跳转到主要内容gydF4y2Ba

谢谢你访问nature.com。您使用的浏览器版本支持有限的CSS。为了获得最好的体验,我们建议您使用更最新的浏览器(Internet Explorer或关闭兼容性模式)。同时,为了确保继续支持,我们网站没有显示样式和JavaScript。gydF4y2Ba

实时荧光和可变形性血细胞计数gydF4y2Ba

自然方法gydF4y2Ba体积gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,gydF4y2Ba页面gydF4y2Ba355 - 358 (gydF4y2Ba2018年gydF4y2Ba)gydF4y2Ba引用这篇文章gydF4y2Ba

主题gydF4y2Ba

文摘gydF4y2Ba

细胞力学描述最近的吞吐量接近传统的流血细胞计数器。然而,这非常敏感,label-free仍缺乏特异性的分子标记的方法。我们开发了一个方法,结合实时1维成像荧光和可变形性血细胞计数仪器(RT-FDC),因此许多新的研究途径。我们展示了其效用通过亚细胞荧光定位识别有丝分裂细胞和测试机械这些细胞的RNA干扰屏幕的变化。gydF4y2Ba

这是一个预览的订阅内容,gydF4y2Ba通过访问你的机构gydF4y2Ba

相关的文章gydF4y2Ba

开放获取文章引用这篇文章。gydF4y2Ba

访问选项gydF4y2Ba

本文租或购买gydF4y2Ba

价格不同的文章类型gydF4y2Ba

从gydF4y2Ba1.95美元gydF4y2Ba

来gydF4y2Ba39.95美元gydF4y2Ba

了解更多gydF4y2Ba

价格可能受当地税收计算在结帐gydF4y2Ba

图1:实时荧光和可变形性血细胞计数。gydF4y2Ba
图2:1 d荧光成像技术对有丝分裂细胞的识别。gydF4y2Ba

引用gydF4y2Ba

  1. 夏皮罗M.H.gydF4y2Ba实际的流式细胞术gydF4y2Ba(约翰·威利& Sons, Inc ., 2003)。gydF4y2Ba

  2. Elson E.L.gydF4y2Ba为基础。启Biophys。Biophys。化学。gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,397 - 430 (1988)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  3. 弗莱彻,D.A. &马林斯,rgydF4y2Ba自然gydF4y2Ba463年gydF4y2Ba,485 - 492 (2010)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  4. 马修斯,香港等。gydF4y2BaDev细胞。gydF4y2Ba23gydF4y2Ba,371 - 383 (2012)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  5. 奥托,o . et al。gydF4y2BaNat方法。gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,199 - 202 (2015)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  6. Ekpenyong A.E. et al。gydF4y2Ba《公共科学图书馆•综合》gydF4y2Ba7gydF4y2Bae45237 (2012)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  7. 谢霆锋,H.T.K. et al。gydF4y2Ba科学。Transl。地中海。gydF4y2Ba5gydF4y2Ba212 ra163 (2013)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  8. 粘糊糊的东西,j . et al。gydF4y2BaBiophys。J。gydF4y2Ba88年gydF4y2Ba,3689 - 3698 (2005)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  9. 位于沃森,9,Schwab, B.I., Elson, E.L. & Downey, G.P.科学gydF4y2Ba245年gydF4y2Ba,183 - 186 (1989)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  10. Bufi: et al。gydF4y2BaBiophys。J。gydF4y2Ba108年gydF4y2Ba,2181 - 2190 (2015)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  11. Toepfner: et al。gydF4y2BaeLifegydF4y2Ba7gydF4y2Bae29213 (2018)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  12. 戈塞仍,湄et al。gydF4y2BaProc。国家的。学会科学。美国gydF4y2Ba109年gydF4y2Ba,7630 - 7635 (2012)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  13. 尼伯格,K.D. et al。gydF4y2BaBiophys。J。gydF4y2Ba113年gydF4y2Ba,1574 - 1584 (2017)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  14. Ramdzan Y.M. et al。gydF4y2BaNat方法。gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,467 - 470 (2012)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  15. 灰色,J.W.,Peters, D., Merrill, J.T., Martin, R. & Van Dilla, M.A.j . Histochem。Cytochem。gydF4y2Ba27gydF4y2Ba,441 - 444 (1979)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  16. 巴斯基,D.A.,Ortyn, W.E., Liang, L., Venkatachalam, V. & Morrissey, P.中国。实验室。地中海。gydF4y2Ba27gydF4y2Ba,653 - 670 (2007)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  17. 刘,A.K.S.,Shum, H.C., Wong, K.K. & Tsia, K.K.芯片实验室gydF4y2Ba16gydF4y2Ba,1743 - 1756 (2016)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  18. Mietke, a . et al。gydF4y2BaBiophys。J。gydF4y2Ba109年gydF4y2Ba,2023 - 2036 (2015)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  19. Mokbel, m . et al。gydF4y2BaACS Biomater。科学。Eng。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,2962 - 2973 (2017)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  20. 稀有,m . et al。gydF4y2Ba科学。代表。gydF4y2Ba7gydF4y2Ba2549 (2017)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  21. 铃木。gydF4y2Ba第一版。粘度图。图像的过程。gydF4y2Ba46gydF4y2Ba32-46 (1985)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  22. Baum, b & Cherbas L。gydF4y2Ba摩尔。生物方法。gydF4y2Ba420年gydF4y2Ba,391 - 424 (2008)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba中科院gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  23. Herbig, m .等人gydF4y2Ba流式细胞术协议gydF4y2Ba(eds。霍利,r & Hawley t .) 347 - 370(胡玛纳出版社,2017年)。gydF4y2Ba

