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小儿肝移植通常需要由于胆道疾病由于缺乏替代治疗胆管修复或替换受损。解决缺乏小儿肝脏适合移植,我们开发了一个协议生成的生物工程胆道组织适合胆道重建。我们的平台允许推导cholangiocyte瀑样(COs)表达关键胆道标记和保留的功能主要额外的2周内或肝内管道cholangiocytes隔离。因为随后播种在聚乙醇酸(PGA)支架或强化胶原蛋白结构生成生物工程4周组织保持胆汁的特点。专长瀑样文化和组织工程是可取的最佳结果。因为对应于成熟的功能性cholangiocytes,区分我们的方法从目前可用的替代瀑样系统传播成体干细胞。因此,因为提供了一个独特的平台,胆汁生理学和病理生理学的研究,以及由此导致的生物工程为再生医学和cholangiopathies组织有广泛的应用。
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确认
我们承认的剑桥Biorepository转化医学的研究中使用的人体组织,感谢联合国Georgakopoulos和b . Bareham角色在本组织收集和分发。过w•b西博尔德作品我们也感谢伯纳德和l . Gambardella帮助和建议关于固定和染色的管状生物工程胆结构。O.C.T. MRC-Sackler博士培训支持的伙伴关系。F.S.被艾登布鲁克的慈善信托基金支持格兰特,一个医学科学院临床讲师起动格兰特(SGL019/1071)和一个NIHR临床讲师的职位。A.W.J.和A.E.M.承认EPSRC的支持(EP / R511675/1和EP / N509620/1)和艾萨克·牛顿的信任。结核病是由一个EASL博士胡安锚地奖学金。L.V.实验室由ERC概念证明格兰特Relieve-Chol,伦理委员会高级格兰特New-Chol,剑桥大学医院生物医学研究中心和国家卫生研究所的核心支持威康信托基金会和医学研究理事会的资助Wellcome-Medical研究委员会剑桥大学干细胞研究所。A.W.J.,F.S.,L.V.,A.E.M.和 K.S.-P. gratefully acknowledge support from the Rosetrees Trust (REAG/240 and NMZG/233). A.K.F. and E.M. were supported by funds from the Norwegian PSC Research Center.
作者信息
作者和联系
贡献
O.C.T.:manuscript writing and editing, coordination of study, execution of experiments and data acquisition, validation of the CO culture protocol, design and production of figures, final approval of the manuscript. A.W.J.: manuscript writing and editing, design, concept, development and validation of the collagen densification protocol, final approval of the manuscript. T.B.: manuscript writing and editing, collection of data, validation of the CO culture, collagen densification and scaffold seeding protocols. S.E.C.: production of schematics for Figs. 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9 and 10 and validation of the collagen densification protocol. K.T.M.: execution of experiments and data acquisition. A.K.F.: development and validation of the CO and ERCP brushing collection protocols. H.Z.: validation of CO culture and data acquisition. E.M.: critical revision of the manuscript, validation of the CO protocols. K.S.-P.: design and concept of the study, development of the protocol, critical revision and final approval of the manuscript. A.E.M.: design and concept of the collagen densification protocol, critical revision and final approval of the manuscript. L.V.: design and concept of the study, critical revision and final approval of the manuscript. F.S.: design and concept of the study, development and validation of the protocol, manuscript writing and editing, critical revision and final approval of the manuscript. O.C.T., A.W.J., and T.B. contributed equally to this work.
相应的作者
道德声明
相互竞争的利益
L.V. DefiniGEN的创始人和股东。L.V.,F.S.和K.S.-P。是Bilitech的创始人和股东。其余作者声明没有利益冲突。
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Sampaziotis, f . et al。地中海Nat。。23,954 - 963 (2017):https://doi.org/10.1038/nm.4360
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综合补充信息
补充图1
流程图显示推荐的主要组织处理公司订单行推导。
图2补充推导的肝内瀑样EpCAM排序。
(一个)的示意图表示可选EpCAM +分类步骤(过程步骤D III-DXXVI)肝内COs的推导。(b)代表brightfield图像的关键EpCAM +排序的步骤。数字对应示意图阶段(a)。3:肝组织酶分离之前。4:酶解离后肝组织展示介质释放细胞和细胞外基质的残余。6:单细胞悬液经过过滤和之前EpCAM +排序。酒吧,规模100μm。(c)代表brightfield瀑样的图像来自一个EpCAM +细胞,电镀后48小时。酒吧,规模50µm。
补充图4代表COs的图像。
额外的描述和故障排除的线。(一个健康公司)代表brightfield图像行来源于组织类型:1:胆管(BD),胆囊(GB)、内镜逆行Cholangio-Pancreatography (ERCP),肝活检(活检)和EpCAM +细胞(EpCAM)排序。酒吧- 200μm规模。(bbrightfield)代表公司的形象行显示典型的公司文化问题与最优有限公司。酒吧,规模200μm
补充图5的推导有限公司从较低的细胞数量。
(一个CBD的)代表brightfield图像有限公司源自~ 3.0×10行3可行的细胞/(总:~ 2.0×104可行的细胞)。电镀后D0 - D12:天。P1:通道1。(b)图说明CBD线衍生的细胞数量随时间(a)展示适当的扩张。
补充图6闸门流仪分析策略。
代表流式细胞术情节显示所有流量仪的控制策略分析。(一个)的残骸。(b)的对比。(c)Secondary-only控制排除消极的人口。(d)代表CK19 + / CK7 +人口。至少2×104封闭的事件被用于分析。
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Tysoe,超频,Justin, A.W., Brevini, T.et al。隔离和传播的主要人类cholangiocyte瀑样生物工程的一代胆道组织。Nat Protoc14,1884 - 1925 (2019)。https://doi.org/10.1038/s41596 - 019 - 0168 - 0
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