介绍
尽管相当功效的抗肿瘤坏死因子(TNF) -α治疗IBD,多达30%的IBD患者不回应,这是未知的原因主要non-reponse。
1这种不确定性在一定程度上相关的事实anti-TNF治疗IBD的作用机制尚未完全阐明。
2anti-TNF治疗IBD的作用机制不能完全归于TNF的中和,像一些TNF-neutralising药物,如道,成功的治疗类风湿性关节炎
3 4但不显示炎症性肠病的疗效。
5个6最近,它已被证明,高制瘤素M (OSM)水平与anti-TNF的情况说明IBD相关。
7
白介素(IL) -10和令人信服的证据是一种细胞因子在炎症性肠病的发病机制中的作用。il - 10与炎症性肠病的病因学通过多个全基因组关联研究(GWAS),老鼠和人类发展自发IBD时il - 10或其受体的基因中断。
8 - 11它曾被证实il - 10在IBD的作用取决于在巨噬细胞il - 10的信号。这里il - 10的行为保持固有层在一份监管CD206 +巨噬细胞表型,维持肠道免疫耐受是至关重要的。
12日13有趣的是,它曾被描述,il - 10基因突变小鼠耐火anti-TNF疗法,而他们是高度响应il - 12 / IL-23p40抗体。
14目前不知道为什么il - 10基因突变小鼠是anti-TNF耐火材料。也许il - 10基因突变小鼠显示一种炎症与anti-TNF独立发展的干预。或者,更有趣的是,有可能il - 10的信号需要anti-TNF的作用机制。
我们先前已经表明,完整的单克隆抗体(mab)对TNF参与Fcγ受体(FcγRs)和这Fc-FcγR互动是必要的治疗效果的anti-TNF在炎症性肠病的临床前模型。没有激活FcγRs完全失去响应anti-TNF治疗的小鼠的t细胞转移结肠炎模型,反之,一个hypofucosylated anti-TNF抗体增加Fc-binding亲和力表现出改善的功效。
15日16此外,我们表明,anti-TNF倾斜人类单核细胞向CD206 +监管Fc-dependent地巨噬细胞体外
17在体内,
16,应对anti-TNF治疗小鼠和人类的形成伴随着这些CD206 +监管肠巨噬细胞。
16日18然而,确切的信号机制这些巨噬细胞及其精确的感应作用肠道炎症的决议anti-TNF疗法目前还不清楚。
有趣的是,以往的经验显示,FcγR信号在巨噬细胞il - 10的分泌增加。
月19 - 21日鉴于巨噬细胞il - 10的关键作用信号在指定一个M2-like CD206 +监管巨噬细胞表型,防止肠道炎症,
12日13的依赖反应anti-TNF FcγR信号
16和il - 10的观察突变小鼠anti-TNF耐火材料,我们决定研究il - 10的角色anti-TNF治疗反应的信号。
在这里,我们表明,anti-TNF马伯治疗增加单核细胞/巨噬细胞il - 10生产FcγR-dependent地体外,这扭曲了他们向CD206 +监管表型。使用特定类型细胞突变老鼠,我们发现在巨噬细胞il - 10的信号是绝对anti-TNF-induced巨噬细胞扭曲CD206 +监管所需表型以及治疗反应。
结果
结肠炎在<斜体切换= " yes " > Il10 < /斜体> KO小鼠耐anti-TNF疗法
如前所述,
14我们发现慢性肠道炎症的发生
Il10KO小鼠高度响应IL-12/23治疗但完全抵抗anti-TNF治疗。anti-TNF相比,anti-IL-12/23抗体治疗改善体重(
图1一个),结肠密度(
图1 b),内窥镜疾病严重程度(
图1 c, D)和组织学评分(
图1 e, F)相比,同形像控制治疗。缺乏anti-TNF的治疗效果
Il10KO小鼠假说,il - 10是一个必要的因素使我们的感应anti-TNF疗法治疗反应。
F1
Il10KO小鼠anti-TNF耐火材料。
