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背景和目的结肠上皮细胞是参与调节肠道功能和黏膜免疫反应,及其功能改变在炎症性肠病(IBD)。然而,综合分析发炎结肠上皮细胞的基因改变目前不可用。我们的研究的目的是检测基因表达的优先发炎结肠上皮细胞的生化反应和澄清在发炎结肠粘膜上皮细胞。
方法互补脱氧核糖核酸表达差异分析是用来确定候选基因选择性表达的结肠上皮细胞发炎。这些基因的选择性表达上皮的结肠粘膜发炎,包括炎症性肠病和non-IBD组织,由实时聚合酶链反应检测和原位杂交。细胞融合和炎症介质的影响在Reg 1α基因表达是研究使用结肠癌细胞系(HT29)。
结果我们确定了七个候选基因被认为是调节发炎结肠上皮细胞。其中,Reg 1α和GW112优势种和表达这些基因是局限于隐窝上皮。使用结肠上皮细胞株体外研究表明,细胞融合调节Reg 1α基因表达。
结论注册1α和GW112基因的选择性表达发炎结肠粘膜隐窝上皮的表明这些基因的重要的监管职能。
- Reg 1α
- GW112
- Annexin-1
- 炎症性肠病
- 表示差异分析
略语
- 美联社
- 碱性磷酸酶
- GAPDH
- glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶
- 人力资源
- 人类重组
- 炎症性肠病
- 炎症性肠病
- 伊尔
- 白介素
- IFN-γ
- 干扰素γ
- TNF-α
- 肿瘤坏死因子α
- SIN-1
- 3-morpholinosydnonimine
- 聚合酶链反应
- 聚合酶链反应
- DP
- 不同的产品
- 挖
- digoxigenin
- 发射极耦合逻辑
- 肠嗜铬细胞的
- 成品
- 毫微微克
- RDA
- 表示差异分析
- Reg 1αR
- Reg 1α受体
- 加州大学
- 溃疡性结肠炎
- 伊什
- 原位杂交
来自Altmetric.com的统计
结肠上皮细胞提供了一个屏障对潜在有害的细胞腔的代理如酸、酶、细菌、毒素,是发挥积极作用在肠道粘膜的免疫反应。结肠上皮细胞功能的故障被认为是显著特征的各种常见和重要的胃肠道功能紊乱,包括炎症性肠病(IBD)。1,2几个一般和特定的保护性因素被认为是参与上皮功能的维护。2在基因敲除小鼠结肠炎缺乏白介素(IL) 2,3il - 10,4或T细胞受体α,5在显性负N-cadherin转基因小鼠6被认为是由于粘膜免疫系统或上皮的变化和信息粘附系统,或两者兼而有之。有充足的证据表明,改变结肠上皮细胞表型和功能存在于炎症性肠病。例如,在IBD上皮通透性增加,7和上皮增殖更迅速比正常人IBD。8此外,有改变抗原表达上皮细胞在炎症性肠病。9,10不仅肠道上皮细胞表达多种免疫受体11但也可以产生一系列广泛的免疫调节IL-1β等物质,12il - 6,12引发,13C-X-C趋化因子ena - 78,14IL-15,15和诱导一氧化氮合酶。16这些结果意味着核心作用的结肠上皮细胞调节肠道功能和黏膜免疫反应,促使我们进一步检查结肠上皮细胞的改变结肠粘膜发炎。为了这个目的,我们使用了表示差异分析(RDA)方法检测基因差异表达的结肠上皮在结肠粘膜发炎。
患者和方法
病人和组织
结肠活检标本通过内窥镜检查来自21个溃疡性结肠炎(UC)患者(3例结肠活检标本得到在不同时间点在疾病的活跃的和不活跃的阶段),从9克罗恩病的患者,5缺血性结肠炎患者,一个阿米巴性结肠炎患者,6个正常对照组(表1)。加州大学和克罗恩病的诊断是基于建立内镜和组织学标准。17缺血性结肠炎的诊断是根据临床特征,建立了内窥镜的标准,18而阿米巴性结肠炎是基于生物的存在。不活跃的加州大学代表例内窥镜治疗领域和组织标本中地下室萎缩或变形没有嗜中性粒细胞浸润。另一方面,积极的加州大学包括例内窥镜发炎地区低到中度的年级(增加粘膜的粒度和脆弱),但地区水土流失和溃疡被排除在分析之外。组织学炎症活动评估是基于中性粒细胞浸润的程度根据田字格的品位19:等级1和2被归类为活跃在这个研究。知情同意是获得所有的病人和对照组(结直肠癌患者和息肉)活检。研究机构审查委员会批准的协议是人类研究的主题。病人的人口统计特征和历史的药物治疗结肠镜检查的时间列于表1。
