的影响IL-20亚细胞因子重组人类表皮建议潜在的角色在银屑病皮肤天生的防御和致病性适应性免疫gydF4y2Ba

牛皮癣是一种慢性炎症性皮肤病,表现为表皮角化细胞的过度增殖和分化异常(;),gydF4y2Ba^2gydF4y2Ba的增长和扩张血管,和白细胞的浸润到真皮和表皮。分析银屑病病变浸润的最稳定确认增加myeloid-derived CD11cgydF4y2Ba^+gydF4y2Ba树突细胞和CD4gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba和CD8gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba与血浆树突细胞(CD11c T细胞gydF4y2Ba^−gydF4y2Ba)、单核细胞/巨噬细胞、中性粒细胞和肥大细胞也经常发现在增加数字(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。角色的T细胞在银屑病的发病机制一直支持的最新发展的牛皮癣治疗目标T细胞,如依法和alefacept,分别绑定CD11a和CD2, (gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。浸润CD4gydF4y2Ba^+gydF4y2BaT细胞在银屑病皮肤迄今为止被定性为显示炎症由于高浓度的IFN-γTh1表型,TNF-α和il - 12。(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。符合这一假说,Ab anti-blocking il - 12的p40亚基,对于Th1细胞因子至关重要的发展,展示了早期临床疗效治疗牛皮癣(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)。然而,p40是一种常见的亚基两个细胞因子,il - 12和IL-23。最近,IL-23发现银屑病病变的主要p40-containing细胞因子识别(gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

尽管最近已经取得显著进展的治疗牛皮癣,针对免疫系统,并不是所有的银屑病患者应对这些靶向治疗(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。一种解释为缺乏完整的功效,这些疗法是居民皮肤细胞群和正常皮肤的防御机制的失调也扮演重要的角色在银屑病的发病机制(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba8gydF4y2Ba)。此外,牛皮癣的KC增生和分化异常机制并不完全清楚,尽管许多表皮生长因子(EGF)的家庭提出了生长因子发挥重要作用(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba)。另一组可溶性因子,与银屑病的病理生理学是最近描述IL-20亚细胞因子,包括IL-19、IL-20, il - 22生成时,IL-24, IL-26。这些细胞因子,IL-19 IL-20, il - 22生成时,和IL-24已经证明是上调银屑病皮肤(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba)。此外,IL-20和il - 22生成促进增生和分化异常;体外和体内(gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba14gydF4y2Ba,gydF4y2Ba15gydF4y2Ba)。IL-20表皮增殖和分化异常引起的超表达转基因小鼠表皮中表达的时候(gydF4y2Ba11gydF4y2Ba)和il - 22生成诱导增生,抑制分化培养重组人类表皮(流值)(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba)。最后,这些细胞因子引起Stat3激活。佐et al。(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba)最近发现Stat3在lesional银屑病皮肤被激活。此外,过度的既定的活动形式的Stat3在表皮;导致K5银屑病病变的发展。Stat3C转基因小鼠。虽然这个模型仍然需要T细胞疾病发展,阻断Stat3激活导致病变减轻。因此,针对上游信号激活Stat3 lesional皮肤可能是一个潜在的新治疗牛皮癣。gydF4y2Ba

IL-19和IL-20主要由激活单核细胞(gydF4y2Ba16gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba18gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba),IL-24由Th2细胞,单核细胞,melanocytic细胞(gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba,gydF4y2Ba22gydF4y2Ba),il - 22生成和IL-26主要是由激活的T细胞(gydF4y2Ba16gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba18gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba)。这些二类细胞因子il - 10,信号通过heterodimeric受体。二类细胞因子受体(CRF2)是由一个很长的R1类型单元具有悠久的胞质尾搭配短R2类型单元胞质尾短。IL-19信号全部通过IL-20R1 / IL-20R2异质二聚体,而IL-20和IL-24信号可以通过IL-20R1 / IL-20R2以及IL-20R2链搭配IL-22R1 (gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba23gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba)。通过IL-22R1搭配IL-10R2 il - 22生成信号(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba,gydF4y2Ba27gydF4y2Ba),IL-26信号通过IL-20R1和IL-10R2组成的异质二聚体(gydF4y2Ba28gydF4y2Ba,gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba)。IL-20R1和IL-20R2表达在皮肤、肺、睾丸等组织(gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba28gydF4y2Ba,gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba)。IL-22R1;表达,肝细胞、胰腺腺泡的细胞,以及在大肠和小肠(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba26gydF4y2Ba,gydF4y2Ba27gydF4y2Ba,gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba)。这些受体的表达谱表明,与il - 10不同,IL-20亚细胞因子主要目标上皮组织。尽管有一些报道称,这些细胞因子在造血细胞活动类型(gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba,gydF4y2Ba32gydF4y2Ba,gydF4y2Ba33gydF4y2Ba,gydF4y2Ba34gydF4y2Ba),表达自己的免疫细胞上受体尚未得到明确的证明。gydF4y2Ba

的免疫起源IL-20亚细胞因子,它们主要候选人考虑上游目标可能直接调解之间的相互浸润T细胞,单核细胞,居民皮肤细胞。然而,功能IL-20亚细胞因子;没有系统地分析和比较。在这项研究中,我们评估IL-19的影响,IL-20, il - 22生成时,人工培养的KC IL-24, IL-26单层膜,在一个重组的人类表皮文化系统。作为我们的分析的一部分,我们评估了生物的后果IL-20亚细胞因子信号;利用基因微阵列分析。我们的数据表明,这个细胞因子亚科的成员不仅影响生长和分化的;但它的成员也诱导趋化因子,蛋白酶,S100家族蛋白质,β-defensins,生长因子,包括血管内皮生长因子(VEGF),这表明IL-20亚科在表皮免疫力和伤口修复中起着重要的作用。此外,我们的研究结果支持这一假设,即细胞因子白细胞的浸润之间可能形成重要联系,白细胞炎症反应,KC异常增殖和分化在银屑病的发病机制。gydF4y2Ba

