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。 2010年7月,139 (1):194 - 203. - e1。
doi: 10.1053 / j.gastro.2010.03.035。 Epub 2010年3月17日。

酸和胆汁盐诱导的CDX2在患有和不患有Barrett食管的食管鳞状细胞中的表达不同

小芳霍1， 回族应张， X张我， 约翰P (merrill Lynch)， Eric D斯特拉赫， Jian-Ying王， 谢尔比维梅尔顿， 罗伯特。M Genta， David H王， 斯图尔特·J Spechler， 朗达F·苏扎
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酸和胆汁盐诱导的CDX2在患有和不患有Barrett食管的食管鳞状细胞中的表达不同

小芳霍et al。 胃肠病学。 2010年7月。
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摘要

背景与目的:目前尚不清楚为什么只有少数胃食管反流病(GERD)患者发展为巴雷特食管。我们假设，当食管鳞状上皮暴露于反流时，个体间激活的分子通路的差异是巴雷特化生发展的基础。

方法:我们使用来自伴有Barrett食管(正常食管鳞状上皮[NES]-B3T和NES- b10t)和无Barrett食管(NES- g2t和NES- g4t)的GERD患者的食管鳞状上皮细胞系，研究酸和胆盐对CDX2基因表达的影响。采用Bay 11-705、Ad5抑制剂kappaB(IkappaB) α - sr和定点诱变技术，探讨核因子-kappaB (NF-kappaB)抑制对CDX2启动子活性的影响;通过染色质免疫沉淀法评估NF-kappaB亚基p50和p65的DNA结合。

结果:酸和胆盐增加了NES-B3T和NES-B10T细胞中CDX2信使RNA (mRNA)、蛋白质和启动子活性，但在NES-G2T和NES-G4T细胞中没有。抑制NF-kappaB可消除CDX2启动子活性的增加。CDX2启动子活性的增加与与启动子结合的p50的核易位有关。我们在10例Barrett食管患者的食管鳞状切片标本中发现了7例CDX2 mRNA，但在10例无Barrett食管的GERD患者的食管鳞状切片标本中仅发现1例CDX2 mRNA。

结论:酸和胆盐诱导Barrett食管患者食管鳞状细胞中CDX2 mRNA和蛋白的表达，但对无Barrett食管的GERD患者无诱导作用。我们推测，这些酸和胆盐诱导的分子通路激活的差异可能是巴雷特化生发展的基础。

利益冲突陈述书

财务信息披露:作者之间不存在任何利益冲突。

数据

图1
图1
酸性、中性胆盐或酸性胆盐对(NES-B3T和nes - b10t)和非(NES-G2T和NES-G4T) Barrett食管GERD患者食管鳞状细胞CDX2mRNA和蛋白表达及CK20 mRNA表达的影响酸、胆盐和酸化胆盐增加:(1A) CDX2 mRNA， (1B) CDX2蛋白，(1C) CK20 mRNA表达。CaCo2细胞作为CDX2 mRNA表达的阳性对照。C，未处理的对照细胞;一、酸性介质;B、胆盐培养基;A&B，酸化胆盐培养基，
图2
图2
CDX2启动子甲基化状态与食管鳞状细胞mRNA表达。(2A)酸、胆盐和酸化胆盐不会改变任何细胞系中CDX2启动子甲基化状态。C，未处理的对照细胞;一、酸性介质;B、胆盐培养基;A&B，酸化胆盐培养基，(2B) DAC在所有细胞系中去甲基化CDX2启动子。(2C)单独去甲基化CDX2启动子并不会在任何细胞系中诱导mRNA的表达。U, unmethylated等位基因;米,甲基化等位基因。
图3
图3
食管食管鳞黏膜活检标本中CDX2 mRNA的表达。CaCo2细胞作为阳性对照。米,标志;C、控制;B，食管鳞状上皮组织活检，来自食管食管食管食管食管食管食管食管食管食管食管食管;G，食管鳞状上皮活检，来自无Barrett食管的GERD患者
图4
图4
酸和胆盐增加了NES-B3T和NES-B10T细胞中构建的人CDX2启动子的活性，但在NES-G2T和NES-G4T细胞中没有。柱状图描述了至少3个个体实验的均值+ SEM。(***，与未处理的对照组相比p<0.001) pGL-3-CDX2，转染含有CDX2启动子结构的质粒并连接到荧光素酶报告子的细胞(-562 bp);pGL-3，转染缺乏CDX2启动子的pGL-3质粒载体的细胞;RLU，相对光单位。
图5
图5
酸和胆盐通过激活NES-B3T和NES-B10T细胞中的NF-κB来提高CDX2启动子的活性。(5A &5B) Bay 11-705对NF-κB的抑制和报告结构pGL-3-CDX2中NF-κB结合位点的定向突变阻止了两种细胞系中CDX2启动子的激活。(5C &5D) NF-κB被腺病毒结构体Ad5IκBα-SR感染抑制，阻止CDX2启动子的激活;相应的空腺病毒载体作为对照。柱状图描述了至少3个个体实验的均值+ SEM。(*，与未处理对照组相比p<0.05;**，与未处理对照相比p<0.01;***，与未治疗对照组相比p<0.001) RLU，相对轻单位。
图6
图6
酸和胆盐增加了NES-B3T细胞中NF-κB亚基p50和p65的核易位。p50和p65的(6A)免疫荧光和(6B)免疫印迹的代表性实验。注意对照细胞中这两种亚基在细胞质和细胞核中均有明显的表达。暴露于酸、胆盐或酸化胆盐后，p50和p65有强烈的核定位。DAPI染色显示的是同一视野内细胞核的总数。微管蛋白和层蛋白分别作为细胞质和核组分的对照。C，未处理的对照细胞;一、酸性介质;B、胆盐培养基;A&B，酸化胆盐培养基。
图7
图7
在NES-B3T和NES-B10T细胞中，酸和胆盐增加了p50与CDX2启动子的DNA结合，但没有增加p65与CDX2启动子的结合。面板显示了p50和p65的ChIP分析的代表性实验。注意，暴露于酸、胆盐或酸化胆盐显著增加p50与CDX-2启动子的结合，但p65不增加。C，未处理的对照细胞;一个酸暴露;B、胆盐暴露;A&B，酸化胆盐暴露;米,标记。
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