细胞系,细胞因子和试剂
人类结肠癌细胞系(HT29)从美国获得类型文化集合(美国马里兰州罗克维尔市)。重组体人(rh) IL-1βrhIL-6,干扰素γ(rhIFN-γ)和肿瘤坏死因子α(rhTNF-α)从Biosource购买(美国加州贝)。从PharMingen rhIL-4购买(美国加州圣地亚哥)和3-morpholinosydnonimine (SIN-1)σ(圣路易斯,密苏里州,美国)。
隔离结肠隐窝和表面的上皮
结肠隐窝和表面上皮细胞从结肠活检标本中分离表组成的两个墓穴使用前面描述的方法和表面上皮由我们实验室。20.简而言之,后立即获得结肠活检标本是沉浸在10毫升的Ca2 +和毫克2 +免费的汉克的平衡盐溶液(美国生命科技,马里兰州)包含30 mM EDTA和孵化在室温下30分钟。孵化后结肠隐窝和表面上皮细胞分离机械通过显微镜使用细针。孤立的上皮细胞被用来提取RNA。孤立的样品只包含地下室和表面上皮形态用苏木精和伊红染色部分光学显微镜下检查。
互补脱氧核糖核酸表达差异分析(RDA)
RDA为cDNA如前所述。21总之,cDNA来自加州大学结肠上皮细胞正常或积极消化Dpn二世和结扎R-Bgl-12/24适配器。表示是由聚合酶链反应(PCR)扩增20 R的结扎cDNA片段的周期使用R-Bgl-24mer作为底漆。R相关序列在测试仪表征J-Bgl-12/24适配器所取代。首先,减法杂交成立使用0.4μg J结扎测试人员和40μg链接器删除驱动程序(测试人员:司机= 1:10 0)。杂交混合物被放大的整除使用J-24mer作为引物PCR 10周期。PCR产品然后用绿豆核酸酶消化(美国马萨诸塞州新英格兰生物学实验室,贝弗利)35分钟30°C。消化PCR产品进一步放大了18周期,和这个放大的产品是第一批不同产品(DP1)。过程重复两次使用不同的引物和检测器:司机1:800和接触的000的比率。
原位杂交(ISH)
活检标本与中性20%福尔马林固定后立即收获。福尔马林固定材料使用标准程序嵌入到石蜡。Deparaffinised和患者部分(4μm)服用10μg /毫升的蛋白酶K在37°C 20分钟。一夜之间杂交进行使用5μg /毫升digoxigenin(挖)utp标签和反义RNA探针60°C。生产挖标记RNA,互补的Reg 1α和GW112插入pCRII向量(表达载体,圣地亚哥,加州,美国)与取向是体外转录T7 RNA聚合酶的Dig-UTP使用挖掘RNA标签工具包(勃林格曼海姆,曼海姆,德国),制造商提供的协议中有说明)。适当的洗涤后50%的甲酰胺0.5×SSC 45°C,部分反应了碱性磷酸酶(美联社)羊anti-Dig抗体,和电视台的网站呈现的美联社/ BCIP(勃林格曼海姆)。验证的特异性信号,挖贴上感觉RNA探针杂交与相邻部分比较消极控制在每一个实验。
DNA测序
引物组用于放大全长Reg 1αcDNA 5′-AGCATGGCTCAGACCA GCTCATAC-3′5′底漆和5′有条件现金援助CTAGTTTTTGAACTTGCAGAC-3′, 3′底漆。循环条件94°C的30秒,30秒55°C, 68°C两分钟35周期与铂Taq DNA聚合酶高保真(技术)。放大Reg 1αcDNA克隆到pCRII向量(表达载体)其次是DNA测序使用M13自动DNA测序器的反向和正向引物在阿尔夫二世(法玛西亚生物技术)。
实时定量PCR FLUOROGENIC探针