  24. R核心团队。gydF4y2Ba接待员:统计计算的语言和环境gydF4y2Ba(R统计计算的基础,2015)。gydF4y2Ba

  25. 贝茨,D。gydF4y2BaR新闻gydF4y2Ba5gydF4y2Ba研究(2005)。gydF4y2Ba

    谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  26. 心情,点,Graybill, F.A. & Boes, D.C.介绍了统计理论gydF4y2Ba第三版,540 - 541(麦格劳-希尔,1974)。gydF4y2Ba

  27. 威尔,轮gydF4y2Ba《数理统计gydF4y2Ba9gydF4y2Ba60 - 62 (1938)。gydF4y2Ba

    文章gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

下载参考gydF4y2Ba

确认gydF4y2Ba

我们感谢d . Klaue m . Urbanska f . Rosendahl, i级有用的讨论和技术支持。我们感谢m . Schurmann琼脂糖的折射率测量结果。我们感谢m . Piel(居里研究所、巴黎、法国)捐赠的海拉H2B-mCherry细胞系。我们感谢m . Bornhauser(血液学和肿瘤学部门,大学诊所卡尔·古斯塔夫词Carus德累斯顿技术大学,德累斯顿,德国)提供apheresis血液样本。我们收到了共焦显微镜的光学显微镜设备的支持,从微观结构对微流控芯片生产设施;都是核心设施中心的分子和细胞生物工程德累斯顿技术大学(CMCB)。我们感激地承认金融支持Alexander-von-Humboldt Stiftung(洪堡教授j), Sachsisches Ministerium毛皮科学和Kunst (TG70格兰特。o和j。;欧洲基金区域Development-EFRE密度和j),伦理委员会(j。格兰特“LightTouch”282060年开始),脱硫再生医学中心的德累斯顿技术大学的j。格兰特(种子),在脱硫KFO249(顾J.G. 612/2-2助学金),人和(Mechthild哈弗科研资助的人和——sls - mhg - 2016 - 02年A.J.),和英国癌症研究中心(C1529 / A17343授予博)。gydF4y2Ba

