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背景高水平的DNA的存在微卫星不稳定性(MSI-H)在大肠癌与改善预后有关,是肿瘤浸润淋巴细胞(尖)的存在。目前还不清楚如果尖贡献直接通过激活与MSI-H癌症相关的生存优势的抗肿瘤免疫反应。
的目标是关联直到和细胞凋亡率在结直肠癌分层MSI的地位。
方法尖的分布特征,量化102年一系列选定的零星的结肠直肠癌分类根据水平的MSI 32 MSI-H 30 MSI-low (MSI-L)和40微卫星稳定(MSS)。归档块使用CD3和CD8 T细胞标记应用,和B细胞标记CD20。细胞凋亡的恶性上皮细胞被免疫组织化学量化M30 CytoDEATH抗体。
结果积极与anti-CD3和负染法染色anti-CD20认为几乎所有尖是T细胞。大多数的CD3+尖(> 75%)也与anti-CD8染色。尖是最丰富的MSI-H直肠癌中23/32(72%)得分直到积极。只有5/40的肿瘤(12.5%)海量存储系统(MSS)中,9/30 (30%)MSI-L癌症直到是积极的(p < 0.0001)。MSI-H癌症显示两个更高的细胞凋亡率(平均(SD) 3.52(0.34) %)比MSS癌症(1.53(0.23)%)而MSI-L子群有一个中级(2.52 (0.35)%)(p < 0.0001)。总的来说,有一个小(rCD3 = 0.347),但显著的线性相关性+和M30+随机细胞凋亡数(p < 0.001)。然而,尖和凋亡colocalisation很小。
结论而尖可能解释的凋亡率增加和改善预后MSI-H癌症,很可能尖MSI-H癌症和细胞凋亡是独立的特征。
- 结肠直肠癌
- DNA微卫星不稳定
- 肿瘤浸润淋巴细胞
- 细胞凋亡
略语
- 儿童权利公约
- 结肠直肠癌
- MSI
- 微卫星不稳定
- 海量存储系统(MSS)中
- 微卫星稳定
- MSI-L
- MSI-low
- MSI-H
- MSI-high
- 尖
- 肿瘤浸润淋巴细胞
- TBS
- 三羟甲基氨基甲烷缓冲液盐
- 轻拍
- 3、3′-diaminobenzidine
- IEL
- 上皮内淋巴细胞
来自Altmetric.com的统计
近年来,它已成为明显的,有三种遗传学上截然不同的子组的散发性结直肠癌(CRC)基于DNA微卫星不稳定性(MSI)的水平。1 - 3大多数的零星的crc(70 - 80%)显示等位损失没有MSI和被定义为微卫星稳定(MSS)。其他两个子组定义为MSI-low (MSI-L)和MSI-high (MSI-H),每一个由10 - 15%的零星的CRC,开发小插入和删除重复DNA突变。1 - 3遗传型的,MSI-L癌症是有区别的,低水平的DNA不稳定< 40%的微卫星位点和APC和肿瘤抑制的失活p53激活的频繁K -拉致癌基因。3相比之下,MSI-H子群有一个低水平的APC基因突变,p53,和K -拉基因。3 - 6然而,由于高水平的DNA不稳定> 40%的微卫星位点,MSI-H癌症经常获得移码突变基因的重复区域与肿瘤进展,包括proapoptotic伯灵顿6,7和转化生长因子β受体8和胰岛素样生长因子。9MSI-H癌症主要是对站(位于近端结肠),低分化粘液性,更大的表现。2,4,10
此外,高水平的存在MSI与改善生存5,10,11癌症与海量存储系统(MSS)中,有证据表明,MSI阳性癌症的特点是炎症反应的存在形式的肿瘤浸润淋巴细胞(尖)。2,4,12尖也似乎是一个重要的预后指标。13,14早些时候的研究尖没有细分CRC根据MSI的水平。因此,本研究的目的是要关联到和细胞凋亡率在结肠直肠癌分层MSI的地位。
材料和方法
肿瘤样本
这项研究由一系列选定的102零星的结直肠腺癌获得皇家布里斯班101名患者接受手术医院1989年至1999年之间。其中,93例来自一群303癌症临床病理和分子特性的特征,包括MSI,2和九MSI-H癌症被添加到本系列增加的统计力量与这组进行比较。完全,32 MSI-H癌症(乐队转变中至少有三个六标记),30是MSI-L(与带一个或两个微卫星标记)的变化,和40 MSI-null或海量存储系统(MSS)中。这项研究是由皇家布里斯班医院伦理委员会批准。
