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腹腔疾病
FAS订婚驱动器腹腔患者的肠上皮细胞的凋亡
免费的
  1. L Maiuri一个,b,
  2. C Ciaccic,
  3. V Raia一个,b,
  4. L Vacca一个,b,
  5. 我Ricciardelli一个,b,
  6. F Raimondi一个,
  7. 年代Auricchio一个,b,
  8. 年代Quaratinod,
  9. M Londeib,d
  1. 一个大学儿科学系费德里科•II,那不勒斯,意大利,b欧洲实验室调查食物引起的疾病,那不勒斯,意大利,c大学胃肠病学部门费德里科•II,那不勒斯,意大利,d肯尼迪学院的风湿病学部门,英国伦敦帝国理工学院医学院
  1. 肯尼迪教授M Londei,风湿病研究所部门1 Aspenlea Rd,英国伦敦将8 lh。m.londei在{}ic.ac.uk

文摘

背景绒毛萎缩是最独特的未经处理的腹腔疾病的迹象(CD)和上皮细胞凋亡被认为是参与这一阶段的腹腔病变。然而,绒毛萎缩的程度不均匀,片状或轻微病变患者已被描述。

的目标是地址:(一)未经处理的CD患者“破碎”的程度;和(b)澄清如果细胞凋亡,最终触发驱动它,导致上皮损伤。

病人20 40治疗,14治疗腹腔患者和15控制收到了5个或5个以上多个十二指肠活检;剩下的20治疗CD患者不超过三个活检。

方法所有切片进行分析监控的“平”粘膜。活检14治疗,10治疗腹腔,七个控制培养有或没有麦胶蛋白。DNA碎片的研究是通过末端转移酶(TdT)介导的dUTP digoxigenin尼克•结束标签(TUNEL)和FAS Ki67通过免疫组织化学表达。Antiendomysium抗体(EMA)调查活检文化上层清液。

结果片状十二指肠病变观察的模式在所有治疗CD患者活检5倍。肠上皮细胞FAS表达高,大量的TUNEL +和Ki67 +肠上皮细胞被发现在绒毛萎缩的地区而不是那些正常的形态(p < 0.001)。相反,EMA在文化上层清液和免疫激活的迹象出现在所有治疗CD活检。体外麦胶蛋白挑战TUNEL +和Ki67 +肠上皮细胞的数量增加(p < 0.001)v文化与媒介单独)只有在“平”活检。中和anti-FAS单克隆抗体被发现控制醇溶蛋白诱导肠上皮细胞凋亡(p > 0.01),而受体激动剂anti-FAS单克隆抗体增加(p < 0.001)。

结论片状病变观察在治疗CD粘膜和上皮FAS参与是一个关键的触发器在CD驱动绒毛萎缩。

  • 细胞凋亡
  • FAS
  • 肠上皮细胞
  • 腹腔疾病

  • 略语

    CD
    腹腔疾病
    教育津贴
    肌内膜抗体
    马伯
    单克隆抗体
    搞笑
    免疫球蛋白
    PT
    peptic-tryptic
    TUNEL
    末端转移酶(TdT)介导的dUTP digoxigenin尼克结束标签
    IEL
    上皮内淋巴细胞

    • http://dx.doi.org/10.1136/gut.48.3.418

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      腹腔病(CD)是一种常见的,到目前为止,在诊断小肠疾病的特点是肌内膜抗体的存在(EMA)在未经处理的CD患者的血清。1 - 3三个主要的小肠黏膜的组织学特性治疗乳糜泻患者:醇溶蛋白依赖应该致病性T细胞的活化;T淋巴细胞上皮内渗透;和地下室增生绒毛萎缩。2后者,“平”的粘膜,可能是最典型的特点CD虽然不能被视为孤立的但在更广泛的背景下小肠的改造过程。1 - 4现在承认CD患者不仅限于严重肠病,但也适用于较小的病变,患者“支离破碎”病变有时被观察到的地方。5,6片状十二指肠病变的证据在同一个CD患者提供了一个有趣的描述性研究粘膜损伤的CD,但解释了这些意外的发现仍然是等待。这里,我们分析了一个更大的样本的CD患者由多个内镜活检全面评估的程度参差不齐病变概要文件并解开的奥秘控制感应扁平粘膜。