Il10KO小鼠接受300µg anti-TNF (n = 9), anti-IL-12/23 (n = 9)或同形像控制(n = 10)每周两次为6周在材料和方法部分描述(健康控制老鼠(n = 10)被包含在B-F。体重(A)、(B)结肠密度,(C)代表内窥镜图像和(D)内窥镜检查得分(MCEI)。(E)代表H&E-stained肠道的图片幻灯片(E)和(F)组织学评分(MCHI)。意义是由克鲁斯卡尔-沃利斯其次是邓恩的事后测试* * * p < 0.05和p < 0.01。IL,白介素;MCEI、鼠标结肠炎内镜指数;MCHI、鼠标结肠炎组织学指数;肿瘤坏死因子,肿瘤坏死因子。
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阻断il - 10的信号减少anti-TNF疗法的疗效
自
Il10KO小鼠il - 10缺乏概念以来,目前还不清楚如果缺乏应对anti-TNF不同免疫细胞的发育异常有关的子集或治疗期间由于缺乏il - 10的信号。调查如果il - 10在anti-TNF治疗疗效的关键因素,我们coadministered anti-IL-10Rα抗体在t细胞转移模型。anti-IL-10Rαanti-TNF的治疗效果,减少表示没有显著改善的内窥镜检查评分(
图2 a, B),组织学评分(
图2 c, D)和结肠密度(
图2 e)。有趣的是,这并不影响效果的anti-TNF体重损失(
图2 f),这表明体重损失依赖于完善的恶病的循环肿瘤坏死因子的影响,我们见过的,
15更少依赖il - 10。有一个增加肠道
Il10表情anti-TNF治疗,尤其是当
Il10表达水平相对重要的促炎细胞因子的水平,如
Ifng或
Il1b(
图2 g)。的感应
Il10减少通过阻断il - 10的信号,表明积极的反馈机制。Anti-TNF疗法的表达增加
Cd163和
Cd206,两个监管巨噬细胞的标记,以il - 10的依赖的方式,减少的表达
Nos2,独立的标志炎性巨噬细胞、il - 10 (
图2 h)。比率的增加
Cd206 / Nos2和
Cd163 / Nos2虽然有些虚假,一个好的迹象表明anti-TNF肠巨噬细胞平衡变化对il - 10的监管表型相关的方式。在一起,这些数据表明,il - 10的信号直接所需的完整anti-TNF在IBD治疗反应。
F2
anti-TNF的功效是依赖于il - 10的。严重联合immunedeficient (SCID)动物收到3×105CD4 + CD45Rb高T细胞和治疗anti-IL-10Rα(250µg每周两次)从2周后T细胞转移,结合同形像或anti-TNF(100µg每周两次)从3周后T细胞转移。代表内镜电影剧照(A)得分(B)的MCEI。代表H&E-stained肠道的图片幻灯片(C)得分的MCHI (D),结肠密度(E)和体重增益/损失在实验(F),肠道的表达水平
Il10,
Ifng和
Il1b相对于
Gapdh和
Il10 / Ifng和我
l10 / Il1b比率,确定整个结肠mRNA, (G)所示。(H)表达水平的
Cd206, Cd163和
Nos2相对于
Gapdh和
Cd206 /不s2和
Cd163 / Nos2比率。意义是由克鲁斯卡尔-沃利斯随后邓恩的事后测试(n = 11 - 13)。星号(F)表示比较anti-TNF和同形像(*,p < 0.05)和同形像+ anti-IL10Rα与anti-TNF + anti-IL10Rα(* * * *,p < 0.0001)。IL,白介素;MCEI、鼠标结肠炎内镜指数;MCHI、鼠标结肠炎组织学指数;肿瘤坏死因子,肿瘤坏死因子。* * * p < 0.05, p < 0.01, * * * p < 0.001, * * * * p < 0.0001。
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增加肠内il - 10在成功anti-TNF疗法
我们先前已经表明,t细胞转移结肠炎模型响应anti-TNFmAb治疗剂量依赖性的方式。
23在这个滴定实验,动物肠道il - 10水平增加处理anti-TNF的有效剂量(
图3一)。之间有一个联系肠道il - 10水平和响应anti-TNF疗法,肠道之间的强负相关性显示il - 10水平和MCHI(枪兵的ρ=−0.582,p < 0.0001;
