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文摘gydF4y2Ba
背景gydF4y2BaTFF2,三叶草因子家族中的一员(TFF)肽,是一种分泌蛋白表达的106个氨基酸粘液颈基底细胞和腺体正常的人类胃腔的底部。TFF2也发现高浓度的网站溃疡。这是防止粘膜损伤因子,刺激细胞的能动性。gydF4y2Ba
的目标是gydF4y2Ba测量TFF2的表达在正常人类胃及其分泌胃液。gydF4y2Ba
方法gydF4y2BaTFF2 cDNA放大了逆转录聚合酶链反应从胃粘膜和测序。胃液或细胞溶质,准备从胃粘膜,是从宏观上的人获得正常的胃。TFF2浓度定量衡量西方转移分析。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba测序TFF2 cDNA透露一个氨基酸的变化发表序列。在人类发现了大量的12 kDa TFF2胃液。大量的蛋白质较高的表观分子量也被检测到。这是证明是N-glycosylated TFF2使用endoglycosidase peptide-N-Gycosidase f .大多数TFF2在正常胃粘膜也糖化。gydF4y2Ba
结论gydF4y2Ba人类TFF2通过N-linkage糖化,大概在AsngydF4y2Ba15gydF4y2Ba形成统一共识的一部分人类TFF2 N-glycosylation网站。糖基化可能功能的意义。未来的研究人类TFF2应该使用抗体对正确的氨基酸序列。生物研究应该进行正确的重组蛋白序列,和糖基化研究的生理后果。gydF4y2Ba
- TFF肽gydF4y2Ba
- 胃gydF4y2Ba
- 糖基化gydF4y2Ba
- TFF2gydF4y2Ba
- 归还gydF4y2Ba
来自Altmetric.com的统计gydF4y2Ba
TFF2第二人类三叶草因子家族的成员(TFF)的肽。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba三个人类三叶草肽已确定,其相应的基因集群21号染色体上gydF4y2BaTFF1gydF4y2Ba12.5 kb的上游gydF4y2BaTFF2gydF4y2Ba,这是大约40 kb的上游gydF4y2BaTFF3gydF4y2Ba。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba3gydF4y2Ba三叶草肽很小,分泌蛋白质,特点是保守域的42-43氨基酸残基。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba4gydF4y2Ba三叶草的六个保守的半胱氨酸残基域(见图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba三分子内二硫键)的形式,因此三个循环堆在一个特征三个循环结构。gydF4y2Ba5 - 8gydF4y2Ba成熟TFF2 12 106 kDa蛋白质氨基酸和包含两个三叶草域由一个短序列分开七残留。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba猪同系物的结构TFF2已经解决了gydF4y2BaxgydF4y2Ba射线晶体学、核磁共振的解决方案。gydF4y2Ba5 - 7gydF4y2Ba相对细长的分子,组成两个球状域,采用相同的三级结构紧凑,通过加入一个小接口。三叶草域的一个显著特征是一块表面形成从五个守恒的残留,没有明显的结构性作用。这两个补丁是位于远的蛋白质分子。gydF4y2Ba5 - 7gydF4y2Ba