      之前就有报道称,多数肠上皮细胞的DNA碎片是观察治疗CD肠谷蛋白撤军后,恢复正常的配置文件。7细胞凋亡研究最多的途径之一是通过FAS接触,“死亡”的原型受体广泛表达的许多细胞类型8我们最近报道中迅速调节治疗腹腔十二指肠与醇溶蛋白在体外的挑战。9

      分析片状病变在腹腔十二指肠代表一个理想的工具,阐明FAS表达之间的相关性,肠上皮细胞凋亡,隐窝上皮增生,绒毛萎缩。此外,使用腹腔十二指肠外植体的器官培养模型,卖地我们测试了FAS的真正角色参与驾驶上皮细胞凋亡和绒毛压扁在CD使用受体激动剂或拮抗剂anti-FAS单克隆抗体(mab)。

      我们的研究表明一个明确的相关性绒毛压扁,肠上皮细胞FAS表达,细胞凋亡,隐窝细胞增殖存在于腹腔十二指肠。此外,我们的数据清楚地表明,FAS接触中扮演着重要角色在诱导上皮损伤和片状病变和正常的组织学之间的区别是缺乏FAS的表情。因此我们的研究可能有助于理解的精确感应的损害之间存在相关性,改造过程中观察到CD。

      方法

      病人

      四十治疗CD患者(平均年龄31.2岁,范围3-54)接受十二指肠内窥镜检查和活检诊断的目的。在所有患者血清anti-EMA被检测到。二十个病人经历了不到三活组织检查所有常规组织学检查显示绒毛萎缩。另外20名患者接受了至少五个活组织检查,检查立即在解剖显微镜。在12的20名患者第一个样本分析显示绒毛压扁而在8个病人第一个示例显示明显的正常绒毛。分析所有片段的解剖显微镜获得的多个内镜活检显示不完整的十二指肠损伤的各种延伸沿各20例十二指肠绒毛萎缩。对于每一个病人,一个片段绒毛压扁,一个样本明显正常绒毛被嵌入到10月,用于组织学分析确认外观解剖显微镜观察到。另一个片段(与绒毛萎缩或正常绒毛)被分成两部分,并且培养如下所述。

      十四的未经治疗的患者(平均年龄(范围)37.3(21-53)年)后进行严格的无谷蛋白饮食跨越一段至少12个月时rebiopsied(称为CD患者治疗)。都是EMA -第二个活检的时候。

      15 non-CD患者(平均年龄(范围)31.1(14-60)年),接受十二指肠内窥镜由于食管炎(n = 5),胃炎(n = 5),或慢性非特异性腹泻(n = 5)有多个活检。活组织检查,所有片段显示正常绒毛架构在解剖显微镜以及组织学分析。知情同意是获得所有CD患者和控制。

      体外器官培养研究

      十二指肠外植体从十二指肠绒毛萎缩的地区从10治疗CD患者体外培养9 - 11的存在与否peptic-tryptic (PT)醇溶蛋白消化(1毫克/毫升)有或没有中和anti-FAS (M3)马伯(7例)(美国西雅图Immunex集团5μg /毫升),14和/或与玉米消化(1毫克/毫升)(3例)。体外文化与媒介一起兴奋剂anti-FAS CH-11马伯(美国加州beckman coulter Inc .)、沥青)也表现在四种情况下:anti-FAS CH-11马伯用于一系列浓度(5μg 100 ng / ml),这种抗体从来没有在这些实验条件下使用。中和anti-FAS M38马伯也测试了三个文化和获得的结果与那些使用中和anti-FAS M3马伯,控制抗体anti-CD80(5μg /毫升)(4例)或反乳糖酶马伯mlac1(5μg /毫升)15(4例)以及CTLA4-immunoglobulin (Ig)(美国剑桥遗传研究所公司)(5例)9也添加到麦胶蛋白。