总RNA提取如前所述22从孤立的结肠上皮细胞标本。反转录的RNA提取(500 ng)进行使用缺乏逆转录酶的前体(上标2;生命技术)和低聚糖(dT)引物(技术)。稀释的整除(2μl)逆转录反应混合物(200μl)是用于定量Reg 1α,GW112, Annexin-1, glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶(GAPDH)基因表达的实时PCR分析。引物组用于放大Reg 1α5′-TCCCTGG TCTCCTACAAGTCCT-3′5′底漆和5′-GGAATCCTGTGCTTGAGGTCAG-3′, 3′底漆。引物组用于放大GW112 5′-TGGTGTGGTGAAC ATCAGCA-3′5′底漆和5′-CCTACCCCAAGCACCATATAGA-3′, 3′底漆。引物组用于放大Annexin-1 5′-AGTTCTGGACCTG GAGTTGAAAG-3′5′底漆和5′-TGCAAAGAAAGCTGGTTTGC-3′, 3′底漆。引物组用于放大GAPDH是5′-GAAGGTGAAGGTCGGA GTC-3′5′底漆和5′-GAAG ATGGTGATGGGATTTC-3′, 3′底漆。厘清共轭fluorogenic探针用来量化Reg 1α,GW112, Annexin-1基因表达和5′-FAM-TGGAG CCCCAAGCAGTGTTAATCCTG-3′, 5′-FAM-ACCGTCTGTGGTTCAGCTCAAC TGGA-3′, 5′-FAM-AGAAATGCCTCAC AGCTATCGTGAAGTGC-3′,分别。乔共轭fluorogenic探针用来量化GAPDH基因表达5′-JOE-CAAGCTTCCCGTTCTCAGCC-3′。 The fluorogenic probes were synthesised by PE Applied Biosystems (Foster City, California, USA). PCR was performed using the Taq-Man PCR kit (PE Applied Biosystems), as previously described.23后的激活AmpliTaq黄金(PE应用生物系统公司)10分钟95°C, 35周期15秒95°C,一分钟62°C进行了使用序列检测器(7700型、PE应用生物系统公司)。实时荧光和阈值测量周期(CT)值为每个样本计算上述序列检测器。24Reg 1α,GW112 Annexin-1, C的标准曲线T值获得连续稀释pCRIIReg1α、pCRIIGW112 pCRIIAnn-1构造。CT值Reg 1α,GW112 Annexin-1成绩单从临床标本绘制标准曲线,和这些基因的数量(fg,毫微微克)自动计算序列检测器(PE应用生物系统公司)1.6版本。量表示为注册的数量1α,GW112, Annexin-1成绩单和质粒的数量。GAPDH, C的标准曲线T值从连续稀释标准样品了。CT值GAPDH成绩单从临床标本绘制标准曲线和相对数量的GAPDH记录标准样本计算。每个样本重复测试,两个值的平均值用于计算。两个值的样本之间的差异几乎是零。标准化后,记录这些基因的表达量(fg)相对于GAPDH。如果C样品被认为是消极的T值超过35周期。组数据被表示为(SEM)和转录水平组之间的差异被学生的分析t测试。一个p值小于5%表示测试组之间存在显著差异。
结果
确定候选基因选择性表达在正常和加州大学结肠粘膜
确定候选基因选择性表达在正常和加州大学结肠粘膜,我们执行cDNA RDA之间正常的和活跃的加州大学结肠上皮(无花果1)。表示正常和活跃的加州大学结肠上皮准备从cDNA来自加州大学结肠上皮细胞正常和活跃。RDA与活跃的加州大学代表了“测试人员”和过度的正常表示“司机”(无花果1与正常表示)或“测试人员”和过量的活跃的加州大学表示“司机”(图1B)。经过一轮的减法,第一个不同产品(DP1)显示广泛的涂片乐队在这两种情况下。经过两轮的减法,第二个不同产品(DP2)显示一些离散的乐队在这两种情况下。经过三轮的减法,第三不同产品(DP3)显示两个离散乐队没有多分散的dna在RDA活跃UC表示“测试人员”和过度的正常表示“司机”(图1在RDA)。与正常表示“测试人员”和过量的活跃的加州大学表示“司机”,没有看到(图离散乐队1B)。在RDA DP3活跃UC表示“测试人员”和正常表示“司机”被随机克隆。14克隆检查,五是相同的注册1α,四是GW112,一个是锌指蛋白17日一个锌指蛋白173,一个是Annexin-1 DNA测序。其他两个不相同的任何基因的克隆提交基因库(无花果1C)。其中,我们进一步研究了Reg 1α和Annexin-1功能的报道,GW112, DP3的主要物种。