TFF 2蛋白质序列。(A)的成熟TFF2蛋白质序列来自TFF2 mRNA三人从人类胃粘膜和TFF2基因。两个三叶草的位置域表示的氨基酸也是包含在这三个循环中形成折叠的三叶草域。单一N-glycosylation识别序列(NRT),这是一个潜在糖基化位点位于第一个三叶草域是盒装的第1循环。赖氨酸残基(K)取代了天冬酰胺残留在先前发表的序列gydF4y2Ba1gydF4y2Ba在99年的位置也是盒装。16个氨基酸肽合成作为免疫原是上划线。空间已经插入序列中的残留6后,49岁,98表示的极限三叶草域。(B)的氨基酸序列的第一个循环域我四种已知的哺乳动物TFF2蛋白质:人类TFF2gydF4y2Ba1gydF4y2Ba(本研究);猪TFF2gydF4y2Ba25gydF4y2Ba;小鼠TFF2gydF4y2Ba26gydF4y2Ba;和老鼠TFF2。gydF4y2Ba27gydF4y2Ba(C)比较16个氨基酸残基的羧基末端的四种已知哺乳动物TFF2蛋白质序列蛋白质:人类TFF2(本研究);猪TFF2gydF4y2Ba25gydF4y2Ba;小鼠TFF2gydF4y2Ba26gydF4y2Ba;和老鼠TFF2。gydF4y2Ba27gydF4y2Ba
主要由布鲁尼尔腺TFF2表达在十二指肠和胃腔正常的人类。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba9gydF4y2Ba高浓度的TFF2信使rna在细胞毗邻胃肠道粘膜溃疡的网站。gydF4y2Ba10gydF4y2Ba这引发人们猜测,三叶草肽在组织修复的作用。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba4gydF4y2Ba11gydF4y2Ba急性粘膜损伤后,胃肠道粘膜的修复启动几分钟。最早的过程是一个快速的迁移细胞受损的边缘地区剥蚀地区重建上皮连续性,这一过程被称为上皮归还。TFF2三叶草肽之间可能会特别感兴趣的是生产冷冻器后30分钟内诱导的大鼠胃溃疡。gydF4y2Ba12gydF4y2Ba
研究与生产的重组TFF2gydF4y2BaSacchromyces酵母gydF4y2Ba13gydF4y2Ba表明,TFF2保护老鼠吲哚美辛和约束引起的胃粘膜损伤,和乙醇诱导的损害。gydF4y2Ba14gydF4y2Ba15gydF4y2Ba体外,TFF2刺激人类结肠癌细胞迁移和入侵到胶原蛋白凝胶,gydF4y2Ba14gydF4y2Ba和刺激他们的迁移在塑料在体外测定受伤。gydF4y2Ba14gydF4y2Ba16gydF4y2Ba
在目前的研究中,我们检验的表达人类TFF2胃液和正常胃粘膜。gydF4y2Ba
方法gydF4y2Ba
人类样本的收集和准备gydF4y2Ba
样本收集的对象进行调查诊断内镜贫血,吞咽困难,或腹痛。没有明显的过去病史或正在酸抑制或非甾体抗炎药。收集胃液胃镜检查的时候从九个学科宏观上正常的胃。样本通过吸吸气装置使用一个标准的连续性细胞学陷阱。胞质是准备从人类胃粘膜。四个胃窦的活检标本收集胃镜检查的时候从每五个科目与宏观上正常的胃。所有的标本被从内部使用标准内镜活检钳幽门的2厘米,和存储冻结在−70°C。每门学科四个窦的标本都是看玻璃:玻璃匀浆器抑制剂缓冲:1毫米碘乙酰胺,4毫米phenylmethlysulphonyl氟化物,盐酸苯甲脒5毫米,10毫米EDTA, 100毫米α氨基己酸,10毫米N-ethyl马来酰亚胺,67毫米磷酸钠pH值6.5。样本1看在1毫升而样品2 - 5 300年单一化μl抑制剂的缓冲区。离心后一小时100 000gydF4y2BaggydF4y2Ba胞质是储存在−70°C。汁和胞质蛋白浓度的测定使用bicinchoninic酸蛋白质分析。gydF4y2Ba17gydF4y2Ba从正常胃粘膜细胞溶质也准备,远离任何病变,来自三个胃切除术标本。gydF4y2Ba
RNA制备,样品的正常胃黏膜被胃切除术标本的胃癌患者。总RNA提取沉淀后得到均化氯化锂和尿素的组织如前所述。gydF4y2Ba18gydF4y2Ba
道德允许人类材料用于本研究的收集来自南部的泰恩医疗机构伦理委员会。所有科目给书面知情同意。gydF4y2Ba
隔离和TFF2 cDNA和基因组DNA的测序gydF4y2Ba