正常的人类表皮;(这些)从新生儿包皮无血清培养系统在EpiLife介质与人类KC增长补充(牛脑垂体提取物0.2% (v / v) 5μg /毫升牛胰岛素,5μg /毫升牛转铁蛋白0.2 ng / ml人类表皮生长因子,和0.18μg /毫升氢化可的松),所有购买的级联生物制剂。三个不同的单一捐赠者这些地方很多。重组人细胞因子和生长因子从研发系统购买。gydF4y2Ba

Abs针对人类IL-20R1人类IL-20R2,人类IL-22R2 (5 c9、1 b4和7 e9,分别)是由免疫小鼠的ectodomain这些蛋白质。Abs的阻塞活动确定使用293个细胞稳定表达与IL-20R2 IL-20R1 IL-22R1 IL-20R2,或与IL-10R2 IL-22R1。细胞被镀在0.2×10gydF4y2Ba^6gydF4y2Ba/在24-well板和第二天receptor-expressing细胞系转染Stat3荧光素酶的记者和gydF4y2BaRenillagydF4y2Ba荧光素酶控制使用Lipofectamine 2000(生命表达载体技术)。第二天IL-19, IL-20、il - 22生成或IL-24(研发系统)被添加在指定的浓度(0.5 - 3海里)以及剂量范围的Ab。16小时后细胞细胞溶解和样品读光度计。剂量曲线被绘制决定集成电路gydF4y2Ba_50gydF4y2Ba5 c9的阻塞活动,1 b4, 7 e9 Abs。gydF4y2Ba

评估细胞表面表达IL-20亚细胞因子受体亚基主要人类;在单层和流值组织文化中,使用以下马伯:anti-IL-20R1 (Genentech;克隆5 c9), anti-IL-20R2 (Genentech;克隆1 b4), anti-IL-22R1 (Genentech;克隆7 e9), anti-IL-10R2 (Genentech;克隆3213)和PE-conjugated anti-IL-10R2(研发系统;克隆90220)。同形像控制鼠标IgG1 (BD生物科学;)和克隆X40 PE-conjugated鼠标IgG1 (BD生物科学;克隆MOPC-21)。二次马伯是R-PE-conjugated F (ab′)gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba山羊anti-mouse免疫球蛋白(杰克逊ImmunoResearch实验室;目录没有。115-116-071)。这些单层文化使胰蛋白酶化简要在环境温度(20°C)其次是中和使用定义的胰蛋白酶抑制剂(级联生物制剂)解除细胞和单细胞悬浮体做准备。主要Ab(0.5μg)是用于3 - 6×10gydF4y2Ba^5gydF4y2Ba细胞每样例添加了碘化propidium之前坏死细胞分析排除。流值组织分解为KC细胞悬浊液,流值组织第一次使胰蛋白酶化2 - 3 h在环境温度在0.83%胰蛋白酶(英杰公司生命技术)。Subcorneal层细胞收集和颗粒状180×gydF4y2BaggydF4y2Ba在4°C中和后胰蛋白酶胰蛋白酶抑制剂的定义。细胞被收集在一个FACScan血细胞计数器(BD生物科学)和分析与流乔软件(树明星)。gydF4y2Ba

这些地方扩散是由CyQUANT细胞增殖工具包(生命表达载体技术)。这些地方被播种在96 - 1550细胞/孔板与完整的人类EpiLife介质KC增长补充。15到24 h后,介质改为EpiLife只有牛胰岛素和转铁蛋白,补充的要么anti-EGF受体(EGFR)马伯(Calbiochem;克隆225)或同形像控制Ab (anti-gp120;基因泰克公司;克隆10 e7)的浓度0.5μg /毫升。十二20 h后,测试因素被添加。盘子是收获2 - 4天后,套利交易的媒介,冻结在−70°C,直到他们化验根据制造商的协议(生命表达载体技术)。gydF4y2Ba

表皮组织模型和流值epi - 100 nmm介质从MatTek购买。实验使用流值都开始后第一次平衡组织中37°C公司为5%gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba一夜之间从航运中恢复。三个组织每次治疗条件在气液界面培养4天的总量5毫升6-well盘子。媒介改变了每隔一天,新鲜的细胞因子和生长因子。受体阻断研究使用了以下马伯的最终浓度20μg /毫升细胞因子前加了1 h: anti-IL-20R1 (Genentech;克隆5 c9), anti-IL-20R2 (Genentech;克隆1 b4), anti-IL-22R1 (Genentech;克隆7 e9)和anti-gp120 (Genentech;克隆10 e7)。所有马伯鼠标反IgG1同形像。gydF4y2Ba

对于常规组织学分析,5-μm部分都沾染了)。组织收集和固定在石蜡neutral-buffered 10%福尔马林和嵌入式。免疫组织化学(包含IHC), 5-μm部分玻璃幻灯片deparaffinized,水化蒸馏水。幻灯片孵化了20分钟在Dako目标检索解决方案(DakoCytomation)在99°C。内源性过氧化物酶、抗生物素蛋白生物素淬火使用KPL阻断缓冲区(科克加德&佩里实验室)和一个向量亲和素、生物素工具包(向量实验室),分别。幻灯片孵化了30分钟10%正常在3% BSA / PBS马血清,然后孵化与1μg /毫升anti-cytokeratin 16 (CK16) (Serotec;克隆LL025)、1μg /毫升anti-S100A7 (Imgenex;克隆47 c1068)或5μg /毫升anti-phospho-Stat3(酪氨酸gydF4y2Ba^{705年gydF4y2Ba})(细胞信号技术;克隆3 e)在室温下60分钟。在TBST洗后,幻灯片和2.5μg /毫升孵化生物素化的马anti-mouse二级Ab(向量实验室)30分钟,Vectastain ABC精英试剂(向量实验室)30分钟,和金属增强diaminobenzidine幻灯片(皮尔斯)4分钟。然后用迈耶的苏木精复染色,脱水,安装,和盖玻片明亮实地查看。gydF4y2Ba

