条文本

下载PDF

胃瘦素和幽门螺杆菌感染
免费的
  1. T Azuma一个
  2. H苏乔一个
  3. Y Ito一个
  4. M Ohtani一个
  5. M Dojo一个
  6. M栗山一个
  7. T加藤b
  1. 一个日本福井医科大学内科二系,b日本福井县立大学护理与福利学院
  1. T Azuma博士,福井医科大学医学院内科第二学系,日本福井910-1193,吉田郡松冈町。而在{}fmsrsa.fukui-med.ac.jp

摘要

背景瘦素调节进食行为,因此可能是与急性和慢性炎症相关的厌食症的中介。近年来,在胃上皮中发现了瘦素mRNA和瘦素蛋白。

目的本研究的目的是检验的影响幽门螺杆菌感染对胃瘦素表达的影响探讨胃瘦素的病理生理作用。

方法手术切除的人胃组织进行免疫组化和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),以检查人胃上皮中瘦素的存在。共201个H幽门慢性胃炎阳性患者行根除治疗H幽门并通过身体质量指数(BMI)和血清瘦素水平来检测感染治愈的效果。从201例患者中40例胃底粘膜活检标本在根除治疗前和治疗后3个月。这些样本采用定量RT-PCR检测根除治疗对胃底粘膜瘦素表达的影响。

结果在胃底腺下半部分检测到瘦素免疫反应细胞,在胃底粘膜中也发现了瘦素PCR产物。H幽门感染显著增加胃瘦素表达。此外,治愈H幽门感染显著降低了胃瘦素的表达,同时增加了体重指数。相比之下,治愈后血清瘦素水平无明显变化H幽门感染。

结论瘦素存在于人的胃粘膜中。胃瘦素可能在根除后的体重增加中起作用H幽门感染。胃瘦素可能有局部作用而不是全身作用。

  • 幽门螺杆菌
  • 瘦素
  • 胃粘膜
  • 身体质量指数
  • 胃炎
  • 本文中使用的缩写

    rt - pcr
    逆转录聚合酶链反应
    CCK
    缩胆囊素
    身体质量指数
    身体质量指数
    UBT
    尿素呼气试验
    GAPDH
    glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶
    肿瘤坏死因子
    肿瘤坏死因子
    伊尔
    白介素
  • 统计数据来自Altmetric.com

    请求的权限

    如果您希望重用这篇文章的任何部分或全部,请使用下面的链接,它将带您访问版权清除中心的RightsLink服务。您将能够快速获得价格和以多种不同方式重用内容的即时许可。

    瘦素是一种ob基因,是一种由脂肪组织合成的16 kDa蛋白质,通过调节食物摄入和能量消耗,在体重的内稳态中起着至关重要的作用。禁食和饥饿会降低瘦素mRNA和蛋白质的水平,这种大幅下降会产生吃东西的信号。1 - 4瘦素最初被报道只由脂肪细胞和胎盘分泌。15最近,Bado报道在大鼠胃上皮中发现了瘦素mRNA和瘦素蛋白,胃底粘膜腺体细胞对瘦素有免疫反应。6他们还报告说,喂养和给药CCK-8(胆囊收缩素(CCK)的生物活性羧基末端)导致瘦素细胞免疫反应性和基底上皮瘦素浓度迅速而显著下降,同时血浆中瘦素浓度增加,这表明胃瘦素可能参与了由食物摄入激活的早期CCK介导的效应,可能包括饱腹感。相比之下,厌食症和瘦体重的减少是急性或慢性疾病的标志性表现,包括感染或癌症。7 - 11幽门螺杆菌感染是慢性活动性胃炎的一个原因。1213H幽门胃炎可引起贫血、体重减轻和吞咽困难等令人担忧的症状,目前尚未确定感染对象的子集。14 - 16也有报道说H幽门感染影响儿童的生长速度。1718另外,固化后体重增加H幽门已有感染报告。19有可能是胃炎引起的H幽门感染影响胃瘦素的表达,瘦素可能在调节食物摄入中起作用。然而,两者之间的关系H幽门感染和胃瘦素表达尚未被检测。