TFF2 cDNA是通过逆转录聚合酶链反应(rt - pcr)胃总RNA和克隆的质粒pEZZ18(法玛西亚)。引物(5′gag AAACCCTCCCCCTGCCAGTGC-3′, 5′-TTAGTAATGGCAGTCTTCCAC-3′)放大序列TFF2信使rna的核苷酸之间的71年和392年(根据Tomasetto编号和同事gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。五重组从每个使用意义的三个胃测序引物(5′-GAAAGTAGACGCGA-3′)和−40 mer引物,序列的位于向量和Sequenase 2.0 (USB / Amersham)。gydF4y2Ba
隔离和测序的gydF4y2BaTFFgydF4y2Ba2gydF4y2Ba基因组DNAgydF4y2Ba
人类胎盘DNA库,部分消化gydF4y2BaMbo我gydF4y2Ba,使用标准技术构建λDash替代向量。图书馆被镀gydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2BaP2PLK和unamplified使用的筛选gydF4y2Ba32gydF4y2BaP标记TFF2 cDNA探针如前所述。gydF4y2Ba2gydF4y2BaTFF2探头是通过rt - pcr的RNA提取人体胃黏膜。引物(5′-CCCAG ATCCTGGCAGCGC-3′, 5′-TTTCTT GGTTTCGGAACACCCG-3′)放大之间的序列TFF2信使rna的核苷酸23和447(据Tomasetto编号和同事gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。PCR克隆到产品gydF4y2BaSma我gydF4y2Ba网站的Bluescript KSM13 (Stratagene)和cDNA探针准备从重组质粒PCR。图书馆是筛选,有杂交空斑纯化的重组,和λDNA准备从他们如前所述。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba
两个λ的DNA重组测序使用Sequenase 2.0 (USB / Amersham)和引物(5′ctc TCGGAAGTGCTGCTTCTCC-3′)核苷酸309年至330年(根据Tomasetto编号和同事gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
生产TFF2特定的抗血清gydF4y2Ba
16羧基末端肽的氨基酸残基的人类TFF2(见图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba被Fmoc聚酰胺合成化学,由高压液相色谱纯化,其真实性验证了基质辅助激光解吸质谱。前肽共轭是牛血清白蛋白免疫兔子,锁眼坚守岗位的血蓝蛋白在免疫BALB / c小鼠。兔子与200μg和接种小鼠接种50μg共轭肽。首次注射明矾和随后注射磷酸盐缓冲盐水。gydF4y2Ba19gydF4y2Ba
聚丙烯酰胺凝胶电泳gydF4y2Ba
丙烯酰胺凝胶是准备使用前面描述的比率和缓冲区。gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba使用的凝胶分离转移无花果所示gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和gydF4y2Ba4gydF4y2Ba包含一个梯度(wt /卷)10 - 32%的聚丙烯酰胺,和图中所示的转移gydF4y2Ba3gydF4y2Ba包含一个梯度(wt /卷)10 - 35%的聚丙烯酰胺;的叠加(wt /卷)聚丙烯酰胺凝胶含有5%。钠十二烷基硫酸盐(SDS)中加载缓冲区的最终浓度为2% (wt /卷)。gydF4y2Ba21gydF4y2Ba样品是分次被带到三羟甲基氨基甲烷HCl液pH值6.8,62.5毫米12.5毫米EDTA, 100毫米β巯基乙醇,0.005%溴酚蓝和煮五分钟之前加载。分子量标记和已知的重组TFF2包括在所有的凝胶。gydF4y2Ba
检测TFF2在人工胃液。胃液的整除(10μl)受到变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,转移到PVDF膜,TFF2抗血清。已知的重组TFF2也进行了分析。分子质量的位置标记(MW)显示在左边,TFF2右边。gydF4y2Ba
