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保护作用的甲硝哒唑解偶联非甾体抗炎药引起的线粒体氧化磷酸化:一个新的机制gydF4y2Ba
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  1. 一个gydF4y2Ba圣保罗大学胃肠病学部门(USP) Medica1学校,圣保罗,巴西,实验室医学调查(LIM 07),一般诊所医院USP的医学院,gydF4y2BabgydF4y2Ba放射学USP医学院,圣保罗,巴西,USP的一般诊所医院医学院gydF4y2Ba
  1. 雷特Z博士,欧几里得大街10900号,马上回来409 b, 44106 - 4952年美国俄亥俄州克利夫兰。gydF4y2Baazl在}{po.cwru.edugydF4y2Ba

文摘gydF4y2Ba

背景gydF4y2Ba非甾体抗炎药(非甾体抗炎药)肠病的发病机制是复杂的。它涉及解偶联的线粒体氧化磷酸化改变了细胞间连接和肠道通透性增加导致的肠道损伤。灭滴灵减少消炎痛引起的炎症,但机制仍然投机。直接影响腔的细菌传统上被认为占灭滴灵的保护作用。然而,保护甲硝哒唑对线粒体氧化磷酸化的影响从来没有测试。gydF4y2Ba

的目标是gydF4y2Ba评估灭滴灵的保护作用引起的线粒体解偶联吲哚美辛和肠道通透性增加和宏观损伤。gydF4y2Ba

材料和方法gydF4y2Ba灭滴灵的保护作用是评价大鼠给予消炎痛;宏观的分数被设计来量化肠道病变,和肠道通透性的衡量手段gydF4y2Ba51gydF4y2BaCr-ethylenediaminetetraacetic酸。灭滴灵的保护作用对消炎痛引起的线粒体解偶联评估使用隔离耦合鼠肝线粒体从老鼠使用甲硝哒唑或盐水。gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba灭滴灵显著降低宏观的消炎痛引起的肠道损伤和肠道通透性增加;此外,在线粒体水平,显著降低耗氧量的增加导致状态4诱导吲哚美辛和减少呼吸控制的水平。gydF4y2Ba

结论gydF4y2Ba我们的研究证实了有益的甲硝哒唑对肠道损伤和肠道通透性的影响,并演示了,第一次,灭滴灵的直接保护作用线粒体氧化磷酸化的解偶联由非甾体抗炎药引起的。gydF4y2Ba

  • 解偶联剂gydF4y2Ba
  • 肠道通透性gydF4y2Ba
  • 肠病gydF4y2Ba
  • 非甾体抗炎药gydF4y2Ba
  • 灭滴灵gydF4y2Ba
  • 吲哚美辛gydF4y2Ba
  • 老鼠gydF4y2Ba
  • 略语gydF4y2Ba

    非甾体抗炎药gydF4y2Ba
    非甾体抗炎药gydF4y2Ba
    DMSO溶液gydF4y2Ba
    二甲亚砜gydF4y2Ba
    51gydF4y2BaCr-EDTAgydF4y2Ba
    51gydF4y2BaCr-ethylenediaminetetraacetic酸gydF4y2Ba
    EGTAgydF4y2Ba
    乙烯glycol-bis(β-aminoethyl醚)gydF4y2BaNgydF4y2Ba,gydF4y2BaNgydF4y2Ba,gydF4y2BaNgydF4y2Ba′,gydF4y2BaNgydF4y2Ba′-tetraacetic酸gydF4y2Ba
    消息灵通的gydF4y2Ba
    NgydF4y2Ba——(2-hydroxyethyl)哌嗪-gydF4y2BaNgydF4y2Ba′- (2-ethanesulphonic酸)gydF4y2Ba
    软gydF4y2Ba
    呼吸控制速度gydF4y2Ba
  • 来自Altmetric.com的统计gydF4y2Ba