测量的表皮厚度和包含IHC染色强度,MetaMorph(分子设备)图像分析软件使用。在微米厚度的测量是由校准刻度栏使用捕获×20像素(原放大)的图像H&E-stained组织和利用四个测量每个组织在整个可行(subcorneal)细胞层。CK16和S100A7染色强度,四个相等的区域地区的活细胞层测量平均染色强度规模每个捕获的0 - 255×20形象。平均表皮厚度和平均强度值计算每个组织和每个治疗组。gydF4y2Ba

统计学意义是由单向的学生的gydF4y2BatgydF4y2Ba测试使用JMP软件(SAS)。gydF4y2Ba

流值组织培养了4、24、48、96 h(有或没有细胞因子浓度用于所有IL-20亚科成员20 ng / ml;IL-1β、TNF-αIFN-γ,KC生长因子(KGF)浓度是10 ng / ml,和EGF 6 ng / ml)。组织在液氮快速冻结,和总RNA制备使用RNeasy迷你包(试剂盒)均质化后与锯齿刀片(Omni H-01)。cRNA杂化了Affymetrix U133 +基因芯片包含54675探针集。信号强度值Affymetrix微阵列分析套件版本5被世世代代规范化描述根据过程等。gydF4y2Ba35gydF4y2Ba)。层次聚类使用皮尔逊相关性作为相似性度量使用R软件进行统计计算的R项目(部门统计和数学,维也纳大学的经济学和商业管理,维也纳,奥地利;www.r-project.org/)。统计测试也是使用R软件执行的微分表达式。错误发现率估计使用gydF4y2Ba问gydF4y2Ba值包(gydF4y2Ba36gydF4y2Ba)。对微分表达式对比IL-20亚科文化与未经处理的控制治疗,gydF4y2BatgydF4y2Ba统计与贝叶斯正规化(gydF4y2Ba37gydF4y2Ba)是使用错误发现率的截止值0.05和0.005,分别产生1955年和266年调查集。方差分析,错误发现率为0.005,7936年收益率探针集与重要gydF4y2BaFgydF4y2Ba统计数据。比较折流值的感应不同的细胞因子,我们计算皮尔逊相关褶皱的变化对所有调查显示一个褶皱变化≥2治疗组相对于未经处理的控制样本。从我们的微分表达式相关的基因列表分析与周et al。(gydF4y2Ba38gydF4y2Ba)被评估使用NetAffx映射(可以从Affymetrix) U133 +和U95芯片上的探针集参考序列(RefSeq)标识符。这两者共同导致了16621个基因芯片,在周et al。(661个差异表达gydF4y2Ba38gydF4y2Ba)和1333年在我们的研究中。两组之间的重叠基因被一个χ然后评估gydF4y2Ba^2gydF4y2Ba测试。实时rt - pcr、50 ng总RNA的运行使用引物和家人/ TAMRA调查针对目标基因的外显子的边界。使用一步法rt - pcr反应混合液(应用生物系统公司)和反应运行7700年ABI棱镜序列检测器。gydF4y2Ba

底漆/探针对使用如下:处于受控,5′-CGTGAAGTCCCCCGGAC-3′(向前),5′-GCCCATTCTTGAGTGTGGCT-3′(反向),和5′-CCACTGCGCCCAAACCGAAGTC-3′(调查);CXCL7 5′-TGATCGGGAAAGGAACCCA-3′(向前),5′-GGCAGATTTTCCTCCCATCC-3′(反向),和5′-TGCAACCAAGTCGAAGTGATAGCCACACT-3′(调查);CXCL8 /引发5′-AAGGAAAACTGGGTGCAGAGG-3′(向前),5′-GATACCACAGAGAATGAATTTTTTTATGA-3′(反向),和5′-TTGTGGAGAAGTTTTTGAAGAGGGCTGAGAA-3′(调查);Stat3 5′-TGAACCCTCAGCAGGAGGG-3′(向前),5′-AGGTAGCGCACTCCGAGGT-3′(反向),和5′-AGTTTGAGTCCCTCACCTTTGACATGGAGTT-3′(调查);SOCS3 5′-TGGGACGATAGCAACCACAA-3′(向前),5′-GTCCCCTGTTTGGAGGCAG-3′(反向),和5′-TGGATTCTCCTTCAATTCCTCAGCTTCCC-3′(调查);BD02 5′-GCCATGAGGGTCTTGTATCTCC-3′(向前),5′-CCTATACCACCAAAAACACCTGG-3′(反向),和5′-CTTCTCGTTCCTCTTCATATTCCTGATGCCTC-3′(调查);S100A7, 5′-CCTGCTGACGATGATGAAGGA-3′(向前),5′-GCGAGGTAATTTGTGCCCTTT-3′(反向),和5′-ACTTCCCCAACTTCCTTAGTGCCTGTGACA-3′(调查);S100A12 5′-GCAGCTGCTTACAAAGGAGCTT-3′(向前),5′-TCCAGGCCTTGGAATATTTCA-3′(反向),和5′-CAAACACCATCAAGAATATCAAAGATAAAGCTGTCATTG-3′(调查);S100A15 5′-TGCTGACGATGATGAAGGAGAA-3′(向前),5′-GCGAGGTAATGTATGCCCTTTT-3′(反向),和5′-TTCCCCAATTTCCTCAGTGCCTGTGAC-3′(调查);heparin-binding表皮生长因子(HB) 5′-GAAAGACTTCCATCTAGTCACAAAGA-3′(向前),5′-GGG gg CCC AAT有条件现金援助AGA-3′(反向),和5′-TCCTTCGTCCCCAGTTGCCG-3′(调查); and IL-20, 5′-GCCAGATTCTGAGTCACTTTGAAA-3′ (forward), 5′-AGAATGTCTAGTTCCCCCAAAGC-3′ (reverse), and 5′-CTGGAACCTCAGGCAGCAGTTGTGAA-3′ (probe).

