调制的pathogen-induced CCL20分泌物HT-29人类肠道上皮细胞共生的细菌
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- PMID:19814810
- PMCID:PMC2763856
- DOI:10.1186 / 1471-2172-10-54
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调制的pathogen-induced CCL20分泌物HT-29人类肠道上皮细胞共生的细菌
BMC Immunol。
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文摘
背景:人类肠道上皮细胞(iec)分泌的趋化因子CCL20响应由各种致肠病的细菌感染或接触细菌鞭毛蛋白。CCL20新兵不成熟的树突细胞和淋巴细胞到目标站点。在这里,我们研究了IEC应对各种致病性和共生的细菌以及共生的细菌的调节影响pathogen-induced CCL20分泌。HT-29人类iec孵化与肠道共栖菌(双歧杆菌对象或唾液乳杆菌),或与鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白,艰难梭状芽胞杆菌,副结核分枝杆菌、分枝杆菌smegmatis不同次。在一些研究中,HT-29细胞预处理的同桌的菌株的感染或鞭毛蛋白刺激前2小时。CCL20及白介素8 (IL)分泌和核因子(NF) -kappaB激活使用酶联免疫吸附试验测定。
结果:未经处理的细胞相比,美国沙门氏菌感染,梭状芽孢杆菌,m .副结核和鞭毛蛋白激活NF-kappaB HT-29 CCL20的重要分泌刺激和引发的细胞。相反,对象,唾液l . m . smegmatis没有激活NF-kappaB或增加CCL20引发生产。治疗对象,但不是唾液l .,剂量依赖性抑制基线CCL20的分泌。与b细胞预处理的对象,梭状芽孢杆菌,沙门氏菌感染,和flagellin-induced CCL20明显减弱。b对象没有限制m . Paratuberculosis-induced CCL20分泌。
结论:这项研究首次表明,同桌的应变可以减弱CCL20分泌HT-29 iec。集体,数据表明,m .副结核可能调解粘膜损伤和b对象可以对iec起到免疫调节作用,调节宿主对鞭毛蛋白和鞭毛肠道病原体的反应。
数据
肠上皮细胞分泌CCL20不同,以应对各种细菌。支流HT-29细胞治疗鼠伤寒沙门氏菌(1×107菌落(CFU) /毫升),鞭毛蛋白(0.5μg /毫升),艰难梭状芽胞杆菌(1×107CFU /毫升),同等体积的文化浮在表面的游离,副结核分枝杆菌(1×108CFU /毫升),m . smegmatis(1×108CFU /毫升),双歧杆菌属对象(1×107CFU /毫升),或唾液乳杆菌(1×107CFU /毫升)。CCL20细胞培养上清液中蛋白质含量测定后6小时,12小时或24小时如上上指定的图。显著水平的CCL20只检测到12小时后孵化m类结核24小时之后梭状芽孢杆菌。m . smegmatis对象和唾液l .并没有导致重大CCL20分泌在任何的时间点或使用浓度。数据表示为pg / ml CCL20及代表平均值±标准错误(n= 7)独立的实验。*P< 0.05相对于未经处理的细胞。
肠上皮细胞分泌白介素8 (IL)不同,以应对各种细菌。支流HT-29细胞治疗鼠伤寒沙门氏菌(1×107菌落(CFU) /毫升),鞭毛蛋白(0.5μg /毫升),艰难梭状芽胞杆菌(1×107CFU /毫升),同等体积的文化浮在表面的游离,副结核分枝杆菌(1×108CFU /毫升),m . smegmatis(1×108CFU /毫升),双歧杆菌属对象(1×107CFU /毫升),或唾液乳杆菌(1×107CFU /毫升)。引发细胞培养上清液中蛋白质含量测定后6小时、12小时或24小时按照酶联免疫吸附试验。数据表示为pg / ml引发和代表平均值±标准错误(n= 7)独立的实验。*P< 0.05相对于未经处理的细胞。
Bacterial-induced NF-kB在肠道上皮细胞DNA结合活动。HT-29细胞治疗,或被暴露鼠伤寒沙门氏菌(1×107集落形成单位(CFU) /毫升),鞭毛蛋白(0.5μg /毫升),艰难梭状芽胞杆菌(1×107CFU /毫升),或副结核分枝杆菌(1×107或1×1081小时的CFU /毫升)。的DNA结合活性NF-κB p65 HT-29核提取使用酶联免疫吸附测定assay-based转录因子分析。提供的积极控制Jurkat核提取工具被用来验证试验特异性竞争分析野生型和突变NF-κB寡核苷酸。数据代表的平均吸光度读数±标准错误五个独立的实验。P< 0.05相对于未经处理的细胞。
双歧杆菌属对象变弱的基线HT-29 CCL20的分泌细胞。(一)支流HT-29层处理b .对象1×10的剂量51×106或1×107克隆形成单位/毫升,CCL20水平测量后6小时。b .对象导致剂量依赖性抑制基线CCL20分泌支流HT-29单层膜。(b)支流HT-29细胞治疗1×107/毫升生活b .对象或唾液l .,或同等剂量的formalin-killed细菌。6小时后CCL20水平测定。生活和formalin-killedb .对象,但不唾液l .,抑制了基线HT-29 CCL20的分泌细胞。数据表示为CCL20蛋白质含量相对于未经处理的控制细胞和代表平均值±标准错误(n= 5)独立的实验。*P< 0.05与未经处理的单层膜相比。
双歧杆菌属对象限制鼠伤寒沙门氏菌,和flagellin-induced CCL20分泌。(a)支流HT-29层是预处理与1×10 2小时7/毫升生活b .对象或唾液乳杆菌或同等剂量的formalin-killedb .对象感染前美国沙门氏菌感染。CCL20水平测定感染后6小时。生活和formalin-killedb .对象克制美国沙门氏菌感染诱导CCL20分泌(*P< 0.05相比美国沙门氏菌感染。HT-29感染细胞)。数据表示为pg / ml CCL20蛋白质和代表平均值±标准错误(n= 8)独立的实验。(b)支流HT-29单层膜预处理的2小时的活b .对象1×10的剂量51×106或1×107克隆形成单位/毫升(左面板)或1×107/毫升formalin-killedb .对象(右面板)。随后,细胞治疗0.5μg /毫升鞭毛蛋白6小时。与1×10预处理7生活和formalin-killed显著抑制flagellin-induced CCL20分泌(*P< 0.05相对于flagellin-treated HT-29细胞)。数据表示为CCL20蛋白质含量相对于flagellin-treated细胞和代表平均值±标准错误(n= 7)独立的实验。
双歧杆菌属对象变弱艰难梭状芽胞杆菌全身CCL20分泌。支流HT-29层是预处理与1×10 2小时7克隆形成单位/毫升(CFU /毫升)b .对象或唾液乳杆菌之前感染1×107CFU /毫升梭状芽孢杆菌细菌或同等体积的浮在表面的游离,或1×108CFU /毫升副结核分枝杆菌。CCL20水平测量12小时或24小时后处理表示。b .对象,但不唾液l .,克制梭状芽孢杆菌,诱导CCL20分泌(*P< 0.05相比梭状芽孢杆菌,对待HT-29细胞)。b .对象没有限制m类结核,诱导CCL20分泌。的数据表示为百分数pathogen-induced CCL20分泌并代表平均值±标准错误(n= 6独立实验)。
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