    请求的权限gydF4y2Ba

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    非甾体抗炎药(非甾体类抗炎药)已被广泛使用,因为他们的镇痛、抗炎、退热的属性。这些药物的主要关心的是他们的消化系统副作用的频率和严重程度,gydF4y2Ba1gydF4y2Ba涉及整个胃肠道。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3gydF4y2BaScintilograms表明小肠炎症在42%的病人服用非甾体抗炎药,粪便calprotectin水平表明炎症在44%,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba但是,当粪便排泄gydF4y2Ba111年gydF4y2BaIn-labelled白细胞被用作衡量炎症,高达67%gydF4y2Ba5 - 9gydF4y2Ba的患者有肠下垂。同样,肠道病变检测到小肠镜gydF4y2Ba10gydF4y2Ba描述了在66%的患者在后期研究中,非特异性肠道溃疡的发病率是13.5%,使用非甾体类抗炎药的人在很长一段时间(6个月或更长时间)。gydF4y2Ba11gydF4y2Ba非甾体抗炎药可能导致慢性肠道病变引起的出血,gydF4y2Ba12 - 14gydF4y2Ba蛋白质的损失gydF4y2Ba8gydF4y2Ba偶尔,狭窄。gydF4y2Ba15 - 20gydF4y2Ba也有报道称,非甾体抗炎药引起肠炎和结肠炎,gydF4y2Ba-gydF4y2Ba木糖吸收减少,gydF4y2Ba28gydF4y2Ba和穿孔的发生率增加,gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba同时对憩室炎,gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba阑尾炎,gydF4y2Ba32gydF4y2Ba内部瘘管,gydF4y2Ba33gydF4y2Ba和炎症性肠病的复发。gydF4y2Ba34-36gydF4y2Ba

    非甾体抗炎药肠病的发病机制很复杂,有很多不确定性。Somasumdaram和他的同事们gydF4y2Ba37gydF4y2Ba建议在发病机理有三个关键步骤。的gydF4y2Ba第一步gydF4y2Ba涉及特定生化损伤的线粒体,gydF4y2Ba38-40gydF4y2Ba解偶联氧化磷酸化反应,在药物的吸收和/或后胆汁排泄(肝肠循环)。gydF4y2Ba41-45gydF4y2Ba电子显微镜研究表明vacuolisation和不断膨胀的线粒体在一小时内的吲哚美辛政府高度的解偶联氧化磷酸化的特征。gydF4y2Ba46gydF4y2Ba分开的结果是减少细胞ATP,改变了细胞间连接,肠道通透性增加,并释放到胞质钙进而导致二级生化损伤。gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba47-50gydF4y2Ba非甾体抗炎药抑制环氧酶似乎并没有参与这个框架。gydF4y2Ba51gydF4y2Ba,gydF4y2Ba52gydF4y2Ba非甾体抗炎药引起的肠病的上下文中,肠道通透性增加(gydF4y2Ba过渡阶段gydF4y2Ba)将生化的伤害转化为组织的反应。在gydF4y2Ba第二步gydF4y2Ba粘膜暴露消化酶和胆汁,gydF4y2Ba47gydF4y2Ba,gydF4y2Ba48gydF4y2Ba和细菌gydF4y2Ba53-58gydF4y2Ba和他们的产品,这似乎主要中性粒细胞化学引诱物。gydF4y2Ba59 - 61gydF4y2Ba中性粒细胞吞噬作用发生时,可能会导致组织损伤,自由基gydF4y2Ba62年gydF4y2Ba,gydF4y2Ba63年gydF4y2Ba生产和溶酶体释放。细菌的作用已经被几乎普遍推测结果已表明,消炎痛引起很少的无菌动物的宏观损伤gydF4y2Ba56gydF4y2Ba,gydF4y2Ba57gydF4y2Ba在那些使用抗生素。gydF4y2Ba53gydF4y2Ba,gydF4y2Ba55gydF4y2Ba,gydF4y2Ba64年gydF4y2Ba

