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炎症和炎性肠道疾病
没有证据表明持久腮腺炎病毒感染在炎症性肠病
免费的
  1. M Iizukaag)ydF4y2Ba,
  2. H斋藤b,
  3. M汤川ag)ydF4y2Ba,
  4. H Itouag)ydF4y2Ba,
  5. T Shirasakaag)ydF4y2Ba,
  6. M千叶ag)ydF4y2Ba,
  7. T福岛c,
  8. 年代渡边ag)ydF4y2Ba
  1. ag)ydF4y2Ba第一内科,秋田犬大学医学院,日本,b微生物学、秋田县公共卫生研究所,日本,c外科学系,日本横滨市医院
  1. M Iizuka第一内科,秋田犬大学医学院1-1-1本州,日本秋田犬010 - 8543。iizuka在{}med.akita-u.ac.jp

文摘

背景和目的有争论关于是否易导致副粘病毒感染,炎症性肠病(IBD)。最新的队列研究声称,非典型麻疹,腮腺炎感染儿童可能后炎症性肠病的危险因素。本研究进行了澄清之间的因果关系的有效性持续腮腺炎病毒感染和炎症性肠病。

对象和方法(1)放大的腮腺炎病毒基因组在肠道进行标本(15克罗恩病,溃疡性结肠炎15日控制10)和外周血淋巴细胞(PBL)(溃疡性结肠炎7、克罗恩病6、控制三个)通过逆转录-聚合酶链反应(rt - pcr),紧随其后的是南部杂交利用引物特定病毒基因组编码血凝素—神经氨酸。磷蛋白质或(2)滴定度血清antimumps免疫球蛋白测定在16个溃疡性结肠炎患者,在16节段性回肠炎患者,在使用酶联免疫吸附测定16名正常对照组。

结果(1)腮腺炎病毒基因组并不是通过rt - pcr检测肠道标本或PBL在任何情况下。(2)Antimumps免疫球蛋白滴定度是积极在溃疡性结肠炎7/16,11/16 10/16克罗恩氏病,控制标本。的平均(SEM)滴定度antimumps免疫球蛋白是12.281(7.831)在溃疡性结肠炎,7.675(1.608)克罗恩氏病,在控制和8.637(1.969),三组之间无显著差异。

结论我们找不到任何证据来支持持续的流行性腮腺炎病毒感染和炎症性肠病之间的因果关系。

  • 炎症性肠病
  • 溃疡性结肠炎
  • 克罗恩病
  • 腮腺炎病毒
  • 麻疹病毒
  • 副粘病毒

  • 略语

    ag)
    阿克
    ELISA
    酶联免疫吸附测定
    成品
    毫微微克
    炎症性肠病
    炎症性肠病
    MMR
    麻疹、腮腺炎和风疹
    出版广播公司
    外周血淋巴细胞
    P
    磷蛋白质
    接下来的
    haemagglutinin-neuraminidase
    rt - pcr
    逆转录-聚合酶链反应
    SSPE
    亚急性硬化性全脑炎

    • http://dx.doi.org/10.1136/gut.48.5.637

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      虽然炎症性肠病(IBD)的发病机理尚不清楚,建议IBD发生在易感宿主和一些未知的外源性物质环境;一个最可能的候选人被认为是感染。1在这方面,开展了一系列研究,韦克菲尔德和他的同事们2 - 6声称麻疹病毒之间的紧密联系和克罗恩病流行病学和免疫组织化学的研究结果的基础上,但这麻疹的假设是有争议的7因为麻疹病毒基因组中没有检测到克罗恩病的患者,8 - 11和麻疹抗体认可以及麻疹病毒宿主蛋白质。12,13