免疫组织化学
常规石蜡包埋块处理得到的病理学、皇家布里斯班医院。肿瘤部分(4μm)贴在胶幻灯片(Menzelglaser,布伦瑞克,德国)和风干一夜之间在37°C。部分在二甲苯脱蜡和患者通过成绩降序酒精的水,然后转移到三羟甲基氨基甲烷缓冲液盐(TBS), pH值7.4。基于热抗原检索使用史和他的同事们的技术了。15部分煮五分钟每两次在0.01 M柠檬酸缓冲,pH值6.0,国内600千瓦微波炉,然后冷却到室温,洗前三的变化TBS五分钟。内源性过氧化物酶活性在1% H就熄了2O2,0.1%在TBS叠氮化钠。在TBS洗涤三次,五分钟后,非特异性抗体绑定被孵化的部分商业脱脂奶粉4% 15分钟。在TBS简单冲洗后的部分被置于湿润室和孵化20分钟无免疫力山羊血清(酶公司,旧金山,加利福尼亚,美国)。主要抗体是在适当的滴定度和部分应用孵化在室温下过夜。以下抗体稀释在TBS: anti-CD3(兔多克隆,施用)anti-CD8(小鼠单克隆、克隆C8/144B 1:30)和anti-CD20(克隆L26, 1:50) Dako(美国加州Carpinteria);和CytoDEATH(克隆M30 1:200)勃林格曼海姆(德国曼海姆)。三TBS的变化部分被彻底洗5分钟(包含0.5% v / v Triton x - 100在第一M30洗)。CD3部分是孵化prediluted山羊antirabbit二级抗体(酶),而CD8、CD20, M30 CytoDEATH部分孵化与prediluted山羊antimouse二级抗体(酶)30分钟。部分被洗三个TBS的变化和prediluted streptavidin-horseradish过氧化物酶(酶)申请了15分钟。在TBS三洗后,抗原网站显示使用0.05% 3、3′-diaminobenzidine (DAB)在TBS H2O2作为衬底。部分被轻轻迈耶的苏木精复染色,脱水,清理,安装使用DePeX (BDH Gurr,普尔,英国)。适当的正面和负面的控制(正常的人类结肠M30和淋巴结淋巴细胞标记)都包括在染色。
M30 CytoDEATH / CD3双重染色,M30染色进行轻拍一步,如上所述。部分被reblocked 4%脱脂奶粉和山羊血清和孵化anti-CD3(1:200)在室温下了两个小时。标准山羊antirabbit和链霉亲和素孵化项目后,紫色向量VIP(向量实验室Inc .,伯林盖姆,加利福尼亚,美国)应用3 - 4分钟,幻灯片之前洗好水复染色与甲基绿(向量实验室)三分钟60°C。
直到和凋亡得分是由两个独立的观察员(JMM-R和AEB-H)。对于每个案例,上皮内CD3的数量+和CD8+淋巴细胞在200年十大领域渗透肿瘤细胞核数和最高的五个价值观是平均每1000肿瘤细胞获得最终的淋巴细胞分数。定义直到阳性肿瘤,5%的切断(也就是说,⩾50 CD3+每1000人淋巴细胞肿瘤细胞核)被选为统计和病理原因。有一个自然分离CD3的双峰分布+淋巴细胞的分数50/1000肿瘤细胞核和病理学家(JRJ)可能不容易检测CD3计数少于5%的常规苏木精和伊红染色。此外,上皮内淋巴细胞(IEL)的比值在正常的人类结肠上皮细胞大约是5:100。16凋亡上皮细胞的分布在几个领域的每个肿瘤分级。首先,随机选择10 200核领域内的每个肿瘤被数和平均每分获得随机的最后得分细胞凋亡(随机%)。其次,细胞凋亡在支架表面和增长(发展)肿瘤边缘得分为0(< 1%),+(1 - 5%)+ +(5 - 10%),+ + +(10 - 15%),或+ + + + (> 15%)。最后,上皮细胞凋亡发生腺腔内的半定量的评分为0(或勤杂人员)+(一些),或+ +(普遍)根据M30阳性染色的程度。M30负腔可能包含凋亡尖,炎症细胞,坏死碎片。当观察者的分数不同1%以上直到计数或凋亡的分数为2%,病例讨论在双头显微镜和期末成绩是达成的共识。
