条文本
PDF
文摘
的目标是——研究bcl - 2免疫组织化学表达之间的联系和p53在结肠直肠癌和肿瘤复发后手术。
方法60 B公爵的6例结直肠癌进行了研究。所有肿瘤都是中度分化,组织学上的切除利润率。免疫组织化学进行福尔马林固定石蜡嵌入组织使用单克隆抗体p53、bcl - 2。的bcl - 2分别染色评估相对染色强度和阳性肿瘤细胞的百分比和最后得分,它结合了两个因素。p53染色评估数量的积极的肿瘤细胞。疣状的模式的情况下,有肿瘤复发比较与那些没有肿瘤复发的病例(控制)。
结果bcl - 2——统计学意义之间存在负相关的得分和肿瘤复发(6的bcl - 2得分中位数(四分位范围(差)2 - 9)患者的复发性疾病;8的bcl - 2得分中值(差6 - 10)在无复发;p = 0.03)。当单独检查,表达强度和阳性肿瘤细胞的百分比明显与肿瘤复发有关(p = 0.04在每种情况下)。没有联系p53染色和肿瘤复发。
结论结果表明,当控制分化、bcl - 2表达是一种预后标志物,可能是有用的作为临床辅助诊断决策。
- 结肠直肠癌
- 肿瘤复发
- bcl - 2
- p53
- 爵士乐分组
来自Altmetric.com的统计
结直肠癌(CRC)是第三个癌症相关死亡最常见的原因在西方世界。1结直肠癌患者的预后取决于公爵的分期和爵士乐分组在手术的时候。2肿瘤分级提供进一步的信息虽然,总的来说,肿瘤年级相似之处肿瘤阶段和低分化肿瘤往往是相对先进。很大一部分患者存在公爵的阶段B肿瘤。这些患者预后有一个中间的五年存活率约70%。给定数量的增加可用的辅助治疗,就有可能变成能够subclassify这组肿瘤为那些有很好的前景,因此可能不需要辅助治疗,而不是那些有严重的前景,在这种情况下,病人可能受益于辅助治疗。
bcl - 2是一个本土化的细胞质蛋白质线粒体,内质网,核膜。蛋白质可以在许多不同的组织和确定被认为是细胞凋亡的抑制作用。34例如,在滤泡淋巴瘤,易位t(14、18)导致本构超表达bcl - 2和不朽的淋巴细胞。56同样,bcl - 2超表达已经识别出大量上皮肿瘤中,它的作用的抑制剂细胞凋亡被认为是促进肿瘤生长。7 - 12在大肠肿瘤起源于,bcl - 2超表达一直在报道一个高比例的腺瘤,包括unicryptal腺瘤。81314直肠癌也被报道显示bcl - 2超表达虽然与腺瘤相比,有侵袭性肿瘤低强度的表达式。81314也可能有损失的表达与肿瘤分化的损失15这样看来,bcl - 2可能是更重要的角色在结直肠肿瘤的早期发展后肿瘤进展。
p53是核oncosuppressor蛋白质参与基因组完整性的维护:DNA损伤导致p53表达的增加导致积极循环细胞G1逮捕。16然后,它可以允许DNA修复发生或诱发因素,如果损失太大,它可以导致细胞凋亡诱导因素。p53突变为晚期事件发生在过渡的腺瘤浸润性癌17和很容易通过免疫组织化学方法检测到p53突变蛋白的稳定。18
几项研究p53超表达的相关性检验,在结直肠癌预后好坏参半的结果在文献中报道。19号在一项研究中bcl - 2表达,高bcl - 2表达了与一个好结果。15我们旨在研究bcl - 2免疫组织化学和p53表达的比较价值的预测肿瘤复发。为了控制分化和公爵Dukes分期,我们只检查了中度分化的肿瘤。
材料和方法
病例选择
六十六双拳阶段B结肠直肠癌是圣马克的医院档案的检索。所有患者随访了至少六年。组由15例曾开发六年内肿瘤复发和51控制recurrence-free在六年。所有操作被执行在圣马克的医院,被认为是治疗操作。复发性肿瘤患者的年龄分布是相似的控制患者尽管比例是男性(表1)。肿瘤复发患者,11已经全身转移和4只局部复发(盆腔复发为结肠直肠肿瘤或腹膜复发肿瘤)。
组织学检查显示,切除的肿瘤很清楚利润率和径向边缘。这些肿瘤在先前的审查,我们发现它们都中度分化,我们评估了爵士乐分组和E钙粘素的表达。24
免疫组织化学
