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。 2008年9月19日,29 (3):464 - 75。
doi: 10.1016 / j.immuni.2008.06.017。

血浆树突细胞调节口腔宽容

安妮Goubier1, 伯特兰•杜波依斯, Hanane盖特, 格雷戈勒Joubert, 佛罗伦萨Villard-Truc, Carine Asselin-Paturel, 乔治•Trinchieri, 多米尼克•Kaiserlian
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血浆树突细胞调节口腔宽容

安妮Goubieret al。 免疫力。 。
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文摘

口服耐受防止口腔敏感饮食抗原(Ags),包括蛋白质和半抗原和DTH反应(DTH)的发展。我们这里显示,血浆树突细胞(髓)预防口腔T细胞启动和负责系统公差CD4(+)和CD8 (+) T细胞介导DTH反应引起的Ag)喂食。系统性的损耗pDCs阻止诱导抗原喂养的宽容。口服Ag-loaded转移肝髓天真的接受者Ag-specific抑制诱发小鼠CD4(+)和CD8 (+) T细胞反应蛋白和半抗原,分别。肝脏是一个站点的口头Ag)表示,pDCs似乎诱导无力或删除Ag-specific T细胞在肝脏相对迅速通过CD4 (+) T cell-independent机制。这些数据表明,口服耐受依赖Ag)表示,pDC T细胞和表明pDC可能是肠道的主要治疗目标和系统性炎症性疾病。

