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2012年10月,25 (10):1333 - 44。
doi: 10.1038 / modpathol.2012.95。 Epub 2012年6月15日。

Reovirus-associated减少microRNA-let-7d与癌细胞凋亡的死亡的增加在临床样本

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Reovirus-associated减少microRNA-let-7d与癌细胞凋亡的死亡的增加在临床样本

杰拉德J莱et al。 国防部分册 2012年10月
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文摘

我们分析了原位分子从癌症患者接受呼肠孤病毒感染有关。黑色素瘤、结肠癌和卵巢癌等病人样本显示变量感染肿瘤细胞但不良性细胞交织在一起。原位RT PCR显示大多数癌症细胞包含了病毒基因组少三倍有生产病毒感染所记录的微管蛋白或蛋白质co-expression鸡。生产感染肿瘤细胞有密切关系的co-expression p38和caspase-3 apoptosis-related死亡(P < 0.001)。癌细胞凋亡的死亡是由于显著viral-induced microRNA-let-7d抑制,反过来,调节caspase-3活动。总之,呼肠孤病毒显示了一个引人注目的趋向性,癌细胞在临床样本。reovirus-induced癌细胞死亡的病原因素是生产病毒性感染,操作通过显著减少microRNA-let-7d和伴随的高架caspase-3表达式。

利益冲突声明

/披露利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

数据

图1
图1
生产呼肠孤病毒感染细胞的准备工作。该细胞系SK-Mel28曾接触悬挂的呼肠孤病毒。未感染的细胞(一个)没有特异性病毒信号;注意大肿瘤细胞的统一性。鸡治疗之后,许多细胞表现出强烈的红色病毒衣壳蛋白胞质信号(b)。注意,许多细胞萎缩,漆黑的核典型的细胞凋亡(c,更高的放大倍数)。细胞系CAL27是检测co-expression呼肠孤病毒(红色信号)和微管蛋白(布朗信号)(d);插入显示了呼肠孤病毒的细微差别转换信号(荧光红色)。(e)显示了细微转换微管蛋白信号(荧光绿)。合并后的图像为呼肠孤病毒和微管蛋白(fco-express)显示呼肠孤病毒蛋白阳性细胞微管蛋白荧光黄色,符合生产力的感染。
图2
图2
分子与细胞感染鸡的准备。Co-expression分析呼肠孤病毒(红色信号)和caspase-3布朗(信号)(一个)细胞株CAL27显示许多细胞的信号显示凋亡变化。插入显示了细微孤立呼肠孤病毒信号(荧光红色),(b)描述了caspase-3孤立信号(荧光绿)。当两个信号合并,基本上所有癌细胞表达检测鸡的蛋白质也表达caspase-3,明显是荧光黄(c)。(d)显示了合并co-expression分析呼肠孤病毒(荧光红色)和p38(荧光绿);注意,大多数reoviral-positive细胞荧光黄色p38积极。消极的控制(没有呼肠孤病毒治疗)显示了p38信号没有鸡信号(e)。而大多数reoviral-positive细胞p38表达(d)、Ras和活跃(数据未显示),没有一个偶尔细胞表达PKR(荧光绿色,f)中的呼肠孤病毒(荧光红色,f)。
图3
图3
鸡的蛋白质和RNA在癌症组织。常规组织学分析组织的结直肠癌患者接受呼肠孤病毒显示病灶细胞凋亡在恶性腺的中心(一个)和更广泛肿瘤坏死(b)。(c)表明,鸡的信号蛋白免疫组织化学定位后癌细胞(小箭头)而不是基质细胞(大箭头)。(d- - - - - -f)对鸡RNA co-expression分析的结果,检测到RT原位PCR,鸡蛋白质可视化与卵巢癌免疫组织化学。(e)显示了RGB图像,很明显,大部分肿瘤细胞含有病毒RNA。注意病毒RNA的引人注目的定位肿瘤细胞巢。(d)显示了鸡的细微差别转换形象蛋白质(荧光红色)和(f)是细微的图像合并后蛋白质和鸡鸡RNA(荧光蓝色)。注意,尽管一些癌细胞同时包含鸡RNA和蛋白质(荧光黄色),许多只包含可检测病毒基因组,暗示一个相对贫穷的富有成效的感染率在这个肿瘤。
图4
图4
鸡感染的分子关联在串行组织部分。串行部分从转移性结肠癌患者治疗呼肠孤病毒分析co-expression呼肠孤病毒和微管蛋白(一个)、呼肠孤病毒和p38 (c),加上呼肠孤病毒和caspase-3 (e);注意凋亡的小面积(箭头所指)。细微差别的图像进行分析系统来评估co-expression的程度;鸡蛋白质荧光红色和细胞蛋白质荧光绿。有大量co-expression鸡和微管蛋白蛋白(b被视为荧光黄色),表明生产感染。同样,鸡和p38蛋白质通常是发现在同一个细胞(d);注意co-expression明显只在肿瘤细胞和周围的基质细胞。Co-expression分析呼肠孤病毒和caspase-3显示稀有细胞间蛋白质在细胞凋亡(阳性f)。
图5
图5
序列之间的同源性microRNA-let-7d呼肠孤病毒和荧光素酶测定微caspase-3监管。(一个呼肠孤病毒株之间的)显示了一个代表分析用于这项研究(serotype-3迪林高产菌株)和microRNA-let-7d分析RNA 22 microRNA目标检测;注意序列同源性强。(b, c)显示原始数据和图形表示,分别为通过microRNA-let-7d差别caspase-3对这些由荧光素酶测定在48 h。d)显示了交互对于miRNA-let-7d和caspase-3种子序列。

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