免疫组织化学进行部分从福尔马林固定石蜡嵌入式肿瘤组织使用标记链霉亲和素的方法。新鲜4μm厚部分在二甲苯脱蜡、水化分级醇。这些是孵化20分钟0.5%过氧化氢在甲醇为了阻断内源性过氧化物酶活性。两种抗原抗体需要一步检索是通过加热30分钟的部分在一个铝压力锅在柠檬酸钠缓冲15 psi(0.01米,pH值6.0)。部分被孵化一夜之间在室温下用鼠标对bcl - 2 (Dako)和p53单克隆抗体(7、Novocastra)稀释分别为1/40和1/100。第二层的生物素化的多克隆兔antimouse抗体(Dako)申请一小时(稀释1/200)其次是最后一层辣根过氧化物酶标记链霉亲和素(Dako)一小时(1/200)的稀释。绑定与diaminobenzidine作为发色体抗体检测。负控制(使用磷酸缓冲盐(PBS)执行缓冲区,而不是主要抗体)和积极的控制(包括组织已知bcl - 2和p53阳性)包含在每一个实验。
综述了免疫组织化学结果由两个独立病理学家(MI和X-PH)人蒙蔽了肿瘤的结果。鉴于bcl - 2染色的异质性,先前描述的双评分系统给予同等重量染色强度和肿瘤细胞染色的程度。25强度得分与3 0 - 3的规模是相当于强度的增殖细胞在隐窝的基础。每个肿瘤染色程度是半定量的得分从0到3使用以下范围:0 =没有染色的肿瘤;1 =不到25%的细胞;2 = 25 - 50%;3 = 50%以上。然后许多评论家都加在一起给一个分数在0和12之间。对于p53免疫染色,肿瘤是在一种半定量的方式使用以下范围:0 =小于10%的阳性细胞;+ = 10 - 25%;+ + = 25 - 50%;+ + + = 50%以上。 The results of the two reviewers were compared and any tumours in which there was not agreement were reviewed together by both pathologists and a consensus was reached.
数据分析和统计
每个肿瘤的免疫染色的结果分析了千瓦和IPMT。只有他们访问数据对每个病人的结果和在任何阶段,要么是病理学家的访问这些数据。Wilcoxon等级测试用于检查和bcl - 2得分之间的关系和肿瘤复发和bcl - 2得分和p53表达之间的关系。使用一个χ分类变量进行比较2在适当的地方和测试统计线性趋势。bcl - 2和复发的关系调整年龄、性别、爵士乐集团和p53表达是研究使用多个逻辑回归。改进模型是基于似然比率。在这个模型中,bcl - 2得分,爵士乐团体,和年龄作为untransformed数值拟合,而p53是安装一个二进制变量(正面或负面的表达)。分析进行了整个集团和子集由排除病人只有局部复发。
结果
免疫组织化学
正常上皮细胞显示强劲的bcl - 2在地下基地染色染色强度递减梯度沿着地下室轴(无花果1)。淋巴细胞在基质和派尔集合淋巴结补丁沾相等强度的上皮细胞在隐窝的基地和担任内部积极控制。染色的肿瘤通常是异构的,从完成负染法(强度0,0)程度(无花果2)所有程度的中间染色(例如,大量淡染色:1,强度程度3(图2B);和焦强烈染色:强度、范围1(图2C))广泛激烈的染色(强度3,程度3(无花果2D))。
bcl - 2表达non-neoplastic粘膜。有强烈的bcl - 2表达在隐窝的底部沿着地下室轴强度递减梯度。固有层淋巴细胞的也是积极和作为内部积极控制。
异构bcl - 2的表达在结直肠肿瘤。(一)肿瘤阴性bcl - 2表达而peritumoural淋巴细胞和相邻粘膜可以看作是积极的。(B)肿瘤显示弱,但明确的表达在大多数肿瘤细胞。(C)肿瘤主要是负面除了焦强烈的表达。(D)可以看到强烈的表达在大多数肿瘤细胞。
p53免疫组织化学显示,肿瘤细胞核染色强(无花果3)。案件被认为是p53阳性超表达如果有超过10%的肿瘤细胞的染色。有偶尔的情况下,细胞质染色但没有核染色。这些被认为是消极的,因为细胞质本地化p53在结直肠肿瘤的意义是不确定的。
p53表达在结直肠肿瘤,显示强大的核表达在大多数肿瘤细胞。
数据分析
图4是一个散点图的bcl - 2得分的肿瘤。bcl - 2染色的得分显著降低肿瘤复发患者比控制。复发性肿瘤患者的平均得分是6(四分位距(差)2 - 9)相比,平均8(差6 - 10)在控制(p = 0.03, Wilcoxon等级和测试)。类似的复发和临时组之间的差异被认为bcl - 2染色强度和阳性细胞的比例,当这些分别分析了在每种情况下(p = 0.04)。肿瘤总体的平均得分是8,使用这个作为切断点,我们被肿瘤为一群表现出“高”bcl - 2得分(8或更多),“低”bcl - 2(7或更少)。三十五51例(69%)肿瘤临时bcl - 2显示出高的分数与五15(33%)复发的肿瘤。这是一个很大的高之间的联系从肿瘤复发(χbcl - 2表达和自由21= 6.04,p = 0.014)。