互补脱氧核糖核酸表达差异分析(RDA)的基因表达在正常和活跃溃疡性结肠炎(UC)结肠上皮细胞。(A) cDNA来自加州大学结肠上皮细胞正常和活跃,并用于RDA活动性UC表示“测试人员”和“司机正常表示。“最初的表征和第一(DP1),第二个(DP2)、第三(DP3)不同产品所示。可见两个离散乐队在DP3没有多分散的dna。(B) cDNA来源于正常和活跃UC与正常结肠上皮细胞并用于RDA表示“测试人员”和活跃的加州大学表示“司机。“最初的表征和第一(DP1),第二个(DP2)、第三(DP3)不同产品所示。注意DP3缺乏离散乐队。(C)的识别活跃UC DP3 DNA测序。活跃的加州大学DP3随机克隆。14克隆检查,五是相同的注册1α,四人GW112,一个是锌指蛋白17日一个锌指蛋白173,一个是Annexin-1 DNA测序。其他两个不相同的任何基因克隆的基因库。数字在括号表示的数量确定克隆。 The GenBank accession numbers of Reg 1α, GW112, zinc finger proteins 17 and 173, and Annexin-1 areM18963,AF097021nm - 000700AA205091,分别和nm - 003449。
REG水平1α,ANNEXIN-1 GW112 mRNA在IBD结肠上皮,NON-IBD和对照组
检查如果Reg 1α,Annexin-1 GW112优先表达活跃UC结肠上皮细胞,这些基因的表达被实时PCR进一步检查。在这些分析,基因转录的相对量量化的结肠上皮细胞对照组(n = 6),加州大学(n = 14)活跃,不活跃的加州大学(n = 10),活跃的克罗恩氏病(n = 4),不活跃的克罗恩氏病(n = 5),和non-IBD病人(缺血性结肠炎n = 5,阿米巴性结肠炎n = 1)使用GAPDH基因转录的内部控制标准化(无花果2)。C均值TGAPDH基因的值记录每组结肠上皮细胞的26.0(1.1)在正常,24.6(2.3)活跃的加州大学,在不活跃的加州大学25.3(1.9),25.4(0.8)克罗恩氏在活跃,不活跃的克罗恩氏24.8(1.7),和24.9(1.2)在non-IBD。没有明显的差异T值GAPDH基因的转录组间。注册1α基因的相对量记录(fg / GAPDH (CT= 25.6)]的结肠上皮细胞在上述每个组:不可以,112.6(44.1),9.9(8.0),384.0(366.5),0.4(0.4),和26.7(15.0),分别(无花果2),统计分析表明,Reg的相对数量1α基因转录活跃UC结肠上皮细胞明显高于不活跃的加州大学和正常样本(活跃的加州大学v不活跃的加州大学,p < 0.001;活跃的加州大学v正常,p < 0.001)。我们还发现大量的注册1α基因转录活跃的克罗恩氏和non-IBD活跃的病变。在不活跃的克罗恩氏病,我们检测到少量(2.0)注册1α基因的转录本只在一个标本。这些结果证实upregulation Reg 1α基因表达的结肠上皮结肠粘膜发炎,加州大学包括活跃,活跃的克罗恩氏,non-IBD活跃的病变。GW112基因的相对数量记录在每组结肠上皮在活跃的加州大学13.8(2.9),5.0(2.3)在不活跃的加州大学,2.5(2.2)克罗恩氏在活跃,不活跃的克罗恩氏8.8(5.7),和3.2(2.4)在non-IBD。在正常组织,GW112基因转录(图无法察觉2B)。GW112基因转录活性的相对数量UC结肠上皮细胞明显高于不活跃的加州大学和正常标本(活跃的加州大学v不活跃的加州大学,p < 0.05;活跃的加州大学v正常,p < 0.001)。我们发现GW112基因转录本在两个四个活跃的克罗恩氏五不活跃的克罗恩病的两个和三个六non-IBD活跃的病变。然而,只有在活跃的加州大学upregulation GW112基因表达证实具有统计学意义。我们检测到少量(1.0 - -7.0)Annexin-1基因转录中仅有五个14的活跃的加州大学和10不活跃的加州大学样本之一。Annexin-1基因转录中没有检测到正常,活跃的克罗恩氏病,不活跃的克罗恩氏病,或non-IBD(无花果2C)。