检测细胞溶质的TFF2准备从西方转移人类胃粘膜的分析。胞质准备从小型普通人类的胃粘膜活检标本的(样品1 - 5),或粘膜胃切除术标本(a - c样品)。分子质量的位置标记(MW)显示在左边,TFF2右边。gydF4y2Ba
通过N-linkage人类TFF2糖化。整除的胃液变性,变性条件下孵化缺席或peptide-N-Gycosidase F (PNGase F),和在没有或抑肽素的存在。TFF2被西方转移检测分析。TFF2的位置显示在右边的凝胶和分子量标记在左边。gydF4y2Ba
TFF2重组蛋白质的赖氨酸在99年生产的位置gydF4y2Ba毕赤酵母属pastorisgydF4y2Ba利用重组蛋白的表达载体,将分泌到培养基。媒介是收获,TFF2由阳离子交换色谱纯化,阴离子交换色谱和凝集素亲和色谱法。糖化和non-glycosylated成熟TFF2生产和纯化。纯化重组TFF2 non-glycosylated的质量是由基质辅助激光解吸质谱分析,并在计算分子质量的0.02%。量化TFF2,已知的重组TFF2和糖化TFF2电泳与人类的样本。的糖基化的重组TFF2迁移一样人类糖化TFF2自然发生的。反应的强度乐队使用图像分析测量。只有non-glycosylated重组TFF2在凝胶电泳显示在无花果gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
西方转移gydF4y2Ba
样本从凝胶转移到一个聚乙二烯二氟化物薄膜(PVDF), 0.2μm孔隙大小(Schleicher和Schuell)用一种半干的传输设备(Schleicher和Schuell) 15分钟在100毫安,然后离开了在室温下过夜。gydF4y2Ba21gydF4y2Ba他们固定在0.2%戊二醛45分钟,阻塞(wt /卷)3%牛血清白蛋白在磷酸缓冲盐,然后孵化1/2000的多克隆anti-TFF2稀释3% (wt /卷)牛血清白蛋白和血清磷酸盐缓冲了两个小时37°C。他们进一步培养两个小时37°C和二次抗体结合碱性磷酸酶在磷酸缓冲盐含有0.1%渐变20和发达如前所述。gydF4y2Ba19gydF4y2Ba
人类TFF2 DEGLYCOSYLATION胃液gydF4y2Ba
胃液1整除(10μl)是孵化为一小时37°C peptide-N-Gycosidase存在与否的F(勃林格曼海姆)推荐的制造商。孵化项目是在没有和存在的蛋白酶抑制剂抑肽素。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
TFF2序列和生产TFF2特定的抗体gydF4y2Ba
之前提高人类TFF2特定的抗体,我们孤立和测序TFF2 mRNA的胃粘膜三人确认Tomasetto发布的蛋白质序列gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba1gydF4y2BaRNA是准备从胃粘膜取自三个人。TFF2 cDNA对应于RNA的成熟TFF2蛋白质放大使用TFF2特定的引物。PCR产物直接测序或克隆测序之前在质粒载体。两个序列的差异Tomasetto和同事gydF4y2Ba1gydF4y2Ba不断被发现。保存的密码子参数gydF4y2Ba65年gydF4y2Ba(见图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)域II CGA,不是大官。这是一个保守的改变。残留的密码子99年在蛋白质的羧基末端部分第二个三叶草域是亚美大陆煤层气有限公司外,AAC。这意味着氨基酸残基在那个位置是赖氨酸和不是一个天冬酰胺最初报道。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba赖氨酸在99位置的存在证实了测序TFF2基因的外显子3从人类胎盘分离DNA库。图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba人类TFF2给成熟的完整序列。gydF4y2Ba
