摘要gydF4y2Ba
神经紧张素(NT)在胃肠道中释放,参与结肠炎症的病理生理。我们已经证明NT在体内介导急性肠道炎症,并在体外刺激非转化人结肠腺细胞中核因子-κ b依赖性白细胞介素(IL)-8的表达。然而,NT诱导IL-8表达的确切机制尚未阐明。在本研究中,我们首次发现NT刺激IκBα磷酸化和降解以及p65磷酸化和转录活性。抑制蛋白激酶C (PKC)激活可显著降低nt诱导的IL-8表达。这种作用似乎是通过抑制IκBα磷酸化和降解以及p65磷酸化和转录活性介导的。我们还表明,细胞内钙动员对于nt诱导的IκBα和p65磷酸化是必要的,这表明常规的PKC参与其中。此外,转染显性阴性形式的PKCα显著降低nt诱导的IL-8启动子活性。这些结果表明,常规的PKCα在NT诱导的促炎信号通路中是一个重要的介导物。gydF4y2Ba
神经紧张素(NT)是一种由13个氨基酸组成的神经肽,在大脑和胃肠道(gydF4y2BaCarraway和Leeman, 1976gydF4y2Ba).在小肠内,NT由特定的内分泌细胞产生和分泌(gydF4y2BaPolak等人,1977年gydF4y2Ba)对几种刺激作出反应(gydF4y2Ba沃尔什1987gydF4y2Ba).NT参与胃和小肠的运动变化;刺激回肠、胰脏及胆道分泌(gydF4y2Ba托尔和罗塞尔,1986年gydF4y2Ba;gydF4y2Ba沃尔什1987gydF4y2Ba);并引发ClgydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba人结肠黏膜的分泌(gydF4y2BaRiegler等人,2000年gydF4y2Ba).NT还与肠粘膜的生长有关,并在体内外刺激肠上皮细胞的增殖(gydF4y2Ba伍德等人,1988年gydF4y2Ba;gydF4y2Ba毛雷特等人,1999年gydF4y2Ba).NT与两种不同的g蛋白偶联受体结合,即高亲和力NTR1和低亲和力NTR2 (gydF4y2Ba文森特等人,1999gydF4y2Ba).使用受体拮抗剂的动物研究表明,NTR1介导与应激和炎症相关的重要结肠反应。因此,给大鼠特定的非肽NTR1拮抗剂SR 48692抑制结肠黏蛋白和前列腺素E2的释放和肥大细胞脱颗粒反应的固定应激(gydF4y2BaCastagliuolo等人,1996年gydF4y2Ba),以及结肠分泌物和炎症介导的gydF4y2Ba艰难梭状芽胞杆菌gydF4y2Ba毒素A (gydF4y2BaCastagliuolo等人,1999bgydF4y2Ba).在炎症性肠病患者的结肠黏膜中,NTR1明显上调(gydF4y2BaCastagliuolo等人,1999agydF4y2Ba)和动物模型gydF4y2Ba梭状芽孢杆菌gydF4y2Baa毒素引起的结肠炎(gydF4y2BaCastagliuolo等人,1999bgydF4y2Ba).几种细胞类型可能参与NT的促炎反应,包括肥大细胞(gydF4y2Ba米勒等,1995年gydF4y2Ba;Castagliuolo等人,gydF4y2Ba1996gydF4y2Ba,gydF4y2Ba1999 bgydF4y2Ba)、白细胞(gydF4y2Ba高德曼等人,1983年gydF4y2Ba;gydF4y2BaCastagliuolo等人,1999bgydF4y2Ba)内皮细胞(gydF4y2Ba谢弗等人,1995年gydF4y2Ba)和巨噬细胞(gydF4y2Ba1988年勒gydF4y2Ba).gydF4y2Ba