(A)的相对定量Reg 1α,GW112 (B)和(C) Annexin-1基因转录本在炎症性肠病(IBD), non-IBD,正常结肠上皮细胞的实时聚合酶链反应(PCR)测定。从结肠上皮细胞总RNA提取分离出活性溃疡性结肠炎(该校),不活跃的加州大学(I-UC),活跃的克罗恩病(cd),不活跃的克罗恩氏病(I-CD) non-IBD和正常对照组(NC)使用glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶(GAPDH)基因转录作为标准化的内部控制。每个样本重复测试和两个值的平均值用于计算。两个值之间的差别在所有样本接近于零。标准化后,基因转录的相对量被表示为(fg) / GAPDH (CT= 25.6)。单杠代表每组的均值。
检测REG 1α和GW112基因表达活跃UC结肠粘膜原位杂交
实时PCR结果表明注册1α和GW112基因的表达调节发炎结肠粘膜的上皮细胞在活跃的加州大学。评估的病理影响Reg 1α和GW112基因表达在结肠粘膜发炎,有必要确定这些基因的表达的细胞基础。在下一步中,我们检查了本地化的Reg 1α和GW112基因表达在结肠粘膜发炎加州大学的伊什(无花果3)。石蜡包埋的部分是杂交挖掘标签意识和反义RNA探针互补Reg 1α或GW112模板DNA。杂交的部分挖贴上这些基因的反义RNA探针显示Reg 1α(无花果3)和GW112(无花果3B)信号仅限于隐窝上皮细胞而上皮细胞在支架表面几乎是免费的这些基因的表达。此外,这些基因的表达间充质细胞中几乎没有影响。杂交的串行部分挖贴上这些基因的RNA探针显示稀疏和弱背景标记的细胞。因此伊什确认注册的具体表达式1α和GW112 UC结肠粘膜隐窝上皮细胞中活跃。在正常结肠粘膜,Reg 1α或GW112基因表达没有检测到伊什(数据没有显示)。
原位杂交的Reg 1α和GW112 mrna在活跃的加州大学结肠粘膜。石蜡包埋的部分被杂交digoxigenin(挖)标记意义和反义RNA探针互补Reg 1α或GW112模板DNA。杂交的部分挖贴上这些基因的反义RNA探针显示(一)注册1α和(B) GW112信号仅限于隐窝上皮细胞。RNA探针杂交的串行部分挖掘标签意义的这些基因导致细胞稀疏和弱背景标签。原来放大×25 (A)和×50 (B)。
比较REG 1αcDNA序列来源于IBD和NON-IBD结肠上皮细胞
进一步评估的病理影响Reg 1α基因表达在加州,我们比较了Reg 1αcDNA序列来自发炎从缺血性结肠炎结肠上皮的加州大学。四500 bp的全长cDNA序列克隆来自加州大学(n = 2)结肠上皮细胞的活跃和缺血性结肠炎(n = 2)确定。在所有克隆研究,Reg 1αcDNA序列没有不同,与野生型相同注册1α(基因库加入号码M18963在胰岛细胞再生。25
细胞融合和炎性细胞因子的影响在REG 1α基因表达在结肠上皮细胞系(HT29)
最后,我们检查是否upregulation Reg 1α基因表达在发炎的结肠上皮是由炎症介质介导的。最近的研究表明,Reg 1α表达HT29细胞生长时期。26我们首先检查如果Reg 1α基因表达的水平取决于细胞融合实时PCR。增加这些细胞的融合与Reg 1α差别进一步对这些基因的表达。虽然在30%和60%的细胞融合,我们发现大量的注册1α基因转录(130和41 fg Reg 1α成绩单/ GAPDH,分别),100%的细胞融合Reg 1α基因表达(图是几不可闻的事情4)。
