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研究文章
克隆的人肠道细胞系HT-29 cl 19A中氯离子分泌与细胞内环磷酸腺苷的关系。
摘要
在ht - 29cl19a细胞单层中,研究了霍乱毒素诱导的细胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量与电致氯分泌的关系。细胞在Ussing腔中通过粘膜添加霍乱毒素(5微克/毫升)处理10、45或90分钟。10分钟后,平均(SEM)细胞内cAMP含量(3.2 (0.2)pmol/mg protein)和短路电流(Isc) (1.9 (0.3) microA.cm-2)与相应的基础值无显著差异。45分钟时,Isc显著增加(22.2 (5.7)microA.cm-2),同时cAMP显著升高(10(1.7)pmol/mgh蛋白)。在90分钟,当刺激的Isc趋于稳定(35.2 (5.2)microA.cm-2)时,cAMP值(99.2 (23.8)pmol/mg蛋白)进一步增加。霍乱毒素对细胞蛋白激酶C (PKC)活性无影响。用不同浓度的DbcAMP (10(5), 5 x 10(-5), 10(-3) M)处理细胞单层,显示DbcAMP(浆膜)的最低浓度为10(-4)M,显著增加Isc (delta 4.5 microA.cm-2),并伴有delta 6.7 pmol/mg蛋白cAMP的增加:与DbcAMP相比,霍乱毒素刺激Isc(在45分钟)的程度要高得多,cAMP也相应升高。结果表明,在cl 19A细胞中,细胞内cAMP的增加有一个阈值,可诱导氯的分泌。霍乱毒素刺激的氯离子分泌主要是由细胞内cAMP的增加引起的,而cAMP的增加与PKC活性无关。