作者信息gydF4y2Ba

作者指出gydF4y2Ba

  1. 菲利普Rosendahl Katarzyna Plak:这些作者的贡献同样这项工作。gydF4y2Ba

作者和联系gydF4y2Ba

  1. 生物技术中心,分子和细胞生物工程中心,德累斯顿技术大学,德国德累斯顿gydF4y2Ba

    菲利普•Rosendahl Katarzyna Plak·雅可比马丁•Kraeter妮可Toepfner,奥利弗·奥托Christoph哈罗德,玛丽亚Winzi,迈克Herbig,燕通用电气,凯特琳瓦格纳& Jochen粘糊糊的东西gydF4y2Ba

  2. MRC实验室分子和细胞生物学,伦敦大学学院,伦敦,英国gydF4y2Ba

    鲍姆Katarzyna Plak & BuzzgydF4y2Ba

  3. 医疗诊所,大学医院卡尔·古斯塔夫词Carus德累斯顿技术大学,德国德累斯顿gydF4y2Ba

    马丁KraetergydF4y2Ba

  4. 大学医院儿科学系卡尔·古斯塔夫词Carus德累斯顿技术大学,德国德累斯顿gydF4y2Ba

    妮可ToepfnergydF4y2Ba

  5. 微观结构设施,分子和细胞生物工程中心德累斯顿技术大学,德国德累斯顿gydF4y2Ba

    萨尔瓦多GirardogydF4y2Ba

作者gydF4y2Ba
  1. 菲利普RosendahlgydF4y2Ba
    看来作者出版物gydF4y2Ba

    你也可以搜索这个作者gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  2. Katarzyna PlakgydF4y2Ba
    看来作者出版物gydF4y2Ba

    你也可以搜索这个作者gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  3. 安琪拉雅可比gydF4y2Ba
    看来作者出版物gydF4y2Ba

    你也可以搜索这个作者gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  4. 马丁KraetergydF4y2Ba
    看来作者出版物gydF4y2Ba

    你也可以搜索这个作者gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  5. 妮可ToepfnergydF4y2Ba
    看来作者出版物gydF4y2Ba

    你也可以搜索这个作者gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  6. 奥利弗·奥托gydF4y2Ba
    看来作者出版物gydF4y2Ba

    你也可以搜索这个作者gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  7. Christoph哈罗德gydF4y2Ba
    看来作者出版物gydF4y2Ba

    你也可以搜索这个作者gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  8. 玛丽亚WinzigydF4y2Ba
    看来作者出版物gydF4y2Ba

    你也可以搜索这个作者gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  9. 迈克HerbiggydF4y2Ba
    看来作者出版物gydF4y2Ba

    你也可以搜索这个作者gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  10. 燕通用电气gydF4y2Ba
    看来作者出版物gydF4y2Ba

    你也可以搜索这个作者gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  11. 萨尔瓦多GirardogydF4y2Ba
    看来作者出版物gydF4y2Ba

    你也可以搜索这个作者gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  12. 凯特琳瓦格纳gydF4y2Ba
    看来作者出版物gydF4y2Ba

    你也可以搜索这个作者gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  13. Buzz鲍姆gydF4y2Ba
    看来作者出版物gydF4y2Ba

    你也可以搜索这个作者gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

  14. Jochen粘糊糊的东西gydF4y2Ba
    看来作者出版物gydF4y2Ba

    你也可以搜索这个作者gydF4y2BaPubMedgydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

贡献gydF4y2Ba

J.G.构思的项目。公关建立了实验装置。产品供应商和h支持光学设计。公关程序实时的数据评估软件。伙夫Kc167设计并进行实验,与博海拉细胞和分析数据的支持。公关与红血球台币进行实验。抗干扰,M.K., and P.R. performed experiments on HSPCs and analyzed the data. P.R. performed and analyzed experiments for device characterization. M.H., O.O., and Y.G. developed the linear mixed model algorithm for statistical evaluation. K.W. and S.G. produced fluorescent beads for device characterization. M.W. performed reference measurements with calibration beads on FCM. S.G. produced masters for microfluidic chips. J.G. and B.B. supervised the project. P.R., K.P., and J.G. wrote the manuscript. All authors reviewed the manuscript.