引发和MIP-3αELISA进行使用DuoSet ELISA开发工具包后从研发系统制造商的协议。样品测试在上层清液流值20 ng / ml IL-20家族细胞因子治疗48 h一式三份。短暂,捕捉Ab涂层在室温下在PBS。洗后第二天早上,1% BSA在PBS的盘子被封锁在室温下1 h。洗后,100μl未稀释的样本添加到每个在室温下对2 h。洗后,100μl streptavidin-HRP被添加到每个在室温下对20分钟洗和衬底和停止的解决方案。引发的浓度和MIP-3α决心根据标准曲线。elisa实验的运行使用样本进行三次,所有这些都取得了类似的结果。gydF4y2Ba

尽管受体亚基IL-20R1、IL-20R2 IL-22R1先前已被证明在银屑病病变和在mRNA水平;gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba),这些蛋白质的细胞表面表达尚未明确。为了解决这个问题,我们生成的Abs小组认识到细胞表面的表达人类IL-20R1 IL-20R2, IL-22R1。Abs是特定的Ag)他们对提高证明了他们有能力阻止信号在记者化验使用细胞系表达这些受体亚基(j .吴邦国委员长和w·欧阳,未发表的数据)。克隆5 c9和1 b4认识到人类IL-20R1链和IL-20R2链,分别。这两种Abs能够完全阻止IL-19——IL-20-induced Stat3-driven Stat3激活的荧光素酶检测的293个细胞中稳定IL-20R1和IL-20R2连锁店(表gydF4y2Ba我gydF4y2Ba)。克隆1 b4抑制IL-20信号通过IL-20R2链搭配IL-22R1链。然而,IL-24诱导活动不能被5 c9,只能被1 b4在类似更高浓度化验,虽然两受体链绝对IL-24所需活动在这些细胞系(表gydF4y2Ba我gydF4y2Ba)。克隆7 e9结合IL-22R1和阻止il - 22生成信号通过与IL-10R2 IL-22R1配对,以及通过IL-22R1 / IL-20R2 IL-20引起的活动。相比之下,7 e9未能阻止IL-24-induced Stat3激活通过IL-22R1 / IL-20R2(表gydF4y2Ba我gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

我们评估IL-20R1的表达,IL-20R2 IL-22R1, IL-10R2主要人类;使用流式细胞仪,发现这些细胞表达受体亚基在单层培养和分层流值。IL-20R2表面和IL-10R2始终表示这些不管融合,通过数字,或钙含量在中(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)。相比之下,表面的表达IL-20R1和IL-22R1这些变化从捐赠者捐赠和总是相对较低,但可检测水平(图。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba和未发表的数据)。与单层这些地方的表达水平相比,IL-20R1和IL-22R1表示在更高水平;分离流值(无花果。gydF4y2Ba1gydF4y2BaBgydF4y2Ba)。这种差异的原因和影响因素这两个链是未知的表达水平。我们也调查了这些受体的表达在人类免疫细胞,流式细胞仪分析。到目前为止,我们还没有发现任何由Abs表面这些受体的表达在细胞类型检查,包括T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞(未发表的数据)。gydF4y2Ba

我们第一次评估是否IL-20亚科成员可能诱发KC扩散单层文化。我们发现检测对KC扩散的影响,甚至对KGF,有必要阻止信号通过表皮生长因子受体(EGF家族配体图gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba左gydF4y2Ba)。使用中和anti-EGFR Ab阻止EGFR-mediated自分泌增长,我们观察到温和但重要的这些扩散引起IL-20, il - 22生成时,和IL-24(无花果。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba,gydF4y2Ba正确的gydF4y2Ba)。因此,这些地方的扩散引起的IL-20亚细胞因子不太可能由表皮生长因子受体介导的间接途径。在IL-20亚细胞因子,il - 22生成诱导增殖的最高水平,其次是IL-24和IL-20。IL-19和IL-26都未能引起显著的浓度扩散甚至100 ng / ml(图。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba和未发表的数据)。除了未能诱导增殖在这些地方,IL-26也没有影响的流值研究,即使在100 ng / ml。这是尽管IL-26导致Colo205 Stat3激活细胞的能力(我们的未发表的数据),结果证实了以前的报告(gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba)。因此,IL-26没有进一步分析。gydF4y2Ba