      最近的队列研究14从同一组(蒙哥马利等)提出了另一种可能性:流行性腮腺炎病毒和IBD-namely之间的密切关系,腮腺炎病毒感染岁前两年是溃疡性结肠炎的风险因素,和腮腺炎和麻疹病毒感染的同年生活明显与炎症性肠病有关。然而,这种队列研究不包括病例曾接受了麻疹,腮腺炎和风疹(MMR)接种疫苗,但担心研究结果可能会引发MMR疫苗接种减少吸收。15此外,众所周知,腮腺炎病毒在哺乳动物细胞建立持续感染。16基于这些发现,我们希望澄清之间的因果关系的有效性持续腮腺炎病毒感染和炎症性肠病。

      据我们所知,只有一个研究17试图在肠道标本检测流行性腮腺炎病毒基因组IBD患者但没有被检测到。然而,逆转录-聚合酶链反应(rt - pcr)进行使用,只有一个底漆设置为腮腺炎病毒基因组和rt - pcr的灵敏度是未知的。17因此很难达到持久之间没有因果关系的结论流行性腮腺炎病毒感染和炎症性肠病的结果。我们的研究澄清这个问题使用rt - pcr杂交南部高灵敏度,紧随其后,腮腺炎病毒的血清学试验。

      材料和方法

      放大的腮腺炎病毒基因组

      放大的腮腺炎病毒基因组进行肠道标本和外周血淋巴细胞(PBL)通过rt - pcr。肠道的内镜活检或手术切除标本得到15溃疡性结肠炎患者,15克罗恩病的患者,10控制。内镜活检中含有肠黏膜和黏膜下层,和手术活检包含完整的肠的厚度。在每种情况下诊断建立了使用标准的临床、放射学、内镜和组织学标准。临床病人的细节如表所示1。PBL在溃疡性结肠炎患者获得七个,六克罗恩病的患者,和三个正常对照组。所有样品都用知情同意。分离外周血淋巴细胞的细胞进行使用Lymphoprep工具包(Pharmaas奈科明,奥斯陆,挪威)根据制造商的指示。

      把这个表:
      表1

      临床病人的细节检查流行性腮腺炎在结肠粘膜RNA

      RNA提取从肠道标本或PBL使用酸guanidinium-phenol-chloroform方法RNaid +工具包(美国加州生物101)。反转录的RNA是由潜伏在42°C 50分钟使用3μg随机六聚物(豆类,大津,日本),10个单位的逆转录酶(RAV-2;豆类)和10 nmol核苷酸的逆转录缓冲区包含50毫米三羟甲基氨基甲烷盐酸,液pH值8.3,75毫米氯化钾,MgCl 8毫米2德勤,10毫米。转换DNA放大1.25单位的Taq DNA聚合酶(豆类Taq;豆类)套引物的存在(10 pmol),和10 nmol核苷酸的PCR缓冲包含10毫米三羟甲基氨基甲烷HCl液pH值(8.3),50毫米氯化钾,1.5毫米MgCl2。腮腺炎病毒基因组被嵌套PCR扩增引物使用特定于病毒基因组编码的一部分磷(P)18血凝素—神经氨酸(HN)和19;两个引物还可以扩大疫苗株。核苷酸序列的引物如表所示2。放大的P基因进行如下。变性的初始四分钟后在94°C, 35 PCR循环(一分钟在94°C, 1.5分钟44°C,和一分钟72°C),紧随其后的是七分钟扩展步骤在72°C使用热循环(GeneAmp PCR系统9600;珀金埃尔默,应用生物系统公司部门,新泽西,美国)。嵌套PCR, 1μl第一PCR产品是混合和样品进行PCR使用相同的热循环计划。

      把这个表:
      表2

      寡核苷酸引物用于嵌套式聚合酶链反应

      放大的HN基因进行如下。前三个周期在92°C两分钟,三分钟55°C,两分钟在72°C。这些是紧随其后的是30周期(一分钟在93°C,一分钟在58°C,和两分钟在72°C),最后五分钟的伸展期72°C。使用相同的热循环嵌套PCR进行计划。PCR产品(5μl)在2%琼脂糖凝胶电泳和视觉效果与溴化乙锭染色和暴露于紫外线光。与P基因引物PCR产品,放大集,随后转移到尼龙膜(Hybond-N +;Amersham法玛西亚生物技术,英国白金汉郡)根据制造商的指示。然后,南部进行杂交的碱性磷酸酶标记的寡核苷酸探针腮腺炎病毒P基因,同一地区的嵌套PCR产品,使用一个AlkPhos直接工具包(Amersham法玛西亚生物技术)。