相应的作者gydF4y2Ba

对应到gydF4y2BaJochen粘糊糊的东西gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

道德声明gydF4y2Ba

相互竞争的利益gydF4y2Ba

公关,O.O., and C.H. are shareholders and employees of the company Zellmechanik Dresden GmbH, which sells devices based on RT-DC and RT-FDC technology. All other authors declare no competing interests.

综合补充信息gydF4y2Ba

补充图1微流控芯片布局。gydF4y2Ba

进口和出口油管连接的位置标注gydF4y2Ba⊗gydF4y2Ba。阵列柱过滤掉碎片和尘埃粒子,以避免堵塞的狭窄通道。的地区利益相机定位在300年底μm长通道在测量(测量区域)。gydF4y2Ba

补充图2 RT-FDC荧光检测的原理和特征。gydF4y2Ba

(gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)光片荧光的激发和检测结果与宽度取决于荧光团的荧光峰本地化。(gydF4y2BabgydF4y2Ba在焦平面)孔径函数(gydF4y2Bax - ygydF4y2Ba)的激发和检测三个荧光通道/激光。(gydF4y2BacgydF4y2Ba)确定厚度的光沿着通道轴gydF4y2BaxgydF4y2Ba产生的值3.64±0.03μm 488海里,3.16±0.02μm 561海里,3.41±0.05μm 640海里。因此,线宽小于大多数真核细胞,它可以用来识别荧光探针的亚细胞分布。(gydF4y2BadgydF4y2Ba)与异构的双色荧光琼脂糖珠大小的测量。策划是绿色的荧光峰宽度(FL-1: 525/50 nm)和红色(FL-3: 700/75 nm)通道。线性适合表明系统决定了几乎相同的尺寸在两个频道。实验gydF4y2Ba得了gydF4y2Ba与类似的结果重复三次。gydF4y2Ba

补充图3校准珠测量。gydF4y2Ba

测量校准珠子人口8 RT-FDC和FCM (BD LSR II)为所有三个渠道。(gydF4y2Ba得了gydF4y2Ba)从RT-FDC测量荧光强度直方图。小标签图表示峰值位置。(gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)绿色FL-1通道(525/50 nm), (gydF4y2BabgydF4y2Ba红色FL-2通道(593/46 nm), (gydF4y2BacgydF4y2Ba)深红色FL-3通道(700/75海里)。(gydF4y2BadgydF4y2Ba)归一化比较子总体中强度与峰值或人口指数。(gydF4y2BaeggydF4y2Ba)从LSR II FCM直方图数据对应的通道。(gydF4y2BaegydF4y2Ba)绿色通道(530/30 nm), (gydF4y2BafgydF4y2Ba红色通道(575/26 nm), (gydF4y2BaggydF4y2Ba)深红色通道(670/14海里)。这两种方法与强度确定八个对象的数量在三个数量级的动态范围。实验gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BabgydF4y2Ba,gydF4y2BaegydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BaggydF4y2Ba与类似的结果重复三次。gydF4y2Ba

补充图4 CD34的评价gydF4y2Ba+gydF4y2Ba分组人口关于image-processing-based参数变形、尺寸、亮度、粒度。gydF4y2Ba

CD34gydF4y2Ba−gydF4y2Ba细胞是在灰色的策划而CD34gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞所示颜色编码数据点的密度。(gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)CD34变形gydF4y2Ba+gydF4y2Ba公司与CD34-APC荧光强度。(gydF4y2BabgydF4y2Ba)投影面积与CD34-APC荧光强度。(gydF4y2Bac - dgydF4y2Ba)基于图像亮度的评估。(gydF4y2BacgydF4y2Ba)内亮度细胞轮廓绘制CD34-APC强度。亮度可以作为一个额外的标记来识别白细胞的子集,最近所示Toepfner et al。gydF4y2Ba11gydF4y2Ba。(gydF4y2BadgydF4y2Ba的标准偏差)的粒度特征是细胞内轮廓像素亮度值,并绘制在CD34-APC强度。没有相关CD34-expression水平检测与参数。然而,cd34多公司似乎在亮度参数相比,相对较低的传播非常异构CD34-negative细胞。实验(gydF4y2Ba模拟gydF4y2Ba)独立重复三次类似的结果。gydF4y2Ba