图3 b)。调查哪些细胞是负责生产的il - 10在anti-TNF疗法,我们进行原位杂交。Anti-TNF治疗导致增加
Il10成绩单在CD3-negative肠细胞(
图3 c)。免疫组织化学分析巨噬细胞标记F4/80连续幻灯片强烈表明,anti-TNF增加
Il10特别是在巨噬细胞(
图3 d),尽管我们不能排除在其他细胞类型表达式。
F3
Anti-TNF治疗增加肠内il - 10的水平。il - 10水平在整个结肠匀浆严重的结合immunedeficient (SCID)小鼠CD4 + CD45Rb高t细胞转移和服用不同剂量的anti-TNF (n = 10 - 12) 4周从3周后t细胞转移。动物治疗的治疗剂量anti-TNF(100μg)红(a)所示。(B)肠道il - 10水平与组织学评分之间的相关性(MCHI)在所有老鼠收到了t细胞转移(n = 53)。的比例CD3-negative固有层细胞表达
Il10由图像分析(C、n > 10图片/条件,每组n = 11)由荧光原位杂交。(D)代表
Il10原位杂交(红色)与F4/80免疫组织化学起动(绿色)consectutive anti-TNF-treated动物的肠道组织的幻灯片。酒吧是50µm规模。意义是由方差分析其次是Sidak事后在(A)和Mann-Whitney测试(D)与* * * * p < 0.05和p < 0.001。DAPI 4’, 6-diamidino-2-fenylindool;包含IHC免疫组织化学;IL,白介素;伊什,原位杂交;MCHI、鼠标结肠炎组织学指数;肿瘤坏死因子,肿瘤坏死因子。
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通过FcγR Anti-TNF诱导il - 10的信号
在先前的研究中,我们已经表明,FcγR交互至关重要anti-TNF在炎症性肠病的治疗效果,可能通过调节巨噬细胞的诱导。
15 - 17日FcγR结扎是一种强有力的诱导巨噬细胞il - 10的
月19 - 21日我们调查了
Il10表达在t细胞转移模型
FcgRKO
/ Rag1KO耐火anti-TNF治疗的动物。
16增加肠道
Il10 / Ifng或
Il10 / Il1b率anti-TNF马伯确实FcγR依赖,增加在小鼠缺乏废除所有激活FcγRs (
图4一)。这支持了il - 10的假设生产FcγR依赖。进一步调查如果anti-TNF能诱导巨噬细胞il - 10生产,我们进行了体外实验骨骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs)。区分的效果增加FcγR anti-TNF马伯的信号与肿瘤坏死因子的中和,生成anti-TNF马伯的Fab片段(
在线辅助图S1)。所示
图4 blipopolysacharide (LPS)刺激BMDM IgG2a控制抗体的免疫复合物增加分泌il - 10的描述。
19中和anti-TNF工厂减少了肿瘤坏死因子的分泌il - 10,而anti-TNF马伯显著增加il - 10分泌与anti-TNF Fab片段(
图4 b)。这与转录的增加有关
Il10(
图4 c),而很少或没有影响促炎细胞因子的表达
Il1b,
白细胞介素6或
Tnfa本身(
在线辅助图S2)。Anti-TNF马伯不会增加il - 10的生产
FcgRKO BMDMs,确认依赖FcγR信号(
在线辅助图S3)。的诱导il - 10可能被anti-IL-10Rα抗体和缺席
Il10rbKO BMDMs (
图4 d),显示一个自分泌正反馈机制。il - 10介导的信号通过激活活动磷酸化信号传感器和激活的转录(STAT) 3。
25孵化与anti-TNF马伯确实导致BMDMs IL-10-dependent磷酸化STAT3的(
图4 e)。当我们假定anti-TNF马伯诱导管制型巨噬细胞的分化,通过增加il - 10的信号,我们决定的影响
Cd206。孵化与anti-TNF马伯确实导致的表达增加
Cd206,这是完全依赖于il - 10的信号(