      十二指肠外植体从十二指肠地区正常绒毛架构从四个治疗乳糜泻患者培养存在与否的PT麦胶蛋白消化(1毫克/毫升)或兴奋剂anti-FAS CH-11马伯,

      十二指肠外植体从10治疗乳糜泻患者体外培养24小时9 - 11的培养基有或没有的PT消化醇溶蛋白(1毫克/毫升)(在所有情况下)和玉米醇溶谷蛋白肽(1毫克/毫升)(6例)或兴奋剂anti-FAS CH-11马伯(4例)。在7个控制,体外培养有或没有PT麦胶蛋白消化(1毫克/毫升)进行;在3例受体激动剂anti-FAS CH-11马伯也测试了。

      检测的DNA碎片

      DNA分裂组织部分化验在所有患者如前所报道16由末端转移酶(TdT)介导的dUTP digoxigenin尼克结束标签(TUNEL)。CD学科与片状病变,DNA碎片是在样品评估绒毛萎缩以及那些正常粘膜的架构。特异性控制实验进行之前报道。16

      两个颜色免疫荧光被用来确定凋亡细胞T细胞或上皮细胞。实验是由发展与phycoeritrin TUNEL反应(RPE)共轭antidigoxigenin马伯(勃,曼海姆,德国)和同时孵化组织部分anti-CD3马伯(1:10 0;Dako丹麦哥本哈根),其次是FITC共轭antimouse搞笑(1:30;Dako)。

      免疫组织化学

      抗原检测在冰冻组织切片是由免疫组织化学之前报道5,9,10与马伯anti-Ki67 (1:25;Dako)或CD3 (1:10 0;Dako), anti-FAS (M3和M38)(鼠标IgG1, 1:30;Immunex Corp .)、CD25 (1:30;Dako)和ICAM1 (1:400;509年伊伦患者通过过氧化物酶或碱性磷酸酶染色技术根据先前所描述的方法。9Anti-FAS-ligand马伯(A11和H11鼠生物素化的搞笑一60;美国加州圣地亚哥Alexis-Corporation)被用来检测FAS-ligand表达式从CD患者活检。抗体是观想使用前所述后过氧化物酶染色技术的方法。9数量的上皮内淋巴细胞(IEL)算作CD3 +细胞/ 100肠上皮细胞10和Ki67 +肠上皮细胞地穴肠上皮细胞的百分比。上皮细胞的染色anti-FAS马伯任意分级从0到+ 2,根据染色强度在70%以上的细胞(察觉= 0,低= 1 +,强烈= 2 +)。指南建立了评分系统的研究和四个独立观察人士分析样品;结果进行了比较。

      至少五个幻灯片为每个样本都盲目地评估。特异性控制实验进行对不当使用鼠标免疫球蛋白或IgM血型抗原,同时分析不同培养样本属于同一个人。

      检测EMA在上层的文化

      EMA的上层清液中发现文化培养的未经处理的CD活检(10从区域与绒毛萎缩和四个地区的正常组织学)与中独自孵化后,按照前面描述的方法。11

      统计分析

      每个类别的样本进行比较。学生的t测试成对样品被用来区分治疗CD肠TUNEL +肠上皮细胞和Ki67 +肠上皮细胞与媒介的挑战后,与媒介与醇溶蛋白补充,或醇溶蛋白与马伯补充。非参数测试(Wilcoxon测试)也被应用,获得的结果与使用参数测试。费舍尔的测试是用来比较组织察觉或低FAS表达(0到1 +)与显示强烈的(2 +)表达式。费雪的测试是用来比较FAS表达组织标本后醇溶蛋白的挑战与挑战中孤独。

      结果

      的粘膜病变经常观察到治疗CD十二指肠

      在所有样品中,十二指肠粘膜发现用解剖显微镜获得经组织学分析。20治疗CD活检中,超过5多个切片,我们观察到的平面面积对应在所有情况下绒毛萎缩和地下室增生,并在18/20样品IEL数量增加(以上肠上皮细胞40/100)被检测到。好代表绒毛用解剖显微镜观测与正常绒毛长度与绒毛高度/隐窝深度比高于3,17和IEL数量大于40/100肠上皮细胞是只有13/20的样品中发现的。在所有治疗CD样本,不管粘膜损伤,免疫激活的共同特征9,10固有层中被发现(CD25 +和ICAM1 +细胞在固有层高于均值+ 3的控制SD值),我们之前报道的5(表1)。