公司补充图5三色的抗体染色。gydF4y2Ba

收集血液样本—动员捐助者与CD3-FITC apheresis和染色后,CD34-PE, CD14-APC。(gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)控制策略排除的红血球细胞的大小和亮度。(gydF4y2BabgydF4y2Ba)门cd34多细胞的荧光强度。(gydF4y2BacgydF4y2BaCD3)门在gydF4y2Ba−gydF4y2BaCD14gydF4y2Ba−gydF4y2Ba分组人口排斥的谱系标记。(gydF4y2BadgydF4y2BaCD34)产生的机械指纹gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD3gydF4y2Ba−gydF4y2BaCD14gydF4y2Ba−gydF4y2Ba程序。(gydF4y2BaegydF4y2Ba)Back-gated分组人口从初始(d)表示。(gydF4y2BafgydF4y2Ba)CD3gydF4y2Ba+gydF4y2Ba部分机械指纹。(gydF4y2BaggydF4y2Ba)CD14gydF4y2Ba+gydF4y2Ba分数。(gydF4y2BahgydF4y2Ba)CD34gydF4y2Ba+gydF4y2Ba分数与所有其他细胞所示灰色。实验进行了一次。gydF4y2Ba

补充图6代表流式细胞仪测量CD34-APC-stained G-CSF-mobilized血样。gydF4y2Ba

(gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)向前散射与侧散点图1门分离细胞碎片的事件。(gydF4y2BabgydF4y2Ba)荧光标记CD34gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞中发现门2侧散射强度与APC阴谋。(gydF4y2BacgydF4y2Ba)直方图细胞的荧光峰山庄大门1(门3 = CD34gydF4y2Ba+gydF4y2Ba)。实验进行了三次独立得到了类似的结果。gydF4y2Ba

补充图7的力学性能未成熟与成熟红细胞(红血球)。gydF4y2Ba

网织红细胞是不成熟的红细胞表面的一部分,通常代表总数的大约5 - 15‰红血球在人类血液的循环gydF4y2Ba12gydF4y2Ba。在第一次两天后被释放到血液中,网织红细胞失去细胞质RNA作为他们成熟的红细胞表面。这使我们使用核酸染色syto13识别RNA-positive网织红细胞荧光。荧光读出商业LSR II FCM(之间的比较gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)和RT-FDC (gydF4y2BabgydF4y2Ba如柱状图所示。(gydF4y2BacgydF4y2Ba)比较网织红细胞分数确定RT-FDC和最先进的全自动血细胞计数(xe - 5000,德国Sysmex)三个捐助者。列显示计数误差代表标准误差产生的泊松统计数据。网织红细胞数相对于红细胞表面的协议。(gydF4y2BadgydF4y2Ba)红细胞和网织红细胞人口中位数在变形的位置和面积。(阴影区域是出于演示目的)红细胞μm粒度中值35.90gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和0.254,网织红细胞变形较大(39.2μmgydF4y2Ba2gydF4y2Ba)并显示较小的变形(0.240)。箭头所示的区别是重要的测试与线性混合模型分析(gydF4y2Ba补充表2gydF4y2Ba)。(gydF4y2Bae, fgydF4y2Ba)代表变形和区域块网织红细胞和成熟的红细胞表面。(gydF4y2BaggydF4y2Ba)变形与syto13荧光,(gydF4y2BahgydF4y2Ba)区域与syto13荧光。结果与以往报告网织红细胞gydF4y2Ba13gydF4y2Ba一直局限于劳动密集型的微量吸液管和显微孔化验有限数量的细胞。我们发现人类的网织红细胞在全血样品相比略大,不变形红细胞表面(gydF4y2BadgydF4y2Ba,gydF4y2Ba补充表2gydF4y2Ba)。增加网状细胞过多症一直与婴儿和镰状细胞性贫血的发病率增加gydF4y2Ba14gydF4y2Ba和红细胞分布宽度也被用作预测临床疗效不佳的设置的各种疾病,包括冠心病gydF4y2Ba15gydF4y2Ba。添加RT-FDC表现型临床使用的网织红细胞指数可能因此提供一种监测血液流变学改变血液学的疾病gydF4y2Ba11日15gydF4y2Ba。实验(gydF4y2Baa、bgydF4y2Ba)进行一次,(gydF4y2Ba碳氢键gydF4y2Ba与样本)进行三种不同的捐赠者。gydF4y2Ba