      血清学试验

      Antimumps免疫球蛋白滴定度测量在16个溃疡性结肠炎患者,在16节段性回肠炎患者,在16个正常对照组的酶联免疫吸附测定(ELISA)使用流行性腮腺炎免疫球蛋白(II)环评Seiken工具包(Denka Seiken,东京,日本)。简单地说,一个塑料盘是涂有净化整个病毒粒子的流行性腮腺炎病毒和覆盖着病人血清。盘子然后孵化与过氧化物酶标记反人类的免疫球蛋白g多克隆抗体。酶活性测定spectrophotometrically后3、3′,5、5′-tetramethylbenzidine特定的显色底物。临床病人的细节如表所示3。所有的情况下收到腮腺炎疫苗接种。

      把这个表:
      表3

      临床病人的细节来衡量antimumps免疫球蛋白

      统计分析是使用Mann-Whitney U测试做的,和p < 0.05被认为是显著的。

      结果

      放大的腮腺炎病毒基因组

      rt - pcr的灵敏度

      我们发现腮腺炎病毒P基因在120年阿克(ag)的RNA(无花果1)和HN基因在12毫微微克(fg)的RNA(无花果1维洛细胞B)提取腮腺炎病毒感染。我们也能够发现P和HN基因腮腺炎病毒的咽喉拭子从病人腮腺炎腮腺炎。

      Nested reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) products from mumps virus infected cells. (A) Phosphoprotein (P) gene: molecular weight marker (lane 1), PCR product from 120 fg (lane 2), 12 fg (lane 3), 1.2 fg (lane 4), 120 ag (lane 5), and 12 ag (lane 6) of template RNA, and PCR product from a throat swab of mumps parotitis (lane 7). (B) Haemagglutinin- neuraminidase (HN) gene: molecular weight marker (lane 1), PCR product from 12 pg (lane 2), 1.2 pg (lane 3), 120 fg (lane 4), 12 fg (lane 5), and 1.2 fg (lane 6) of template RNA, and PCR product from a throat swab of mumps parotitis (lane 7).
      " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图1
      图1

      嵌套逆转录-聚合酶链反应(rt - pcr)产品,腮腺炎病毒感染的细胞。(A)磷(P)基因:分子量标记(巷1),PCR产品从120年fg(巷2),12 fg(巷3),1.2 fg(巷4),120 ag(巷5),和12 ag(巷6)RNA的模板,从咽喉拭子和PCR产品的流行性腮腺炎腮腺炎(巷7)。(B)血凝素-神经氨酸酶(HN)基因:分子量标记(巷1),PCR产物从12 pg(巷2),1.2 pg(巷3),120年fg(巷4),12 fg(巷5)和1.2 fg(巷6)RNA的模板,从咽喉拭子和PCR产品的流行性腮腺炎腮腺炎(巷7)。

      P基因的扩增

      单个或多个乐队被观察到在所有样品包括肠道标本和培养,但这些乐队的大小不符合预期的腮腺炎病毒(199个基点)。十一个PCR产品图所示2答:这些乐队和标签之间没有观察到杂交探针的构建腮腺炎病毒P基因(车道6-13;无花果2南方杂交后B)。强烈的混合动力车在积极控制流行性腮腺炎病毒(通道2、3;无花果2B)和从流行性腮腺炎腮腺炎患者咽喉拭子(巷15;无花果2B)。