      把这个表:
      表1

      总体表示粘膜的特点表现在腹腔疾病(CD)和控制

      在肠上皮细胞DNA碎片,Ki67和FAS表达与粘膜病变

      未经处理的CD和样品绒毛萎缩

      与绒毛萎缩治疗CD活检样本,TUNEL积极性增加与控制(p < 0.0001)(图1),在隐窝Ki67强烈的表达增强,与之前的报道相一致3,7(p < 0.0001v控制)(图1B)。几乎没有CD3 +细胞TUNEL染色阳性,表明凋亡细胞上皮。有趣的是,一些TUNEL阳性(红色)上皮细胞并不靠近CD3 +(绿色)(图1C)。这一发现可能表明并不是所有上皮浸润FAS-ligand积极IEL引起死亡和其他机制可能涉及,目前虽然没有可以得出明确的结论。强烈的FAS表达(2 +)表面和墓穴肠上皮细胞被发现在16/20样品。FAS表达在这些样本中检测出绝大多数(70%以上)的肠上皮细胞(v0/15的控制;p < 0.01)(表1)。

      DNA fragmentation and Ki67 expression in coeliac disease (CD) and control intestine. (A) DNA fragmentation in enterocytes of CD and control intestine. (B) Expression of Ki67 in crypt enterocytes of CD and control intestine (mean (SD)). Untreated CD, untreated biopsies with patchy mucosal lesions (n=20); treated CD, treated biopsies (n=14); controls, biopsies from non-coeliac patients with a normal villus architecture (n=15). ***p<0.0001 v treated CD and controls. (C) Pattern of intraepithelial DNA fragmentation in untreated CD duodenum. DNA fragmentation (TUNEL technique, red colour) is absent in the nucleus of all intraepithelial lymphocytes (CD3, green colour), while it is detected in the majority of enterocytes. Original magnification ×240. Two colour immunofluorescence: TUNEL technique, RPE labelling (red); immunohistochemistry, CD3 labelling (green) (see methods).
      " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图1
      DNA fragmentation and Ki67 expression in coeliac disease (CD) and control intestine. (A) DNA fragmentation in enterocytes of CD and control intestine. (B) Expression of Ki67 in crypt enterocytes of CD and control intestine (mean (SD)). Untreated CD, untreated biopsies with patchy mucosal lesions (n=20); treated CD, treated biopsies (n=14); controls, biopsies from non-coeliac patients with a normal villus architecture (n=15). ***p<0.0001 v treated CD and controls. (C) Pattern of intraepithelial DNA fragmentation in untreated CD duodenum. DNA fragmentation (TUNEL technique, red colour) is absent in the nucleus of all intraepithelial lymphocytes (CD3, green colour), while it is detected in the majority of enterocytes. Original magnification ×240. Two colour immunofluorescence: TUNEL technique, RPE labelling (red); immunohistochemistry, CD3 labelling (green) (see methods).
      " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图1
      图1

      DNA碎片和Ki67表达在腹腔疾病(CD)和控制肠。(一)DNA碎片在CD和控制肠肠上皮细胞。(B)表达式Ki67的地穴肠上皮细胞的CD和控制肠(平均(SD))。未经处理的CD,未经处理的和不完整的粘膜病变活检(n = 20);治疗治疗CD,活检(n = 14);控制,从non-coeliac活检患者正常绒毛架构(n = 15)。* * * p < 0.0001 v治疗CD和控制。(C)的上皮内DNA碎片在未经处理的模式CD十二指肠。DNA碎片(TUNEL技术,红色)缺席在细胞核的上皮内淋巴细胞(CD3、绿颜色),当它发现在大多数肠上皮细胞。原来放大×240。 Two colour immunofluorescence: TUNEL technique, RPE labelling (red); immunohistochemistry, CD3 labelling (green) (see methods).