接下来,评估的影响IL-20亚细胞因子上;在分层表皮文化系统中,流值组织培养了4天在气液界面IL-20亚细胞因子添加到培养基中。组织学检查显示,IL-19 IL-20, il - 22生成时,和IL-24诱导棘皮症或可行的增生,noncornified表皮(无花果。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2BaBgydF4y2Ba),il - 22生成并再次IL-24有增生的影响最大。进一步评估增生的影响,表皮增厚在H&E-stained量化部分。IL-19 IL-20, il - 22生成,IL-24所有活细胞中诱导表皮增厚层剂量依赖性的方式(图gydF4y2Ba2gydF4y2BaCgydF4y2Ba),il - 22生成表皮厚度增加> 50%,控制在所有研究组织。虽然il - 22生成的影响达到25 ng / ml, IL-24的活动趋于稳定在25 - 50 ng / ml, IL-20 50 ng / ml, IL-19 100 ng / ml。这些影响是统计学意义(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05)与未经处理的介质控制组织剂量IL-19低至2.5 ng / ml, IL-20, il - 22生成时,和IL-24。评估是否表皮增厚是由于KC增生,我们清点的数量表皮KC细胞层。所有IL-20亚科成员,以及KGF,引起了相似,流值的平均数显著增加表皮细胞层与介质控制组织(我们的未公开的数据)。这些结果证实IL-20亚科成员诱导表皮增生;,虽然我们不能完全排除这种可能性,一些KC肥大也可能发生。有趣的是,尽管我们看到增加表皮增生,我们不能证明任何重大差异IL-20亚cytokine-treated和媒介控制组织使用ki - 67染色作为增殖标记(未发表的数据),这表明扩散效应导致增生发生早于我们能够测量。这些结果与以前的报告中发现协议(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

除了会导致表皮增生的最大程度,il - 22生成唯一的细胞因子,也诱导hypogranulosis(无花果。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)或减少颗粒细胞层,这一发现与先前的报告(是相一致的gydF4y2Ba14gydF4y2Ba)。我们也观察到,il - 22生成诱导形成突出的非细胞变透明角质;高于hypogranular区和降低角质层(图。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba星号)。此外,在一个完整的厚度模型,包括真皮成纤维细胞,il - 22生成诱导角化不全在组织培养7天(我们的未公开的数据)。Hypogranulosis和银屑病表皮角化不全都经常观察组织学特征(gydF4y2Ba39gydF4y2Ba)。与这些IL-22-induced变化相反,EGF诱导hypergranulosis压实的颗粒层内的;而其他三个IL-20亚细胞因子,IL-19, IL-20,和IL-24没有明显影响表皮颗粒细胞层的流值。gydF4y2Ba

包含IHC进行流值评估KC分化标记的表达以及其他特性与银屑病相关的表型。如无花果所示。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2BaBgydF4y2Ba的标记,我们发现CK16表皮增生,增加在所有cytokine-treated文化与组织控制。CK16表达程度的每个细胞因子诱导的多种多样,与IL-19 IL-20只诱导增加CK16表达式在基底区il - 22生成时,IL-24, EGF诱导增加整个表皮noncornified CK16表达式。S100A7 (psoriasin), S100家族蛋白质之一已经发现上调某些hyperproliferative炎性皮肤病,包括牛皮癣,是suprabasal诱导表皮的所有成员IL-20亚变量程度(无花果。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2BaCgydF4y2Ba),但是,最广泛的il - 22生成IL-24紧随其后。强烈S100A7染色观察细胞核和细胞质的;与一些蛋白质也似乎是细胞外。相比之下,尽管诱导表皮增生,EGF不会上调S100A7。量化的染色强度(图。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2BaFgydF4y2Ba)表明,诱导IL-19 S100A7, IL-20 il - 22生成,IL-24统计学意义(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05)与未经处理的组织控制。量化的CK16(无花果。gydF4y2Ba3gydF4y2BaEgydF4y2Ba)取得了类似的结果。gydF4y2Ba

激活Stat3在银屑病lesional已被证明是提高皮肤(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba)。我们发现IL-20亚细胞因子诱导持续Stat3激活检测使用phosphotyrosine (pY) -Stat3包含IHC流值。IL-19 IL-20, il - 22生成,IL-24诱导pY-Stat3核染色;所有活细胞层(无花果。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2BaDgydF4y2Ba)。尽管EGF和TGF-α激活Stat3(已报告gydF4y2Ba40gydF4y2Ba,gydF4y2Ba41gydF4y2Ba),没有pY-Stat3核染色观察流值这两个生长因子治疗。此外,实时rt - pcr分析RNA提取的流值在这些实验表明,IL-20亚细胞因子也增强Stat3表达在mRNA水平(见图。gydF4y2Ba6gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

IL-20信号通过两个受体对,IL-20R1 / IL-20R2和IL-22R1 / IL-20R2 (gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba23gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba)。主要是因为这两种受体表达;来自流值,目前尚不清楚IL-20优先使用一对受体。为了解决这个问题,mab特定于单个IL-20亚受体亚基被用来确定IL-19观测的影响,IL-20, il - 22生成人工流值可以屏蔽(图。gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。与之前的数据一致,Abs对IL-20R1或IL-20R2可以完全阻止IL-19-induced S100A7表达式和Abs IL-22R1阻塞IL-22-induced S100A7表达式。虽然感应的S100A7 IL-20使用anti-IL-20R2完全封锁,Abs IL-20R1或IL-22R1可能会阻止IL-20-induced S100A7表达式只有他们应用于组合(未发表的数据),结果表明IL-20R1在IL-20信号和IL-22R1可能互补的作用在人类;(无花果。gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

进一步揭开这群细胞因子的生物学效应;,我们进行微阵列实验。流值组织服用IL-20亚细胞因子4天如上所述。RNA制备cRNA杂化了Affymetrix U133 +基因芯片包含54675探针集。图像数据被处理成信号强度使用微阵列分析套件版本5和规范化程序所描述的Choe et al。(gydF4y2Ba35gydF4y2Ba)。中描述的数据进行了分析gydF4y2Ba材料和方法gydF4y2Ba;每个治疗条件运行重复或一式三份。进行分层聚类分析基因根据它们的表达模式。基于方差分析分析的差异表达基因最图所示。gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba。流值在相同条件下进行治疗显然是聚集在一起。与以前的实验结果一致,IL-26对待样品有一个表达式模式非常类似于未经处理的控制样品(我们的未公开的数据)。流值样本处理il - 22生成和IL-24,程度较轻,IL-20和IL-19共享类似的基因签名。IFN-γ、IL-1β,KGF-treated样本也包括控制。正如图所示。gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba,这些因素引起的基因签名,显然是不同于那些IL-20亚细胞因子,表明这些因素诱发不同的生物功能。尽管KGF诱导流值显著表皮增生,引起下游机制KGF显然是不同于那些IL-20亚细胞因子,作为其独特的基因聚类(图了。gydF4y2Ba5gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)。同样,尽管据报道IFN-γ和IL-1β上调银屑病皮肤(gydF4y2Ba42gydF4y2Ba,gydF4y2Ba43gydF4y2Ba下游),他们的目标也显然不同于IL-20亚细胞因子。gydF4y2Ba