图4 f)。这证实了CD206流式细胞术(
图4 g)。这些研究结果建议anti-TNFmAb-induced FcγR信号增加巨噬细胞il - 10生产,后来使更多监管表型分化。
SP3
10.1136 / gutjnl - 2019 - 318264. - supp3
SP4
10.1136 / gutjnl - 2019 - 318264. - supp4
SP5
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F4
Anti-TNF诱发IL-10-dependent M2 BMDMs体外分化。(一)肠
Il10表达水平相对于
Gapdh和
Il10 / Ifng和Il10 / Il1b的比率
Rag1KO和
FcgRKO /
Rag1KO anti-TNF对待动物。相对
Ifng和
Il1b表达水平在Bloemendaal报道
等。
16意义是由克鲁斯卡尔-沃利斯其次是邓恩的事后考验,n = 9 - 11。(B) il - 10水平与lipopolysacharide BMDMs媒介刺激(有限合伙人,100 ng / mL)和IFN-γ(20 ng / mL)结合免疫球蛋白同形像控制抗体(10µg毫升),免疫球蛋白免疫复合物(10µg毫升),anti-TNF马伯的(10µg /毫升)或Fab片段(7.2µg /毫升)48小时后(B) (C)水平
Il10正常的
Gapdh表达BMDMs后24小时。(D) il - 10水平BMDMs媒介(48小时后)。(E)免疫印迹pSTAT3, STAT3和β-actin。(F)的水平
Cd206正常的
Gapdh表达在48小时后(G)代表CD206流式细胞术的柱状图,表达的平均荧光强度成倍增加(MFI)在图BMDMs后72小时。野生型BMDMs所示黑色,野生型BMDMs孵化与anti-IL-10Rα在蓝色和(10µg /毫升)
Il10rbKO BMDMs绿色。所有数据代表的意思是+ SEM (n = 3 - 6),代表两到三个独立的实验。由方差分析决定意义。其次是Sidak事后测试(B, C)或未配对t检验与* * * p < 0.05, p < 0.01, * * * p < 0.001, * * * * p < 0.0001。BMDM,骨骨髓来源的巨噬细胞;干扰素干扰素;IL,白介素;肿瘤坏死因子,肿瘤坏死因子。
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il - 10 t细胞信号是可有可无的anti-TNF的治疗效果
排除的可能性anti-TNF治疗介导的免疫抑制效应,通过直接影响t细胞体内il - 10含量的增加,我们收养CD4 + CD45Rb转让高
Il10rbKO t细胞成
Rag1KO小鼠。Anti-TNF马伯治疗引起类似的减少内镜评分(
图5 a, B),组织学评分(
图5 c, D)和结肠密度(
图5 e)
Rag1KO小鼠CD4 + CD45Rb收到过继转移高
Il10rbKO T细胞,而小鼠CD4 + CD45Rb野生型高t细胞。这清楚地表明,il - 10在T细胞是可有可无的信号响应anti-TNF马伯疗法。没有il - 10 t细胞信号没有改变anti-TNF mAb-induced增加
Il10 / Ifng和
Il10 / Il1b比(
图5克)或
Cd206 / Nos2和
Cd163 / Nos2比率(
图5 h)。
F5
功效anti-TNF是独立的il - 10在t细胞信号。
Rag1KO动物收到了3×105野生型(灰色)或3×105
Il10rbCD4 + CD45Rb KO(绿色)高t细胞与同形像或anti-TNF转移和治疗。控制
Rag1KO动物没有收到t细胞转移。代表内镜电影剧照(A)得分(B)的MCEI。代表H&E-stained肠道的图片幻灯片(C)得分的MCHI (D),结肠密度(E)和体重增益/损失在实验(F)。(G)肠道的表达水平
Il10, Ifng和
Il1b相对于
Gapdh和
Il10 / Ifng和Il10 / Il1b比率,确定整个结肠mRNA。(H)的表达水平