      FAS-ligand表达式中检测出IEL(50%以上)4治疗CD活检与绒毛萎缩(数据没有显示)。有趣的是,FAS-ligand的模式表达式被维亚德高度的描述等莱伊尔氏综合征患者。18

      未经处理的CD样本与正常形态

      在所有治疗CD样本与正常粘膜结构,DNA碎片(图的模式1(图)和Ki67抗原表达1B)控制相似(p > 0.5)。此外,高FAS表达中没有任何的8例(p > 0.5v控制)。在一些情况下,我们发现急剧变化的FAS表达平面之间的边界(高)和正常(低)地区(图2)。

      FAS expression in untreated coeliac disease (CD) duodenum. A marked change in expression of FAS is observed at the border between regions with normal villus architecture (low expression; left side) and those with villus atrophy (very high expression; right side). Original magnification ×150; immunohistochemistry, peroxidase staining technique.
      " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图2
      图2

      FAS表达治疗腹腔疾病(CD)十二指肠。FAS表达显著变化是观察到边境地区与正常绒毛架构(低表达;左侧)和绒毛萎缩(非常高表达;右侧)。原来放大×150;免疫组织化学,过氧化物酶染色技术。

      FAS-ligand表达治疗CD肠道正常绒毛结构类似于发现在未经处理的CD绒毛萎缩(表1)。

      治疗CD样品

      在所有治疗CD样本DNA碎片(图的模式1(图)和Ki67抗原表达1B)类似于观察控制(p > 0.5)。观察高肠上皮细胞FAS表达只在1/14例(p > 0.5v控制)。在这些样品没有证据表明免疫激活观察(表1),如之前报道。5IEL治疗CD和控制几乎所有FAS-ligand负(表1)。

      机关文化研究

      在未经处理的CD与绒毛活检萎缩,醇溶蛋白诱导肠上皮细胞凋亡的增加通过FAS相关的通路

      FAS表达增加肠上皮细胞并不自动意味着FAS参与驾驶上皮细胞凋亡的关键。我们使用离体培养研究来验证FAS表达是否可以交付功能的信号。

      7与绒毛萎缩的治疗CD样品中FAS表达强烈的体外操作之前,24小时麦胶蛋白引起的挑战TUNEL阳性肠上皮细胞的数量增加和单独的剖面观察与媒介相比(p < 0.001)(图3)。表达式仅Ki67孵化后明显降低了介质(p < 0.0001),而醇溶蛋白持续Ki67表达观察体外操作前(p > 0.5)(图3B)。

