文摘
一个健壮的血清学试验检测中和抗体SARS-CoV-2急需确定不仅感染率,群体免疫和体液预测保护,而且疫苗功效后在临床试验和大规模的疫苗接种。目前的黄金标准是传统的病毒中和试验要求住病原体和生物安全三级实验室。在这里,我们报告一个SARS-CoV-2代孕病毒中和试验检测总immunodominant中和抗体针对病毒峰值(S)蛋白受体结合域的同形像,与对象无关的方式。我们的简单和快速测试是基于抗体介入堵塞的血管紧张素转换酶2 (ACE2)之间的相互作用受体蛋白和受体结合域。测试,验证了两个群COVID-19患者在两个不同的国家,特异性和灵敏度95 - 100%达到99.93%,区别人类冠状病毒抗体反应几个。代理病毒中和试验不需要生物安全三级控制,使它广泛的访问研究和临床应用的更广泛的社区。
主要
COVID-19爆发第一次承认2019年12月在武汉,中国1和已经蔓延到世界各地,导致10357662确诊感染508055人死亡的2020年7月1日2。病原体被确认为2019 - ncov,随后指定SARS-CoV-23,4,这属于物种困难冠状病毒(SARSr-CoV),冠一样,17年前SARS疫情的病原体5。
尽管分子检测技术,如聚合酶链反应(PCR)和下一代测序,发挥了重要作用在急性的诊断和监测病毒的基因变化,迫切需要存在一个可靠的和通用的血清学抗体测试。这种测试需要回顾接触者追踪,调查的无症状感染,病死率的精确测定,和评估的群体免疫和体液保护性免疫恢复病人和接受者的候选疫苗,并在寻找自然宿主和中间宿主(s)6。研究实验室和制药公司正竞相产生抗体的测试可以检测COVID-19感染足够的特异性和敏感性6。有两种类型的抗体测试目标。第一类是传统的病毒中和试验(cVNT),它检测到中和抗体(小伙子)患者的血液中。cVNT需要处理SARS-CoV-2住在专门的生物安全三级(BSL3)防范设施和繁琐,耗费时间,2 - 4天才能完成。的pseudovirus-based VNT (pVNT),另一方面,可以在BSL2实验室执行,但仍需要使用活病毒和细胞7,8。所有其他化验,如酶联免疫吸附试验(ELISA)和侧流试验(LFA)快速测试,表示第二个试验类型,检测总抗体绑定(芭布斯)和无法区分芭布斯和小伙子6,9,10。
在这项研究中,我们建立了一个代理VNT (sVNT)检测小伙子,而不需要任何活病毒或细胞,可以在1 - 2 h在BSL2实验室完成。使用纯化受体结合域(RBD)的S蛋白和宿主细胞受体ACE2,我们的测试的目的是模拟病毒-宿主相互作用的ELISA板。这个RBD-ACE2交互可以中和(阻塞)由特定的小伙子在病人或动物血清,以同样的方式在cVNT或pVNT。
结果
生化模拟病毒受体相互作用和抗体介入中和
SARS-CoV-2后立即被确认为COVID-19疫情的病原体,它表明人类ACE2 (hACE2)是病毒的主要功能受体条目3。我们假设病毒受体结合可以模仿体外通过使用纯化重组hACE2和蛋白质间交互作用RBD SARS-CoV-2年代的蛋白质。这种互动可以被病毒小伙子出现在测试血清,用同样的原则作为cVNT进行使用活病毒在BSL3设施(图。1 a, b)。
在我们的研究中,直接绑定了使用不同SARS-CoV-2与辣根过氧化物酶结合的蛋白质(合)。hACE2之间存在特定的绑定存在剂量依赖的相关性和RBD或S1,但不是核衣壳蛋白(N), RBD生产最好的绑定特性(无花果。1 c)。HRP-RBD蛋白被选为后续研究。然后我们证明这个特定的RBD-hACE2绑定可以通过COVID-19阻塞或中和血清剂量依赖性的方式,但不是从健康对照组血清(无花果。1 d)。使用一组20恢复期的血清,我们证明了HRP-RBD执行探测小伙子比HRP-S1(扩展数据图。1)。证明同样的原则适用于冠密切相关,也使用hACE2作为受体的条目11,我们重复类似的实验,证明了冠RBD以几乎相同的方式执行sVNT格式(无花果。1 e, f)。进一步确认sVNT测量是正确的家伙,可以区分从芭布斯被使用相同的RBD ELISA抗原,我们比较性能的15个单克隆抗体(mab)从4个不同的物种(4从老鼠,兔子,3从骆驼和4人)在RBD ELISA和RBD sVNT(扩展数据图。2和补充表1)。从每一个物种,我们发现马伯ELISA (s),并有很强的约束力,但薄弱或没有sVNT中和活动。