我们最近证明了非转化的人结肠上皮NCM460细胞表达功能性NTR1。我们还发现,在过表达NTR1的NCM460细胞中,NT刺激强中性粒细胞趋化剂白介素-8 (IL-8)的释放(gydF4y2Ba赵等,2001gydF4y2Ba),提示NT可能通过直接作用于人结肠腺细胞介导结肠炎症。nt介导的IL-8基因表达的机制涉及核因子-κB (NF-κB)的激活(gydF4y2Ba赵等,2001gydF4y2Ba),是肠道炎症相关基因表达的重要调节因子(gydF4y2BaSchmid等人,1998年gydF4y2Ba).它由Rel家族蛋白的同源和异源二聚体组成,如p65和p50,由IκB抑制蛋白以非活性形式保留在细胞质中。i κ b在接触促炎刺激后发生磷酸化、泛素化和降解,导致NF-κB转位到核内并激活NF-κB相关基因。NF-κB p65的转录活性也受不同丝氨酸/苏氨酸激酶在其多个位点的磷酸化调控。肿瘤坏死因子-α通过IκB激酶(IKKs)诱导位于羧基端转激活域内的p65 Ser536位点快速磷酸化,导致p65转录活性增加(gydF4y2Ba樱井等,1999gydF4y2Ba;gydF4y2Ba马德里等人,2001年gydF4y2Ba).p65对肿瘤坏死因子-α的完全转激活也需要其Ser529位点被酪蛋白激酶II磷酸化(gydF4y2BaWang et al., 2000gydF4y2Ba).蛋白激酶A的催化亚基对脂多糖的磷酸化通过促进其与辅激活物creb结合蛋白/p300的相互作用来刺激p65的转录活性(Zhong等人,gydF4y2Ba1997gydF4y2Ba,gydF4y2Ba1998gydF4y2Ba).大量研究表明,蛋白激酶C (PKC)家族蛋白也通过激活IKKs或增加p65的转激活活性或两者兼有来调节NF-κB通路(gydF4y2Ba圣丹尼斯等人,1998年gydF4y2Ba;gydF4y2Ba维特加尔等人,2000年gydF4y2Ba;gydF4y2BaTrushin等人,2003年gydF4y2Ba).然而,参与这一过程的特定PKC同工酶取决于特定的刺激和/或细胞类型。gydF4y2Ba
迄今为止,已有11个密切相关的PKC同工酶被描述,并根据它们的结构域结构和对Ca的反应能力将它们分为3个亚家族gydF4y2Ba2 +gydF4y2Ba及DAG (gydF4y2Ba牛顿,1995年gydF4y2Ba;gydF4y2Ba牛顿和约翰逊,1998年gydF4y2Ba).“常规的”PKC异构体(α, β1, βII和柱绕)由结合C1结构域的DAG和Ca调控gydF4y2Ba2 +gydF4y2Ba,它绑定C2域。相反,“新的”PKC异构体(δ, ε, η和σ)不受Ca的调控gydF4y2Ba2 +gydF4y2Ba但一定要回复DAG。新的PKC异构体的分子结构与传统的异构体相似,只是Ca不同gydF4y2Ba2 +gydF4y2Ba绑定域名。第三组PKC异构体包括“非典型”PKC异构体(ξ、λ/ι和μ),它们不受DAG或Ca的调控gydF4y2Ba2 +gydF4y2Ba.细胞内钙浓度升高gydF4y2Ba2 +gydF4y2Ba刺激后的DAG可能激活常规或新型或两种PKC亚型,从而介导NF-κB激活(gydF4y2BaSzamel等人,1998年gydF4y2Ba).许多研究表明,蛋白激酶Cs也可能参与NT信号传导,因为NT刺激肌醇(1,4,5)三磷酸的形成,并增加细胞内钙(gydF4y2BaAmar等人,1986年gydF4y2Ba;gydF4y2BaBozou等人,1989年gydF4y2Ba).此外,nt诱导的MAP激酶激活可被PKC抑制剂GF 109203X (gydF4y2BaPoinot-Chazel等人,1996年gydF4y2Ba).然而,蛋白激酶C家族蛋白在NT促炎信号传导中的功能作用仍然未知。gydF4y2Ba
我们使用过表达NTR1的非转化人结肠NCM460细胞来研究PKCs是否参与了NT反应中IL-8基因的表达,并研究了这一过程中的信号通路。在本研究中,我们发现PKC激活通过抑制IκBα磷酸化和降解以及p65磷酸化和转录活性参与nt - ntr1诱导的IL-8表达。使用显性阴性方法,我们还提出了新的证据,表明传统的PKCα是NT介导人结肠子细胞中IL-8基因表达的信号通路的关键介质。gydF4y2Ba
材料与方法gydF4y2Ba