    灭滴灵似乎减少大多数参数消炎痛引起的炎症;然而,这种药物的机制保护粘膜和变弱炎症仍然只有投机。医学文献的数据表明,甲硝哒唑可能直接影响腔的衰减增强细菌粘膜渗透引起的吲哚美辛和减少大量的细菌易位到肠系膜淋巴结,肝,脾,gydF4y2Ba65年gydF4y2Ba而不是cytoprotective角色。在这种背景下,这种药只应该保护期间gydF4y2Ba第二步gydF4y2Ba,内生细菌,尽管在一些研究灭滴灵防止非甾体抗炎药引起的肠道通透性的增加,表明灭滴灵的直接影响肠道损伤的开始。Bjarnason和他的同事们gydF4y2Ba64年gydF4y2Ba报道,肠道炎症和血液损失显著降低了甲硝哒唑;不过他们无法显示肠道通透性显著差异和灭滴灵治疗后。然而,这项工作包括病人服用非甾体消炎药了至少6个月。因此,山田和他的同事们,gydF4y2Ba65年gydF4y2Ba在实验模型中,发现甲硝哒唑不会降低粘膜渗透在一天后注射消炎痛但黏膜渗透性降低后48小时内,并得出结论,甲硝哒唑可能直接影响后期阶段(gydF4y2Ba第二步gydF4y2Ba)涉及腔的细菌。相比之下,戴维斯和他的同事们,gydF4y2Ba66年gydF4y2Ba在人类中,表明共同服用甲硝唑在短时间内成功的阻止了消炎痛引起的肠道通透性的变化。同样,戴维斯和贾玛利,gydF4y2Ba67年gydF4y2Ba在老鼠身上,表明甲硝哒唑逆转非甾体抗炎药引起的肠道通透性增加,但认为这一发现潜在的自由基清除剂灭滴灵的行动。因此,确切点(s),甲硝哒唑保护小肠损伤(是)不知道。早熟的甲硝哒唑保护的发现很重要,因为它表明直接影响药物的非甾体抗炎药伤的开始。为了验证这个假设,我们已经研究了灭滴灵的保护作用在宏观损伤和肠道消炎痛引起的渗透率在老鼠和隔离耦合线粒体为了确定机制灭滴灵非甾体抗炎药引起的小肠损伤的保护。gydF4y2Ba

    材料和方法gydF4y2Ba

    雄性Wistar鼠(250 - 350 g)分别被安置在代谢笼。老鼠有水和标准实验室的鼠粮随意。八十只老鼠被分为三组:车辆(水)对照组(n = 27),吲哚美辛组(n = 26)和吲哚美辛结合甲硝哒唑组(n = 27)。gydF4y2Ba

    肠道炎症是由政府单一剂量的吲哚美辛填喂法(7.5毫克/公斤)。药物最初是溶解在二甲亚砜(DMSO)和稀释,这样最后的DMSO溶液的浓度是5% (v / v)和调整pH值7.4,之后他们可以免费获得标准老鼠食物和水。gydF4y2Ba

    灭滴灵是由填喂法,分三次(60毫克/公斤/ dose-total剂量180毫克/公斤),12个小时,开始的同时,吲哚美辛。gydF4y2Ba

    肠道通透性是评估使用尿排泄gydF4y2Ba51gydF4y2BaCr-ethylenediaminetetraacetic酸(gydF4y2Ba51gydF4y2BaCr-EDTA),如前所述,gydF4y2Ba48gydF4y2Ba后口服。动物收到消炎痛和/或甲硝唑如上所述。老鼠有5μCigydF4y2Ba51gydF4y2BaCr-EDTA在0.5毫升蒸馏水填喂法,其次是5毫升的水。动物被放置在个体代谢笼为收集尿液和五个小时可以免费获得自来水和食物。老鼠牺牲(50毫克)被注射氯胺酮(Ketalar)和剖腹手术被穿刺和膀胱空虚。总五小时尿液中放射性一起确定标准γ计数器两分钟。数据表示为部分放射性标记的排泄。小肠轻轻取出,肠道粘膜被切断反肠系膜的一面,暴露了在一块软木塞,与埃文是蓝色的和干,提高宏观评估分数,29小时后给药,使用sterostatic显微镜(25 - 50次)。宏观分设计量化肠道病变:粘膜溃疡总数:(A) < 1毫米;(b)⩾1和< 3毫米;(c)⩾3和< 5毫米;(d)⩾5和< 10毫米; and (e) ⩾10 mm, multiplied by 1, 3, 5, 10, and 20, respectively. Total score was the sum of the values obtained in each item. A separate group of male Wistar rats (n=18) weighing 250 g was used to determine the effect of indomethacin on mitochondria in vitro, and was subdivided into two groups: one received a single dose of 100 mg of metronidazole intraperitoneally and the other saline, both five hours before liver extraction and mitochondrial isolation.