同形像统计图,与对象无关中和
sVNT的优点之一是能够检测病人血清中总RBD-targeting抗体,与大多数SARS-CoV-2抗体测试发布或销售,其中大部分是isotype-specific,主要为IgM或免疫球蛋白,IgA的一些9,10,12。从患者恢复期的血清COVID-19在新加坡,我们指定的四组基于IgM或免疫球蛋白ELISA的水平,取决于我们内部捕获ELISA检测(见方法):高IgM /低免疫球蛋白;低IgM /低免疫球蛋白;低IgM /高免疫球蛋白;和高IgM /高免疫球蛋白。所有组显示活动强劲中和sVNT(无花果。2),演示的isotype-independent性能试验。值得注意的是,较低的面板IgM /低免疫球蛋白g、70 - sVNT抑制仍达到90%,显示其优越的敏感性,这组血清被认为是负面的或弱阳性仅基于IgM isotype-specific捕获ELISA和免疫球蛋白。有趣的是,效价下降的斜率最大的低IgM /低免疫球蛋白组,其次是高IgM /低免疫球蛋白组。
然后,我们测试了不同的动物血清sVNT化验证明与对象无关的性能。结果免疫老鼠和兔子SARS-CoV-2 RBD蛋白质证明非常有效的中和活动SARS-CoV-2 sVNT(无花果。3)。同样,从非典冠状和兔子的雪貂感染免疫血清灭活冠还显示一个有效剂量依赖性抑制hACE2之间的交互和冠RBD冠sVNT(无花果。3 b)。
SARS特异性对其他人类浸和比较血清收集在2003年和2020年
为了演示特异性,我们测试了不同的面板和证实SARS-CoV-2 sVNT可以区分抗体反应SARS-CoV-2 x和其他人类感染(无花果。3 c)。人类从229 / NL63或OC43感染患者血清和羊驼血清实验MERS-CoV感染,没有可检测交叉中和。非典血清,反应有些大,不意外的给他们的亲缘关系密切,据报道3,7。当分析冠和SARS-CoV-2 sVNT并排化验,中和从SARS患者血清分化从患者血清COVID-19(无花果。3 d, e)。
在调查过程中潜在的SARS病毒血清和SARS-CoV-2之间的大,我们几个显著的观测。首先,尽管缺乏的SARS对SARS-CoV-2活病毒血清交叉中和cVNT观察到美国和其它组13,14,我们发现某种程度的交叉中和sVNT(无花果。3 c),这表明sVNT比cVNT更敏感。第二,非典小伙子可检测至少17年恢复患者(无花果。3 c, e)。第三,非典型肺炎血清交叉中和水平较高采样2020年比2003年(图采样。3 c),尽管同源中和水平2020血清(无花果。3 e)低于2003血清(无花果。3 d);这也证实了确定RBD-binding抗体使用间接ELISA试验(扩展的数据图。3)。最后,我们发现N-specific 2020非典血清抗体水平要低得多比2003个样本(无花果。3 f)。
生化sVNT之间的相关性和活病毒cVNT pVNT
小组60 COVID-19血清与不同级别的SARS-CoV-2小伙子第一次由sVNT选择之间的比较和相关性研究sVNT和另外两个VNTs cVNT pVNT。如无花果所示。4得了,所有三个VNT化验有一个很好的整体相关,与sVNT-cVNT关联略优于sVNT-pVNT或pVNT-cVNT。sVNT效价的计算使用半峰抑制浓度(IC50;补充表2)。在扩展数据图。2使用马伯,并非所有RBD-binding抗体是小伙子,但RBD仍然是一个合适的抗原估计NAb COVID-19患者血清中的水平。此外,如扩展数据图所示。4,还有一个好的RBD ELISA结果之间的相关性和RBD sVNT。
验证两个群体的积极的和消极的血清来自两个国家
