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摘要
背景在肠粘膜中，上皮细胞、成纤维细胞和免疫细胞产生的许多细胞因子通过上皮-间充质细胞和上皮-免疫细胞的相互作用影响上皮的分化和增殖。迄今为止，细胞因子在大鼠小肠出生后发育中的重要性尚未确定。
目的目的探讨大鼠出生后小肠上皮粘膜细胞因子表达的发育变化及糖皮质激素(GC)对其的调节作用。
方法通过蔗糖酶-异麦芽糖酶(SI) mRNA的表达来评估粘膜成熟度，并通过原位杂交分析。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测断奶大鼠(14-21日龄)、成年大鼠及11日龄大鼠注射氢化可的松(HC)后1 d粘膜提取物中转化生长因子β1 (TGF-β1)、β2 (TGF-β2)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素1β (IL-1β)、TGF-α的含量。同样，我们研究了在没有或存在地塞米松(DX)的情况下，从出生后空肠和回肠中克隆的上皮下肌成纤维细胞中细胞因子的表达和GC的调节作用。
结果TGF-β1、TGF-β2和IL-1β在生命第3周降低，TNF-α升高，TGF-α保持不变。与此同时，从18天开始，SI转录本增加，并在肠细胞的顶端逐渐积累，最初位于绒毛底部。有趣的是，HC对SI mRNA的早熟诱导与TGF-β亚型和IL-1β表达的降低相一致。所有细胞因子均在肌成纤维细胞系中表达。此外，结果显示，TNF-α在基础培养条件下和DX刺激后在空肠和回肠肌成纤维细胞中的表达存在差异。DX降低IL-1β，但不降低TGF-β亚型，与体内相似。
结论本研究表明，黏膜细胞因子在发育过程中受到调节，而GC可能在断奶时与肠道黏膜成熟并行参与这种调节。
- 小肠
- 断奶
- 成熟
- 成纤维细胞
- 细胞因子
本文使用的缩略语
- GC
- 糖皮质激素
- 如果
- sucrase-isomaltase
- TGF
- 转化生长因子
- 肿瘤坏死因子-α
- 肿瘤坏死因子α
- il - 1β
- 白介素- 1β
- HC
- 氢化可的松
- rt - pcr
- 逆转录聚合酶链反应
- 表皮生长因子
- 表皮生长因子
- 德勤
- 二硫苏糖醇
- SSC
- 标准柠檬酸盐
来自Altmetric.com的统计数据
在肠粘膜中，多种细胞因子由局部上皮、固有层中的成纤维细胞和免疫细胞产生;它们的控制表达对于组织在发育期间以及在成年器官中的稳态是必不可少的。1 - 3上皮下肌成纤维细胞已被证明在胚胎和成人生活中通过上皮-间充质细胞相互作用在上皮分化中发挥重要作用。4 - 6在共培养中，它们介导糖皮质激素(GC)和视黄酸处理下的上皮分化7，8;它们表达的形态发生、生长和分化因子，如表啡肽、肝细胞生长和/或分散因子(HGF/SF)和转化生长因子β1 (TGF-β1)，可能是与上皮细胞串扰的介质。9 - 11零星的数据支持细胞因子对肠上皮细胞行为的调节作用。在共培养中，T84细胞分化并获得肠细胞样表型，成纤维细胞衍生的TGF-β1的作用得到了强调12;TGF-β1和转化生长因子β2 (TGF-β2)均能抑制上皮细胞的生长。13，14断奶时小肠中表达转化生长因子α (TGF-α)15 - 17日并可能在大鼠肠道成熟中发挥作用。18，19此外，这种细胞因子由IEC6细胞产生并刺激其增殖;TGF-α可能是促进肠上皮生长的主要刺激因子，被TGF-β1的抑制作用所抵消。20.同样，断奶时黏膜免疫系统似乎与上皮成熟有关，此时黏膜出现了生理炎症的高峰。T细胞活化促进上皮细胞生长21相反，环孢素增加T淋巴细胞TGF-β1的合成和分泌22)延缓肠道成熟。23最后，肿瘤坏死因子α (TNF-α)和白细胞介素1β (IL-1β)，主要被称为免疫调节细胞因子，介导肠道正常或病理炎症反应，发挥多种生物活性，包括生长、分化和细胞功能。24 - 26日