16羧基末端肽的氨基酸,赖氨酸残基在99年相当于位置,是合成的。后结合牛血清白蛋白和锁眼坚守岗位的血蓝蛋白,分别多克隆抗血清生长在兔子和老鼠。抗血清的反应是由能力评估与TFF2肽作为免疫原的反应。gydF4y2Ba
检测TFF2胃液gydF4y2Ba
确定我们是否可以使用TFF2 TFF2抗血清测量表达式,西方转移后的胃液样本进行分析。已知的重组TFF2正确的分子质量是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳。图中所示gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,蛋白质的表观分子量约12 kDa comigrated与重组TFF2检测到明显的六个九的胃液样本。因此看来,这少丰富TFF2免疫反应性的蛋白带对应于成熟,分泌TFF2。gydF4y2Ba
在所有九胃液样本,主要TFF2免疫反应性的蛋白质乐队是一个缓慢迁移大约20 kDa的明显的分子质量。大的性质带被认为是免疫反应性的蛋白质。蛋白质电泳之前,煮了硫醇代理β巯基乙醇和离子洗涤剂SDS;不太可能因此更大的蛋白质带代表一个复杂TFF2与另一个分子。可能是一个相关的蛋白质与TFF2交叉反应的抗血清,正确处理成熟的TFF2前体或TFF2蛋白质,经历了一些翻译修饰。gydF4y2Ba
人类TFF2 GLYSOSYLATED体内gydF4y2Ba
有一个识别序列N-linked糖基化在TFF2循环1的第一个三叶草域,NgydF4y2Ba15gydF4y2BaRgydF4y2Ba16gydF4y2BaTgydF4y2Ba17gydF4y2Ba(见图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba的可能性)。TFF2通过N-linkage糖化体内,和更大的蛋白质乐队代表糖化TFF2 endoglycosidase测试,peptide-N-Gycosidase F,删除N-linked聚糖由糖蛋白裂开天冬酰胺残留和第一个糖之间始终是一个n -乙酰-gydF4y2BadgydF4y2Ba氨基葡萄糖。胃液示例1中的蛋白质变性联系,然后孵化前peptide-N-Gycosidase F的缺失和存在通过凝胶电泳分离,转移到PVDF和immunodetection TFF2抗血清。重复的孵化项目进行抑肽素的存在,以确保蛋白质水解孵化期间没有混淆的解释。图所示的结果gydF4y2Ba3gydF4y2Ba确认主要TFF2免疫反应性的蛋白质乐队在胃液样本1 TFF2大于成熟。孵化与peptide-N-Gycosidase F转换慢迁移TFF2免疫反应性的乐队的形式comigrated TFF2与成熟。这表明更大的TFF2免疫反应性的蛋白带包含一个N-linked低聚糖和人类TFF2分泌糖基化的蛋白质在体内。gydF4y2Ba
表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba显示了糖化的浓度和non-glycosylated TFF2胃液的9个样品。总TFF2浓度变化超过20倍范围从1到20μg / ml,及其占总蛋白浓度不同的10倍从0.07%降至0.7%。在所有九胃液样本,糖化TFF2 TFF2检测的主要形式。糖化比non-glycosylated TFF2多样5:1和10:1之间(见表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
TFF2在人工胃液的浓度gydF4y2Ba
TFF2在人类胃粘膜gydF4y2Ba
调查的形式TFF2存在于胃粘膜,窦的粘膜细胞溶质从八个样品准备:五期间收集的胃镜检查和三个从胃切除术标本。胞质中提取分离的蛋白质变性凝胶电泳和转移到PVDF;TFF2蛋白检测中描述的方法。图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba表明,糖化TFF2 TFF2在胃粘膜的主要形式。这表明大多数TFF2合成和分泌胃粘膜是糖化。糖化TFF2比non-glycosylated TFF2似乎更高比胃粘膜腔可能表明分泌后,一些成为deglycosylated胃腔。TFF2几乎没有可检测在正常人体胃黏膜样本2和5,只是显示在原来的转移膜。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