散点图的bcl - 2得分(A)强度,(B)阳性肿瘤细胞百分比和(C)综合得分的癌症患者在最终的肿瘤复发和那些仍然没有复发。差,四分位范围。
此外,如果bcl - 2染色是分为四组(表2)有证据的线性趋势减少肿瘤复发的风险更高的bcl - 2得分(p = 0.01)。结果是相似的,如果只有局部复发病例被排除在外(n = 62, p = 0.01)。
学习小组作为一个整体,爵士乐分数高复发性肿瘤患者比控制(表1;χ23= 5.9,p = 0.05)。二十9 51例(57%)的临时肿瘤和八15(53%)复发肿瘤患者p53阳性过度(表3)显示,没有p53表达与肿瘤复发(χ之间的联系23= 5.3,p = 0.15)。没有p53积极性和bcl - 2得分之间的关联(p = 0.47, Wilcoxon等级和测试)之间或爵士乐分组和bcl - 2得分(数据没有显示)。
独立评估协会bcl - 2与肿瘤复发的爵士乐分数和p53,逻辑回归模型(表使用4)。这表明bcl - 2得分显著相关(p = 0.02)和复发在控制了年龄、性别、爵士乐组和p53的分数。不包括纯粹的局部复发患者后,相应的p值是0.05。
讨论
在这项研究中,我们调查的有效性bcl - 2和p53表达的变化在结直肠癌预后因素。之前我们已经显示,在这组肿瘤,复发与爵士乐分组而不是E钙粘着蛋白表达的变化。资料提供依据逆bcl - 2得分和肿瘤复发的风险之间的联系。相比之下,在p53超表达无显著差异之间的反复和临时肿瘤。
其他研究已经表明,bcl - 2表达与预后不良相关损失在结直肠和non-colorectal肿瘤。91015这些研究并没有控制肿瘤分化和肿瘤阶段,但表明,总的来说,有损失的bcl - 2表达与肿瘤分化的损失。我们的研究是控制这些因素和显示,在侵入性结直肠肿瘤,bcl - 2表达是一个独立的预后指标。如果这些结果证实了其他研究,免疫组织化学bcl - 2的表达可能为临床管理做出有用的贡献。癌症呈现在公爵的B阶段形成一个异质群体和它可能会分开这些病例复发的风险更高,因此可能需要辅助治疗,从这些案件中,仅可能通过手术治愈。没有p53表达与预后之间的相关性与一些研究协议,而不是其他人的。也许我们的研究太小和一个更大的研究可能会显示一些p53免疫染色的预后价值。
这项研究还显示,爵士乐分组和bcl - 2表达与肿瘤复发有关虽然不是彼此。bcl - 2的进球数仍显著甚至为爵士乐分组调整后。这表明bcl - 2得分可能有额外的预后意义。显然有几种不同性质的肿瘤会影响其行为和患者的预后,并很可能爵士乐分组和bcl - 2表达的免疫染色测量不同的因素。
我们的数据对肿瘤生物学提出有趣的问题。bcl - 2蛋白的过度表达在腺瘤增长表明,选择的bcl - 2介导的抑制细胞凋亡的早期事件在结直肠肿瘤的发展。似乎对立的,在我们的研究和他人的,失去这意味着抑制细胞凋亡的肿瘤实际上比肿瘤预后差,保留bcl - 2表达。腺瘤生长的肿瘤进展和肿瘤入侵是两个不同的阶段,可能在肿瘤的阶段入侵,凋亡压力是不同的,这需要选择不同的方式抑制细胞凋亡(比如p53突变)。在这种情况下,bcl - 2功能将成为冗余和肿瘤可能会丢失,没有成本。或者,它可能是bcl - 2函数可能会以牺牲另一个优势(如oncosuppressor基因18号染色体上的损失)。不管怎样,这些数据相吻合,在一定程度上,数据显示表达的相关性损失DCC蛋白质和不良预后26bcl - 2和DCC基因发生在染色体18温度系数。
总之,我们已经表明,高bcl - 2表达自由与结直肠癌复发中度分化公爵的B。这就提出了一个可能性的bcl - 2表达的使用作为一个辅助测试在这组肿瘤的临床管理。虽然bcl - 2这一研究获得的成绩是两个单独的病理学家的综合得分,这些结果需要的其他类似控制这方面的研究以确定bcl - 2免疫染色的真正价值在结肠直肠癌。