      (A) Nested polymerase chain reaction (PCR) products using primers to the phosphoprotein (P) gene. Molecular weight marker (lane 1), PCR products from intestinal specimens of ulcerative colitis (lanes 2–4), Crohn's disease (lanes 5–7), controls (lanes 8–10), PCR products from peripheral blood lymphocytes (PBL) of ulcerative colitis (lanes 11, 12), and PCR product without template DNA (lane 13), and from the throat swab of the patient with mumps parotitis (lane 14). (B) Southern hybridisation of PCR products using primers to P gene. Molecular weight marker (lane 1), PCR products from 1.2 fg (lane 2), 120 ag (lane 3), 12 ag (lane 4) of template RNA from mumps virus infected cells, blank (lane 5), PCR products from intestinal specimens of ulcerative colitis (lanes 6–8), Crohn's disease (lanes 9–11), PCR products from PBL of ulcerative colitis (lanes 12, 13), blank (lane 14), and PCR product from the throat swab of mumps parotitis (lane 15).
      " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图2
      图2

      (一)嵌套式聚合酶链反应(PCR)产品使用引物磷蛋白质(P)基因。分子量标记(巷1),从肠道溃疡性结肠炎标本PCR产品(通道2 - 4)、克罗恩病(道5 - 7),控制(车道8 - 10),PCR产品从外周血淋巴细胞(PBL)的溃疡性结肠炎(车道11、12)和PCR产品没有模板DNA(巷13),和流行性腮腺炎患者的咽喉拭子腮腺炎(巷14)。(B)南部杂交PCR产品使用P基因的引物。分子量标记(巷1),PCR产品从1.2 fg(巷2),120 ag(巷3),12 ag(巷4)的模板从腮腺炎病毒感染细胞RNA,空白(5道),PCR产品从肠道溃疡性结肠炎标本(道6 - 8),克罗恩病(9 - 11车道),PCR产品从PBL的溃疡性结肠炎(车道12、13),空白(巷14)和PCR产品流行性腮腺炎的咽喉拭子腮腺炎(巷15)。

      放大的HN基因

      预期的乐队没有观察到任何结肠粘膜或PBL样本。四个PCR产品图所示3。

      Nested polymerase chain reaction (PCR) products using primers to the haemagglutinin-neuraminidase (HN) gene. Molecular weight marker (lane 1), PCR product from intestinal specimens of ulcerative colitis (lane 2), Crohn's disease (lane 3), control (lane 4), PCR product from peripheral blood lymphocytes (PBL) of ulcerative colitis (lane 5), PCR product without template DNA (lane 6), and PCR product from a throat swab of mumps parotitis (lane 7).
      " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图3
      图3

      嵌套式聚合酶链反应(PCR)血凝素—神经氨酸(HN)产品使用引物基因。分子量标记(巷1),PCR产品从肠道溃疡性结肠炎标本(巷2),克罗恩病(巷3),控制(巷4),PCR产品从外周血淋巴细胞(PBL)的溃疡性结肠炎(巷5),PCR产品没有模板DNA(巷6),从咽喉拭子和PCR产品的流行性腮腺炎腮腺炎(巷7)。

      血清学试验

      意味着(SEM)患者为28.9(2.0)岁对于那些溃疡性结肠炎,25.3(1.9)对于那些克罗恩氏病,和28.3(2.2)的控制。意味着(SEM)出生年为溃疡性结肠炎患者是1965(2.1),1970(2.1)克罗恩氏病,1968(2.3)的控制。没有显著差异之间的年龄或出生年三组。在ELISA系统中,antimumps免疫球蛋白滴定度超过4.0环评认为是积极的,低于2.0为负,在2.0和4.0之间是不确定的。根据这些标准,溃疡性结肠炎患者,7/16 11/16 10/16克罗恩病病人,控制被判定为阳性antimumps免疫球蛋白。的平均(SEM)滴定度antimumps免疫球蛋白是12.281(7.831)环境影响评价为溃疡性结肠炎,7.675(1.608)克罗恩氏病,控制和8.637 (1.969);三组之间没有明显differenc。