基于以上信息，我们的研究目的是探讨粘膜炎症因子和/或生长因子(TGF-β1, TGF-β2, TNF-α， IL-1β， TGF-α)在断奶上皮成熟中的作用。为此，我们分析了(i)细胞因子在小肠中沿近端-远端轴的发育表达模式，以及(ii)细胞因子表达与断奶前后蔗糖-异麦芽糖酶(SI)表达的发育发病之间的潜在相关性，或通过注射GC诱导其早熟。体外研究了GC对上皮下肌成纤维细胞株细胞因子表达的调节作用。
材料与方法
动物
新生Wistar大鼠来自我们自己的繁殖群体。将怀孕大鼠单独安置在光照循环、温度控制、通风良好的房间中，随意给予水和标准食物。幼崽被留在它们的母亲身边，直到完全断奶，然后自由进食。
对出生后14、18、21和60天的幼犬进行发育研究。切除小肠，分为十二指肠(从幽门到Treitz韧带)、空肠近端(剩余小肠近端)和回肠远端(远端)。撕开粘膜，立即用液氮冷冻，直至提取总RNA。
丙型肝炎治疗
一窝11天大的幼崽被分成两组。一组皮下注射氢化可的松(HC;50 μg/g体重;Sigma, France)和对照组给予相同体积的培养液(NaCl 9%， 25 μl/g)。12天处死幼崽;切除近端空肠并冷冻以备后续分析。
细胞培养
4个克隆细胞系来源于8日龄大鼠肠固有层(近端空肠(MIC 101-1和101-2)和远端回肠(MIC 216和219)10))被使用。细胞在Dulbecco改良Eagle培养基中培养，培养基中添加10%胎牛血清、0.25 U/ml胰岛素、10 μg/ml转铁蛋白、20 ng/ml表皮生长因子(EGF)和40 μg/ml庆大霉素。在实验条件下，8×10−7在基础培养基中加入M地塞米松(DX) (Sigma) 2天。细胞在- 80°C冷冻至RNA提取。
rt - pcr分析
组织和培养细胞均质，按照制造商的说明使用TRIzol试剂(Gibco/PRL)分离RNA。沉淀的核酸在75%乙醇中洗涤，干燥，并在水中重悬。单链cdna在42℃下用6 μg RNA、10 U禽成髓细胞病逆转录酶(Promega, France)、oligo(dT)合成60分钟。17引物(50 pM, Eurogentec, Belgium)，脱氧核苷酸三磷酸(dATP, dGTP, dCTP, dTTP)各0.2 mM;Promega, France)，在50 μl的反应缓冲液(50 mM Tris HCl, pH 8.3, 50 mM KCl, 10 mM MgCl)中20.5 mM亚精胺，10 mM二硫苏糖醇(DTT))。然后用特定的寡核苷酸引物用聚合酶链反应(PCR)扩增cDNA(见表2)1)，旨在检测细胞因子(TGF-β1和β2, TGF-α， TNF-α， IL-1β)，肠分化(SI)标志物和控制(β-肌动蛋白和核糖体磷酸化蛋白)cdna。PCR反应在100 μl 75 mM Tris HCl, pH 9, 20 mM (NH)4）2所以40.01%吐温20,1 mM MgCl2dNTP各0.2 mM, Dynazyme DNA聚合酶(Finnzymes Oy, riihitonttie, Finland) 0.5 U，引物各50 pM, cDNA混合物2 μl。将cdna扩增一定周期(表1)1)步骤如下:在94℃下变性45秒(初始周期94℃1分钟)，在50或60℃下退火45秒，在72℃下延伸45秒，最后在72℃下延长5分钟。对于每个寡核苷酸对和每个RNA物种，进行了初步分析，以确定与DNA产物数量的指数增长相一致的适当周期范围。在3%琼脂糖凝胶上电泳后，使用Molecular Analyst/PC图像分析软件(Bio-Rad Laboratories, USA)评估溴化乙啶的发光强度。结果以相对密度单位表示，与β-肌动蛋白或磷脂糖体蛋白相关，统计差异由学生决定t测试。将逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)片段插入pGEM-T载体(Promega)中，使用T7测序试剂盒(Pharmacia, Orsay, France)测定核苷酸序列，以确认扩增的cDNA片段的身份。对照PCR采用未经RT处理的RNA样本;在这些条件下没有检测到与基因组DNA对应的扩增片段。