突变分析
P53突变被发现使用单链构象多态性分析如前所述。6发现密码子的突变的K - 12和13拉使用非放射性聚合酶链reaction-restriction原癌基因片段长度多态性是前面描述的。3基因改变编码8-guanine重复的伯灵顿基因进行分析(如前所述)。7
统计分析
使用非参数方法分析作为主要感兴趣的变量,也就是说,CD3、CD8,随机细胞凋亡数量不是正态分布。这种类型的分析也比传统的保守参数的方法。因此,均值和中位数年龄、CD3、CD8,随机细胞凋亡数量在MSI的水平相比利用克鲁斯卡尔-沃利斯非参数方差分析。此外,K -拉,p53,伯灵顿的地位与CD3或随机使用克鲁斯卡尔-沃利斯方差分析细胞凋亡数量。频率分布的差异分类因素,如性别、阶段,和程度的分化,MSI水平检查使用皮尔逊的χ2统计。斯皮尔曼的非参数相关系数(ρ)是用来测量之间的关联程度的CD3或CD8计数和随机细胞凋亡/分。此外,CD3数之间的联系的程度或随机bcl - 2细胞凋亡和p53蛋白表达用斯皮尔曼相关系数的测量。一个p值小于0.05被认为是具有统计学意义。
结果
MSI-H临床病理特征、MSI-L和MSS结肠直肠癌
临床病理的数据从102年零星的大肠癌癌手术切除101例表所示1。MSI-H癌症的大多数(28/32,87.5%)发生在右结肠脾曲(近端)。相比之下,MSI-L和MSS癌症主要被发现在左侧结肠脾曲(远端)和直肠(表1)。MSI-H癌症也以比例明显高于粘液性癌(粘液湖泊由> 50%)。此外,超过一半(18/32,56.3%)MSI-H癌症是低分化与4/30(13.3%)相比MSI-L和9/40(22.5%)的海量存储系统(MSS)中肿瘤。有一个倾向更先进的疾病MSI-L和海量存储系统(MSS)中组织的12/30 (40.0%)MSI-L和16/40(40.0%)的海量存储系统(MSS)中癌症已经扩散至淋巴结或远端站点(杜克大学阶段C和D)而只有7/31(22.6%)的MSI-H癌症进展阶段C或D阶段(表1)。然而,这一趋势并未达到统计学意义(p = 0.071)。
尖在零星的结直肠癌与MSI-H和MSI-L表型有关
免疫组织化学分析显示大量的尖MSI-H直肠癌意味着数为68.4(标准差46.9)正面彩色CD3每1000人淋巴细胞肿瘤细胞核(表2)。MSI-L子群有一个中间的意思是CD3数为36.3(26.5)和平均CD3 MSS组最低为24.6 (24.1)。CD3的分布+计数是总结根据MSI在无花果1。102年,37个肿瘤得分,直到50 CD3阳性(包含>+每1000人淋巴细胞肿瘤细胞核)。MSI-H, 23/32 (71.9%), 9/30 (30%) MSI-L,只有5/40(12.5%)海量存储系统(MSS)中(表2)。在这两个中间CD3的区别+计数和百分比分配直到这些团体之间分数是高度显著(p < 0.001)(表2这些尖),确认主要与MSI和MSS表型。进一步的免疫组织化学和定量anti-CD8发现CD8+计数与CD3+与CD8计数在102年所有癌症,+细胞组成的CD3的75 - 80%+人口(图2、表2)。因此,尖似乎CD3为主+/ CD8+T细胞。这个结果证实了缺乏积极的上皮内anti-CD20 (B细胞)在串行部分染色相同的肿瘤(图2D和数据未显示)。CD4细胞染色也尝试但失败在这一系列肿瘤(数据没有显示)。
CD3的分布+和CD8+肿瘤浸润淋巴细胞(尖)零星的结肠直肠癌,根据级别的DNA微卫星不稳定性(微卫星instability-high (MSI-H),微卫星instability-low (MSI-L)和微卫星稳定(MSS))
CD3的分布+肿瘤浸润淋巴细胞(尖)在结直肠癌。所有102个肿瘤CD3+由一个三角形。50 CD3的分数+淋巴细胞被选为切断直到积极癌症(虚线)和单杠代表平均计数为每个组。海量存储系统(MSS)中,微卫星稳定;微卫星instability-low MSI-L;微卫星instability-high MSI-H。