识别的赖氨酸残基位置99 TFF2在材料准备的四个人,而不是天冬酰胺残留的报道,表明这是一个频繁的多态性或有一个错误在原始序列。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba更换一种氨基酸相对较短,极长侧链的氨基酸,带正电的侧链将增加蛋白质的π,可能对其结构的影响和对蛋白质水解。与我们的发现协议,另一组确定了潜在的TFF2多态性。gydF4y2Ba22gydF4y2Ba
羧基末端序列的四种已知哺乳动物TFF2蛋白质比较图gydF4y2Ba1gydF4y2Bac .高序列保护在这个地区,只有一个其他氨基酸残基显示变异;剩余102是谷氨酸在人类、猪和小鼠TFF2,而天冬氨酸在老鼠TFF2。剩余99是最变体:人类TFF2赖氨酸或天冬酰胺,在猪TFF2蛋氨酸,在啮齿动物TFF2谷氨酰胺。显然这不是保守的变化,如果残留99参与的生物功能TFF2那么这些替换可能会有影响。gydF4y2Ba
很难预测的替代效应的赖氨酸残基天冬酰胺残留对人类TFF2的结构,特别是当它超出了更高度结构化的三叶草域。研究的功能活动TFF2出版日期使用重组人类TFF2天冬酰胺残留在99位置。这将是有趣的调查是否TFF2与赖氨酸残基在99位置有相同的活动或是否替换具有生物学意义。可能相对高浓度的TFF2需要获得一个效应在一些研究中由于天冬酰胺残留的替换。gydF4y2Ba
许多研究提出反对TFF2用抗体的表达对应16羧基末端肽人类TFF2的残留物。剩余99位于中间肽,这可能影响抗体的特异性。我们合成了16个肽与赖氨酸残留的相当于99的位置。特别是与TFF2反应产生的抗血清和TFF1没有交叉反应,或任何可能存在的TFF3,胃或胃液(参见无花果gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
高浓度的TFF2出现在人工胃液gydF4y2Ba
TFF2在胃液的浓度变化1 - 23μg /毫升,平均值为9.5(2.6)μg /毫升。所有患者禁食内窥镜检查前,很可能这些值反映了个体之间的自然变化。这是大大高于0.03到0.1μg /毫升报道TFF1在胃液的浓度从6个人。gydF4y2Ba23gydF4y2Ba有趣的是,TFF2在胃液的浓度远高于TFF1的浓度。这样的差别可能暗示两者之间的显著功能差异蛋白质。gydF4y2Ba
人类TFF2糖化蛋白质的体内gydF4y2Ba
的发现TFF2主要是糖基化的蛋白质在体内是意想不到的。只在胃组织中糖基化的形式被发现,在胃液,糖化TFF2之间存在过多的5:1,10:1 non-glycosylated TFF2。我们这里显示的糖基化是通过一个N-linkage。当重组人类TFF2表达gydF4y2Ba年代酵母gydF4y2Ba很大一部分的重组蛋白糖化通过N-linkage AsngydF4y2Ba15gydF4y2Ba。gydF4y2Ba13gydF4y2Ba然而,自然TFF2没有在蛋白质水平研究,以及gydF4y2Ba年代酵母gydF4y2Ba是已知的哺乳动物生产重组蛋白质糖基化的异常,这不是假设自然TFF2糖化。第二年,一篇论文中报告anti-TFF2单克隆抗体的生产,一种免疫反应性的蛋白质群的预测大小non-glycosylated成熟TFF2提取物中检测出正常的胃、十二指肠和回肠但不是结肠。gydF4y2Ba24gydF4y2Ba与本文研究这种差异的原因尚不清楚,但它确实建立视图,TFF2不是通常糖化。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba4gydF4y2Ba24gydF4y2Ba我们发现TFF2糖化17个人现在逆转这个误解。gydF4y2Ba