原位杂交分析
利用先前描述的原位杂交技术分析空肠近端SI mRNA表达的开始。27，28在出生后第11、16、18、21和60天取出幼崽的近端空肠，用含有核糖核酸酶抑制剂(0.8 u/ml;用4%多聚甲醛在0.1 M磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4)中固定2小时。然后将组织包埋在OCT中，在异戊烷中冷冻，在液氮中冷却，并在- 80°C中保存。低温切片(12 μm)解冻，装在3-氨基丙基乙氧基硅烷包被的载玻片上，保存在- 80°C。
RNA探针由大鼠蔗糖酶cDNA (GC 4.5;3.0 kb，来自S Henning博士的礼物)克隆到pBluescript SK +/−质粒。29转录载体用合适的限制性内切酶(Sma I或Sal I)线性化。分别用T3和T7聚合酶合成正义和反义RNA探针35S标记的UTP (Amersham, France)在以下条件下:10mm NaCl;40 mM Tris HCl, pH 7.5;6mm MgCl2;亚精胺2 mM;5mm DTT;0.05 mg/ml牛血清白蛋白;0.5 mM ATP, CTP, GTP;0.01 mM UTP;100 μCi [35S]UTP (1300 Ci/mmol);1 U/μl RNAsin;1 U/μl T7或T3 RNA聚合酶，终体积为20 μl。cRNA探针在60°C下进行部分碱性水解，最终长度约为150个核苷酸。探针的比活性为5-10×108cpm /μg。
杂交前处理包括在0.25%乙酸酐中乙酰化10分钟，以减少非特异性结合35S标记探针。在某些情况下，为了进行特异性测试，在乙酰化之前进行RNAse (250 μg/ml)预处理，然后在2×SSC(标准柠檬酸盐)、10 mM Tris、pH 7.5和1 mM EDTA中进行乙酰化，在37°C下进行60分钟，然后在2×SSC中进行三次洗涤，在室温下进行10分钟。在55℃下，用50%去离子化甲酰胺、10 mM DTT、1×Denhardt’s、1 mM EDTA、10 mM Tris HCl、pH 7.5、0.6 M NaCl、500 μg/ml酵母tRNA、250 μg/ml变性鲱鱼精子DNA、10%葡聚糖硫酸盐和0.3 μg/ml进行杂交16小时35S标记RNA探针(15×105Cpm /30 μl /玻片)。洗包括以下步骤:在2×SSC 10分钟两次在室温下,在《(0.5 M氯化钠,10毫米三羟甲基氨基甲烷盐酸,液pH值7.5,5毫米EDTA, pH值8)五分钟37°C,曾经在《和核糖核酸酶(10μg / ml) 15分钟37°C,在室温下在《五分钟三次,两次1×SSC在室温下了五分钟,一次0.1×SSC五分钟60°C,一旦在0.1×SSC 30分钟60°C,和两次2×SSC在室温下五分钟。然后将切片通过含有0.3 M醋酸铵的分级乙醇并风干。然后将载玻片浸在LM1乳剂(Amersham, France)中，在4°C的密闭箱中曝光两周，使用柯达D19显影剂显影，并用苏木精和伊红反染。在明暗场显微镜下对数据进行分析。
结果
tgf -β1、tgf -β2、tgf -α、tnf -α、il-1β的发育表达
为了评估细胞因子在出生后小肠功能发育中的可能作用，我们使用半定量RT-PCR技术分析了它们在断奶期间与成熟器官(60天)的表达。结果(图)1结果显示，小肠黏膜中表达了所有生长因子和促炎因子。检测TNF-α和TGF-β2 mRNA所需的高周期数(表2)1)表明这些转录本的表达较低。TGF-α mRNA在各肠段发育阶段未见显著变化。TGF-β1和TGF-β2 mrna在出生后第3周(18-21天)十二指肠和空肠近端显著下降;回肠只有在成虫期才有明显的下降。值得注意的是，TGF-β2仅在成人小肠黏膜中表达较弱。对于TNF-α，在出生后第三周，空肠近端出现明显的进行性升高;同时，IL-1β的表达在这一节段降低。在十二指肠和回肠远端只观察到这两种转录本的微小变化。总的来说，各种细胞因子的表达在空肠近端和研究中最年轻的发育阶段最高。结肠中细胞因子的表达低于小肠黏膜(未示出)。