验证的性能SARS-CoV-2 sVNT,我们测试了两组不同的积极的和消极的血清。执行的试验是在两个不同的国家由两个独立的团体,进一步确保可靠性和重现性。截止在30%抑制选择测试超过500 -人类血清。第一组,我们测试了175从患者血清PCR-confirmed COVID-19在新加坡收集在出现症状后几天14-33和200名健康控制血清,导致100%的特异性和灵敏度为98.9%(图。4 d)。在第二组中,我们测试了50个患者的血清PCR-confirmed COVID-19在南京,中国,出现症状后取样天27 - 61和200名健康控制血清。的特异性为100%,敏感性为98%(图。4 e)。
讨论
我们现在7个月到COVID-19爆发,全世界的关注,对科学界和决策者,转移注意力从急性使用血清学诊断策略和能力的一个重要组成部分封锁退出战略,依靠准确评估感染的患病率和保护性免疫在个体和人口(群)的水平。讨论和辩论血清学的作用大大加强了在这种情况下6。
尽管许多COVID-19实验室或现场即时抗体测试套件是商用,没有一个能够测量小伙子。cVNT和pVNT平台仍然发现小伙子的唯一平台。然而,需要活病毒和细胞,高度熟练的操作符和天获得结果。他们因此不适合大规模生产和测试,以商业规模养殖,即使在最发达的国家。
世界卫生组织最近警告说,积极的抗体测试结果不平等的保护性免疫15由于技术和科学的挑战。首先,大部分,如果不是全部,测试目前在大规模检测芭布斯的孤独和不衡量真正的家伙;第二,小伙子的存在可能会或可能不会与保护。尽管后者挑战将更加深入的科学和临床研究来解决特定上下文的COVID-19,过去的经验与病毒感染一般认为,在大多数病人中恢复过来,NAb保护性免疫的水平是一个很好的指标,尽管有已知的例外“经验法则”16,17。在这项研究中,我们已经开发出一种血清学平台应对技术挑战。
本文提供的数据表明,sVNT尽可能具体,但更敏感,cVNT细胞类型的测试(图。4)。在我们最初的优化研究中,我们发现RBD蛋白质表现好于S1蛋白(扩展数据图。1)。我们还比较了RBD蛋白在昆虫和哺乳动物细胞,发现生产性能(扩展数据图非常相似。5)。仍有可能进一步改善的敏感性sVNT平台在未来通过蛋白质工程RBD——或ACE2-binding接口。扩展数据图的马伯研究。2证明RBD sVNT措施真正的家伙,而RBD ELISA是无法区分芭布斯和小伙子。因此可以得出结论,RBD-based sVNT是一个健壮的试验平台可靠的量化RBD-targeting小伙子。应该注意的是,并不是所有的家伙都必然RBD-binding抗体,与过去的研究表明冠状显示S1和S2蛋白抗体和其他地区也可以扮演一个角色在病毒中和18。然而,研究基于冠和SARS-CoV-2表明RBD-targeting小伙子在非典和immunodominant COVID-19感染19,20.。在我们的研究中,我们使用60个病人血清样本不同NAb的水平,和我家的相关研究提出了无花果。4清楚地表明sVNT之间的相关性和cVNT一样好,如果不是比,pVNT和cVNT之间。这表明non-RBD-targeting抗体,可以以pVNT,但不是在sVNT,不太可能发挥重要作用在SARS-CoV-2中和,与先前的研究一致19,20.,21。
sVNT的主要优势是,它可以迅速在大多数研究或临床实验室进行而不需要使用活生物材料和生物安全控制。sVNT也适合高通量测试和/或完全自动化测试后最小的适应。
sVNT的另一个优点是它能察觉SARS-CoV-2抗体与对象无关的方式。SARS-CoV-2的起源和早期传播事件仍然难以捉摸,sVNT试验将适合病毒狩猎,过去的研究充分证明,血清学调查比分子检测考虑更优越的特异抗体在动物身上比病毒遗传物质持续更长的时间22,23,24。抽样血清抗体检测也比其他抽样方法更可靠的用于分子检测,作为目标的组织可以从病毒病毒不同25,26,27。