    耦合制备线粒体是如前所述gydF4y2Ba68年gydF4y2Ba从动物牺牲斩首。肝脏迅速解剖和放置在冰冷的均衡解决方案没有1(0.1毫米280毫米蔗糖,EGTA(乙烯glycol-bis(β-aminoethyl醚)gydF4y2BaNgydF4y2Ba,gydF4y2BaNgydF4y2Ba,gydF4y2BaNgydF4y2Ba′,gydF4y2BaNgydF4y2Ba′-tetraacetic酸)、2毫米玫瑰(gydF4y2BaNgydF4y2Ba——(2-hydroxyethyl)哌嗪-gydF4y2BaNgydF4y2Ba′- (2-ethanesulphonic酸)),5毫克/毫升牛血清白蛋白在pH值7.4),细切成大约1厘米的块用剪刀,和洗两次均衡解决方案去除多余的血。肝脏被悬浮在50毫升相同的均衡解决方案和单一化Potter-Elvjehm匀浆器由六个旋转聚四氟乙烯杵中风。匀浆然后离心机在900年gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟去除多余的血液,细胞核和细胞碎片。上层清液离心机在10 000gydF4y2BaggydF4y2Ba另一个10分钟,之后的颗粒被删除和resuspended 10毫升的均衡解决方案2号(280毫米蔗糖,2毫米玫瑰,pH值7.4)。隔离过程花了大约45分钟的匀浆被保持在0 - 4°C。线粒体蛋白质浓度测定用洛瑞的方法。gydF4y2Ba69年gydF4y2Ba

    耗氧量polarographically测量gydF4y2Ba70年gydF4y2Ba使用克拉克型氧电极(克拉克;黄温泉仪器有限公司黄温泉,美国俄亥俄州)所描述的机会和威廉姆斯。gydF4y2Ba71年gydF4y2Ba电极被安装到一个恒温树脂玻璃室含1.55毫升的氧电极缓冲(120毫米氯化钾,5毫米三,1毫米EGTA, 0.1%牛血清白蛋白,pH值7.4)。少量线粒体制备(100μl), 35μl琥珀酸钾(10毫米),20μl ADP(504毫米),0 - 100μl消炎痛(0 - 140的最终浓度μmol /毫克蛋白)介绍了通过一个小洞室盖子。实验进行了30°C连续磁搅拌。五分钟后耗氧量测量和监控每个实验大约两分钟。三到六个实验在每个吲哚美辛浓度为每一个老鼠。吲哚美辛在DMSO溶液溶解(最终浓度室从未超过0.3% DMSO的v / v)。控制实验使用蒸馏水只是在之前的实验中在我们的实验室验证,DMSO浓度高达10倍的最大使用在目前的体外实验,类似于水的耗氧量。gydF4y2Ba

    统计分析gydF4y2Ba

    结果表示为(SEM)。宏观的统计差异分数和肠道通透性组间进行评估(克鲁斯卡尔-沃利斯和邓恩)使用非参数测试。统计的差异之间的耗氧量DMSO溶液和水,水和甲硝哒唑组和控制是由一个非参数测试评估(Mann-Whitney)。统计耗氧量团体之间的差异被回归分析评估。gydF4y2Ba