    因此,我们检查的效果H幽门感染对胃瘦素表达的影响探讨胃瘦素的病理生理作用。

    方法

    实验设计

    首先,手术切除早期胃癌患者的胃组织样本(2例;一名56岁的男性和一名52岁的女性)接受免疫组化和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检查胃上皮中瘦素的存在。

    其次,201年H幽门慢性胃炎阳性患者(男性121例,女性80例,平均年龄41.5岁)选择自福井医科大学第二内科多相健康检测服务中心的受试者。这些服务包括上消化道内窥镜检查或放射摄影以筛查胃癌。慢性胃炎的诊断使用这些检查。20.21有消化性溃疡、反流性食管炎、恶性疾病、胆结石或手术史的患者,以及接受非甾体类抗炎药物或抗生素的患者被排除在研究之外。H幽门感染诊断使用13尿素呼气试验(UBT)。实验对象在UBT前禁食一晚。在吸入a之前和15分钟后采集呼吸样本13C尿素溶液(100 mg13C尿素在100毫升水中),并用同位素比质谱法进行分析。的增量值的增加13有限公司2高于基线值2.5以上的被认为是阳性的H幽门感染。采用标准化问卷评估腹部症状。该问卷调查了7种持续或反复发作的症状,持续三个多月,作为主要目标变量(上腹痛、心灼烧、返流、恶心、呕吐、上腹部饱腹感、食欲不振)。各自症状的强度被分为0(无)、1(低强度)、2(中等强度)或3(严重)。201例患者中有121例(60.2%)出现消化不良症状。201例患者均接受根除治疗H幽门感染奥美拉唑(20mg,每日2次),阿莫西林(750 mg,每日2次),克拉霉素(200 mg,每日2次)一周预防胃癌。治愈的H幽门治疗3个月后使用UBT评估感染情况。在根除治疗前和治疗后3个月测量患者的体重和症状评分。体重指数(BMI kg/m)的变化2根治组与非根治组比较。在根除治疗前和三个月后的早晨禁食一夜后获得血清样本,并在- 20°C保存,直到分析。

    再次,对201例患者中的40例(33例成功根除,男20例,女13例,平均年龄42.2岁)在根治治疗前和根治治疗后3个月提取胃底黏膜活检标本;还有7名患者没有根除:4名男性和3名女性,平均年龄41.6岁)。这些样本采用定量RT-PCR检测根除治疗对胃底粘膜瘦素表达的影响。胃底黏膜活检标本H幽门阴性正常对照(男13例,女7例,平均年龄40.8岁)也进行定量RT-PCR检测对照组胃瘦素表达。

    这些研究是根据《赫尔辛基宣言》的原则进行的,并在充分说明研究的性质和方案后取得每个人的同意。

    瘦素免疫组化

    手术切除的组织样本被固定在布因溶液中,并嵌入石蜡中。免疫组化染色采用亲和素-生物素-过氧化物酶复合物技术(vecastain ABC试剂盒;Vector, Burlingame, California, USA)由Hsu和同事描述。22所有孵育均在室温下进行。每片(4 μm厚)浸入0.3% H2O2在甲醇中浸泡30分钟,破坏内源性过氧化物酶活性,用0.05 M Tris缓冲盐水冲洗10分钟,pH 7.5,然后与正常山羊血清孵育30分钟,以阻断非特异性Ig结合位点。除去山羊血清,用1:100稀释的抗人瘦素兔抗体18545S (IBR, Gumma, Japan)孵育载玻片过夜。然后在Tris缓冲盐水中洗涤30分钟,与生物素化山羊抗兔IgG孵育30分钟,在Tris缓冲盐水中重复洗涤,与亲和素DH生物素化辣根过氧化物酶孵育30分钟。在Tris缓冲盐水中最后清洗后,将载玻片在含有0.05%二氨基联苯胺和0.015% H的溶液中孵育两分钟2O2.用苏木精进行核染色。免疫组化反应的特异性首次建立在非免疫兔血清不显示阳性染色。此外,通过吸收对照评价抗体的特异性。稀释后的抗体与人瘦素在浓度高达10 nmol/ml的条件下在4℃下孵育24小时,然后应用于组织切片。