此外,sVNT提供了一个关键优势大多数ELISA或即时测试能力检测总isotype-independent地家伙。这不仅简化了测试策略也进一步增加测试灵敏度。如无花果所示。2 bCOVID-19患者的血清面板显示低IgM和免疫球蛋白isotype-specific elisa, sVNT试验还发现大量的家伙。虽然机制需要进一步的调查,至少有两个可能性:其他免疫球蛋白同形像或中和协同作用的存在(协同组合不同的同形像neutralization-critical抗体针对不同抗原表位),如前所观察到的艾滋病毒和其他病毒28,29日,30.。我们的初步分析表明,中和协同作用更可能的机制。首先,从人类mAb的研究中,我们发现了一些证据之间的协同两个中和马伯,AR6949和AR6959(扩展数据图。2我)。第二,IgA测试表明,没有高水平的RBD-specific IgA低IgM /低免疫球蛋白组(扩展数据图。6)。
结果从两个相隔17年非典血清面板是显著的。存在长期的家伙17年在最初感染患者来说是令人鼓舞的消息从COVID-19中恢复过来,考虑两种病毒之间的密切关系。增加的机制和生物学意义交叉中和对SARS-CoV-2加上N-specific抗体减少/消失的17年感染后保证进一步调查更好地理解上下文中的SARSr-CoV免疫反应动力学。
总之,我们有解决的挑战COVID-19血清学方法,使检测的小伙子在一个简单的,安全的和快速的方式增强特异性和敏感性。尽管sVNT试验可能永远无法完全取代cVNT,我们的数据表明,sVNT很相关的性能与cVNT和pVNT。的应用程序可以涵盖许多方面COVID-19从接触者追踪调查,seroprevalence测量和水库/中间动物跟踪评估群体免疫和长寿的保护性免疫。它还可以用来评估疫苗效力期间不同候选疫苗的临床前和临床试验和监测中和滴度在疫苗接种者在人口大规模疫苗接种。
方法
细胞和病毒
人类胚胎肾HEK293T细胞(写明ATCC没有。crl - 3216)和非洲绿猴肾细胞克隆E6 (Vero-E6)(写明ATCC没有。crl - 1586)在杜尔贝科的修改维护鹰介质(DMEM)补充10%胎牛血清。SARS-CoV-2、隔离BetaCoV /新加坡/ 2/2020 (GISAID加入代码EPI_ISL_406973),是用于VNT Vero-E6细胞31日。HEK293T / SARS-CoV-2飙升表达式生成细胞的转导pQCXIH-SARS-CoV-2尖峰,紧随其后的是潮霉素选择在最后100μg毫升的浓度−1。SARS-CoV-2飙升准型病毒是由感染HEK293T-SARS-CoV-2飙升细胞与水泡性口炎病毒ΔG-luc种子病毒感染复数的和收集16 h感染后。
质粒和重组蛋白
SARS-CoV-2 N和S和冠N基因被GenScript和BioBasic合成。SARS-CoV-2 N和冠N基因克隆到pcDNA3.1 pDualGC表达向量根据制造商的指示。SARS-CoV-2 S基因被克隆到pQCXIH向量。hACE2基因从pCAGGS-hACE2放大质粒(礼物z Shi,武汉病毒学研究所、中国)和subcloned pQCXIH表达载体。重组SARS-CoV-2 RBD和S1和冠RBD蛋白质是由GenScript使用baculovirus-insect细胞表达系统。性能比较,重组SARS-CoV-2 RBD也是由GenScript哺乳动物表达系统。这些重组蛋白的序列信息补充表所示3。蛋白纯度由sds - page和蛋白质浓度测定Nanodrop 2000。合结合是由添加激活合在2:1质量比RBD,其次是孵化2 h在25±2°C在黑暗中不断的颤抖。硼氢化钠添加到共轭反应,最终200μg毫升的浓度−1在黑暗中,其次是孵化2 h在25±2°C不断颤抖。HRP-conjugated蛋白质透析在PBS和蛋白质纯化HRP-conjugated 10毫克毫升−1BSA和保存在0.01%硫柳汞。SARS-CoV-2和冠polyhistidine-tagged N蛋白表达的pcDNA3.1 SARS-CoV-2 N和pDualGC冠N质粒,分别。