      In vitro organ culture of untreated coeliac disease (CD) intestine with villus atrophy: DNA fragmentation and Ki67 expression after 24 hour challenge with medium or gliadin. Effect of neutralising anti-FAS M3 or agonist anti-FAS CH-11 monoclonal antibodies (mAbs) on enterocyte apoptosis. (A) DNA fragmentation and (B) Ki67 expression before and after in vitro culture. Untreated CD samples with villus atrophy before in vitro culture (n=7) and after 24 hour challenge with medium alone (n=7), gliadin (n=7), gliadin supplemented with anti-FAS M3 mAb (n=7), or medium supplemented with anti-FAS CH-11 mAb (n=4). The number of TUNEL+ enterocytes (mean (SD)) are given as percentage of both surface and crypt enterocytes and Ki67+ enterocytes (mean (SD)) as percentage of crypt enterocytes. ***p<0.001 v samples after 24 hour challenge with medium alone; †††p=0.001 v samples after 24 hour gliadin challenge. (C) Pattern of DNA fragmentation after 24 hour gliadin challenge. Note that the majority of enterocytes are TUNEL+; staining is also evident in many lamina propria mononuclear cells. (D) Pattern of DNA fragmentation after 24 hours of in vitro challenge with gliadin supplemented with neutralising anti-FAS M3 mAb. The number of TUNEL+ enterocytes is decreased compared with the pattern observed after gliadin challenge. (E) Pattern of DNA fragmentation after 24 hours of in vitro challenge with medium supplemented with agonist CH-11 anti-FAS mAb. A marked increase in the number of TUNEL+ enterocytes with derangement of epithelial architecture is evident. Original magnification: C, D and E (×180); TUNEL technique, peroxidase staining.
      " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图3
      In vitro organ culture of untreated coeliac disease (CD) intestine with villus atrophy: DNA fragmentation and Ki67 expression after 24 hour challenge with medium or gliadin. Effect of neutralising anti-FAS M3 or agonist anti-FAS CH-11 monoclonal antibodies (mAbs) on enterocyte apoptosis. (A) DNA fragmentation and (B) Ki67 expression before and after in vitro culture. Untreated CD samples with villus atrophy before in vitro culture (n=7) and after 24 hour challenge with medium alone (n=7), gliadin (n=7), gliadin supplemented with anti-FAS M3 mAb (n=7), or medium supplemented with anti-FAS CH-11 mAb (n=4). The number of TUNEL+ enterocytes (mean (SD)) are given as percentage of both surface and crypt enterocytes and Ki67+ enterocytes (mean (SD)) as percentage of crypt enterocytes. ***p<0.001 v samples after 24 hour challenge with medium alone; †††p=0.001 v samples after 24 hour gliadin challenge. (C) Pattern of DNA fragmentation after 24 hour gliadin challenge. Note that the majority of enterocytes are TUNEL+; staining is also evident in many lamina propria mononuclear cells. (D) Pattern of DNA fragmentation after 24 hours of in vitro challenge with gliadin supplemented with neutralising anti-FAS M3 mAb. The number of TUNEL+ enterocytes is decreased compared with the pattern observed after gliadin challenge. (E) Pattern of DNA fragmentation after 24 hours of in vitro challenge with medium supplemented with agonist CH-11 anti-FAS mAb. A marked increase in the number of TUNEL+ enterocytes with derangement of epithelial architecture is evident. Original magnification: C, D and E (×180); TUNEL technique, peroxidase staining.
      " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图3
      图3

      体外器官培养的腹腔疾病(CD)肠道绒毛萎缩:DNA碎片和Ki67表达式后24小时挑战与介质或醇溶蛋白。影响中和anti-FAS M3受体激动剂或anti-FAS CH-11单克隆抗体(mab)肠上皮细胞凋亡。(一)DNA碎片和(B) Ki67前后体外表达文化。未经处理的CD和样品绒毛萎缩在体外培养(n = 7)和24小时后的挑战与介质(n = 7),醇溶蛋白(n = 7),醇溶蛋白补充anti-FAS M3马伯(n = 7),或中等补充anti-FAS CH-11马伯(n = 4)。TUNEL +肠上皮细胞的数量(平均(SD))给出的表面和地下室肠上皮细胞和Ki67 +肠上皮细胞(平均(SD))地穴肠上皮细胞的百分比。* * * p < 0.001 v样品24小时后单独挑战介质;†††p = 0.001 v样品后24小时麦胶蛋白的挑战。(C)模式的DNA碎片后24小时麦胶蛋白的挑战。注意,大多数的肠上皮细胞TUNEL +;染色同样明显的是在许多固有层单核细胞。 (D) Pattern of DNA fragmentation after 24 hours of in vitro challenge with gliadin supplemented with neutralising anti-FAS M3 mAb. The number of TUNEL+ enterocytes is decreased compared with the pattern observed after gliadin challenge. (E) Pattern of DNA fragmentation after 24 hours of in vitro challenge with medium supplemented with agonist CH-11 anti-FAS mAb. A marked increase in the number of TUNEL+ enterocytes with derangement of epithelial architecture is evident. Original magnification: C, D and E (×180); TUNEL technique, peroxidase staining.

      中和抗体anti-FAS都有效地减少TUNEL +肠上皮细胞的数量与剖面观察体外孵化后醇溶蛋白(p < 0.001)(图3A, C, D),而他们未能控制Ki67表达式(数据未显示)。没有观察到的保护作用与反孵化后乳糖酶mlac115或anti-CD80马伯,承担相同的同形像中和anti-FAS抗体在四个测试用例(p > 0.5)(图3培养的)。在五未经处理的CD与绒毛活检萎缩,CTLA4-Ig,强大的T细胞激活和特定抑制剂,19无法控制醇溶蛋白诱导肠上皮细胞的DNA碎片增加(p > 0.5)(无花果吗3)。然而,CTLA-4Ig下调粘膜免疫激活的模式(数据未显示)表明其疗效在控制immunomediated麦胶蛋白诱导激活。在四个培养未经处理的CD和样品绒毛萎缩,兴奋剂CH-11 anti-FAS马伯诱导显著增加TUNEL +肠上皮细胞和粘膜的错乱架构(图(p < 0.001)3A, E)虽然没有增加Ki67表达式(数据未显示)(表2)。