Cd206,
Cd163和
Nos2相对于
Gapdh和
Cd206 /不s2和
Cd163 / Nos2比率。意义是由克鲁斯卡尔-沃利斯其次是邓恩的事后测试* * * p < 0.05, p < 0.01, * * * p < 0.001 (n = 10 - 12)。IL,白介素;MCEI、鼠标结肠炎内镜指数;MCHI、鼠标结肠炎组织学指数;肿瘤坏死因子,肿瘤坏死因子。
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巨噬细胞il - 10的信号是必要anti-TNF体内的治疗效果
确认在巨噬细胞il - 10的信号是至关重要的治疗效果anti-TNF马伯在炎症性肠病,我们使用
LysMCreIl10rafl / flRag1KO小鼠,IL-10Rα在巨噬细胞是专门删除。
26这些小鼠肠道炎症的发展,CD4 + CD45Rb高t细胞转移,是完全抵抗anti-TNF马伯疗法。没有影响anti-TNF马伯的内窥镜检查评分(
图6 a, B),组织学评分(
图6 c, D),结肠密度(
图6 e)或体重的损失(
图6 f)在小鼠macrophage-specific IL-10Rα删除。抵抗anti-TNF无关水平下降的anti-TNF马伯(
在线辅助图S4A)或减少肠道
Tnfa表达式(
在线辅助图S4B)。然而,阻力anti-TNF与增加肠道的缺失
Il10 / Ifng和
Il10 / Il1b比(
图6克)。此外,相比
Rag1KO控制老鼠,没有anti-TNF-dependent增加
Cd206 / Nos2和
Cd163 / Nos2(
图6 h)比率。这些比率的相关性很好
Il10 / Ifng和
Il10 / Il1b肠的比率(
在线辅助图S5)。随着
Cd206 / Nos2和
Cd163 / Nos2比率不能区分两极化的巨噬细胞和炎性浸润的单核细胞,我们已经证实通过流式细胞术的确是一个完全废除anti-TNF mAb-induced监管巨噬细胞分化macrophage-specific IL-10Rα突变小鼠(
图6我)。总之,这些数据表明,巨噬细胞il - 10的信号都是绝对需要监管巨噬细胞分化和治疗效果,以应对anti-TNF马伯。
SP6
10.1136 / gutjnl - 2019 - 318264. - supp6
SP7
10.1136 / gutjnl - 2019 - 318264. - supp7
F6
anti-TNF的功效取决于il - 10在体内巨噬细胞信号。
Rag1KO(灰色)或
LysMcreIl10rafl / flRag1KO(蓝色)动物收到了CD4 + CD45Rb高(5×10 t细胞转移5细胞)和同形像或anti-TNF治疗。控制动物(
Rag1KO)没有收到t细胞转移。代表内镜电影剧照(A)得分(B)的MCEI。代表H&E-stained肠道的图片幻灯片(C)得分的MCHI (D),结肠密度(E)和体重增益/损失在实验(F)。(G)肠道的表达水平
Il10, Ifng和
Il1b相对于
Gapdh和
Il10 / Ifng和
Il10 / Il1b比率,确定整个结肠mRNA。表达水平的
Cd206, Cd163和
Nos2相对于
Gapdh和
Cd206 /不s2和
Cd163 / Nos2比率(H)所示。流式细胞术分析CD206 LY6C (I)所示,浇注后结肠巨噬细胞(DAPI−CD45+CD11b+Ly6G−CD64+)。意义是由克鲁斯卡尔-沃利斯随后邓恩的事后考验* p < 0.05, * * * * * p < 0.01和p < 0.001, 7 - 12 n =。IL,白介素;小鼠结肠炎内镜指数;MCHI、鼠标结肠炎组织学指数;肿瘤坏死因子,肿瘤坏死因子。
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在人类IBD anti-TNF对il - 10的影响信号