细胞融合和炎性细胞因子的影响在Reg 1α基因表达在结肠上皮细胞系(HT29)。细胞收获不到30%,60%,和100%汇合的细胞培养条件和总RNA提取其次是实时聚合酶链反应(PCR)分析检测Reg 1α成绩单。各种细胞因子和一氧化二氮的影响在Reg 1α表达HT29 100%汇合的细胞培养条件下进行。一天后HT29细胞成为支流,细胞培养24小时无民事行为能力人或者白介素(IL) 1β(2 ng / ml), IL - 4 (50 U /毫升),IL - 6 (10 ng / ml),肿瘤坏死因子α(TNF-α)(10 ng / ml),干扰素γ(IFN-γ)(1μg /毫升),或3-morpholinosydnonimine (SIN-1)(10毫米)2毫升的RPMI1640含10%胎牛血清。细胞收获和总RNA提取其次是实时PCR检测Reg 1α成绩单。每个样本重复测试,两个值的平均值用于计算。两个值之间的差别是在所有样本几乎为零。标准化后,基因转录的相对量表示为(fg) / GAPDH (CT= 15.5)。从一个两个实验的结果是相同的结果。nd,不是检测。
很难评估炎性细胞因子的影响在Reg 1α基因表达因为表达与细胞融合的程度。由于这个原因我们对各种细胞因子和一氧化二氮的影响在HT29 Reg 1α表达低于100%汇合的细胞培养条件。一天后HT29细胞汇合的,细胞培养的无民事行为能力人或者IL-1β(0.5,2,或10 ng / ml), il - 4(5、50或500 U /毫升),il - 6(1、10或100 ng / ml), TNF-α(1、10或100 ng / ml), IFN-γ(0.1、1或10μg /毫升),或SIN-1(1、10或100毫米)2毫升含10%胎牛血清的RPMI1640 12日24或48小时。细胞收获和总RNA提取在12日24和48小时的文化之后,实时PCR试验检测Reg 1α成绩单。我们不能检测Reg 1α基因表达在任何条件下或文化时期就读于100% confluency(无花果4和数据未显示)。
讨论
在目前的研究中我们发现,Reg 1α和GW112优势物种出现在RDA cDNA不同产品与活跃的加州大学表示“测试人员”和过度的正常表示“司机”(图1)。互补dna来自正常的和活跃的UC结肠上皮细胞消化与Dpn二世和用作表示正常和活跃的加州大学结肠上皮细胞,分别。Dpn II碎片可能超过几个千碱基配对可能不是RDA cDNA差异产品,因为PCR扩增效率低的长Dpn II cDNA片段。出于这个原因,我们也许可以找到另一个主要基因物种优先表达结肠上皮细胞活跃的加州大学通过使用其他四个碱基对识别限制性内切酶比Dpn II生成表示。值得注意的是,cDNA RDA不能使用负面证明的东西不是因为同样的原因不同。因此RDA的结果与正常表示“测试人员”和过量的活跃的加州大学表示“司机”(图1B)中未发现离散乐队并不意味着主要基因物种没有优先表达在正常结肠上皮细胞。
Reg 1α被发现在再生基因调节胰岛细胞。25,27后来的研究报道,Reg蛋白质是相同的胰腺石头,在石头发现慢性钙化胰腺炎患者。28人类Reg 1α基因的序列预测166氨基酸多肽N终端信号肽的23个氨基酸。25据报道重组鼠Reg蛋白质是促有丝分裂的分离大鼠胰岛细胞,29日β细胞,30.和胰腺导管细胞。31日最近,Reg 1α基因的异位表达胰腺外报道,包括enterochromaffin-like (ECL)细胞鼠胃语料库,Paneth细胞、柱状细胞的人类十二指肠32和人类结肠直肠癌。33
在目前的研究中,我们首次发现Reg 1α基因表达调节发炎结肠粘膜的上皮细胞在炎症性肠病和non-IBD(无花果2)。注册1α基因表达是负数在正常结肠上皮细胞已经报道在信使rna和蛋白质水平。25,34我们还发现,Reg 1α基因表达仅限于隐窝上皮细胞而上皮细胞腔的表面几乎是免费注册1α基因表达(图3A)。这一事实upregulation Reg 1α基因表达在发炎结肠粘膜的上皮细胞在炎症性肠病很常见,non-IBD强烈建议注册1α蛋白的重要的生理作用。
先前的研究表明,蛋白质Reg的家庭,胰腺炎相关蛋白1,授予胰腺癌细胞株抗细胞凋亡。35在结肠,凋亡bcl - 2免疫染色是著名的隐窝上皮和上皮细胞在支架表面几乎免费的bcl - 2染色。20.,36bcl - 2的相同的分布和注册1α在结肠上皮细胞表明注册1α可能产生发炎的结肠上皮细胞凋亡的影响。