      把这个表:
      表2

      整体表现的特点小肠粘膜表现在机关文化的腹腔疾病(CD)患者和控制

      在未经处理的CD与正常绒毛活检体系结构中,肠上皮细胞低FAS表达无法启动凋亡计划

      的四个培养治疗CD样本与正常绒毛结构,在这种结构中,FAS表达很低,没有离体培养之前,触发的FAS受体受体激动剂CH-11 anti-FAS马伯没有有效地诱导肠上皮细胞凋亡(p > 0.5v文化与媒介单独)(无花果4A)。一个24小时麦胶蛋白的挑战同样无法增加TUNEL +肠上皮细胞的数量(无花果4)或增加Ki67表达式在隐窝(无花果4B) (p > 0.5v文化与媒介本身)。此外,在这些活组织检查,没有增加肠上皮细胞的表达FAS受体是醇溶蛋白引起的挑战在任何的四个培养活检(p > 0.5v文化与媒介)(表2)。

      In vitro organ culture of untreated coeliac disease (CD) intestine with normal villus architecture. DNA fragmentation (A) and Ki67 expression (B) (mean (SD)) after 24 hour challenge with medium or gliadin and effect of agonist anti-FAS CH-11 mAb on enterocyte apoptosis
      " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图4
      图4

      体外器官培养的腹腔疾病(CD)肠道正常绒毛架构。DNA碎片(A)和Ki67表达式(B)(平均(SD))后24小时挑战与介质或醇溶蛋白和受体激动剂效果anti-FAS CH-11马伯在肠上皮细胞凋亡

      未经处理的CD活检释放EMA在文化上层清液不管十二指肠形态

      在所有与绒毛萎缩的治疗CD样品,分析文化上层清液11EMA在缺乏自发透露的醇溶蛋白刺激,依照先前的报告。11,20.有趣的是,自发释放EMA上层清液中检测出文化甚至在所有四个培养未经处理的架构(表与正常粘膜活检2)。

      在治疗CD样本,醇溶蛋白诱发FAS表达在肠上皮细胞

      在所有10个培养治疗CD样本,24小时麦胶蛋白的挑战是无法增加TUNEL +或Ki67 +肠上皮细胞的数量(数据未显示)时有效地增强肠上皮细胞FAS表达7/10例(p < 0.01),作为以前的报告中描述9(图5A-5C)(表2)。

      In vitro organ culture of treated coeliac disease (CD) intestine: effect of 24 hour gliadin challenge on enterocyte expression of FAS. (A) FAS expression after 24 hour challenge with medium alone. Faint staining is observed on cell membranes of some enterocytes. (B) FAS expression after 24 hour challenge with gliadin. Intense FAS expression is evident on the cell membranes of the majority of enterocytes and in some lamina propria mononuclear cells. (C) FAS expression after 24 hour challenge with gliadin: high magnification. Staining is evident on the basolateral membranes of the enterocytes. Original magnification: A, B (×160); C (×240); immunohistochemistry, peroxidase staining technique.
      " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图5
      图5

      体外器官培养的腹腔疾病治疗(CD)肠:24小时的醇溶蛋白对FAS的肠上皮细胞表达。(A) FAS表达后24小时挑战中孤独。微弱的染色观察到在某些肠上皮细胞的细胞膜。(B) FAS表达后24小时与醇溶蛋白的挑战。强烈的FAS表达明显多数肠上皮细胞的细胞膜和在某些固有层单核细胞。(C) FAS表达后24小时与醇溶蛋白的挑战:高放大。染色在肠上皮细胞的基底外侧膜也很明显。原来放大:A、B (×160);C (×240);免疫组织化学,过氧化物酶染色技术。