没有证据表明TFF1或TFF3糖化,也不包含N-glycosylation共识序列。TFF2的糖基化是一个重要的潜在差异三个人类三叶草的蛋白质。gydF4y2Ba
这糖基化的影响的结构和生物活性TFF2现在必须被考虑。AsngydF4y2Ba15gydF4y2Ba在第一个循环的第一个三叶草TFF2领域,立即毗邻最高度保守的氨基酸残基参数gydF4y2Ba16gydF4y2Ba。事实上参数gydF4y2Ba16gydF4y2Ba中央残留在三个氨基酸共有序列N-linked Asn糖基化gydF4y2Ba15gydF4y2Ba。参数gydF4y2Ba16gydF4y2Ba是一个在结构上重要的残渣被认为是稳定的关键核心结构之间的第一个和第三个循环。在猪TFF2残留12日至16日被发现3gydF4y2Ba10gydF4y2Ba螺旋C晶体gydF4y2Ba5gydF4y2Ba在解决方案的一部分。gydF4y2Ba7gydF4y2Ba在第二篇论文,gydF4y2BaxgydF4y2Ba射线晶体结构的猪TFF2, TFF2在场作为不对称单位,作为一个二聚体。作者发现两个氢键的形成之间的AsngydF4y2Ba15gydF4y2Ba和AsngydF4y2Ba67年gydF4y2Ba,涉及赖氨酸的范德华接触gydF4y2Ba14gydF4y2BaasngydF4y2Ba15gydF4y2Ba和AsngydF4y2Ba67年gydF4y2Ba箴gydF4y2Ba71年gydF4y2Ba。gydF4y2Ba6gydF4y2Ba似乎可能的存在一个N-linked低聚糖AsngydF4y2Ba15gydF4y2Ba将会影响这些结构元素和inter-residue接触的稳定性。gydF4y2Ba
的氨基酸序列的第一个循环域包含共识我人类TFF2 N-glysosylation识别序列是与相应的序列已知的其他三个TFF2蛋白质在无花果gydF4y2Ba1gydF4y2BaB。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba3gydF4y2Ba25日- 27日gydF4y2Ba三肽的共识序列,糖化的天冬酰胺和精氨酸是守恒的,但苏氨酸变异,取而代之的是在猪TFF2缬氨酸和赖氨酸的啮齿动物TFF2蛋白质。尽管小鼠和大鼠TFF2包含一个苏氨酸在12的位置,这些苏氨酸残基并没有形成一个N-glycosylation共识识别序列的一部分,没有其他N-glycosylation共识序列的蛋白质。gydF4y2Ba26gydF4y2Ba27gydF4y2Ba所有哺乳动物TFF2蛋白质在胃里表示,主要是在腔,十二指肠。猪、大鼠和小鼠TFF2也表示在胰腺腺泡的细胞,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba23gydF4y2Ba24gydF4y2Ba而人类TFF2不是。gydF4y2Ba4gydF4y2Ba胰腺TFF2可能提供了一个额外的TFF2来源生物活性的胃肠道远端胃。这将是有趣的,如果人类TFF2胰腺所表达的不是因为TFF2人类胃更积极的或产生的稳定比其他哺乳动物由于其糖基化。gydF4y2Ba
明显的影响生物活性的糖基化TFF2也需要考虑。糖基化可能会影响TFF2的半衰期。布雷福特gydF4y2Ba等gydF4y2Ba已经观察到糖化重组TFF2比non-glycosylated有力TFF2体内保护胃损伤的大鼠模型。gydF4y2Ba14gydF4y2Ba糖化的生物活性和non-glycosylated TFF2现在需要比较严格的生物化验。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
这项工作是支持的癌症研究活动。JIS由于癌症研究活动的研究资助和JLN感谢阿斯特拉基金会临床研究奖学金。我们感谢教授OFW詹姆斯和艾伦的建议和有益的讨论。gydF4y2Ba
引用gydF4y2Ba
脚注gydF4y2Ba
- 这篇论文使用的缩写:gydF4y2Ba
- TFFgydF4y2Ba
- 三叶草因子家族gydF4y2Ba