数据

图1
图1所示。器官分配的口头管理的半抗原
(A)免疫组织化学分析DNP捕获在小肠,在不同时间点后DNFB填喂法(初始放大320)。低温恒温器部分(5μm)小肠的染色与生物素化的DNP马伯和链霉亲和素过氧化物酶,并使用amino-ethyl咔唑反应了。(B)派尔集合淋巴结补丁,脾脏,MLN,肝脏,肝LN、腋窝和腹股沟LN收获在2小时后车辆喂养(白色的酒吧)或2小时(孵化酒吧)和24小时(黑条)后DNFB填喂法。孤立的白细胞(105细胞/)cocultured 3天的CD8 + T细胞(105从第五天DNFB-sensitized老鼠细胞/)。扩散是由3H-thymidine吸收文化在过去的8小时。结果表示为一式三份的水井平均cpm±标准差包含混合细胞从每组四只老鼠。数据是代表三个独立的实验。
图2
图2。半抗原交付通过口头或Intraportal路线诱发CD8的宽容+T细胞调节CHS
(一)Hapten-specific CHS。−7天,老鼠DNFB稀释0.1%丙酮和橄榄油(1:10 v / v)(封闭广场)或通过门静脉注射125毫克/公斤dnb稀释仅在PBS(封闭的圆圈)和PBS(圆圈)。0天所有老鼠DNFB敏化和耳朵挑战5天,和CHS反应是由耳肿胀(μm)在不同时期后半抗原的挑战。结果表示为平均耳肿胀(μm±SD)为五至七老鼠每组和代表的两个独立的实验。* p < 0.01 PBS-injected老鼠相比DNBS-injected老鼠。Hapten-specific CD8 (B)+T细胞的反应。小鼠治疗和敏化如图2所示。纯化CD8+T细胞(2×105)从腹股沟和腋窝淋巴结5天皮肤敏化后重振与辐照脾细胞体外3天(5×105与dnb)未经处理或脉冲,IFN-γ在第三天上层清液的ELISA。结果表示为意味着IFN-γ生产(UI /毫升)包含汇集CD8±SD一井+从四只老鼠每组T细胞。数据代表的两个独立的实验。
图3
图3。肝脏体内血浆直流耐受性
(一)流式细胞仪分析和排序的肝直流子集。肝脏白细胞沾anti-CD11c, anti-CD11b anti-NK1.1。封闭的CD11c+细胞(左点图)分析了CD11b和NK1.1表达式(右点情节),FAC-sorted分为三个子集:CD11c+CD11b+或−NK1.1+(R1), CD11c+CD11b+NK1.1−(R2), CD11c+CD11b−NK1.1−(R3)。(B)肝脏CD11c+细胞无法' DNFB CHS回应。小鼠免疫0南卡罗来纳州转移的10天5BM-DC(开放广场)或MAC-sorted CD11c+肝细胞(封闭广场)脉冲与dnb体外。CHS是由耳肿胀(μm±SD 5到7小鼠每组)后DNFB挑战5天。* p < 0.01。(C)肝脏CD11c+细胞抑制CHS DNFB。Unpulsed (105)肝脏CD11c+细胞(封闭的圆圈)或PBS(圆圈)当时在天真的小鼠皮下注射和站点的皮肤与DNFB绘画。CHS是由耳肿胀(μm±5 SD鼠每组)后5天后DNFB挑战。* p < 0.05。(D-F)体内过继转移实验。每个子集的R1(封闭广场),R2(圆圈),和R3 CD11c排序(封闭的圆圈)+肝细胞(C)所示是转移到南卡罗来纳州。(105细胞/鼠标)天真的小鼠在皮肤敏化的站点和时间DNFB(第0天)。Untransferred但DNFB skin-sensitized老鼠(开放广场)被用作控制。在(D)和(F),所有老鼠耳朵挑战5天,CHS DNFB是由耳肿胀(μm±5 SD鼠每组)在(D)后不同时期或(F) 24小时DNFB挑战。* p < 0.05 untransferred组和R3-transferred组之间。(E),在第五天的频率hapten-specific IFN-γ-spot-forming细胞(证监会)引流淋巴结中有关酶联免疫斑点。由结果表示为每10证监会的平均数量6CD8+T细胞包含汇集CD8±SD一井+从四只老鼠每组T细胞。在右面板(E)和(F),在一个独立的实验中,CD11c+CD11b−NK1.1−肝脏白细胞被进一步分为120年八国集团+pDC和120年的八国集团−细胞抑制启动和测试的能力(E) hapten-specific IFN-γ证监会或(F) CHS的回应。每个数据集是代表两个(D-F)到4 (B和C)独立的实验。
图4
图4。抗体耗竭的pDC防止感应口服宽容和允许口头启动
(模拟)小鼠注射anti-Gr1 RB8.6C5马伯或anti-BST2耗尽pDC 120年八国集团马伯,或控制老鼠GL113马伯,检测感应监控的口服耐受CHS和CD8 (A和C)+T细胞反应DNFB (B和D)中描述的实验程序和图2的传奇。在(A)、* p < 0.01控制马伯,anti-Gr1-treated DNFB-fed老鼠。在(B), * * * p < 0.0001;* * p = 0.0071。数据(一)——(D)的代表三个可再生的实验使用五到七老鼠每组。(E)为口服启动测试,老鼠DNFB或车辆和耳朵挑战5天后,和耳肿胀反应是决定后48小时(两个)的一个有代表性的实验。
图5
图5。抗体介入损耗的pDC影响口服耐受蛋白抗原
(一个)小白鼠注射或不是120年八国集团马伯,美联储三次与PBS或20毫克的卵子流程图描绘,在#表示120年八国集团马伯注射的日子。七天过去填喂法后,所有被皮下注射免疫小鼠的卵在PBS和CFA与聚合乳液和挑战1星期后卵子注入拦路贼。(B和C)公差分析了感应测量的DTH反应24小时后挑战(平均每组5小鼠耳肿胀±SD)和(C) OVA-specific T细胞IFN-γ生产由脾细胞收集48小时后的挑战和重振体外1毫克/毫升卵子(平均UI /毫升±威尔斯一式三份)。* * * p = 0.001;* * p = 0.0018。
图6
图6。pDC的肝脏或MLN Ag-Fed老鼠以抗原特异性的方式有效地抑制DTH反应
(一)DNBS-pulsed BMDCs (105)转让南卡罗来纳州到老鼠天真的存在与否的分级pDCs (102-10年5mac)纯化的车辆或DNFB-fed小鼠的肝脏。所有受到DNFB老鼠的耳朵在第五天,和CHS DNFB由耳肿胀24小时后决定。数据表示为意味着耳肿胀(μm±SD),代表的两个实验每组四只老鼠。* * * p < 0.0005的接受者之间105或104肝脏pDC DNFB-fed捐助者和控制老鼠没有收到pDC。(B) DNBS-pulsed BM-DC (105)是南卡罗来纳州注入天真的老鼠,单独或连同105MAC-sorted pDC从小鼠肝脏或脾脏收到DNFB或车辆填喂法18小时。在一个独立的实验中,pDC是从DNFB-fed老鼠的肝脏或MLN净化通过流式细胞仪和类似的转移到天真的老鼠。在直流传输后第五天,的频率有关酶联免疫斑点在skin-draining IFN-γ-secreting T细胞是由一个淋巴结。结果表示为每10 IFN-γ证监会的平均数量6一式三份的T细胞±SD井包含集合淋巴结细胞每组三个老鼠。(C和D) OVA-pulsed BM-DC (105)(C)或DNBS-pulsed BM-DC (D)注入南卡罗来纳州单独或连同105从小鼠肝脏pDC流式细胞仪纯化喂养18人力资源与DNFB早些时候,OXA或卵子。免疫接种后5天,接受DNBS-pulsed BM-DC与DNFB耳朵挑战,和耳肿胀反应是决定后48小时(C) * * * p = 0.0002。所有小鼠接受OVA-pulsed BM-DC挑战与聚合卵子在拦路贼免疫后7天,和DTH反应,以拦路贼肿胀,确定后48小时(D) * p = 0.03。这些数据是代表两个独立的实验。
图7
图7。pDC需要口服诱导Hapten-Specific CD8的功能缺失+T细胞
(模拟)0天,8 - 10 C57BL / 6或(D) MHC类II-deficient供体老鼠DNFB或车辆控制,和牺牲1 (B)或6(模拟)天后CD8的隔离+T细胞。CD8+T细胞(3 3 10510、A和B或2.5 - 36C和D)从(A和B)肝脏或纯化(模拟)MLN静脉注射到老鼠CD3ε-deficient接受者转移,由皮肤敏化3周后与DNFB绘画。五天后敏感,所有老鼠耳朵的挑战与DNFB (A) CHS响应的个人,和(罪犯)的频率hapten-specific IFN-γ证监会汇集皮肤淋巴结(香港证监会的平均值±SD一式三份井)测定。(C) pDC耗尽在供体小鼠注射120年八国集团马伯的天−1,0(天喂养),+ 2,+ 5。结果代表了两个独立的实验使用五到八个Cd3ε−−/收件人/组。图7 b的数据代表证监会的平均值±SD一式三份的井,包含CD8+从五人T细胞池。统计数据作为p值表示。
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