      讨论

      复杂的模式的事件控制CD的粘膜表现的演变,它的特点是清晰的粘膜损伤的迹象和伴随的组织改造的特点。1 - 4这种破坏性的最终结果/改造活动被认为是一个均匀分布的“平”粘膜的整体提升整个粘膜隐窝扩大。2这种病态模式通常被认为是由麦胶蛋白的免疫识别。21然而,承认片状病变观察到在某些病人腹腔5,6但比例不协调的模式不明确和被认为是罕见的。这项研究提供了一些重要的结果和澄清一些CD的致病特点。在第一个实例中,我们观察到的未经处理的CD粘膜病变经常观察到,他们在治疗CD十二指肠也不例外。这可能有重要的临床意义,CD的诊断仍然是基于小肠组织学广泛。2我们发现补缀的性质并不少见,在未经处理的CD,相反很频繁,因此有些病人可能错误地诊断为没有CD。

      对上皮的致病因素控制感应阶段,“平”补丁提供清晰的上皮细胞凋亡和增殖的迹象,所观察到的,3,7高表达的FAS,原位免疫激活的证据,5和自发释放教育津贴。11,20.补丁与“正常”的结构分析表明,没有迹象表明上皮参与(增殖、凋亡或FAS表达),而免疫激活和EMA生产治疗CD患者中发现。11,20.因此我们有一个明显的免疫激活和粘膜损伤之间缺乏联系。因此这些结果表明,CD的上皮阶段有一个显然更复杂的感应机制,它可能不是完全由麦胶蛋白的免疫识别。FAS的表情似乎描述“平”区域的补丁和更重要的是,FAS订婚有关键作用诱导粘膜损害由麦胶蛋白的挑战。研究使用中和抗体或受体激动剂anti-FAS毫不含糊地表明,醇溶蛋白诱导FAS调制及其参与上皮损伤有一个关键的角色。甚至在这种情况下似乎缺乏联系immunorecognition醇溶蛋白和上皮损伤,我们表明在其它实验条件下。9事实上,CTLA4-Ig,一个极其有效的设备控制的T细胞的激活,19无法控制醇溶蛋白在治疗CD外植体诱导细胞凋亡。

      一个有趣的发现是,在未经处理的CD,十二指肠的区域“正常”粘膜与弗兰克“平”粘膜和连续的这应该刺激寻求腹腔病变的机制的理解。很难理解为什么这些患者的谷蛋白摄入引起不均匀的粘膜模式修改。我们的数据,展示的存在局部免疫激活的迹象,表明免疫激活可能并不总是导致粘膜损伤。5最值得注意的是,即使片段与正常组织学产生可检测水平的教育津贴,表明疾病特异性免疫激活。这些数据表明,EMA本身不引起规范化扁平粘膜组织学修改中观察到,最近提出了比亚吉和他的同事们,22虽然我们不能排除这一事实EMA结合其他因素可能导致疾病的表现。

      我们的研究也表明,有一个层次结构的上皮元素作为减少细胞凋亡没有导致Ki67表达减少。这样看来,增殖阶段不是感应的结果而是扩散之前死亡的细胞凋亡。说明的因素控制FAS /细胞凋亡的表达和诱导Ki67可能进一步进化的病理学。研究这些片状病变可能是理想的免疫激活工具定义区别和粘膜损伤/改造,作为免疫激活未经处理的CD是一个常数的特性而粘膜损伤/改造不是。

      确认

      金融支持Telethon-Italy(格兰特没有E762),威康信托基金会(英国),Associazione Italiana Celiachia(意大利)欧洲共同体赠款qlk1 - ct - 1999 - 00037,和bmh4 - 98 - 3703。支持肯尼迪学院风湿病关节炎和风湿病英国议会。

      略语

      CD
      腹腔疾病
      教育津贴
      肌内膜抗体
      马伯
      单克隆抗体
      搞笑
      免疫球蛋白
      PT
      peptic-tryptic
      TUNEL
      末端转移酶(TdT)介导的dUTP digoxigenin尼克结束标签
      IEL
      上皮内淋巴细胞

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