    瘦素测定

    使用放射免疫分析试剂盒(Linco Research, St Charles, Missouri, USA)根据制造商的协议测定血清瘦素浓度。23

    定量rt - pcr

    手术切除的胃底、胃窦黏膜和胃结肠大网膜组织样本切片被冷冻并储存在液氮中。根据制造商的协议,使用Micro FastTrack试剂盒(Invitrogen, Carlsbad, California, USA)从组织中纯化mRNA。24采用ABI 7700序列检测系统(PE Applied Biosystems, Foster City, California, USA)的一种新型实时定量RT-PCR方法对瘦素进行RT-PCR检测。25瘦素的意义引物为5 ' -CACCAAAACCCTCA TCAAGACA-3 ',反义引物为5 ' -CTTTCTGTTTGGAGGAGACTGACT-3 '。反应混合物是根据制造商的协议,使用TaqMan Gold RT-PCR试剂盒(PE Applied Biosystems)制备的。该反应还包含目标杂交瘦素探针(5 ' -CACCA GGATCAATGACATTTCACACACG-3 ')。探针在5 '端用报告荧光染料6-羧基荧光素标记。热循环条件为48°C 30分钟,95°C 10分钟,然后在95°C 15秒和60°C 1分钟下扩增50次。PCR产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测。用溴化乙锭对凝胶进行染色,以确认预期序列的扩增成功。从活检标本中纯化mRNA,并使用TaqMan GAPDH对照试剂(PE Applied Biosystems)进行实时定量RT-PCR检测瘦素和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为对照。为了相对定量瘦素表达,使用从胃结肠大网膜获得的mRNA构建了一个校准曲线。用GAPDH的RNA作为内源性对照。 The amount of leptin RNA was normalised to the level of GAPDH.

    统计分析

    结果用平均值(SD)表示。组间平均年龄、BMI和BMI变化差异的显著性使用未配对的学生评估t测试。比较体重指数大于0.5 kg/m的差异变化2使用x2用Fisher精确概率检验。在根除治疗前后的间隔时间内,用配对的学生分析血清瘦素浓度和瘦素相对RNA定量的差异t测试。用Wilcoxon符号等级检验比较各组间症状评分。BMI的变化与症状评分的变化或瘦素相对RNA定量的变化之间的关系通过Spearman秩相关进行评估。p值小于0.05的差异被认为显著。

    结果

    胃粘膜中瘦素的检测

    瘦素免疫反应细胞可见于基底上皮腺的下半部分1).用10 nmol/ml瘦素片段吸附抗体后,未见免疫反应性。在基底上皮中发现了瘦素PCR产物2).

    图1

    人基底粘膜瘦素的免疫染色。瘦素免疫反应见于基底上皮腺的下半部分(A)。高倍放大(B)。比例尺10 μm。

    图2

    瘦素mRNA的逆转录酶-聚合酶链式反应分析:阴性对照(lane 1)、胃结肠大网膜(lane 2)和基底黏膜(lane 3)。

    根除疗法对bmi变化的影响

    比较根除组和非根除组在根除治疗后的BMI变化。H幽门161例感染治愈。成功根除患者的BMI均值变化明显高于未根除患者。BMI变化大于0.5 kg/m2在根除患者中观察到的频率明显高于非根除患者(表1).

    表1

    幽门螺杆菌根除疗法对体重指数(BMI)的影响

    血清瘦素浓度

    根除治疗后,无论是根除组(3.5(2.2)至3.9 (2.6)ng/ml)还是非根除组(3.3(2.6)至3.8 (2.9)ng/ml),血清瘦素水平均无明显变化。

    症状评分

    根除治疗成功后症状评分明显改善。相比之下,在未根除的患者中,治疗后症状评分没有明显改善(表2).治疗后症状有可能改善H幽门感染导致体重增加。然而,症状评分的变化与BMI的变化之间没有显著的相关性(图1)3.).

    表2

    根除治疗前后症状评分的变化

    图3

    症状评分变化与体重指数(BMI)变化的关系。两者之间无显著相关性(r=0.10, p=0.189)。

    胃瘦素的定量分析

    胃瘦素的相对RNA定量H幽门慢性胃炎阳性患者2.3例(0.6例)明显高于非慢性胃炎阳性患者H幽门阴性正常对照(1.2 (0.5))(p<0.0001)。成功清除后,瘦素的相对RNA定量显著降低。然而,在未根除的患者中,水平没有显著变化4、表3.).瘦素相对RNA定量的变化与BMI (r=−0.69,p=0.0002)(图5).