调查是否upregulation il - 10和后续信号相关的影响anti-TNF马伯IBD患者,我们首先研究il - 10在区分人类单核细胞在体外生产。孵化与anti-TNF马伯adalimumab导致产量的增加il - 10相比孵化与anti-TNF Fab片段certolizumab (
图7),并使分化更巨噬细胞在体外系统的监管表型,upregulation为特征的
CD206(
图7 b)。这在很大程度上是依赖于il - 10的信号作为anti-IL-10抑制性抗体强烈的upregulation减弱
CD206(
图7 b)。这证实了CD206流式细胞术(
图7 c)。最后,我们决定粘膜
IL10mRNA水平CD患者接受anti-TNF马伯。我们包括七个内镜反应者和七个内镜无(
在线补充表1)。尽管没有增加的相对表达水平
IL10,与老鼠anti-TNF疗法,治疗
IL10 / IFNG表达率显著增加在anti-TNF治疗的反应者,则没有这样的增加anti-TNF无(
图7 d)。调节巨噬细胞的诱导anti-TNF马伯治疗,增加所示
CD206 / NOS2比,还发现特别是在anti-TNF反应者与无(
图7 e),与
IL10 / IFNG水平(
在线辅助图S6)。
SP8
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F7
Anti-TNF诱发IL-10-dependent M2人类单核细胞在体外分化。人类单核细胞il - 10水平在中等刺激与lipopolysacharide(有限合伙人,100 ng / mL)和IFN-γ(20 ng / mL)的单克隆抗体anti-TNF (adalimumab 10µg /毫升)或anti-TNF Fab片段(certolizumab 10µg /毫升)48小时后(A)和水平
CD206正常的
Gapdh48小时后或流式细胞术CD206表示为褶皱增加MFI后72小时(C)结合和anti-IL-10抗体(10µg /毫升)或同形像控制(10µg /毫升)。所有的图表都意味着+ SEM代表三个独立的捐赠者与n = 4 - 6 /条件。的
IL10和IFNG表达水平相对于
GAPDH和
IL10 / IFNG比率(D)和
CD206和
NOS2表达水平相对于
GAPDH和
CD206 / NOS2比率在肠活检(E)治疗前后患者反应和non-responding anti-TNF CD.Significance由曼决定惠特尼,方差分析后跟Holm-Sidak事后测试B并且,着和魏克森讯号等级测试在D和E * * * p < 0.05, p < 0.01, * * * p < 0.001, * * * * p < 0.0001。干扰素干扰素;IL,白介素。
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讨论
情况的原因anti-TNF治疗IBD仍知之甚少。
1在这里,我们表明,anti-TNF马伯需要il - 10在巨噬细胞信号,这对anti-TNF-induced il - 10的信号是必要的监管M2-like表型分化的巨噬细胞。小鼠巨噬细胞中il - 10是中断信号完全抗CD4 + CD45Rb anti-TNF治疗高结肠炎的T细胞转移模型,而il - 10在T细胞信号中断不影响治疗的反应。
il - 10是一个关键因素在粘膜免疫耐受的维护。缺乏的小鼠il - 10发展慢性炎症性肠病。
10在人类中,变异
IL10轨迹与全基因组关联研究发展中炎症性肠病的风险
8 9和罕见的病人纯合突变
IL10或
IL10R发展严重的早发性炎症性肠病。
11研究特定类型细胞il - 10 signalling-deficient老鼠,以及使用细胞来源于IL-10R-deficient病人显示宽容极度依赖于巨噬细胞il - 10的信号。
12日13这是发现M2-like CD163 / CD206 +监管粘膜巨噬细胞的表型取决于il - 10的信号。在没有il - 10的情况下,巨噬细胞被锁定在一个M1-like Nos2 / CD86 +促炎的表型,分泌过多的促炎细胞因子反应的刺激。老鼠和患者在il - 10的种系突变途径无法应对与anti-TNF疗法。