      讨论

      我们的研究未能发现流行性腮腺炎病毒基因组在肠道或PBL在IBD患者标本。我们试图发现腮腺炎病毒基因组在PBL以及肠道标本腮腺炎病毒更多地感染人类淋巴细胞,特别是激活T淋巴细胞。20.放大的腮腺炎病毒基因组是由使用两个可靠的rt - pcr引物组P18和接下来的19腮腺炎病毒的基因。我们发现样品小120 ag)使用rt - pcr病毒RNA,它对应于大约10 - 20腮腺炎病毒RNA的复制;因此腮腺炎病毒的rt - pcr检测的敏感性高,高于腮腺炎病毒隔离。19我们从肠道组织中RNA提取使用玻璃粉(RNaid)因为它PCR抑制剂可以消除一些使用和更好的定性结果。21此外,rt - PCR的灵敏度时没有改变RNA提取肠道组织增加了反应混合物的rt - PCR(数据未显示)这表明提取物肠组织中不含化合物可以抑制PCR引物用于这项研究。因此,我们认为,我们的研究结果显示没有腮腺炎病毒IBD患者。

      亚急性硬化性全脑炎(SSPE)是由持续的麻疹病毒引起的感染,是最可能发生如果麻疹病毒感染发生在年轻的时候。22麻疹病毒的抗体反应这样的病人是不正常的,往往是增加和维护在血清和中枢神经系统。23,24鉴于这些观察,我们的血清学结果没有增加antimumps免疫球蛋白的发现被认为是支持缺乏持久的IBD感染腮腺炎病毒。

      在这项研究中我们没有检查腮腺炎病毒抗原在结肠粘膜免疫组织化学利用antimumps单克隆抗体单克隆抗体对病毒抗原有时交叉与宿主蛋白质反应。25,26我们还演示了在我们之前的报道12,13antimeasles单克隆抗体认可宿主蛋白质在结肠粘膜以及麻疹病毒;这种现象导致我们错误的结论:持续的麻疹病毒感染发生在结肠粘膜的克罗恩病。

      我们的研究中,结合之前的调查Folwaczny和他的同事们,17显示没有腮腺炎病毒基因组编码三个腮腺炎病毒的结构蛋白(血凝素—神经氨酸,磷蛋白质,和一个小疏水蛋白质)在IBD患者,表明持续腮腺炎病毒感染溃疡性结肠炎和克罗恩病是不可能的。在蒙哥马利和他的同事们14假设密切联系非典型副粘病毒感染在儿童时期,后来出现的炎症性肠病,我们一起学习与先前的调查8日至13日表明没有证据表明持续的麻疹病毒感染在IBD显示小的证据表明,炎症性肠病是由副粘病毒持续感染,即使非典型副粘病毒感染发生。关于MMR疫苗接种和炎症性肠病,蒙哥马利和他的同事们的队列研究14不包括病人收到MMR疫苗接种。进一步,我们执行rt - pcr使用底漆集,也可以检测疫苗株,但我们不能发现任何疫苗株或非疫苗株麻疹、腮腺炎病毒在IBD患者。因此值得强调的是,还没有流行病学或直接实验证据显示MMR疫苗与炎症性肠病。相比之下,的确,我们的研究并没有排除这种可能性,腮腺炎病毒感染是一个触发事件后出现炎症性肠病,但我们相信,与更大的人口需要进一步流行病学调查证实了这一点。

      确认

      这项工作是支持的部分资金援助从教育部科学研究,科学和文化,日本。我们感谢Takako佐佐木女士和渡边雪女士的技术支持。

      略语

      ag)
      阿克
      ELISA
      酶联免疫吸附测定
      成品
      毫微微克
      炎症性肠病
      炎症性肠病
      MMR
      麻疹、腮腺炎和风疹
      出版广播公司
      外周血淋巴细胞
      P
      磷蛋白质
      接下来的
      haemagglutinin-neuraminidase
      rt - pcr
      逆转录-聚合酶链反应
      SSPE
      亚急性硬化性全脑炎

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