补充图8 1 d-fluorophore定位检测的荧光峰宽。gydF4y2Ba

我们使用一维成像检测亚细胞,核本地化的荧光蛋白通过比较荧光峰宽度细胞表达核本地化序列(nls)和胞质(cyt)荧光蛋白标记。在这里,海拉细胞转染质粒表达GFP和mRFP有或没有核定位序列(nls)。红点:胞质RFP和核GFP,黑点:两个荧光体胞质,胞质GFP和核RFP的绿色小点。细胞,GFP和RFP荧光团硝唑可以找到对角线上的阴谋。以后,在动物细胞中,细胞周期进展涉及核渗透率的变化,我们可以利用这个特性来识别有丝分裂细胞异构人口中发现了有丝分裂细胞gydF4y2Ba果蝇gydF4y2BaRNAi屏幕(见gydF4y2Ba图2 cgydF4y2Ba)。这个实验也表明,绿色和红色通道可以交替使用这种分析。实验3次独立得到了类似的结果。gydF4y2Ba

补充图9的秋水仙素处理对分数的影响有丝分裂Kc167细胞。gydF4y2Ba

荧光峰宽情节(tdTomato比nls-GFP) (gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba摘要或(gydF4y2BabgydF4y2Ba)秋水仙碱治疗细胞表明秋水仙碱治疗增加细胞的数量与胞质nls-GFP(分数的细胞即使峰值宽度,局部沿对角线)。在有丝分裂期间,核膜破裂释放nls-GFP胞质蛋白,影响GFP的测量峰宽渠道。这是用来识别有丝分裂细胞RT-FDC测量。有丝分裂细胞由彩色斑点,间期细胞以灰色显示。(gydF4y2BacgydF4y2Ba)与手动检查Hoechst33342染色细胞的共焦显微镜图像。酒吧图表显示从计数、百分比误差显示标准误差产生的泊松统计数据。缩微non-sync。49/1063(有丝分裂/总数)细胞进行了分析,对显微镜同步。156/928的细胞,RT-FDC non-sync。388/6871和1078/6120的细胞进行了分析。实验(gydF4y2Baa, b, cgydF4y2Ba)进行一次。gydF4y2Ba

补充图10 Kc167 RNAi屏幕的数据处理。gydF4y2Ba

对于每一个基因,实验和两个dsRNA变体进行,每个重复三个不同的天,两个不同的流速。模范的基因10(韩国)图0.04μL / s流量显示。和所有其他的统计分析组数据是可用的gydF4y2Ba补充表3gydF4y2Ba。有丝分裂细胞是由彩色点而有限数量的间期细胞显示在灰色。实验(中心列)都是对模拟控制相比(左列)。看到右列的比较分散的情节。虚线轮廓线绘制的最大数据点密度的50%,和坚实的轮廓线在95%。模拟数据和治疗变成了弹性模量的值比较的线性混合模型分析(gydF4y2Ba补充图10gydF4y2Ba和gydF4y2Ba补充表3gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