27日14这可能是由于免疫系统的发育异常引起的炎症过程的作用机制anti-TNFs是无关紧要的。有趣的是,不同的结肠炎小鼠模型的数据表明TNF在肠道炎症和实际上可能有保护作用,根据上下文,TNF甚至可能需要抑制小鼠的肠道炎症。
2例如,中和的TNF马伯大幅恶化全身的葡聚糖硫酸酯钠(DSS)结肠炎
28和肿瘤坏死因子敲除小鼠对DSS高度敏感。
29日肿瘤坏死因子恶化结肠炎的完全没有突变小鼠il - 10,
30.在t细胞转移模型,结肠炎恶化如果转移t细胞缺乏TNF-receptor II (TNFRII)。
31日我们的之前的数据表明,anti-TNF丢失在小鼠的治疗效果缺乏激活FcγRs。
16这些数据表明,肿瘤坏死因子可以在肠道炎症有重要的保护功能支持的观念anti-TNFs可能有额外的治疗模式行动的独立于TNF的中和。il - 10的信号可能是一个额外的行动模式。的确,这里我们发现药理封锁的il - 10的信号IL-10Rα抑制性抗体的治疗效果降低t细胞转移的anti-TNF结肠炎模型。这强烈表明,il - 10信号直接anti-TNF所需的治疗反应。符合这一点,西方
等
7最近表明,结合一个系统性IL-10Rα封锁
幽门螺杆菌hepaticus感染导致anti-TNF-resistant结肠炎的发展,与OSM水平增加有关。确实在我们的手中,系统性IL-10Rα封锁似乎增加肠道
Osm水平(
在线辅助图S7A),与应对anti-TNF疗法的损失。然而,anti-TNF-resistant结肠炎,发达的
LysMCreIl10rafl / flRag1KO并不增加肠道
Osm水平(
在线辅助图S7B),表明il - 10在巨噬细胞信号所需的治疗疗效anti-TNF OSM独立的。
SP9
10.1136 / gutjnl - 2019 - 318264. - supp9
我们曾表明anti-TNF马伯可以斜单核细胞到一个M2-like CD206 +表型体外和体内FcγR-dependent方式。
16肿瘤坏死因子是一种三聚物的细胞因子,它允许TNF-anti-TNF免疫复合物的形成强有力地吸引FcγR马伯的英夫利昔单抗,adalimumab和golimumab但不是道(可溶性受体结合单个三聚物)或certolizumab(单臂Fab片段)。
32我们所知,这是唯一的作用机制独特的马伯,不能共享与certolizumab或服用依那西普,和这样的复合物的形成可能导致相对高的粘膜愈合率观察与anti-TNF马伯。
因为它曾被表明FcγR信号可以强有力地诱导il - 10,
月19 - 21日我们检查是否anti-TNF马伯FcγR-dependent地诱导il - 10的信号。我们的数据表明,anti-TNF增加
Il10FcγR-dependent地在小鼠体外和体内。我们发现在我们所有的体外实验中部分依赖于肿瘤坏死因子il - 10的表达。当我们阻断TNF没有FcγR订婚,anti-TNF Fab片段,il - 10的水平降低,而当我们与完整的免疫球蛋白g马伯,阻止肿瘤坏死因子il - 10的表达类似于同形像控制免疫球蛋白。当我们接触FcγR没有TNF封锁使用免疫球蛋白复合体,il - 10的水平都上升到高于非复杂的免疫球蛋白g控制(
图4;参见Bloemendaal
等
32)。在一起,这表明,il - 10表达部分肿瘤坏死因子相关,anti-TNF马伯弥补损失的il - 10表达通过FcγR,后来导致下游通过磷酸化STAT3信号。
虽然我们体外数据显示一个自分泌il - 10信号循环,我们没有建立细胞类型负责增加肠道anti-TNF马伯暴露体内后il - 10水平。anti-TNF治疗小鼠原位杂交表明了这一点
Il10通过巨噬细胞生产,但是我们的数据并不确凿,过度由巨噬细胞il - 10。虽然增加的
Il10 / Ifng和