试剂。gydF4y2BaNT购自Phoenix Pharmaceuticals (Belmont, CA)。BAPTA/AM和GF 109203X从Calbiochem (San Diego, CA)获得。Phospho-IκBα (Ser33/Ser36)单克隆抗体、磷酸化nf -κB p65 (Ser536)抗体和p65抗体来自Cell Signaling Technology Inc. (Beverly, MA)。PKCα抗体和β-肌动蛋白抗体分别来自BD Biosciences (San Jose, CA)和Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)。IκBα多克隆抗体购自Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA)。显性阴性的PKCα结构是由我们医院的Alex Toker医生提供的。NCM460细胞和改良的三维培养基来自INCELL Corporation (San Antonio, TX)。用于测量蛋白质浓度的双辛酸试剂购自Pierce Chemical (Rockford, IL)。gydF4y2Ba
Western Blot分析。gydF4y2Ba用冰冷的磷酸盐缓冲盐水冲洗细胞两次,然后在含有蛋白酶抑制剂鸡尾酒的放射免疫沉淀试验缓冲液中孵育10分钟(Roche Diagnostics, Mannheim, Germany)。细胞裂解液在1000下离心gydF4y2BaggydF4y2Ba等量的细胞提取物通过sds -聚丙烯酰胺凝胶电泳(10%)分离,蛋白质转移到硝化纤维膜(Bio-Rad, Hercules, CA),在100 V下,4°C下1小时。将膜置于5%脱脂牛奶中,在50 mM Tris、pH 7.5、0.15 M NaCl和0.05% Tween 20中阻塞,然后用针对IκBα或p65的特异性磷酸抗体(0.2 μg/ml)或针对IκBα或β-actin的抗体孵育。辣根过氧化物酶标记抗体用SuperSignal Chemiluminescent Substrate (Pierce)检测。gydF4y2Ba
p65的转录活性。gydF4y2Ba一个单杂交系统被用来确定p65的转录活性,独立于它的DNA结合,最初由Schmitz和Baeuerle (gydF4y2Ba1991gydF4y2Ba).在本实验中,p65序列被融合到酵母GAL4转录因子(pGal4-p65)的DNA结合域,荧光素酶报告基因的表达由两个GAL4结合位点[p(GAL4)2-luc]控制,因此可以检测p65的主转激活域。两种质粒pGal4-p65和p(Gal4)2-luc已在前面描述过(gydF4y2BaVanden Berghe等人,1998gydF4y2Ba).gydF4y2Ba
引发测量。gydF4y2Ba如前所述,使用山羊抗人IL-8 (R&D Systems, Minneapolis, MN),采用双配体酶联免疫吸附法测定结肠上皮细胞条件培养基中的IL-8蛋白水平(gydF4y2Ba赵等,2001gydF4y2Ba).结果以均数±标准差(毫微克/毫升)表示。每个实验条件至少进行了三个独立实验,每个实验都有三个重复测量。gydF4y2Ba
IL-8启动子活性。gydF4y2Ba一个包含1521个碱基对(核苷酸-1481到+40)的人类IL-8基因启动子区域的报告结构被用于确定IL-8基因的转录活性,如前面所述(gydF4y2Ba赵等,2001gydF4y2Ba).简言之,细胞在12孔板(0.2 × 10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba细胞/孔)过夜,并使用Effectene转染试剂(QIAGEN, Valencia, CA)与IL-8启动子荧光素酶结构物或对照荧光素酶结构物pRL-TK (Promega, Madison, WI)或其他DNA结构物进行瞬时转染。转染细胞血清饥饿24小时,然后暴露于NT 4小时gydF4y2BaRenilla reniformisgydF4y2Ba使用双荧光素酶报告测定系统(Promega)测定细胞提取物中的荧光素酶活性。然后通过归一化IL-8启动子驱动的萤火虫荧光素酶活性来计算相对荧光素酶活性gydF4y2Bar . reniformisgydF4y2Ba荧光素酶活性。所有实验的数据均以相对荧光素酶活性(平均±东南)的形式呈现,这些数据来自至少两组独立的实验,每组有三次重复测量。gydF4y2Ba