表达式是在转染HEK293T细胞和由此产生的蛋白进行纯化使用镍琼脂糖(通用电气医疗集团)后,制造商的指示。总之,20μg pcDNA3.1 SARS-CoV-2 N或pDualGC冠N被用来使转染HEK293T细胞。在48 h post-transfection,细胞与细胞裂解细胞溶解缓冲区(20毫米三,300毫米氯化钠,1% Triton x - 100, 0.1% SDS, 10毫米β-mercaptoethanol, 25毫米咪唑,pH值8.0)。阐明细胞溶解产物与倪pre-incubated琼脂糖在一夜之间在4°C不断旋转。Polyhistidine-tagged N蛋白筛选了从镍琼脂糖梯度咪唑缓冲区(20毫米三,300毫米氯化钠,50 - 500 mM咪唑,pH值8.0)。分数包含纯化蛋白三池和透析20毫米,300毫米氯化钠,pH值8.0。Nanodrop纯化蛋白浓度测定的仪器。
面板的人类和动物血清用于这项研究
在新加坡,患者的血清COVID-19用于这项研究来自新加坡保护研究如前所述31日。从SARS患者血清2003人如前所述32。在2020年非典召回抽样,我们联系,获得血液从自愿的个人先前承认非典(伦理批准文号:NHG DSRB E 2020/00091)。人类浸面板包括感染后血清样本对象确认为阳性浸229 / NL63 OC43使用的张开面积和张开体积SeeGene说RV12呼吸道多路复用设备在先前研究中(伦理批准文号:NUS-IRB 11 - 3640)32。负控制血清获得剩余血清样本从先前的研究无关。在南京,中国,从患者恢复期的血清COVID-19收集书面知情同意和批准的第二医院伦理委员会南京(伦理批准号:2020 - ls - ky003)。老鼠和兔子anti-SARS-CoV-2 RBD血清和单克隆抗体对SARS-CoV-2 RBD都从GenScript。兔子和雪貂anti-SARS-CoV血清和羊驼anti-MERS-CoV血清中描述的先前的研究33,34。
直接绑定和sVNT化验
MaxiSORP ELISA板(Nunc)板与hACE2蛋白质(GenScript) 100 ng /在50μl 100毫米carbonate-bicarbonate涂层缓冲区(pH值9.6)一夜之间在4°C,其次是阻塞OptEIA测定稀释剂(BD)。直接绑定化验,HRP-conjugated SARS-CoV-2 N, S1或RBD HRP-conjugated冠RBD(由GenScript;补充表3)被添加到hACE2-coated板在100μl OptEIA测定不同浓度稀释剂在室温下(BD) 1 h。释放HRP-conjugated抗原与磷酸盐被五洗,0.05% Tween-20 (PBST)。色度信号是合酶反应的显色底物,3 3’,5、5 ' -tetramethylbenzidine(三甲)(表达载体)。同等体积的三甲停止解决方案(KPL)添加到停止反应,和吸光度读数在450 nm和570 nm)获得使用Cytation 5标(BioTek)。sVNT试验,3 ng HRP-RBD(从病毒)与测试血清1 h pre-incubated 37°C(最后一卷50μl),紧随其后的是添加到MaxiSORP ELISA板涂有hACE2 (100 ng /嗯,如上所述)在室温下1 h。由五PBST释放HRP-conjugated抗原被洗涤。抑制(%)=(1−示例光密度值/负控制光密度值)×100。人类血清中和滴度测定,使用一个双重的连续稀释法从1:10,一样cVNT和pVNT描述如下。军团的正面和负面的血清验证来自新加坡和中国,最后1:20测试血清的稀释使用。
ELISA