的例子,一个典型的未分化的微卫星instability-high (MSI-H)癌症严重渗透,淋巴细胞。(一)标准的苏木精和伊红染色部分。(B)与anti-CD3连续切片相同的肿瘤染色,揭示T淋巴细胞。与anti-CD8 (C)连续切片染色。请注意,大多数CD3+T细胞也显示与anti-CD8阳性染色。(D)与anti-CD20连续切片相同的肿瘤染色,一个B细胞标记。注意,本节没有上皮内细胞染色积极(原放大×60)。
微卫星不稳定性与增强的恶性上皮细胞的凋亡
是否存在尖与增加水平的肿瘤细胞凋亡,凋亡细胞的频率和分布格局在同一个选择一系列102进行免疫组织化学方法观察癌症M30 CytoDEATH抗体。M30抗体绑定到一个neoepitope cytokeratin-18暴露后半胱天冬酶乳沟从而允许非常具体和凋亡的早期检测上皮细胞。17M30 CytoDEATH染色明显更敏感比细胞凋亡的形态学鉴定通过苏木精和伊红染色(图3)。M30的口袋+恶性上皮细胞被发现随机分布在整个102检查病变。值得注意的是,MSI-H癌症显示平均高出两个细胞凋亡率(3.55(1.99)%)比MSS癌症(1.53(1.47)%)而MSI-L子群的中级水平细胞凋亡(2.52(1.92)%)从每个肿瘤(表10个随机选择的字段3)。这种差异在肿瘤细胞凋亡水平非常显著(p < 0.0001)。平均凋亡数量在表面和边缘增长也明显高于MSI-H子群,MSI-L中间,和最低的海量存储系统(MSS)中癌症(分别p < 0.0001, p = 0.002)(表3)。此外,腺腔上皮细胞凋亡是MSI-H癌症(表中最普遍3)尽管这种差异没有达到统计学意义(p = 0.059)。M30负腔可能包含凋亡尖,坏死碎片,中性粒细胞。和吞噬细胞。重要的是,当串行部分比较M30的缺乏+与高CD8染色严重地区渗透+T细胞(图4),同样,M30 CytoDEATH / CD3双染色法显示小colocalisation CD3之间+尖和M30+肿瘤细胞凋亡(无花果5)。总的来说,有一个重要的但weak-moderate线性相关性CD3的数量+尖和M30+随机细胞凋亡的分数(r= 0.347,p < 0.001)。CD8之间的线性相关+淋巴细胞和M30+细胞凋亡是一个相似的大小(r= 0.299,p < 0.002)。然而,这些线性相关性肿瘤的时候被细分为三个子组根据MSI的水平。
串行部分的微卫星instability-low (MSI-L)癌症(a)常规苏木精和伊红染色和(B)染色M30 cytoDEATH抗体特定于上皮细胞的凋亡。棕色的胞质染色表明许多肿瘤细胞凋亡存在于这个领域(原始放大×120)。
分布的细胞凋亡在结肠直肠癌的DNA微卫星不稳定性(微卫星instability-high (MSI-H),微卫星instability-low (MSI-L)和微卫星稳定(MSS))
分化良好的串行部分结直肠癌沾anti-CD3 (a)和(B) M30 CytoDEATH抗体。注意,只有一个细胞凋亡存在于这个区域密集渗透与肿瘤浸润淋巴细胞(原始放大×120)。
的例子M30 CytoDEATH和CD3双重染色,与甲基绿复染色。棕色的DAB染色表明M30+肿瘤细胞凋亡(箭头)和VIP染色揭示了CD3紫色向量+T细胞在肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)积极的微卫星instability-high (MSI-H)癌症。请注意,M30+肿瘤细胞和CD3+尖不一致(原始放大×120)。