据报道注册1α是胃粘膜细胞的生长因子37因此也可能是结肠上皮细胞的生长因子。最近,一位注册1α受体被确认,30.由exostoses-like基因编码和介导的增长信号Reg 1αβ细胞再生。如果Reg 1α介导结肠上皮细胞的生长,它成为重要的检查表达式Reg 1α受体(Reg 1αr)结肠上皮细胞,因为缺乏表达注册1αr或改变注册1αr信号在IBD结肠上皮细胞致病机制之一可能是干扰IBD结肠粘膜的调整。还需要进一步的研究来阐明这一点。
大鼠胃粘膜,Reg 1α基因表达是局限于胃ECL细胞。胃泌激素刺激生产注册蛋白质在胃ECL细胞和调节胃注册生产。37在结肠粘膜发炎,监管Reg 1α基因表达可能是不同于胃Reg 1α基因表达的结肠粘膜隐窝上皮细胞发炎,包括杯状细胞不ECL细胞,表达了注册1α基因(图3)。我们的体外研究的结果使用结肠上皮细胞系HT29表明,细胞融合而不是炎症介质调节Reg 1α基因表达(无花果4)。26因此改变信息联系发炎结肠粘膜上皮的可能调节Reg 1α基因表达,和注册1α表达的结肠上皮可能改变信息接触的一个标志。在五10不活跃的加州大学,两个不活跃的克罗恩病样本,我们发现注册1α基因表达。这一发现表明,信息接触和上皮重建仍然是不完整的在这些Reg 1α正上皮细胞虽然这些似乎几乎完整的内窥镜和组织学检查,暗示这可能是复发的一个标志。使用人口多需要进一步检查证实这一结论。在这种情况下,应该强调,我们不能绝对排除的可能影响炎症介质在Reg 1α基因表达,因为治疗汇合的“转化”HT29细胞和炎症介质可能是一个合适的模型来研究这些介质的影响Reg 1α基因表达的“非转换”结肠发炎结肠粘膜上皮细胞。
众所周知,结肠癌的发展在UC结肠粘膜发炎。最近的研究报道,突变Reg 1α,防止分泌与胃ECL细胞类癌相关联38Reg 1α表达可能是一个敏感的标志结直肠粘膜的风险肿瘤的发展。34然而,Reg 1α蛋白的存在结肠上皮细胞不能标记结肠癌的发展因为Reg 1α表达中检测出non-IBD结肠上皮细胞,不开发肿瘤(无花果2),然后检查如果存在突变的Reg 1α结肠上皮在加州大学和他们是否可能是结肠癌的致病因素。为了解决这个问题,我们比较了Reg 1αcDNA序列来自加州大学和缺血性结肠炎的结肠上皮细胞发炎,自发愈合和不发展为结肠癌。在所有克隆研究,Reg 1αcDNA序列没有不同,与野生型相同Reg 1α的胰岛细胞再生。25因此不太可能Reg 1α是参与了加州大学的结肠致癌作用,虽然本研究主题检查的数量是有限的。
从人类原始粒细胞GW112基因克隆。据我们所知,没有研究调查GW112分布,GW112未知的功能。优惠的表达GW112在发炎结肠粘膜隐窝上皮在加州大学(无花果2B,3B)建议GW112的重要生理作用,尽管进一步的研究是必要的,以确定确切的作用。
总之,使用RDA,我们确定了七个候选基因中可能调节活跃UC结肠上皮细胞。其中,Reg 1α和GW112被发现是发炎的主要物种结肠上皮细胞及其表达仅限于隐窝上皮,伊什做了演示。Reg 1α表达的结肠上皮细胞可以被视为一种改变的标志信息接触,可能与结肠上皮细胞的再生在结肠粘膜发炎,类似于它在胰岛细胞中的作用。基因打靶研究阐明Reg的体内功能1α在我们实验室正在进行中。进一步的研究是必要的澄清的生物功能注册1α发炎结肠上皮细胞。
确认
这项工作的部分支持由佐藤纪念癌症研究基金和科研补助金(C)。
略语
- 美联社
- 碱性磷酸酶
- GAPDH
- glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶
- 人力资源
- 人类重组
- 炎症性肠病
- 炎症性肠病
- 伊尔
- 白介素
- IFN-γ
- 干扰素γ
- TNF-α
- 肿瘤坏死因子α
- SIN-1
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