补充图11的结果屏幕Kc167细胞的基因调节有丝分裂细胞力学。gydF4y2Ba

对每个基因两个dsRNA构造使用和dsRNA治疗上重复了三次单独一天。大小和变形数据转化为E模使用Shapeout软件和使用线性混合模型进行了统计分析。基因一致的结果对流量和p值< 0.05都视为支安打。(“*”:p < 0.05,“* *”: p < 0.01)gydF4y2Ba

补充图12的双色荧光检测FUCCI细胞循环标记gydF4y2Ba16gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

(gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)两个颜色荧光散点图与盖茨为G1和G2 / M期。(gydF4y2BabgydF4y2Ba)一个脉冲宽度评价使有丝分裂细胞的检测,因为GFP定位在细胞核中在有丝分裂间期和细胞溶质,导致更大范围的脉冲。(gydF4y2Ba氟gydF4y2Ba)细胞周期特定机械混合样品的指纹G1, G2和有丝分裂。实验进行了10次独立得到了类似的结果。gydF4y2Ba

补充图13暂停对RPE1细胞的影响。gydF4y2Ba

(gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)细胞周期阶段特定机械指纹RPE1细胞分离后直接使用胰蛋白酶(青色),从板和30分钟后悬架(红色)。轮廓显示95%的密度iso-lines,虚线轮廓iso-lines 50%。(gydF4y2BabgydF4y2Ba)变形的比较中位数(N = 10复制。在间期细胞表现出明显的变化在可变形性将被保存在暂停30分钟。有丝分裂族群的另一方面,基于t变化不明显(两面,韦尔奇纠正)与* *:p < 0.01 n。:p≥0.05。箱线图胡须从5gydF4y2BathgydF4y2Ba到95年gydF4y2BathgydF4y2Ba从25百分位数,盒子gydF4y2BathgydF4y2Ba到75年gydF4y2BathgydF4y2Ba百分位,水平线表示中位数,意思是象征着由一个小型广场。N = 10复制与样本相同的细胞培养,但独立处理和测量在不同天,进行了分析。gydF4y2Ba

补充图14对准光路的技术细节。gydF4y2Ba

(gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)激励和(gydF4y2BabgydF4y2Ba)发射的光路径RT-FDC设置。各个部分的解释,请参阅网上gydF4y2Ba方法gydF4y2Ba部分实验设置。gydF4y2Ba

补充信息gydF4y2Ba

补充文本和数字gydF4y2Ba

补充图1 - 14、补充讨论和补充表1 - 5gydF4y2Ba

生命科学报告总结gydF4y2Ba

源数据gydF4y2Ba

权利和权限gydF4y2Ba

再版和权限gydF4y2Ba

关于这篇文章gydF4y2Ba

检查更新。验证通过CrossMark货币和真实性gydF4y2Ba

引用这篇文章gydF4y2Ba

Rosendahl, P。Plak, K。,Jacobi, A.et al。gydF4y2Ba实时荧光和可变形性血细胞计数。gydF4y2BaNat方法gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,355 - 358 (2018)。https://doi.org/10.1038/nmeth.4639gydF4y2Ba

下载引用gydF4y2Ba

  • 收到了gydF4y2Ba:gydF4y2Ba

  • 接受gydF4y2Ba:gydF4y2Ba

  • 发表gydF4y2Ba:gydF4y2Ba

  • 发行日期gydF4y2Ba:gydF4y2Ba

  • DOIgydF4y2Ba:gydF4y2Bahttps://doi.org/10.1038/nmeth.4639gydF4y2Ba

本文引用的gydF4y2Ba

搜索gydF4y2Ba

高级搜索gydF4y2Ba

快速链接gydF4y2Ba

自然简报gydF4y2Ba

报名参加gydF4y2Ba自然简报gydF4y2Ba通讯-重要的科学,每天免费发送到您的收件箱中。gydF4y2Ba

一天中最重要的科学故事,自由在你的收件箱。gydF4y2Ba 报名参加自然简报gydF4y2Ba