我们也探讨凋亡水平和突变之间的关系p53K拉伯灵顿基因,以及p53、bcl - 2蛋白表达。在以前分析了K - 79肿瘤拉状态在这个实验室,3有一个细胞凋亡的减少趋势(p = 0.135),与窝藏突变的K - 19肿瘤拉证明平均凋亡分数1.56%与野生型K - 60肿瘤的2.51%拉。在本系列的81肿瘤从之前的分析p53突变,6之间不存在显著相关p53状态和细胞凋亡,与42野生型和突变p53癌症有类似意味着细胞凋亡分数(2.39%v分别为2.20%)。然而,在突变型p53蛋白的表达,通过免疫组织化学方法确定之前,1885年与低水平的细胞凋亡相关肿瘤从这个系列(p = 0.041)。bcl - 2蛋白表达也评估了65年以前肿瘤从当前系列。18当不存在相关性随机细胞凋亡数量比较在bcl - 2表达(p = 0.618)。最后,伯灵顿状态评估在32 MSI-H本系列的癌症,如前所述。616个肿瘤的凋亡指数与插入或删除polyG束伯灵顿基因(3.78%)被类似于16肿瘤没有伯灵顿变异(3.32%)(p = 0.361)。
讨论
现在有大量的证据表明,显示了明显的表型和基因型差异直肠癌,MSI与海量存储系统(MSS)中。2 - 10然而,在低分化肿瘤MSI-H组的代表一直难以合理化与这些肿瘤的预后更好的系列报道。5,10,11的一个主要表型特性可能会提供一些解释更好的预后是一个重要的存在淋巴细胞浸润在MSI癌症。从这个实验室的研究表明,33%的MSI-H癌症有显著的淋巴细胞浸润。2然而,目前的研究清楚地表明,免疫组织化学评估尖明显比以前更敏感基于形态学的研究方法分析常规苏木精和伊红染色。Anti-CD3染色确定数字直到积极的癌症2-5-fold高于被眼睛评估2和一个梯度的存在直到MSI-H之间的渗透,MSI-L, MSS癌症。尖的数量确定在MSI-H癌症(平均6.8%)类似于IEL的比值在正常结肠粘膜上皮细胞(5 IEL: 100上皮细胞),并显著大于在MSI-L直到号码(3.6%)和MSS(2.5%)子组。我们还发现,75 - 80%的CD3尖+/ CD8+T淋巴细胞,符合结肠上皮内起源和Dolcetti和他的同事们发现的。12剩下的20 - 25%的CD3+CD8−最有可能CD4尖+CD8 T细胞,相似:CD4比率在肿瘤中发现正常的人类肠道IEL数量。16,19
淋巴细胞浸润的出现了进一步的详细分析上皮/肿瘤细胞凋亡,使用M30 CytoDEATH抗体。凋亡数量显著增加(p < 0.0001) MSI-H癌症(3.55(1.99)%)比在海量存储系统(MSS)中癌症(1.53 (1.47)%)。MSI-L子群有中级水平的细胞凋亡(2.52 (1.92)%)。的存在更高的尖的数量和更高的凋亡指数MSI-H癌症也证明了Dolcetti和同事。12然而,他们进一步观察显示CD8的亲密并置+直到,TUNEL阳性的上皮细胞在统计学上不支持任何线性相关性的研究。在我们大系列的零星的癌症,有弱到中度总CD3显著相关性+尖和M30+随机细胞凋亡的分数(r与CD8 = 0.347)+:M30+相关的类似的大小(r= 0.299)。这显著相关性时失去了个人团体是由微卫星分析分层状态。此外,直到之间发现了细胞凋亡的差异不显著+,直到−癌症的整体(3.0 (2.0)%v分别为2.1(1.8)%)或在MSI子组。尤其是在MSI-H癌症被发现直到没有区别+,直到−细胞凋亡的分数为3.6(2.0)%和3.4(2.1)%,分别。此外,单独的肿瘤,区域内的尖和凋亡似乎并不一致。总的来说,这些结果表明,增强细胞凋亡水平MSI-H癌症在本质上是自发的。
结果公布之前从这个实验室微卫星地位和频率之间的关系p53K -拉伯灵顿突变,使用一系列类似的结肠直肠癌,表明p53和K -拉突变通常是发现在海量存储系统(MSS)中,MSI-L癌症但是很少MSI-H癌症。3,6虽然这些结果似乎是一个合理的解释MSI-H凋亡率的差异,MSI-L, MSS子组,在这项研究中没有发现显著相关性之间直到状态或凋亡数和K -的存在与否拉突变。正如所料,这一趋势接近意义直到之间被发现+癌症和野生型p53(p = 0.143),因为这两个是MSI-H癌症的特性。然而,没有明显的存在之间的相关性被发现p53突变和肿瘤细胞凋亡,但可以预料,p53的表达增加,表明突变型p53蛋白的稳定,与细胞凋亡分数负相关(p = 0.041)。