因为我们观察到的每个IL-20亚科;细胞因子的生物效应非常相似,我们问他们是否诱发类似的基因资料。我们比较每个基因的褶皱感应不同细胞因子通过计算皮尔逊相关系数的褶皱变化相对于未经处理的流值。出乎意料,虽然il - 22生成和IL-24使用不同的受体信号,诱导的基因资料这两种细胞因子显著相关,见图。gydF4y2Ba5gydF4y2BaCgydF4y2Ba。类似的相关性也明显当我们比较基因诱导il - 22生成vs IL-20和il - 22生成vs IL-19,尽管这种程度的相关性低于观察il - 22生成和IL-24之间在这两种情况下(我们的未公开的数据)。目前尚不清楚这些基因诱导的相似之处,我们观察到由于il - 22生成时,IL-20, IL-24信号通过IL-22R或是否由于这群共享下游通路细胞因子。il - 22生成并产生一些独特的基因,包括trichohyalin和纤维蛋白原(我们的未公开的数据)。纤维蛋白原是临时的一部分矩阵在组织修复过程中形成的,它提供了一个支架对细胞迁移(gydF4y2Ba44gydF4y2Ba),trichohyalin keratin-associated蛋白表达在毛囊,包皮,和舌头在病态的上皮细胞,包括银屑病表皮(gydF4y2Ba45gydF4y2Ba,gydF4y2Ba46gydF4y2Ba)。Trichohyalin有S100-like钙结合域和与profilaggrin基因家族成员被认为是融合基因的细胞信封前体蛋白基因和S100蛋白基因家族(gydF4y2Ba47gydF4y2Ba)。这些基因位于表皮分化复杂连同S100A蛋白质和小脯氨酸蛋白质(SPRRs)。因此,这种蛋白质的表达可能与乐队的变透明角质;上面提到hypogranular区和角质层IL-22-treated低流值和进一步的证据改变分化诱导il - 22生成模式。gydF4y2Ba

考虑到相似的基因档案由IL-20, il - 22生成时,和IL-24 il - 22生成受体和他们共同使用,我们决定专注于基因通常由他们相比,控制样品。的错误发现率< 0.005和0.05有266(补充表1)gydF4y2Ba^3gydF4y2Ba和1955年(未发表的数据)总探针集识别,分别。前20名大多数诱导或抑制基因图所示。gydF4y2Ba5gydF4y2BaB。gydF4y2Ba在诱导基因之前报道与牛皮癣有关S100A7, S100A12, SCCA2, SERPINB4, CCL20 CD36, Stat3 (gydF4y2Ba38gydF4y2Ba,gydF4y2Ba48gydF4y2Ba,gydF4y2Ba49gydF4y2Ba,gydF4y2Ba50gydF4y2Ba)。进一步评估潜在关联基因受IL-20亚细胞因子和基因调控在牛皮癣,我们将我们的研究与之前的微阵列研究银屑病皮肤(gydF4y2Ba38gydF4y2Ba)。因为这些研究在不同的芯片,我们只比较独特RefSeqs来自研究的共同点。我们发现1955基因列表高度相关的基因调控参与银屑病皮肤与正常皮肤(χgydF4y2Ba^2gydF4y2Ba= 231.55,gydF4y2BapgydF4y2Ba< 2.73 e-52;细节gydF4y2Ba材料和方法gydF4y2Ba)。457年常见RefSeqs显著上调银屑病皮肤(gydF4y2Ba39gydF4y2Ba),355 RefSeqs也诱导和188是重要的(gydF4y2BapgydF4y2Ba< 0.05)在我们的研究中。165年共同RefSeqs被抑制在银屑病皮肤(gydF4y2Ba39gydF4y2Ba),138 RefSeqs也被压抑在我们的研究中,71人重要。这些基因补充表2所示。gydF4y2Ba

最重要的生物功能的IL-20亚细胞因子似乎是感应;抗菌防御机制。在招募白细胞趋化因子起着重要作用,感染的网站。我们确定了CXCL8 /引发,处于受控/ GRO-αDMC, CXCL7 / NAP-2 CCL20 / MIP-3α,CCL2 / MCP-1 IL-20趋化因子诱导的亚细胞因子(补充表我和无花果。gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)。S100家族成员也被证明参与应对感染(gydF4y2Ba51gydF4y2Ba,gydF4y2Ba52gydF4y2Ba,gydF4y2Ba53gydF4y2Ba)。除了S100A7, S100A8,此前据报道上调和S100A9 il - 22生成(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba14gydF4y2Ba),我们发现S100A12和S100A15 IL-20强烈诱导的亚细胞因子(补充表我和无花果。gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)。等抗菌基因β-defensins也差异。为了进一步验证这些基因的诱导,实时rt - pcr进行总RNA准备从流值处理IL-20亚细胞因子4、24、48和96 h。见图。gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba最强大的细胞因子,il - 22生成诱导趋化因子以及许多其他基因,包括IL-20,从流值。两个趋化因子的分泌,引发MIP-3α,48 h后细胞因子治疗进一步证实了ELISA(无花果。gydF4y2Ba6gydF4y2BaBgydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