哺乳大鼠小肠黏膜细胞因子表达发育模式的代表性图示。(A) 14、18、21、60日龄大鼠十二指肠、空肠近端和回肠远端转化生长因子β1和β2 (TGF-β1、TGF-β2)、转化生长因子α (TGF-α)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)和白细胞介素1β (IL-1β)的RT-PCR分析。(B)作为内控的β-肌动蛋白mRNA归一化对应值的特定波段的密度分析;从三个独立实验中获得的值的平均值(SEM)(以14天时波段相对强度的百分比表示)。与14日龄哺乳大鼠比较差异有统计学意义(未配对t检验):*p<0.05， **p<0.01。
空肠近端SI mRNA的发育起始
在啮齿类动物中，小肠功能成熟的最后一步的特点是，除其他变化外，消化酶活性的总体增加和断奶前后SI表达的开始。为了将细胞因子的表达模式与肠道成熟联系起来，我们使用原位杂交技术研究了出生后不同发育阶段空肠近端SI mRNA的出现(图2)2)。11日龄幼犬未检测到杂交信号(图2)2A, B)。从第16天到第三周，检测到SI mRNA，并将其限制在绒毛下三分之一的细胞中(图2)2一部)。随着染色强度的增加，颗粒逐渐集中到肠细胞的顶端(图2)2D, E)。在成人中，染色强度进一步增加(图2)2F)，在绒毛高度的至少三分之二处存在丝状的顶端积累。SI mRNA信号的特异性在所有出生后阶段都被用一种感觉链RNA证实(图2)2G)。此外，在RNAse预处理的载玻片上未检测到标记(图2)2H)。
蔗糖-异麦芽糖酶(SI) mRNA表达的发育模式使用材料和方法中描述的SI反义cRNA探针对近端空肠切片进行原位杂交。11 (A, B)， 16 (C)， 18 (D)， 21 (E)和60 (F-H)日龄大鼠肠道切片的暗场(A, C, D)和明场照明(B, E - h)。对照:用传感探针杂交(G)或杂交前用RNAse处理切片(H)。放大倍数:a, C-F ×50;B g h ×250。
hc注射液对si诱导及细胞因子表达的影响
为了进一步分析细胞因子变化与肠道成熟之间的潜在相关性，并评估粘膜细胞因子的激素调节作用，我们通过注射HC诱导断奶前幼犬早熟。RT-PCR检测空肠近端SI、TGF-β1和β2、TGF-α、TNF-α和IL-1β的表达(图2)3.A, B)。注射后一天，HC诱导了众所周知的SI mRNA的出现。HC注射后TGF-β1、TGF-β2、IL-1β的表达也明显降低。TGF-α或TNF-α mrna的数量未见变化。
11日龄幼犬注射氢化可的松(HC)对蔗糖-异麦芽糖酶(SI)诱导及细胞因子表达的影响。(A)有代表性的RT-PCR检测SI、转化生长因子β1和β2 (TGF-β1、TGF-β2)、转化生长因子α (TGF-α)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素1β (IL-1β)和β-肌动蛋白mrna: 1号线，对照组;车道2，治疗过的动物。(B)三个独立实验中SI、TGF-β1、TGF-β2、TGF-α、TNF-α和IL-1β波段归一化为β-肌动蛋白内控值的密度分析。结果在HC处理组织中以控制值的百分比表示。*p< 0.05， ** p<0.01, HC组与对照组差异有统计学意义(unpaired t检验)。
dx对小肠肌成纤维细胞因子表达的影响
为了检验在HC注射的影响下观察到的体内细胞因子表达的变化是否可以至少部分归因于对上皮下间充质细胞的作用，我们在体外研究了GC对上皮下肌成纤维细胞克隆细胞系细胞因子表达的影响。10所分析的细胞系分别建立于空肠近端(MIC 101-1和101-2)和回肠远端(MIC 216和219);所有细胞均表达所研究的五种细胞因子(图2)4)。结果表明，与HC在体内观察到的作用相反，DX对回肠和空肠细胞系中TGF-β亚型的表达没有显著影响。然而，DX在体外降低IL-1β的表达，与其在体内的作用相似。有趣的是，TNF-α mRNA水平在回肠来源的肌成纤维细胞中最高4A)，在空肠和回肠克隆中，DX根据近端-远端轴的差异调节其表达:分别减少或增加(图2)4B)。