间接ELISA, 100 ng的每个蛋白涂在MaxiSORP板块(Nunc)使用100毫米碳酸盐缓冲和阻塞OptEIA测定稀释剂(BD)。从测试COVID-19或SARS患者血清的稀释1:50又被山羊反IgG-HRP (Santa Cruz) 1:10,000稀释。捕获ELISA, MaxiSORP板块(Nunc)被涂上一层10µg毫升−1的反IgM (SeraCare),反人类免疫球蛋白(杰克逊实验室)或反IgA (GenScript)在一夜之间碳酸氢盐缓冲4°C。井被封锁使用BD OptEIA测定稀释剂(BD) 1 h在37°C和heat-inactivated在1:50稀释血清添加和孵化1 h在37°C。广泛的洗涤后,SARS-CoV-2 HRP-RBD (GenScript) 4µg毫升−1添加和孵化为30分钟37°C。添加后的显色反应是量化三甲衬底(表达载体)和停止解决方案(KPL SeraCare)。样品的吸光度测量在450 nm和背景在570 nm)。
cVNT和pVNT
cVNT, 50μl双重serial-diluted血清与1000年50μl TCID pre-incubated50每毫升5%的边后卫的SARS-CoV-2 DMEM 90分钟37°C。virus-serum混合物被添加到单层Vero-E6细胞1 h在37°C。在感染后1 h,培养液摘除和感染细胞在DMEM洗一次5%的边后卫。细胞在DMEM然后补充5%的边后卫和中和滴度测定4 dpi。pVNT 1.5×106RLU SARS-CoV-2飙升的准型病毒与双重的serial-diluted pre-incubated测试血清在最后一卷50μl 1 h在37°C,其次是感染ACE2-transfected HEK293T细胞。在18 - 20 h感染后,同等体积的ONE-Glo荧光素酶底物(Promega)添加和发光信号测量使用Cytation 5标(BioTek) Gen5软件(版本3.03.14)。同一稀释从1:20 1:1,280被用来促进并排比较相关性研究的三种不同的VNT化验。
统计分析
使用GraphPad棱镜7执行统计分析软件。负控制之间的差异和COVID-19测试使用一个未配对血清进行了分析t以及。之间的差异配对血清SARS在SARS-CoV-2 sVNT和冠sVNT使用配对进行了分析t以及。sVNT之间的相关性和cVNT或pVNT使用皮尔逊相关系数进行了分析。所有数据来自两个独立的实验。
报告总结
进一步研究信息设计是可用的自然研究报告摘要与这篇文章有关。
数据可用性
在这项研究中使用的关键数据集是在补充表1 - 3。额外的数据集的生成和/或分析在当前研究可从相应的作者以合理的要求。
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确认
我们感谢美国,y沈:毛,w .邵和l .朱技术援助,建议和后勤支持分析开发和测试;a . Gamage y Peng b . l . Lim和x m . Ong寻求帮助与蛋白质纯化,样品和测试管理;y Abdad和l·w·l·谭求助与人类浸血清收集;诉Vijayan, b . Ng和诉Sivalingam Duke-NUS医学院ABSL3设施的物流管理和帮助。支持L.-F.W.和D.E.A.由新加坡国家研究基金会(nrf2016nrf nsfc002 - 013)和国家医学研究理事会(stprg fy19 - 001和covid19rf - 003)。
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贡献
L.-F.W.构思和指导这项研究。C.W.T.,W.N.C., X.Q., P.L., C.T., V.C.-W.C., W.R.S., R.F. and D.E.A. performed laboratory work including data analysis. M.I.-C.C., Z.H., B.E.Y., Y.-J.T., Y.Y. and D.C.L. provided necessary samples and coordination for the study. L.-F.W. initiated the manuscript writing with input from all authors.