    结果gydF4y2Ba

    宏观损伤gydF4y2Ba

    图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba表明宏观分数的值明显不同的三组:控制、消炎痛、消炎痛+甲硝哒唑组(p < 0.0001)。使用歧视性的测试可以看到,宏观分数显著降低甲硝哒唑时管理与吲哚美辛与吲哚美辛(消炎痛灭滴灵就达3.3 (1.4)gydF4y2BavgydF4y2Ba吲哚美辛63.6 (25.9);p < 0.05),也不同于对照组(消炎痛与甲硝哒唑3.3 (1.4)gydF4y2BavgydF4y2Ba控制0;NS)。gydF4y2Ba

    图1gydF4y2Ba

    盒子,须情节表现出宏观的得分中值(水平线)第25和第75百分位数(盒)和范围(胡须)控制(组1,n = 10),吲哚美辛(组2,n = 10)和吲哚美辛+甲硝唑(3组,n = 10)组。组1 v组2,p < 0.0001;NS组1 v组3;3组2 v组,p < 0.001。gydF4y2Ba

    肠道通透性gydF4y2Ba

    肠道通透性,如评估gydF4y2Ba51gydF4y2BaCr-EDTA是明显不同的三组(p < 0.0001)(图gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。后肠通透性显著增加消炎痛(控制2.0 (0.3)%gydF4y2BavgydF4y2Ba吲哚美辛8.9 (0.8)%;p < 0.0001)。甲硝哒唑时补充道,没有显著差异与控件(吲哚美辛和灭滴灵1.9 (0.2)%;NS),但是它明显不同于消炎痛(p < 0.05)。gydF4y2Ba

    图2gydF4y2Ba

    盒子,晶须的情节显示位数肠道通透性(水平线)第25和第75百分位数(盒)和范围(胡须)控制(组1,n = 17)、吲哚美辛(组2 n = 16)和吲哚美辛+甲硝唑(3组,n = 17)组。值的百分比gydF4y2Ba51gydF4y2BaCr-EDTA五小时尿排出。组1 v组2,p < 0.05;NS组1 v组3;3组2 v组,p < 0.05。gydF4y2Ba

    耗氧量gydF4y2Ba

    消炎痛引起的耗氧量的增加显著降低甲硝哒唑组(p = 0.046)(图gydF4y2Ba3gydF4y2Ba);此外,有一个不太明显降低呼吸控制速率(RCR) (p = 0.035)(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba与甲硝哒唑组相比)。没有显著差异状态4中耗氧量(S4)(控制48.2 (2.3)gydF4y2BavgydF4y2Ba甲硝哒唑40.1 (3.1);p = 0.16)或软(控制3.1 (0.1)gydF4y2BavgydF4y2Ba甲硝哒唑2.8 (0.1);p = 0.29)两组之间在吲哚美辛。这些数据符合Aicardi和Solaini的结果gydF4y2Ba72年gydF4y2Ba显示没有独自灭滴灵的耗氧量的影响。gydF4y2Ba

    图3gydF4y2Ba

    回归分析的影响甲硝哒唑在基底状态(S4)耗氧量(值μmol氧气/毫克的蛋白质)。gydF4y2Ba

    图4gydF4y2Ba

    回归分析的影响灭滴灵控制呼吸速率(RCR)。消费关系的氧气与ADP (S3)和后消耗(S4)。gydF4y2Ba

    讨论gydF4y2Ba

    非甾体抗炎药引起的肠病包括三个不同的阶段gydF4y2Ba37gydF4y2Ba:一个早期阶段(gydF4y2Ba第一步)gydF4y2Ba涉及线粒体氧化磷酸化之后的解偶联gydF4y2Ba过渡阶段gydF4y2Ba特点是肠道通透性增加,后期阶段(gydF4y2Ba第二步gydF4y2Ba)时肠粘膜暴露在积极代理(例如,细菌和他们的产品),促进炎症介质的释放与随之而来的额外的肠道通透性增加和最后,组织损伤。gydF4y2Ba