DX对上皮下肌成纤维细胞因子表达的影响。(A)从空肠克隆的肌成纤维细胞中提取的转化生长因子β1和β2 (TGF-β1、TGF-β2)、转化生长因子α (TGF-α)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素1β (IL-1β)和核糖体蛋白转录物的代表性RT-PCR分析(MIC 101-1);1和2车道)和回肠(MIC 216;肌成纤维细胞在基础培养基(1和3车道)和8×10培养基中培养2天7M DX(通道2和4)。(B) TGF-β1、TGF-β2、TGF-α、IL-1β和TNF-α波段的密度分析(归一化为核糖体蛋白的值作为内部对照):在两个空肠(MIC 101-1和101-2)或两个回肠(MIC 216和219)细胞系上进行的实验获得的值的平均值，结果相同。结果用DX处理过的培养物占相应对照物的百分比说明。*与对照组比较p<0.05(未配对t检验)。
讨论
在本研究中，我们主要关注小肠粘膜细胞因子在出生后小肠黏膜成熟过程中的表达以及循环激素对其表达的调节。结果表明，断奶时肠黏膜细胞因子的表达存在不同的发育模式:TGF-β1、TGF-β2和IL-1β mRNA的减少和TNF-α mRNA的增加与肠细胞顶端SI表达和SI转录物分离的开始一致。在体内，注射HC可引起SI的早发性诱导，同时TGF-β1、β2和IL-1β的表达降低。在体外，DX也能抑制IL-但不影响上皮下肌成纤维细胞表达的TGF-β亚型。体内HC处理后TNF-α未见变化，但DX对空肠和回肠肌成纤维细胞系的TNF-α有差异调节。
TGF-β亚型和TGF-β家族的其他成员在一些器官中参与早期上皮-间充质细胞相互作用依赖的形态发生。30 -在本研究中，我们发现TGF-β1和β2亚型的转录本在出生后的肠粘膜中表达，并且在出生后的第三周内表达量下降，在成人器官中达到低水平。与我们在整个粘膜中检测mRNA的观察结果相反，整个粘膜包括各种细胞类型(上皮细胞，免疫细胞，肌肉细胞和成纤维细胞)，Penttila和同事33在断奶时上皮细胞中TGF-β表达增加。其他作者表明，在这一阶段，只有大多数根尖绒毛肠细胞表达TGF-β1，13在健康粘膜成纤维细胞中未发现转录本33，34而在炎症黏膜固有层细胞中则明显增加。34同样，本研究中使用的来自出生后肠道的成纤维细胞系表达TGF-β1和β2。10因此，TGF-β1可能在产后和炎症肠中参与组织重塑。例如，间充质来源的TGF-β1在共培养中诱导肠上皮细胞形成腺体。12同样值得注意的是，TGF-β亚型抑制肠上皮细胞的增殖12 - 14，35并刺激绒毛尖端的细胞凋亡。36
啮齿类动物出生后第三周循环GC的增加与肠道成熟的最后一步有关，即消化成人饮食所需的特殊功能的开始，特别是小肠中SI表达的诱导。这些变化伴随着上皮细胞周转率的增加，导致成熟器官的隐窝绒毛稳态特征。有趣的是，我们的数据表明，一方面生理或实验上GC浓度的增加与诱导SI呈负相关，另一方面，TGF-β1和β2 mrna的表达减少。这与添加氢化可的松后正常肠上皮细胞(IEC6细胞系)潜在TGF-β产生的减少一致。37因此，TGF-β亚型可能与发育期间肠道的形态和功能成熟有关，并且在断奶前后它们的减少(至少部分由GC控制)可能允许成年隐绒毛细胞更新的发生与功能成熟的最后步骤并行。