相比之下,p53和K -拉,伯灵顿突变被发现在50%的MSI-H但在海量存储系统(MSS)中只有2%的癌症。6鉴于伯灵顿移码突变通常导致proapoptotic蛋白质的失活,7有人可能认为这些肿瘤凋亡率降低。令人惊讶的是,我们发现没有显著相关性肿瘤的凋亡指数和伯灵顿状态用于这项研究。因此,我们的数据表明,细胞凋亡在MSI-H癌症似乎是独立的伯灵顿的表情。此外,没有发现显著相关bcl - 2的表达与凋亡指数,尽管我们曾表明,结肠直肠癌bcl - 2表达凋亡蛋白更容易海量存储系统(MSS)中。18伯灵顿和Bcl缺乏相关性- - - - - -2状态可能进一步间接证据表明,凋亡率更高MSI-H癌症相关部分高尖的数量。
先前的研究凋亡指数(表示为一个百分比的总上皮细胞数,在这项研究中)使用标准的苏木精和伊红染色或TUNEL。前方法可能产生不当低利率由于缺乏敏感性,Sinicrope的研究证明等发现平均凋亡指数的1.2%。20.这项研究没有控制微卫星状态。凋亡数量发现与TUNEL越高可能与缺乏特异性的方法(染色有丝分裂和细胞坏死),而其他潜在的缺点包括需要双重染色和缺乏敏感性的早期细胞凋亡与M30 CytoDEATH抗体。12,17,21,22在这些研究中使用TUNEL,而不是评估MSI,整个凋亡指数介于0.95%和3.1%之间23,24而在其他研究中微卫星状态控制,Dolcetti等MSI-H组发现的凋亡指数4.1%和1.53%在海量存储系统(MSS)中。12在相同的研究中,MSI-L没有评估,作者承认一些“正常”的原子核与TUNEL染色。这不是观察M30抗体。
有趣的是,在正常结肠右结肠的凋亡率小于左结肠(1.2%v2.2%)使用TUNEL技术。25我们的研究表明,大多数MSI-H癌症进行细胞凋亡率大约三倍的正常上皮细胞,而大多数的海量存储系统(MSS)中癌症显示细胞凋亡的减少0.7倍。我们分析这个进一步通过检查所有癌症细胞凋亡在基于位置(右v左)。这显示意义的趋势(p = 0.089),但深受MSI-H癌症的数量在右边(28/32)。进一步比较各MSI-L凋亡指数,MSS癌症(21站,48左站)显示没有差别(p = 0.620)基于位置。与其他研究的建议相一致,12,25我们的研究排除了可能性较高的细胞凋亡率MSI-H癌症是由于他们近端位置,相反,增加凋亡指数似乎与高水平的DNA微卫星不稳定性在MSI-H癌症。
重要的是,我们的研究结果首次证明,在最好的情况下,频率的增加尖与MSI-H癌症只能部分解释在这些肿瘤凋亡数量更高。凋亡数和胡麻+表现型MSI-H状态密切相关,不解释肿瘤的位置。更好的预后契合上述发现。然而,这并不能解释为什么30%的MSI-L癌症的特点是尖和一个中间凋亡率的存在,但是没有生存优势已经记录了这个小组。凋亡率之间的相关性,直到计数,和K -拉状态在这些子组可能是有用的,但有限的数字在这个研究。
总之,本研究表明,尖是一个有用的MSI-H癌症生物标志物但尖和肿瘤细胞凋亡只是weak-moderately相关。而尖可能解释的凋亡率增加和改善预后MSI-H癌症,很可能尖MSI-H癌症和细胞凋亡是独立的特征。
确认
我们感谢埃斯特尔Schoch女士和奈杰尔Misso先生,技术专长,女士吧Pandeya与统计分析,寻求帮助和粘土Winterford先生优秀摄影再生产。我们也感谢普通外科医生和教授杰弗里·塞尔(皇家布里斯班医院病理学系)协助收集肿瘤。这个项目得到了皇家布里斯班昆士兰癌症医院研究基金会和资助基金。
略语
- 儿童权利公约
- 结肠直肠癌
- MSI
- 微卫星不稳定
- 海量存储系统(MSS)中
- 微卫星稳定
- MSI-L
- MSI-low
- MSI-H
- MSI-high
- 尖
- 肿瘤浸润淋巴细胞
- TBS
- 三羟甲基氨基甲烷缓冲液盐
- 轻拍
- 3、3′-diaminobenzidine
- IEL
- 上皮内淋巴细胞