其他家庭的基因受IL-20亚细胞因子包括丝氨酸蛋白酶的血管舒缓素子群和一大群的蛋白酶抑制剂(补充表1)。在激肽释放酶激肽释放酶6基因上调,10,12、13和14。几个serpin家庭也上调蛋白酶抑制剂在我们的实验中,包括进化枝serpin 1和6,支系B serpin 1, 4, 6, 9和13,进化枝G serpin 1。此外,大量角蛋白是由IL-20亚细胞因子,确认该亚科在KC分化过程中发挥作用。表达EGF家族的配体amphiregulin和HB-EGF增强,而betacellulin表达下调。值得注意的是,我们也发现proangiogenic因子VEGF和内皮细胞生长因子1被IL-20诱导亚细胞因子(补充表1)。gydF4y2Ba

在这项研究中,我们系统相比的生物学IL-20培养;亚细胞因子。我们的数据表明,IL-20亚细胞因子是免疫细胞;使者链接,这些细胞因子主要是由免疫细胞产生的,而其受体表达;但不是在T细胞,B细胞、单核细胞(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba54gydF4y2Ba,gydF4y2Ba55gydF4y2Ba)。虽然这些细胞因子信号通过不同的受体,他们有非常相似的生物活性。组织学和微阵列分析支持的假设这些细胞因子发挥重要作用在皮肤的先天免疫,皮肤修复和重构。此外,可能导致的正常分化和免疫内稳态失调在牛皮癣的皮肤明显。gydF4y2Ba

我们首先证明;表达受体的细胞因子在细胞表面的亚科。TNF-α等炎性细胞因子、IFN-γIL-1β被认为是重要的病理生理学的牛皮癣由于其生物效应;和免疫细胞。;,他们调控的表达MHC, costimulatory配体为T细胞趋化因子、粘附分子(gydF4y2Ba43gydF4y2Ba,gydF4y2Ba56gydF4y2Ba,gydF4y2Ba57gydF4y2Ba,gydF4y2Ba58gydF4y2Ba)。;相比之下,IL-20亚细胞因子具体目标,引起表皮增厚流值和诱导许多其他特性,是银屑病表皮特征,包括激活Stat3的表达CK16, S100A7和S100家族其他成员,老年病的蛋白酶参与皮肤流动和重构。之前猜测,生长因子EGF和纤维母细胞生长因子家族可能发挥重要作用在银屑病的发病机制,特别是导致表皮增生(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba59gydF4y2Ba,gydF4y2Ba60gydF4y2Ba,gydF4y2Ba61年gydF4y2Ba,gydF4y2Ba62年gydF4y2Ba)。EGF和TGF-αEGF家族的成员,KGF、纤维母细胞生长因子家族的一员,都是KC扩散的有力刺激器。我们发现,虽然这三个生长因子诱导流值显著KC增生,没有一个诱导hypogranulosis,持久Stat3激活,或S100A7表达式。此外,基因表达谱这三个生长因子诱导的流值不相关的基因的银屑病皮肤(我们的未公开的数据)。IL-20亚细胞因子,除了IL-26诱导扩散单层;这是独立于EGFR通路,因为阻断EGFR在单层培养系统没有废除KC扩散。然而,KC扩散可能会进一步提高体内通过上调EGF家族的配体amphiregulin和HB-EGF IL-20亚细胞因子。amphiregulin和HB-EGF与表皮生长因子受体结合,已经决心推动自分泌KC扩散的主要增长因素(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba),过表达;在银屑病病变(gydF4y2Ba61年gydF4y2Ba)。amphiregulin牛皮癣和银屑病关节炎的潜在作用也被支持的临床前动物实验(gydF4y2Ba59gydF4y2Ba,gydF4y2Ba63年gydF4y2Ba,gydF4y2Ba64年gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

尽管IL-20;亚细胞因子也有类似的生物功能,家庭成员之间有差异。首先,他们使用不同的受体信号,证明了我们的研究与对IL-20R1中和Abs, IL-20R2或IL-22R1。IL-20的活动相比,IL-24活动只能被anti-IL-20R2在非常高的浓度(我们的未公开的数据)。目前还不清楚IL-20和IL-24造成这种差异的性质。一个潜在的可能的解释是IL-20和IL-24 IL-20R2链有不同的亲和力,虽然这些报告了类似的(gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba24gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba)。比较的相对效力五IL-20亚科成员在刺激增殖和诱导基因;证明il - 22生成反应产生的最大震级IL-24紧随其后,然后IL-20,最后IL-19。细胞因子il - 22生成也是唯一导致hypogranulosis流值文化系统。较少的离散表皮细胞的发现与缺乏突出的透明角质颗粒层上层银屑病表皮是常见的皮肤和牛皮癣有别于其他皮肤疾病,如地衣单工chronicus hypergranulosis,扩大颗粒细胞层,是主要的功能(gydF4y2Ba39gydF4y2Ba)。鉴于il - 22生成的几乎相同的基因签名,IL-24组织学差异的确切分子机制负责这两种细胞因子引起的表皮分化模式仍然是未知的。另一个有趣的结果是,IL-26没有引起任何可观察到的生物活动流值系统,虽然它能够激活Stat3在Colo205细胞系之前报道(gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba)。原因缺乏活动在我们的系统目前还不清楚,但可能与IL-26的结构特性,它不与其他IL-20亚科成员,如能力结合细胞表面蛋白聚糖和IL-26形成二聚体的可能性解决方案(gydF4y2Ba65年gydF4y2Ba)。结肠癌细胞系和肠道组织表达IL-20R1链在相对较高的水平,和IL-26是唯一IL-20亚细胞因子与高亲和力结合这个亚基(gydF4y2Ba28gydF4y2Ba,gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba)。可能IL-26主要活跃在肠道上皮细胞由于IL-20R1受体水平较高和细胞表面蛋白聚糖的差异。gydF4y2Ba