结果表明，促炎细胞因子IL-1β mRNA在肠黏膜各阶段均有表达，其中以空肠近端表达量最高。在体内，IL-1β仅局限于固有层单个核细胞和Peyer’s斑块。26，38这种细胞因子仅在病理条件下(肿瘤细胞系和急性实验性结肠炎)在上皮细胞中表达39，40)。我们发现IL-1β在培养的上皮下肌成纤维细胞中也有表达，从空肠到结肠呈递减的梯度。因此，小肠黏膜IL-1β的发育模式可能反映了其在单核细胞和结缔组织成纤维细胞中的表达。与TGF-β1和TGF-β2一样，IL-1β表达在断奶后下降，至少在空肠近端。我们的数据还显示，HC处理的空肠和体外添加DX的肠肌成纤维细胞中IL-1β的表达降低，表明该细胞因子受到GC的负调控。有趣的是，最近在IL-1β基因中发现了一个含有GC反应元件的负调控区。41肠上皮细胞表达IL-1β受体，42，43之前Mengheri和同事提出，间质来源的IL-1β可能在肠道功能发育中发挥作用。26此外，随着肠道成熟的最后一步，血浆GC的生理性增加可能直接导致其表达下调。
TNF-α是另一种重要的促炎细胞因子，在出生后发育过程中存在于小肠黏膜中。TNF-α先前已被定位于炎症细胞、成纤维细胞和小鼠Paneth细胞。44与IL-1β一样，TNF-α仅在克罗恩病等病理情况下才在肠上皮中发现45和IL-2敲除小鼠肠道炎症。46此外，细菌攻击后，肿瘤坏死因子-α在结肠上皮癌细胞系中被诱导。39，47，48我们的数据显示，TNF-α在正常大鼠肌成纤维细胞中表达，并呈近端-远端梯度增加。DX在空肠分离的培养肌成纤维细胞中负向调节TNF-α表达，而在回肠来源的肌成纤维细胞中正向调节这一事实是有趣的，值得进一步分析。最近的数据显示，TNF-α以浓度依赖的方式介导人上皮细胞系Caco2中SI生物合成的增加，这与断奶时诱导SI时近端空肠中TNF-α表达的增加有关。25然而，由于断奶前体内注射TNF-α对蔗糖酶活性没有影响，49这种细胞因子似乎与SI表达的开始无关，而是与随后的增加有关。因此，HC在体内未改变近端空肠TNF-α的表达。最后，TNF-α也可能与断奶时发生的隐窝细胞增殖的变化有关，因为局部免疫系统的激活发生在这一阶段，并且已经观察到对IEC-6细胞生长的刺激作用。50
TGF-α mRNA的表达和调控在出生后发育过程中没有显著变化，这与哺乳大鼠和成年大鼠中存在相似浓度的蛋白质是一致的15这表明这种生长因子与断奶时发生的主要变化无关。然而，EGF-R敲除小鼠遭受上皮发育受损18EGF与TGF-α结合相同的受体，可以在体内诱导SI的表达。19因此，我们可以假设EGF参与了哺乳大鼠小肠的分化51而TGF-α可能只参与细胞增殖速率的基础调节。
综上所述，我们的研究结果表明，断奶时肠上皮细胞顶端SI mRNA的大量积累表明，肠成熟伴随着TGF-β亚型和IL-1β表达的减少和TNF-α的增加。这表明，这些细胞因子的相对浓度可能在出生后小肠的形态和功能成熟过程以及随后的内稳态中起关键作用。这一结论进一步证实了TGF-β亚型和IL-1β的减少可能是由断奶前循环GC控制的。最后，我们的数据还显示，粘膜炎症肽和生长因子在上皮下肌成纤维细胞中表达差异，并对GC有反应，这证实了这些细胞也与上皮的功能成熟和稳态有关。
致谢
作者希望对M. Babyatsky博士和D . K . Podolsky教授(MGH，哈佛医学院，波士顿，马萨诸塞州，美国)发起原位杂交技术和S . J . Henning博士(儿科，贝勒医学院，休斯顿，德克萨斯州，美国)慷慨地赠送大鼠蔗糖-异麦芽糖酶探针表示感谢。我们感谢J . N . Freund博士和O . Lefebvre博士在这项工作中提供的建议和帮助。我们感谢E . Martin夫人和C . Arnold夫人的专业技术支持，以及L . Mathern夫人和I . Gillot夫人的高质量插图和对手稿的出色准备。财政支持来自INSERM、Aupetit基金会(法国)和Ferring Pharmaceuticals(丹麦)。
本文使用的缩略语
- GC
- 糖皮质激素
- 如果
- sucrase-isomaltase
- TGF
- 转化生长因子
- 肿瘤坏死因子-α
- 肿瘤坏死因子α
- il - 1β
- 白介素- 1β
- HC
- 氢化可的松
- rt - pcr
- 逆转录聚合酶链反应
- 表皮生长因子
- 表皮生长因子
- 德勤
- 二硫苏糖醇
- SSC
- 标准柠檬酸盐