统计分析。gydF4y2Ba结果以均数±S.E.M.表示。数据使用SIGMA-STAT专业统计软件程序(SPSS Inc., Chicago, IL)进行分析。受保护的方差分析gydF4y2BatgydF4y2Ba组间比较采用检验。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
NT刺激I的磷酸化和降解gydF4y2BaκgydF4y2BaBgydF4y2Baα。我们之前的研究表明,NT在NTR1转染的人结肠上皮细胞(NCM460-NTR1细胞)中刺激NF-κB的DNA结合活性。为了研究NT是否也能诱导亲本NCM460细胞和NCM460- ntr1细胞中IκBα的磷酸化和降解,我们对细胞进行了不同时间的NT处理。然后用磷酸化IκBα (Ser32/Ser36)单克隆抗体或IκBα抗体对等量的细胞蛋白进行Western印迹。如gydF4y2Ba图1gydF4y2Ba, NT诱导IκBα磷酸化(gydF4y2Ba图1一个gydF4y2Ba)和退化(gydF4y2Ba图1 bgydF4y2Ba)只存在于NCM460-NTR1细胞(gydF4y2Ba图1一个gydF4y2Ba(左),但未转染的NCM460细胞(gydF4y2Ba图1一个gydF4y2Ba,。(右),已知它们表达低水平的NTR1 (gydF4y2Ba赵等,2001gydF4y2Ba).这也与我们之前的观察相一致,NT仅在NCM460-NTR1细胞中刺激NF-κB DNA结合和IL-8基因表达(gydF4y2Ba赵等,2001gydF4y2Ba).gydF4y2Ba
nt诱导的IκBα磷酸化依赖于细胞内钙动员和蛋白激酶C激活。gydF4y2Ba因为NT之前被证明可以诱导细胞内钙释放并可能激活蛋白激酶C (gydF4y2BaAmar等人,1986年gydF4y2Ba;gydF4y2BaBozou等人,1989年gydF4y2Ba;gydF4y2BaPoinot-Chazel等人,1996年gydF4y2Ba),我们研究了这些信号分子是否参与了nt诱导的NF-κB通路的激活。为此,NCM460-NTR1细胞用BAPTA/AM(细胞内钙螯合剂)或GF 109203X (PKCα-, β特异性PKC抑制剂)预处理gydF4y2Ba我gydF4y2Ba-、βgydF4y2Ba2gydF4y2Ba-, γ-, δ-和ϵ-isozymes,然后用NT刺激15分钟。测量IκBα磷酸化gydF4y2Ba图1gydF4y2Ba.结果表明,BAPTA/AM或GF 109203X单独预处理均能以剂量依赖的方式阻断nt诱导的IκBα磷酸化(gydF4y2Ba图2一个gydF4y2Ba).为了进一步研究PKC在NT反应中的重要性,用PKC激活剂PMA预处理细胞一夜以耗尽PKC的表达,然后将细胞暴露在NT中15分钟。数据显示PKC的下调也阻断了NT诱导的IκBα磷酸化(gydF4y2Ba图2 bgydF4y2Ba).总之,这些结果表明,钙依赖的PKC可能介导这种NT反应。gydF4y2Ba