最近的一份报告从Wolk et al。(gydF4y2Ba15gydF4y2Ba)表明,il - 22生成调节基因参与抗菌防御,细胞分化,KC流动通过基因芯片分析单层的RNA样本与il - 22生成;治疗。此外,王et al。(gydF4y2Ba55gydF4y2Ba)评估的影响IL-20 HaCaT细胞和比较IFN-γ诱导的基因表达谱。虽然我们确实发现的类似基因的诱导il - 22生成Wolk研究(gydF4y2Ba15gydF4y2Ba),我们已经确定了一些额外的上调基因如趋化因子、表皮生长因子家族成员,VEGF未确认、报告。然而,我们的初步结果使用HaCaT在单层培养细胞和主;确定这些单层系统的局限性,包括不一致的Stat3 IL-20R1激活和表达水平较低和IL-22R1。此外,单层培养系统不概括KC分层的过程,分化,角质化发生在正常表皮生长和体内平衡。因此,我们相信,流值系统更代表表皮KC比单层系统生物学。进一步支持我们的研究结果,其他几个研究已经报道,IL-20亚细胞因子诱导趋化因子生产不同细胞类型(gydF4y2Ba66年gydF4y2Ba,gydF4y2Ba67年gydF4y2Ba,gydF4y2Ba68年gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

IL-19 IL-20, il - 22生成时,在银屑病皮肤和IL-24都升高(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba32gydF4y2Ba,gydF4y2Ba55gydF4y2Ba)。我们最近发现,il - 22生成由IL-23在CD4增强gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba,CD8gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba和γδT细胞(gydF4y2Ba69年gydF4y2Ba)。IL-23最近进入突出细胞因子,可能有至关重要的作用在外围的开发和维护自身免疫性炎症组织由于其潜在的极化效应T细胞(gydF4y2Ba70年gydF4y2Ba)。这些数据表明,il - 22生成可能是主要的可溶性因素之一链路自适应免疫反应;和先天免疫病理生理学的牛皮癣。表达的研究银屑病与正常或冷漠的皮肤已经确定改变>表达,1300个基因在银屑病病变(gydF4y2Ba38gydF4y2Ba,gydF4y2Ba48gydF4y2Ba,gydF4y2Ba49gydF4y2Ba)。我们演示了这里的基因受IL-20亚细胞因子在银屑病皮肤高度相关的基因修改,进一步支持他们潜在的角色在银屑病的发病机制。S100家族的一些最高度上调蛋白基因微阵列,由定量rt - pcr。这个家族的蛋白质的基因存在于表皮分化复杂,钙结合蛋白是与炎症有关,其中一些已被证明有趋药性的和直接的抗菌活动(gydF4y2Ba51gydF4y2Ba,gydF4y2Ba52gydF4y2Ba,gydF4y2Ba53gydF4y2Ba)。IL-20引发的其他基因亚细胞因子和银屑病皮肤包括趋化因子,血管生成因子,组织激肽释放酶和β-defensins (gydF4y2Ba38gydF4y2Ba,gydF4y2Ba48gydF4y2Ba,gydF4y2Ba49gydF4y2Ba,gydF4y2Ba71年gydF4y2Ba)。趋化因子和血管生成因素可能进一步增强促炎反应通过招募额外的一个正反馈循环白细胞和促进皮肤的血管生成。一些血管舒缓素已被证明是重要的过程中剥离,脱落的角质层corneocytes (gydF4y2Ba72年gydF4y2Ba,gydF4y2Ba73年gydF4y2Ba)。β-Defensins产生的抗菌肽是几个家庭之一;有能力杀死细菌,真菌和病毒。银屑病斑块被高度抵抗细菌、病毒和真菌感染(gydF4y2Ba38gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

总之,我们的结果表明,IL-20亚细胞因子诱导表皮;增殖和表达炎症和免疫调节介质。此外,这些细胞因子引起持续的Stat3激活和改变很多基因的表达参与表皮终端分化。诱发的基因表达谱IL-20亚科是一致的发现在伤口愈合愈合的阶段,这一过程称为再生成熟。在这个过程中,增殖和改变分化的增加;作为组织修复过程的一部分的表达,证明了hyperproliferative角质CK6 CK16,趋化因子,和几个S100蛋白,包括S100A7 (gydF4y2Ba74年gydF4y2Ba)。这种模式类似于观察;在银屑病病变和表明这些细胞因子在皮肤的先天免疫和对损伤的反应十分重要。此外,我们的研究表明,IL-20亚科之间的联系可能形成一个重要的适应性和先天免疫的皮肤加剧了不恰当的适应性免疫反应和干扰在银屑病表皮内稳态,明显通过众多潜在的反馈循环。这些发现支持了假设降低正常表皮损伤反应的浓度,这是一个重要的元素的皮肤天生的自我平衡的免疫监视,可能会导致一个不恰当的适应性免疫反应,如果持续下去,可能会导致慢性炎性疾病如牛皮癣。gydF4y2Ba

我们承认在病理组织学实验室和免疫组织化学实验室部门的贡献和帮助优化组织染色。我们也承认崔里德,特伦斯王,安安Chuntharapai技术援助的一代anti-IL-20R1, anti-IL-20R2,和anti-IL-22R1 Abs。我们也感谢化学系的蛋白质基因泰克的贡献在Fc融合蛋白的生成和净化的ectodomains IL-20R1, IL-20R2,和IL-22R1用于Ab的一代。gydF4y2Ba

作者都是现任或前任基因泰克公司的员工。gydF4y2Ba