Il10 / Il1b比率可以间接反映了不同程度的炎症小鼠接受anti-TNF和安慰剂之间,它是依赖于FcγR再次指向骨髓人口。尽管剩下的不确定性的来源il - 10,非常清晰的从我们的数据是由巨噬细胞il - 10感应所需的治疗疗效anti-TNF马伯。符合关键作用调节巨噬细胞il - 10的信号的扭曲,
12日13阻断il - 10的信号完全阻止anti-TNF-dependent监管巨噬细胞扭曲人类细胞在体外和小鼠体外和体内。有趣的是,il - 10的重要性信号可能是相对特定anti-TNF的治疗效果,我们以前没有观察miltefosine影响il - 10的药物,改善临床症状以及组织学和强有力地抑制多种细胞因子在t细胞转移模型。
33同样,在最近的实验中,小分子激酶抑制剂,我们观察到几乎完全粘膜愈合没有任何影响il - 10表达相同的模型(2019年我Wildenberg,个人沟通)。相反,当我们执行一个公正的药物筛选药物,提高了anti-TNF-induced CD206 +监管巨噬细胞分化,我们确定了阿苯达唑药物强化anti-TNF体外和体内的效果。
23我们发现阿苯达唑与anti-TNF专门把移植il - 10的表达。在一起,这些数据支持了这样的观点,即upregulation il - 10可能相对具体的作用方式anti-TNF马伯。然而,随着anti-IL-10Rα阻塞的影响抗体的治疗效果anti-TNF不是一样令人印象深刻的效果完全摧毁所有FcγR,
16这可能是因为我们不能完全阻止IL-10R信号使用这种方法,FcγR也可能影响il - 10的受体信号水平以下IL-10Rα块的影响,或者il - 10的信号的机制,是完全独立的。各种替代机制的作用anti-TNF此前就已被描述。涉及膜结合的绑定描述的机制之一,肿瘤坏死因子(mTNF),它会干扰单核细胞的凋亡效应表达mTNF CD4 + T细胞,从而导致T细胞凋亡。
34之间的这种机制是共享的,然而,anti-TNF马伯,Fab片段certolizumab粘膜愈合,不能解释低在certolizumab在10周(4%)中观察到的
35相比于马伯英夫利昔单抗(31%在10周)
36在第12周和adalimumab (27%)。
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我们的数据表明,一个无能的粘膜反应巨噬细胞il - 10的信号可能的机制之一是主要情况说明anti-TNF IBD患者。最近的一项研究Nunberg
等
38显示一个子集的CD患者单核细胞显示降低il - 10与健康对照组相比。一小PBMCs CD患者的研究表明,这种反应,il - 10与肿瘤坏死因子的响应(图中未显示),可能是一种非常有用的预测标记为响应anti-TNF治疗,我们的目标是验证在一个更大的患者群。这工作就着重那些坏家伙了il - 10的依赖巨噬细胞反应anti-TNF治疗慢性t细胞在小鼠模型驱动的炎症,这可能只是与CD患者相关,如图所示
图7。然而,调查IL-10-dependent巨噬细胞反应在急性严重结肠炎可能识别相似的响应文件签名并可以帮助管理决策在救援anti-TNF疗法与手术在临床情况下,这也进一步调查的主题。FcγR-mediated il - 10对巨噬细胞表型的影响引起anti-TNF马伯可能无关紧要”其他免疫介导性疾病,如牛皮癣和风湿性关节炎。牛皮癣患者和风湿性关节炎有更多的类似的反应不同种类的TNF阻滞剂,依赖FcγR信号似乎相对具体的IBD患者。总之,在这里,我们发现,il - 10的信号需要anti-TNF-induced监管在人类和小鼠巨噬细胞扭曲。治疗反应anti-TNF完全依赖il - 10的信号在结肠炎黏膜巨噬细胞在小鼠模型。我们的数据表明,IL-10-dependent巨噬细胞扭曲CD206 +监管表型是治疗IBD的一个关键方面,这些患者中降低il - 10对疾病的病因学反应可能不那么友善的回应与anti-TNF疗法。这减少了对il - 10可能用于识别这些患者,可能是更好的候选人疗法与另一种作用方式如抗体针对IL-12/23或IL-1β最近建议。
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