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星形细胞中NTCP活性证据不足
  1. Roni F Kunst1,2,
  2. 科恩C Paulusma1,2,
  3. Stan F J van de Graaf1,2
  1. 1阿姆斯特丹消化病学，内分泌学，代谢学,阿姆斯特丹大学医学中心,阿姆斯特丹、荷兰
  2. 2Tytgat肠胃病和肝脏病研究所,阿姆斯特丹UMC location AMC,阿姆斯特丹,北荷兰、荷兰
  1. 对应到Stan F J van de Graaf博士，荷兰北荷兰阿姆斯特丹1105 AZ阿姆斯特丹UMC中心特特加肝脏和肠道研究所;k.f.vandegraaf在{}amsterdamumc.nl

http://dx.doi.org/10.1136/gutjnl-2021-326452

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    我们饶有兴趣地阅读了Salhab的研究，假设钠+/牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)是治疗肝纤维化的新靶点。1作者报道了胆汁酸摄取转运蛋白NTCP在原代人肝星状细胞和LX2细胞中的功能性表达，并提出了NTCP介导的胆盐摄取和随之激活的星状细胞在肝纤维化发病机制中的作用。

    作者使用一种市售的抗人NTCP抗体进行免疫荧光染色和Western blots、荧光激活细胞分选(FACS)分析，并在胆汁盐摄取实验中作为中和抗体。值得注意的是，尽管免疫阳性信号高，但在免疫荧光染色中未观察到细胞表面信号。使用该抗体，作者显示了在LX2细胞中完全抑制ntcp介导的胆盐吸收，而抗体所引起的表位主要是在细胞内。此外，在Western blot上显示的NTCP迁移模式与肝细胞裂解物以及NTCP过表达细胞系中所见的NTCP弥漫性迁移模式不同。2NTCP是一种严重糖基化的蛋白质，我们先前已经证明糖基化对其质膜运输和活性至关重要。2

    一个非常有趣但令人困惑的观察是NTCP中和对CCL纤维化发展的有益作用4小鼠模型。用于中和小鼠NTCP的抗体在兔子体内培养，并靶向合成的与小鼠NTCP细胞内C端区域相对应的肽。因此，尚不清楚该抗体如何作为一种阻断抗体。在小鼠纤维化模型中观察到的影响可能与在小鼠中使用兔抗体引起的急性炎症反应有关。本实验不设抗体对照。我们和其他人之前已经证明，在炎症条件下，ntcp介导的以及Oatp1a/1b介导的胆盐吸收机制都迅速下调，这可能解释了CCL中牛胆酸(TCA)适度升高的原因4/ anti-NTCP注入老鼠。

    由于我们的研究兴趣集中在肝胆道运输过程，包括NTCP功能，我们研究了NTCP细胞在LX2细胞表面的存在和活性，而不依赖抗体(在线补充材料)．我们在存在和不存在特异性和特征良好的NTCP抑制肽Myrcludex B(也称为bulevirtide)的情况下进行了胆盐摄取测定。3.与过表达人类NTCP的U2OS细胞相比，3.H-TCA和tauo - nor - thca -24- dbd的摄取在LX2细胞中处于背景水平，独立于tgf ß-诱导的激活，并且不能被Myrcludex B进一步阻断(图1 a, B)．tgf β激活的LX2细胞与fitc标记的Myrcludex B (图2)，与ntcp阳性U2OS细胞相反。这表明，在这个细胞群中，也没有ntcp阳性细胞的低丰度亚群。我们的胆盐吸收数据与作者提供的数据形成了鲜明的对比，其中含有100 μ M TCA的培养基在45分钟后完全从TCA中耗尽，据推测是由于NTCP的吸收活性。如果我们(安全地)假设细胞高度<培养基总高度的1%，那么在这些ntcp阳性星形细胞内，细胞内TCA浓度至少需要达到10mm，这是不太可能的情况，因为这超过了TCA的临界胶束浓度。4

    Myrcludex B does not inhibit either 3H-TCA or Tauro-NOR-THCA-24-DBD uptake radiolabelled TCA (A) or fluorescent Tauro-NOR-THCA-24-DBD (B) uptake in LX2 cells with or without TGFβ activation with U2OS_HA-hNTCP cells as a positive control. DPM, desintegrations per minute;TGF, transforming growth factor.
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图1
    图1

    Myrcludex B对两者都没有抑制作用3.H-TCA或tauro - noro - thca -24- dbd摄取放射标记TCA (A)或荧光tauro - noro - thca -24- dbd (B)在LX2细胞中摄取，无论是否有TGFβ激活，U2OS_HA-hNTCP细胞作为阳性对照。DPM，每分钟分解量;TGF，转化生长因子。

    Myrcludex B binds to the cell surface of NTCP-positive U2OS cells, but not LX2 cells. Bright field (top) and fluorescent (bottom) microscopy images showing strong plasma membrane binding of Myrcludex B-FITC in NTCP positive U2OS but not LX2 cells. The latter only shows non-specific intracellular signal. FITC, fluorescein isothiocyanate; NTCP, sodium+/taurocholate cotransporting polypeptide,
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图2
    图2

    Myrcludex B可与ntcp阳性U2OS细胞表面结合，但不能与LX2细胞表面结合。亮场(上)和荧光显微镜(下)图像显示NTCP阳性U2OS细胞中Myrcludex B-FITC的质膜结合较强，但LX2细胞中没有。后者仅显示非特异性细胞内信号。FITC,异硫氰酸荧光素;牛磺胆酸钠共转运多肽;

    总之，我们认为星形细胞中NTCP活性对纤维化的直接作用尚未被Salhab提出的实验所证实等．在我们将星形细胞中的NTCP作为一个有前途的抗纤维化靶点之前，需要更多的研究使用特定的抑制剂和更好的控制条件。

    伦理语句

    病人同意发表

    伦理批准

    这项研究不涉及人类参与者。

    参考文献

    1. ↵
      2. Salhab一个,
      3. 阿米尔-J,
      4. 陆Y,等
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      OpenUrl 摘要/免费的全文
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