NT刺激p65磷酸化并增加其转录活性。gydF4y2Ba因为,如上所述,NF-κB p65的磷酸化是其转录活性的重要步骤,我们接下来研究了NT是否诱导NCM460-NTR1细胞的p65磷酸化。用NT处理不同时间的细胞,等量的细胞蛋白用phospho-NF-κB (Ser536)抗体进行Western印迹。结果表明NT强烈诱导p65 Ser536磷酸化(gydF4y2Ba图3gydF4y2Ba).接下来,我们确定NT是否也增加p65的转录活性。细胞瞬间转染pGal4-p65和p(Gal4)2-luc,如下文所述gydF4y2Ba材料与方法gydF4y2Ba然后用NT处理6小时。我们的结果显示NT显著提高了p65的转录活性(gydF4y2Ba图3 bgydF4y2Ba).gydF4y2Ba
nt诱导的p65磷酸化和转录活性需要细胞内钙依赖性蛋白激酶C活性。gydF4y2Ba为了确定NT诱导的p65 Ser536磷酸化是否涉及细胞内钙释放和蛋白激酶C,用BAPTA/AM或GF 109203X预处理细胞30分钟或用PMA过夜,然后用NT刺激10分钟gydF4y2Ba图3gydF4y2Ba.如gydF4y2Ba图3 cgydF4y2Ba, GF 109203X预处理、延长PMA处理或BAPTA/AM均显著抑制nt诱导的p65 Ser536磷酸化(gydF4y2Ba图3 cgydF4y2Ba).为了进一步研究nt诱导的p65转录活性是否与蛋白激酶C有关,用pGal4-p65和p(Gal4)2-luc转染细胞gydF4y2Ba图3gydF4y2Ba用GF 109203X预处理,然后暴露NT。gydF4y2Ba图3 dgydF4y2Ba表明抑制蛋白激酶C显著降低了nt诱导的p65转录活性。gydF4y2Ba
抑制蛋白激酶C可降低nt诱导的NF-κ b依赖性报告蛋白的表达。gydF4y2Ba我们之前已经证明NT增加了NF-κB驱动的荧光素酶报告基因的表达,这是NF-κB通路的一般读数(gydF4y2Ba赵等,2003gydF4y2Ba).因此,我们接下来研究了抑制PKCs是否对这种反应有任何影响。为此,用GF 109203X (1 μM)预处理细胞30分钟,然后用NT (10gydF4y2Ba7gydF4y2BaM)或PMA (1 μM)预处理6 h。gydF4y2Ba图4gydF4y2Ba)显著抑制nt诱导的NF-κ b驱动报告基因表达。为了证实PKCs在NT诱导的NF-κB转录活性中的作用,我们还用PMA (1 μM)预处理细胞16 h,然后再用NT暴露6 h。结果表明,PMA过夜预处理显著诱导NF-κB诱导的细胞内荧光素酶报告基因表达后,NT或PMA(6小时处理)诱导的NF-κB转录活性被PMA过夜预处理阻断(gydF4y2Ba图4 bgydF4y2Ba).gydF4y2Ba
抑制蛋白激酶C可降低nt诱导的IL-8基因表达。gydF4y2Ba由于NF-κB在nt诱导的IL-8基因表达中起关键作用(gydF4y2Ba赵等,2001gydF4y2Ba)和PKCs介导NF-κB活化以响应多种刺激,包括t细胞受体活化(gydF4y2BaTrushin等人,2003年gydF4y2Ba), 12 -gydF4y2BaOgydF4y2Ba-tetradecanoylphorbol-13-acetate (gydF4y2Ba维特加尔等人,2000年gydF4y2Ba)和脂多糖(gydF4y2Ba圣丹尼斯等人,1998年gydF4y2Ba),我们接下来检测了nt诱导的IL-8基因表达是否涉及蛋白激酶Cs。为此,用GF 109203X (1 μM)预处理细胞30分钟,用PMA (1 μM)预处理细胞16小时,然后用NT刺激细胞6小时。测量条件介质中IL-8的产生。数据显示,GF 109203X预处理显著抑制nt诱导的IL-8分泌(gydF4y2Ba图5gydF4y2Ba).接下来,我们确定了GF 109203X-或pma延长孵育是否抑制了nt诱导的IL-8启动子活性。细胞转染IL-8启动子结构物,然后用GF 109203X处理30分钟或PMA处理16小时,然后再用NT暴露6小时。这些数据表明GF 109203X (gydF4y2Ba图5 bgydF4y2Ba)或延长PMA潜伏期(gydF4y2Ba图5度gydF4y2Ba)显著抑制nt诱导的IL-8启动子活性。gydF4y2Ba
