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。 2015年12月,21日(12):1491 - 6。
doi: 10.1038 / nm.3968。 Epub 2015年11月9日。

瑞士/ SNF-mutant癌症取决于EZH2的催化和非活动

金伯利H金123, Woojin金123, 托马斯·P·霍华德123, 巴斯克斯堡4, Aviad Tsherniak4, 詹妮弗·N吴1234, 沩山王123, Jeffrey R Haswell123, 罗兰D Walensky123, 威廉·C哈恩456, 斯图亚特·H奥尔金1237, 查尔斯W M罗伯茨12347
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瑞士/ SNF-mutant癌症取决于EZH2的催化和非活动

金伯利H金et al。 Nat地中海。 2015年12月。
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文摘

人类癌症基因组测序最近透露,基因编码单元的瑞士/ SNF染色质重塑复合物经常在各种各样的癌症突变,和几个子单元的复杂已被证明有善意的肿瘤抑制活性。然而,是否突变在瑞士/ SNF子单元导致共享依赖关系是未知的。这里显示EZH2, polycomb专制复杂的催化亚基2 (PRC2)是至关重要的在所有测试癌症细胞系和异种移植窝藏瑞士/ SNF子单元ARID1A突变,叫做PBRM1 SMARCA4,哪几种最常见的突变瑞士/ SNF子单元在人类癌症,但这同现的Ras途径突变与废除的依赖。值得注意的是,我们证明瑞士/ SNF-mutant癌细胞主要是依赖于一个非催化作用EZH2 PRC2复杂,稳定的,他们只是部分依赖EZH2组蛋白甲基转移酶的活动。这些结果不仅揭示了共同依赖的癌症基因改变在瑞士/ SNF子单元,但也表明EZH2酶抑制剂在临床开发可能不完全抑制EZH2的致癌活性。

数据

图1
图1所示。瑞士/需要EZH2 SNF突变的癌细胞
瑞士/ SNF突变体和野生型细胞系与控制或转导EZH2针对成分。扩散被MTT试验评估。(一个)增殖曲线瑞士/ SNF野生型细胞系(ES2, OCI-LY-19, SKM-1)和癌症细胞系包括突变SMARCA4突变体(A549 H1299 SW13),ARID1A突变体(TOV21G HEC59 OVISE),和叫做PBRM1突变体(RCC4 A704, SK-RC-20)。误差线表示意味着南达科他州±。(n= 3)。(*普通单向方差分析,P < 0.05;* *,P < 0.01;* * *,P < 0.001;* * * *,P < 0.0001) (b)集落形成试验。细胞转导与控制或EZH2成分被播种在低密度标准6-well盘子。殖民地被结晶紫染色可视化。复制的化验代表三个独立的实验。(c)免疫印迹分析HCT116同基因的细胞(ARID1A野生型父母,+ / +;ARID1A杂合的。+ /−;或ARID1A纯合子的不足,−−)与控制或诱导后EZH2成分。肌动蛋白被用作加载控制。(d)。MTT增殖曲线ARID1A同基因的细胞系。误差线表示意味着南达科他州±。(*普通单向方差分析,P < 0.05;* *,P < 0.01;* * *,P < 0.001;* * * *,P < 0.0001)。(e)的分布EZH2shRNA依赖基于瑞士/ SNF突变状态。每个酒吧都代表一个细胞系;细胞系与纯合子的灭活瑞士/ SNF突变用蓝色表示。得墨忒耳的得分越低表明EZH2更多的依赖关系。的统计差异EZH2瑞士/ SNF突变体和野生型细胞间的依赖性是计算使用一个未配对,两个示例韦尔奇t以及。
图2
图2。催化活性只有部分负责EZH2依赖
(一个)治疗A549和SW13 (SMARCA4 / SMARCA2突变体),TOV21G和HEC59 (ARID1A突变体)和A704 (叫做PBRM1突变体),GSK126 7 d受损群体形成ES2(瑞士/ SNF野生型),而RCC4 (叫做PBRM1突变体),H1299(SMARCA4突变)和OVISE (ARID1A相对耐药突变)细胞。(b)GSK126-sensitive (TOV21G G401)和耐药细胞系(RCC4)治疗剂量的增加GSK126 7 d。免疫印迹显示水平H3K27 tri-methylation和总H3。增殖曲线为细胞治疗GSK126 10µM±南达科他州。n= 3)。c)的影响EZH2 shRNA击倒和救援长篇EZH2或catalytically-dead EZH2-ΔSET (n = 3)。(d)免疫印迹分析EZH2和H3K27me3表达GSK126-resistant (H1299)和敏感(A549)细胞系和MTT扩散分析与控制(只有向量)替换之前或之后,野生型或点突变EZH2。H3K27 tri-methylation量化和H3印迹。肌动蛋白和H3被用作加载控制。(*,P< 0.05;* *,P< 0.01;* * *,P< 0.001;* * * *,P通过双向方差分析p < 0.0001)。误差线表示意味着南达科他州±。(n= 3)。h免疫印迹EZH2和H3K27 tri-methylation G401细胞治疗SAH-EZH2 (42 - 68)AB而消极的控制(dSAH-EZH2Neg1)。(我)瑞士/ SNF突变体和野生型细胞的集落形成针对dSAH-EZH2钉肽(n = 2)。
图3
图3。中断PRC2稳定酶抑制剂治疗后发生在敏感的细胞
(一个)评价H3K27甲基化和乙酰化,总EZH1 EZH2, EZH2磷酸化在GSK126-sensitive (G401)和耐药细胞系(RCC4)治疗后GSK126 7 d。EZH2 p-T487和EZH2印迹量化,量化的数字写下面每一个污点。(b)Thr487在EZH2的位置的示意图。速度、SUZ12和DNA甲基转移酶(DNMT)绑定域和域表示。(氟)PRC2复杂的完整性评估通过使用EZH2或SUZ12抗体在免疫印迹GSK126-sensitive (G401)和耐药(RCC4、H1299 OVISE)细胞系。复制的化验代表三个独立的实验。
图4
图4
在活的有机体内抑制H3K27me3通过GSK126造成回归GSK126-sensitive癌症肿瘤的生长,但不是GSK126-resistant癌症。收件人老鼠收到A549的异种移植(一个)GSK126-sensitive线或H1299 (d)一次GSK126-resistant细胞系和肿瘤达到200毫米3,老鼠被随机分配治疗GSK126或车辆控制(n= 4),* * * *P普通单向方差分析(p < 0.0001)。(b和e)的质量分析肿瘤(n= 4)*P= 0.0237(未配对t检验)。(c和f)使用表示抗体对肿瘤免疫印迹分离小鼠接受车辆控制或GSK126;肌动蛋白和H3被用作加载控制。
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