相应的作者
道德声明
相互竞争的利益
专利申请已经申请内容披露在这项研究中,一个SARS-CoV-2 sVNT工具包是商业化的过程中与工业合作伙伴。
额外的信息
出版商的注意施普林格自然保持中立在发表关于司法主权地图和所属机构。
扩展数据
扩展数据图1比较SARS-CoV-2 RBD和S1 sVNT。
相同摩尔比率的HRP-conjugated SARS-CoV-2 RBD或S1是用来检测小伙子从20个测试在1:20稀释血清。重组RBD和S1蛋白都是由baculovirus-insect细胞表达系统。统计分析了使用成对的双尾学生的学习任务。
扩展数据图2的比较分析SARS-CoV-2 sVNT和间接RBD和单克隆抗体ELISA。
单克隆抗体的物种起源如下:从老鼠(4a、b);4从兔(c, d);3从骆驼(e, f);从人类和4 (g h)。为每个组血清间接RBD-binding ELISA (a、c、e, g)和RBD-blocking sVNT (b, d, f, g)一起进行的。两个人类的家伙,协同进行的比较研究也(我)。
扩展数据图3比较非典型肺炎血清ELISA分析采样收集在2003年和2020年对RBD SARS-CoV-2和冠状。
测试是使用非典型肺炎病人血清进行收集(一个)< 1年的感染(n = 7)和(b感染后的)> 17年(n = 10)。进行间接ELISA方法中描述病人血清在1:50的最后稀释使用。配对的双尾学生的学习任务是用于统计显著性分析。
扩展数据图4的相关性SARS-CoV-2 sVNT和间接RBD ELISA。
皮尔森相关系数和线性回归分析是使用端点执行的效价SARS-CoV-2 sVNT和ELISA使用相同的60-serum面板图。4。虚线表示标准偏差的线性回归分析。使用双尾检验确定统计学意义。
扩展数据图5 sVNTs使用两个不同的重组RBD的性能相关的蛋白质。
使用相同的60-serum面板在无花果。4基于昆虫,sVNT性能RBD (iRBD)和哺乳动物RBD (mRBD)相比,(一个在日志IC)中和活动50值或(b)双尾皮尔逊相关分析和线性回归分析的日志IC50值从面板。成对双尾学生的学习任务是用于面板。
扩展数据图6使用捕获ELISA测定血清IgA的水平。
比较分析了使用(一个)较低的血清面板IgM从面板图和低免疫球蛋白。2 b(n = 9);(b)选择性COVID-19病人血清与已知的高水平的IgA (n = 2)作为积极的控制;和(c负控制血清(n = 10)。
权利和权限
关于这篇文章
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棕褐色,漫画,Chia, W.N., Qin, X.et al。SARS-CoV-2代理病毒中和试验基于抗体介入堵塞ACE2-spike蛋白质相互作用。生物科技Nat》38,1073 - 1078 (2020)。https://doi.org/10.1038/s41587 - 020 - 0631 - z
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DOI:https://doi.org/10.1038/s41587 - 020 - 0631 - z
本文引用的
rt - pcr - COVID-19
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