NT对NF-κ b依赖性IL-8基因表达的影响gydF4y2Ba我们上述的研究结果表明,nt诱导的NF-κ b通路的激活需要动员细胞内钙,而PKC抑制剂GF 109203X可以选择性地靶向PKCα-, βgydF4y2Ba我gydF4y2Ba-、βgydF4y2Ba2gydF4y2Ba-, γ-, δ-和ϵ-isozymes,以及通过PMA延长治疗下调PKC表达。根据这些证据,我们假设钙依赖的PKCα通路可能参与了反应,因为它在NCM460细胞中高度表达(数据未显示)。为了验证我们的假设,我们使用了显性阴性形式的PKCα (pPKCα-DN)。pPKCα-DN或对照质粒瞬时转染NCM460-NTR1细胞后,通过pkc α特异性抗体免疫印迹法首次证实了pPKCα-DN的过表达(gydF4y2Ba图6gydF4y2Ba).用pPKCα-DN或对照质粒以及IL-8启动子构建物瞬时转染细胞(gydF4y2Ba图6 bgydF4y2Ba)或NF-κB报告结构(gydF4y2Ba图6 cgydF4y2Ba),以及一个内控质粒。然后使细胞饥饿,用NT处理6小时。测量等量细胞提取物中的荧光素酶报告细胞活性。结果表明,转染pPKCα-DN可显著抑制nt诱导的IL-8启动子活性(gydF4y2Ba图6 bgydF4y2Ba)和NF-κ b依赖性报告基因表达(gydF4y2Ba图6 cgydF4y2Ba).gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
我们实验室之前报道了NTR1在包括结肠上皮细胞在内的多种细胞类型的结肠炎症反应中显著上调,并且NTR1激活的拮抗作用显著抑制了结肠炎症反应gydF4y2Ba梭状芽孢杆菌gydF4y2Ba毒素A (gydF4y2BaCastagliuolo等人,1999bgydF4y2Ba).我们最近的研究还表明,NCM460人结肠上皮细胞表达高亲和力NT受体,该受体介导细胞外信号调节激酶活化,以响应NT (gydF4y2Ba赵等,2001gydF4y2Ba).此外,过表达NTR1的NCM460细胞暴露于NT可引起NF-κB依赖性的IL-8表达和NT介导的NF-κB DNA结合活性,IL-8的表达通过细胞内钙释放介导(gydF4y2Ba赵等,2001gydF4y2Ba).在本研究中,我们进一步研究了NT激活NF-κ b介导的IL-8基因表达的机制。我们的结果表明,NT通过调控NF-κB p65的磷酸化和降解以及磷酸化依赖的转录活性来激活NF-κB通路。此外,NT诱导的IκBα和p65的磷酸化都是由钙依赖性蛋白激酶c介导的。此外,我们发现蛋白激酶Cα显性阴性突变体的表达显著抑制了NT诱导的IL-8启动子活性和NF-κB依赖性报告基因的表达,这表明PKCα介导NF-κB通路响应NT。gydF4y2Ba
我们观察到BAPTA/AM对细胞内钙的阻断降低了nt诱导的IκBα和p65的磷酸化,这与我们之前的发现相一致,BAPTA/AM抑制了nt诱导的NF-κB DNA结合活性和IL-8基因表达(gydF4y2Ba赵等,2001gydF4y2Ba).细胞内钙水平升高可能调控NF-κB通路的机制有两种。第一种可能是细胞内钙的增加通过钙调素依赖的途径诱导IκB磷酸化,因为钙调素拮抗剂W7可以抑制IκB降解(gydF4y2Ba马提拉等人,1990年gydF4y2Ba;gydF4y2Ba休斯等人,1998年gydF4y2Ba).此外,钙依赖性蛋白磷酸酶钙调神经磷酸酶可能与蛋白激酶C协同激活NF-κB,其机制尚不清楚(gydF4y2Ba马提拉等人,1990年gydF4y2Ba;gydF4y2BaSteffan等人,1995年gydF4y2Ba;gydF4y2BaTrushin等人,1999gydF4y2Ba).我们之前观察到W7或环孢素A部分抑制了NT诱导的IL-8分泌,这表明这些钙依赖通路可能部分参与了NT暴露后NF-κB的激活(gydF4y2Ba赵等,2001gydF4y2Ba).第二,钙可能通过钙依赖的PKC(尤其是PKCα)调控NF-κB通路,包括本研究。