    图4

    用四种不同稀释度的从胃结肠大网膜中获得的mRNA构建了一个校准曲线。(A)瘦素扩增图;(B)瘦素校准曲线。

    表3

    幽门螺杆菌根除疗法对胃瘦素表达的影响

    图5

    胃瘦素相对RNA定量变化与体重指数(BMI)变化的关系。两者之间存在显著相关性(r=−0.69,p=0.0002)。

    讨论

    据报道瘦素只由脂肪细胞和胎盘分泌。15Bado首次报道了大鼠胃上皮中存在瘦素mRNA和瘦素蛋白,胃底粘膜腺体细胞对瘦素有免疫反应。6最近,在人胃底腺下半部分发现了免疫反应性瘦素细胞,通过RT-PCR也在人胃黏膜中检测到瘦素mRNA。2627在本研究中,我们证实了瘦素在人胃底粘膜中的存在。胃瘦素的生理功能尚不清楚。Bado据报道,喂养和给药CCK-8都导致瘦素细胞免疫反应性和基底上皮瘦素含量迅速而大幅度下降,同时血浆中瘦素浓度增加。他们认为胃瘦素可能参与了由食物摄入激活的早期CCK介导的效应,可能包括饱腹感。6

    相比之下,厌食症和瘦体重的减少是急性或慢性疾病的标志性表现,包括感染或癌症。肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素(IL)-1和IL-6作为宿主对感染或恶性肿瘤反应的内源性介质的作用已被广泛研究。7号到9号也有报道称多种细胞因子和炎症会提高瘦素水平。瘦素调节进食行为,因此可能是与急性和慢性炎症相关的厌食症的中介。28 - 30一些研究表明细胞因子参与了胃炎症的发病机制。瑰柏翠在培养上清中检测到较高水平的TNF-α、IL-6和IL-8H幽门感染患者的胃活检标本比未感染患者的标本多。31Noach也检测到在来自的胃窦活检标本的培养上清中IL-1β, IL-8和TNF-α的水平升高H幽门被感染的病人。32山冈据报道,IL-6、IL-7、IL-8和IL-10 mRNA的表达水平显著升高H幽门阳性胃炎优于阴性胃炎H幽门正常粘膜阴性,认为这是细胞因子表达增加的原因H幽门感染明显减少后H幽门感染被治愈了。33在本研究中,H幽门感染增加胃瘦素表达,治愈H幽门感染导致胃瘦素表达减少。这些结果提示胃炎症是由H幽门感染增加胃瘦素表达。

    有趣的是,治疗H幽门感染也会导致显著的体重增加,胃瘦素相对RNA定量的变化与BMI的变化有显著的相关性。胃瘦素可能在糖尿病治愈后体重增加中起作用H幽门感染。但治疗后血清瘦素水平无明显变化H幽门感染。胃瘦素可能有局部而非全身作用,在胃粘膜内发挥旁分泌作用或刺激迷走神经传入信号中枢神经系统。最近,一些研究人员报道了瘦素及其受体在人类胃中的存在,并提出瘦素对胃上皮细胞功能的旁分泌和/或自分泌作用。2627此外,在大鼠胃中发现了瘦素敏感的迷走神经传入终末。34另一方面,根除治疗成功后,症状评分明显改善。导致体重增加的可能是症状的改善,而不是胃瘦素表达的改变。但BMI的变化与消化不良症状评分的变化无显著相关性。

    总之,胃炎症是由H幽门感染使胃瘦素表达升高。治愈的H幽门感染减少了胃瘦素的表达,同时增加了体重指数。胃瘦素可能在治疗后体重增加中起作用H幽门感染。胃底粘膜中存在瘦素的证据为研究饱腹感的调节机制开辟了新的途径。进一步检查胃瘦素的生理作用是有必要的。

    致谢

    这项工作得到了日本文部科学省科学研究援助补助金(11670555)的支持。

    本文中使用的缩写

    rt - pcr
    逆转录聚合酶链反应
    CCK
    缩胆囊素
    身体质量指数
    身体质量指数
    UBT
    尿素呼气试验
    GAPDH
    glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶
    肿瘤坏死因子
    肿瘤坏死因子
    伊尔
    白介素

    参考文献