    灭滴灵的保护作用非甾体抗炎药引起的肠病最近被研究过。gydF4y2Ba64 - 67gydF4y2Ba然而,甲硝唑施加这种保护的机制并不完全清楚。山田和他的同事们,gydF4y2Ba65年gydF4y2Ba在老鼠模型中肠道炎症(消炎痛),建议灭滴灵的保护作用是由于其抗菌作用。然而,戴维斯和贾玛利gydF4y2Ba67年gydF4y2Ba使用一个类似的实验模型,证明了甲硝哒唑保护对消炎痛引起的肠道通透性增加在早期(吲哚美辛)12小时后,得出的结论是,甲硝哒唑直接干扰时参与腔的细菌不太明显。gydF4y2Ba37gydF4y2Ba此外,戴维斯和贾玛利gydF4y2Ba67年gydF4y2Ba表明,灭滴灵的保护作用是剂量依赖。这些研究方法之间的差异gydF4y2Ba65年gydF4y2Ba,gydF4y2Ba67年gydF4y2Ba可能解释这种差异。gydF4y2Ba

    我们的结果证实了以前的工作gydF4y2Ba65年gydF4y2Ba,gydF4y2Ba67年gydF4y2Ba灭滴灵在哪里与显著减少宏观非甾体抗炎药引起的肠道损伤(无花果吗gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。同时,甲硝哒唑预防非甾体抗炎药引起的渗透率变化(图gydF4y2Ba2gydF4y2Ba大约24小时后政府的吲哚美辛。与戴维斯和贾玛利一样,gydF4y2Ba67年gydF4y2Ba我们也注意到甲硝哒唑保护剂量依赖关系(数据没有显示)。消炎痛引起的肠道损伤达到最大后3 - 4天gydF4y2Ba55gydF4y2Ba当腔的细菌和他们的产品有一个地方。灭滴灵的保护我们观察到,吲哚美辛大约24小时后,表明甲硝哒唑可能干预肠道损伤的早期阶段腔的攻势特工的很少或根本没有影响。也直接影响的甲硝唑和不是一个抗生素介导效应证实了最近的示威活动,甲硝哒唑最小化消炎痛引起的肠道损伤在无菌老鼠。gydF4y2Ba73年gydF4y2Ba我们的体外研究证实了这个假设。线粒体解偶联的特点是耗氧量增加第四阶段(S4)和减少软。灭滴灵显著降低线粒体的耗氧量的增加在第四阶段(S4)(图gydF4y2Ba3gydF4y2Ba消炎痛引起的),造成少减少RCR(无花果gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。功能都是灭滴灵的直接保护作用相关的线粒体解偶联氧化磷酸化由非甾体抗炎药引起的。gydF4y2Ba

    在目前的工作,我们已经描述了,第一次,一个新的灭滴灵的影响:它直接影响线粒体氧化磷酸化,间接的,细胞间连接。因此灭滴灵的保护作用与非甾体抗炎药引起的肠道通透性的增加可能包括一个行动线粒体解偶联。我们的工作揭示了新的视角研究的药物可以直接干扰线粒体解偶联,最终预防非甾体抗炎药引起的肠病。gydF4y2Ba

    略语gydF4y2Ba

    非甾体抗炎药gydF4y2Ba
    非甾体抗炎药gydF4y2Ba
    DMSO溶液gydF4y2Ba
    二甲亚砜gydF4y2Ba
    51gydF4y2BaCr-EDTAgydF4y2Ba
    51gydF4y2BaCr-ethylenediaminetetraacetic酸gydF4y2Ba
    EGTAgydF4y2Ba
    乙烯glycol-bis(β-aminoethyl醚)gydF4y2BaNgydF4y2Ba,gydF4y2BaNgydF4y2Ba,gydF4y2BaNgydF4y2Ba′,gydF4y2BaNgydF4y2Ba′-tetraacetic酸gydF4y2Ba
    消息灵通的gydF4y2Ba
    NgydF4y2Ba——(2-hydroxyethyl)哌嗪-gydF4y2BaNgydF4y2Ba′- (2-ethanesulphonic酸)gydF4y2Ba
    软gydF4y2Ba
    呼吸控制速度gydF4y2Ba

    引用gydF4y2Ba

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