PKCα先前已被证明介导IKKs的激活和随后的IκBα磷酸化和降解,导致核易位和NF-κB的DNA结合,以响应几种细胞外刺激,包括t细胞受体的激活(gydF4y2BaTrushin等人,2003年gydF4y2Ba), 12 -gydF4y2BaOgydF4y2Ba-tetradecanoylphorbol-13-acetate (gydF4y2Ba维特加尔等人,2000年gydF4y2Ba)和脂多糖(gydF4y2Ba圣丹尼斯等人,1998年gydF4y2Ba).gydF4y2Ba
先前的研究表明,蛋白激酶c可能参与NT信号通路。例如Poinot-Chazel et al. (gydF4y2Ba1996gydF4y2Ba)表明蛋白激酶Cs可能参与nt诱导的MAP激酶激活,因为PKC抑制剂GF 109203X在稳定转染人NTR1的中国仓鼠卵巢细胞中抑制了MAP激酶胞外信号调节的激酶磷酸化。然而,这些结果与我们报道的结果不同(gydF4y2Ba赵等,2004gydF4y2Ba)和哈桑等人。(gydF4y2Ba2004gydF4y2Ba),其中表皮生长因子受体转激活分别是nt诱导的人结肠上皮细胞和雄激素不依赖的PC3细胞MAP激酶激活的主要原因。我们目前的研究首次提供了PKC,特别是PKCα在NTR1信号通路到NF-κB通路中的重要性的直接证据。因此,NT可能主要通过表皮生长因子受体的转活化刺激生长相关反应,而它通过钙和蛋白激酶c介导的NF-κ b通路诱导炎性细胞因子的表达。我们的研究结果也为NTR1信号通路阻断相关的治疗方法提供了见解,这种方法专门针对促炎信号,而不影响结肠炎期间结肠粘膜中nt相关的愈合过程。gydF4y2Ba
脚注gydF4y2Ba
本研究由美国国立卫生研究院拨款DK060729(给C.P.)支持。D.Z.和H.Z.是美国国立卫生研究院职业发展奖(分别为K01-DK064920和K01-CA098581)的获得者。gydF4y2Ba
文章、发表日期和引文信息可在gydF4y2Bahttp://molpharm.aspetjournals.orggydF4y2Ba.gydF4y2Ba
doi: 10.1124 / mol.104.010801。gydF4y2Ba
缩写:gydF4y2BaNT,神经降压素;NF-κB,核因子-κB;PKC,蛋白激酶C;BAPTA/AM, 1,2-二(邻氨基酚)乙烷-gydF4y2BaN, N, NgydF4y2Ba′gydF4y2BaNgydF4y2Ba' -四乙酸,乙酰氧基甲酯;PMA,佛波酯12-肉豆蔻酸13-乙酸;IL,白介素;IKK, IκB激酶;DAG甘油二酯;MAP,丝裂原活化蛋白;DN,显性阴性;支W7,gydF4y2BaNgydF4y2Ba——(6-aminohexyl) 5-chloro-1-naphthalenesulfonamide盐酸盐;GF 109203X, 3-[1-[3-(二甲氨基丙基)]-1gydF4y2BaHgydF4y2Ba-indol-3-yl] 4 - (1gydF4y2BaHgydF4y2Ba-indol-3-yl) 1gydF4y2BaHgydF4y2Ba-pyrrole-2, 5-dione monohydrochloride;SR 48692, 2-(1-(7-氯-4-喹啉基)-5-(2,6-二甲氧基苯基)吡唑-3-基羰基氨基)三环(3.3.1.1.(3.7))癸-2-羧酸。gydF4y2Ba
- 收到了gydF4y2Ba2004年12月23日gydF4y2Ba
- 接受gydF4y2Ba2005年3月3日gydF4y2Ba
- 美国药理学和实验治疗学会gydF4y2Ba
参考文献gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
- ↵gydF4y2Ba
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