肠道失调与酒精性肝病的小鼠模型
肝脏病学。
2011年1月。
免费的PMC的文章
文摘
细菌和细菌易位的产品进入流通导致酒精性肝病。肠道细菌过度生长在酒精性肝病患者中很常见。我们的研究的目的是探讨细菌易位,肠道微生物的变化,其监管粘膜抗菌蛋白在酒精性肝病。我们使用小鼠模型的连续送胃内的酒精或等热量的饮食。细菌易位发生变化之前观察到微生物。量化这些动物肠道微生物区系的变化评估首先使用传统培养技术在小和大肠。虽然我们没有发现差异1天或1星期后,肠道细菌过度生长观察白鼠酒精对胃肠道的3周与控制等热量的液体饮食的老鼠。因为< 20%的胃肠道细菌可以使用传统的方法,培养我们进行大规模并行焦磷酸测序进一步评估定性酒精暴露后的肠道微生物的变化。16 s核糖体RNA基因的测序揭示了相对丰富的拟杆菌门和Verrucomicrobia细菌白鼠酒精而厚壁菌门细菌控制老鼠的相对优势。对宿主的转录组、酒精喂养与下调的基因和蛋白质表达杀菌c型凝集素Reg3b和Reg3g小肠。 Treatment with prebiotics partially restored Reg3g protein levels, reduced bacterial overgrowth, and lessened alcoholic steatohepatitis.
结论:酒精喂养与肠道细菌过度生长和肠道失调有关。肠道抗菌分子特异表达在慢性酒精喂养导致肠道微生物的变化和酒精性脂肪肝。
版权©2010年美国肝病研究协会。
数据
老鼠通过胃内的酒精或等热量的饮食喂养管。(一)代表肝脏的显微照片显示。(B)血浆ALT水平测定。(C)肝基因表达的胶原蛋白α1(我)是由RT-QPCR和归一化到18 s基因表达。值是相对于控制喂动物。* p < 0.05,当老鼠酒精等热量的控制饮食的老鼠。数据代表均值±SEM的六个控制或酒精喂老鼠在每个时间点。
需氧细菌在(A)量化肠系膜淋巴结和血液(B)在用酒精或等热量的饮食的老鼠(n = 4-17动物每个时间点)。*控制美联储的老鼠相比p < 0.05。CFU =集落形成单位。(C)内毒素水平测量,提出了相对于控制美联储的动物为每个时间点每个时间点(n = 5 - 10的动物)。
总需氧细菌(A)和(B)厌氧细菌在胃肠道被文化量化的酒精或等热量的控制饮食的老鼠三个星期。数据代表均值±SEM十二控制或酒精喂老鼠在每个时间点。* p < 0.05,相比控制治疗的老鼠。CFU =集落形成单位。(C)总盲肠细菌负荷是由QPCR使用通用引物的细菌。值是相对于控制喂动物。* p < 0.05,当老鼠酒精等热量的控制饮食的老鼠。数据代表均值±5 SEM控制或酒精喂老鼠在每个时间点。
(一)16 s rRNA鼠标使用454钛技术盲肠测序。身份Experiment-specific OTU代表序列(97%)使用核糖体数据库项目(RDP)分类器分类和策划。橙色条指示辣子鸡含有酒精治疗组(3老鼠,分布在349个辣子鸡)和白色条指示包含等热量的辣子鸡对照组(3老鼠,分布在297个辣子鸡)。(B)图表演示了每个社区的百分比由指定的门。(C)散射块Unifrac(左)和R(右)PCA。酒精对样品蓝色等热量的控制样品在红色。
(一)16 s rRNA鼠标使用454钛技术盲肠测序。身份Experiment-specific OTU代表序列(97%)使用核糖体数据库项目(RDP)分类器分类和策划。橙色条指示辣子鸡含有酒精治疗组(3老鼠,分布在349个辣子鸡)和白色条指示包含等热量的辣子鸡对照组(3老鼠,分布在297个辣子鸡)。(B)图表演示了每个社区的百分比由指定的门。(C)散射块Unifrac(左)和R(右)PCA。酒精对样品蓝色等热量的控制样品在红色。
肠段的总RNA制备与酒精或等热量的饮食的老鼠1周(A和C)或3周(B、D、E)。表达Reg3b (A和B), Reg3g (C和D)和Defensinα5 (E)基因测定通过RT-QPCR使用18岁作为内部控制。数据代表均值±5 SEM控制或酒精喂老鼠在每个时间点。* p < 0.05,相比控制治疗的老鼠。
(A和B)蛋白质提取物小鼠的近端小肠(空肠)酒精饮食或者等热量的控制饮食3周分析西方墨点法与Reg3b或Reg3g抗体。微管蛋白被用作加载控制。图片代表一个免疫印迹,复制在三个独立的实验中每次使用不同的动物。(C)免疫组织化学检测Reg3b和Reg3g石蜡包埋后近端小肠部分小鼠酒精或控制喂养3周。代表部分所示。(D)基因表达人类Reg3g由RT-QPCR决定和归一化到18 s基因表达在十二指肠活检从慢性酒精滥用(n = 10)患者和健康对照组(n = 10)。值提出了相对于健康对照组和代表均值±SEM。(E) Reg3g和微管蛋白蛋白表达在十二指肠活检慢性饮酒(n = 6)患者和健康对照组(n = 6)分析免疫印迹分析。一个代表性的免疫印迹图像显示。微的免疫印迹图像配对控制和酒精进行样品。 Values are presented relative to healthy controls and represent the mean ± SEM; *p<0.05.
老鼠等热量的饮食、酒精或酒精和fructooligosaccharides (FOS)提交通过胃内的喂食管为3周。(A) Reg3g蛋白表达分析在近端小肠通过免疫印迹(空肠)。微管蛋白被用作加载控制。图片代表一个免疫印迹,复制在四个独立的实验中每次使用不同的动物。(B)总需氧细菌(图上)和厌氧细菌低(图)被文化中期小肠量化。数据代表均值±SEM每组5 - 6小鼠;* p < 0.05。CFU =集落形成单位。(C)代表)的显微照片彩色显示肝脏。(D)血浆ALT水平测定。 Data represent the mean ± SEM of 4–14 mice per group; *p<0.05. (E) Hepatic triglyceride content was determined. Data represent the mean ± SEM of 5–10 mice per group; *p<0.05.
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