doi: 10.1038 / nprot.2013.153。
Epub 2013年11月14日。
体外扩张和胃肠道干细胞球体文化的基因改造
从属关系
- PMID:24232249
- PMCID:PMC3969856
- DOI:10.1038 / nprot.2013.153
项剪贴板
体外扩张和胃肠道干细胞球体文化的基因改造
Nat Protoc。
2013年12月。
免费的PMC的文章
文摘
是有用的能够丰富的干细胞体外生长。干细胞作为组织的发展是一个关键的球状体方法允许可持续文化的成人的上皮细胞。胃肠道干细胞可以通过传播条件培养基从一个支持性的细胞系(L-WRN)。本协议描述如何准备条件培养基和文化富含干细胞上皮细胞从老鼠gastrointestine球状体。这些球状体也适合与重组慢病毒基因改造。这个系统使许多类型的细胞生物学实验与永生化细胞系已执行,适用于球状体。隔离的上皮细胞从老鼠占用单位2 h,并富含干细胞胃肠道中获得三维球状体。转基因与慢病毒可以在两周内得到球状体。
利益冲突声明
数据
小鼠胃肠道上皮瀑样的发展。(一)胶原酶消化鼠标胃、小肠、盲肠和结肠。有力的移液分离单一上皮单位从剁碎组织胶原酶溶液中碎片。酒吧= 1毫米。(b)孤立的胃肠道上皮单位。酒吧= 200μm。(c)主要从胃肠道上皮瀑样组织。孤立的上皮单位被嵌入在基底膜基质和50% L-WRN媒体培养3天。10μM Y27632和10μM SB431542添加了小肠和盲肠。酒吧= 1毫米。
的典型形态gastroiontestinal瀑样培养50% L-WRN条件媒体。酒吧= 1毫米。
干细胞文化系统的示意图。
隔离lentivirus-infected瀑样。(a, b)主瀑样感染后显示马赛克GFP的表达。代表荧光(一)和亮视场图像(b)所示。酒吧= 200μm。(c)Hand-selection GFP-positive组成的二级瀑样细胞。酒吧= 1毫米。
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