使用宽范围(通用)探针和引物组实时PCR检测细菌负荷
微生物学(阅读).
2002年1月.
摘要
报道了一套通用引物和探针的设计和评价,该引物和探针用于实时PCR扩增域菌16S rDNA,以估计细菌总载量。通用检测系统的广泛特异性通过测试从34种细菌中分离出来的DNA得到证实,这些细菌包括Bergey的确定细菌学手册中概述的大多数细菌群。然而,作为标准的染色体DNA的性质是至关重要的。由于16S rDNA拷贝数的变化以及细菌生成时间对该数量的影响,代表在给定栖息地中最有可能占主导地位的细菌的DNA标准对于更准确地确定细菌总负荷是重要的,因为快速生长可能导致多个复制分叉,因此,实际上,染色体部分的多个拷贝。通过计数体外混合的人工样本和临床龋牙本质样本中的细菌数量,证实了应用这些警告来估计细菌负荷的有效性。考虑到这些参数,通用探针和引物在龋牙本质中估计的厌氧菌数量比培养方法检测到的细菌总数大40倍,证明了实时PCR在这种环境分析中的实用价值。
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