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背景信息几乎没有胆固醇microlithiasis的发病机制,目前尚不清楚,如果胆汁脂质成分在这些患者中看到类似于变化胆固醇胆石患者。
的目标是测量患者的胆汁脂质成分胆固醇microlithiasis。
病人11个患者胆固醇microlithiasis 20胆固醇胆石患者和17名健康对照组。
方法十二指肠胆汁收集在禁食状态注入蓝肽。胆汁胆固醇、磷脂和总胆汁酸被酶化验分析,通过高压液相色谱法和共轭胆汁酸。
结果microlithiasis患者有胆固醇饱和指数明显高于控件(平均值1.30(95%置信区间1.05 - -1.54)v0.90(0.72 - -1.08)),但类似于胆石患者(1.51 (1.40 - -1.63))。这是由于显著减少百分之磷脂(10.0%(7.1 - -12.8))与控制(21.4%(18.1 - -24.6))和胆石患者(24.9% (20.5 - -29.3))。每分钱microlithiasis和控制患者的胆固醇相似(5.3%(4.5 - -6.1)和5.6%(4.3 - -6.8),分别)但在胆石患者显著增加(10.9% (9.3 - -12.4))。microlithiasis患者胆汁酸成分类似于控制而在胆石患者脱氧胆酸显著增加:27.3% (24.8 - -29.7)v19.0%(15.7 - -22.2)在控制和20.6% (14.9 - -26.2)microlithiasis患者。
结论患者胆固醇microlithiasis胆汁胆固醇过饱和,类似于胆固醇胆石患者。而在后者每分胆固醇,这是由于增加了患者microlithiasis这是由磷脂不足引起的,与正常每分胆固醇和正常胆汁胆汁酸成分。
- 胆固醇microlithiasis
- 胆道污泥
- 胆汁脂质成分
- 胆汁酸
- 磷脂
- 脱氧胆酸
略语
- CSI
- 胆固醇饱和指数
- 高效液相色谱法
- 高效液相色谱法
来自Altmetric.com的统计
Microlithiasis可以被定义为悬浮沉淀的胆固醇在胆汁一水晶体或bilirubinate钙颗粒。1它的存在可以作为此结论提出的超声non-shadowing移动图像,所谓的“胆泥”,2但其明确的演示是基于发现胆道晶体在十二指肠胆汁的显微镜检查。3
microlithiasis一直强调的临床意义,因为它被认为是在急性特发性胰腺炎有致病作用。4,5然而,这种情况并不完全理解的自然历史。基于超声随访研究,污泥可能消失,永远不会复发,但通常会出现。6这可能演变成只在少数患者胆石病。6形成microlithiasis与粘液分泌过多有关胆囊中比在胆石患者甚至更高的水平。7令人惊讶的是,小的信息可以在胆汁脂质成分含有胆固醇的胆汁晶体。根据李和尼科尔斯,肝和胆囊胆汁的污泥不是患者不同于胆石患者和健康受试者中发现的胆固醇饱和指数(CSI)和胆固醇、磷脂、总胆汁酸浓度。8沙玛等发现患者胆固醇microlithiasis模式的成核时间和胆囊排空介于健康受试者和胆固醇胆石患者,而CSI和十二指肠胆汁浓度的三个主要的脂质类似于胆石患者。9胆汁胆汁酸成分上没有数据。这是相关的,因为胆汁浓缩与脱氧胆酸与胆固醇分泌和更大更高的CSI,胆固醇胆石形成的,是一个风险因素。10
因此我们的目的是研究患者的胆汁脂质胆固醇microlithiasis的构成,比较结果与一群健康对照组和胆固醇胆石患者。
对象和方法
主题
我们研究了三组病人。第一组由11个患者胆汁胆固醇microlithiasis,七个男人和四个女人,平均年龄47岁(范围33 - 71)。从那些被我们这些患者连续登记中心的临床适应症胆囊胆汁抽样因为反复发作的急性特发性胰腺炎。患者选择这项研究如果5或更多的胆固醇晶体一水有或没有bilirubinate钙颗粒被发现胆汁丰富十二指肠液的显微镜检查。5胆汁抽样进行4 - 6周后急性胰腺炎的最后一集,在缺乏超声胆石病的证据。
第二组包括20胆固醇胆石患者,10男10女,平均年龄53岁(范围34 - 77)。这些患者胆囊的正常运作和射线可透过的胆结石在口服胆囊造影术。第三组包括17名健康对照组,10男性和7名女性,平均年龄41岁(范围21 - 62)。
胆汁集合的时候,所有的受试者中研究中有一个正常的身体质量指数:23.2(22.6 - -23.8)患者胆固醇microlithiasis, 22.6(22.0 - -23.1)患者胆固醇胆石病,和23.1(22.5 - -23.8)为健康对照组(NS的比较)。所有受试者正常血常规化学,包括肝脏和胰腺功能测试和血清血脂水平;没有收到任何药物前的4周的研究。告知口头同意获取胆汁样品是由所有科目。协议是经当地伦理委员会批准。
实验的程序
十二指肠胆汁收集隔夜空腹后从早上所有科目。nasoduodenal管定位到第三部分十二指肠荧光镜的指导下。胆汁丰富十二指肠液收集在静脉输液的50毫微克/公斤蓝肽(塔;Farmitalia,意大利米兰)。胆汁的整除立即被离心机3500 rpm 15分钟和沉积物偏光显微镜下检查载玻片上。胆固醇晶体一水被确定的基础上他们的经典长斜方形的形状和双折射下交叉极化。8样品被认为是阳性胆固醇microlithiasis每张幻灯片当五个或更多水晶被发现。5
一个整除的胆汁进行化学分析处理。浓度的胆固醇,11磷脂,12和总胆汁酸13测定酶学。所有胆汁样品满意的要求总脂质浓度大于5 g / dl,因此呈现CSI的可靠计算成为可能。14CSI的多项式方程计算托马斯和霍夫曼15基于胆固醇溶解度线被Hegardt和大坝。16
分析,结合胆汁酸是由高效液相色谱(HPLC)使用先前描述的技术17最近修改的由我们组。18分析纯试剂和deionised蒸馏水。结合胆汁酸和苯酚(内部标准)购买的σ(圣路易斯,密苏里州,美国)。水KH2阿宝42.0 g / l (A), H3阿宝485% 2.0毫升/ l (B)的解决方案,和梯度级乙腈(C)(默克公司,达姆施塔特,德国)作为流动相。胆汁(200μl)与100%乙醇稀释到4.0毫升,带到沸点5 - 10分钟,在一夜之间,在黑暗中在室温下。混合物上升了100μl ethanolic苯酚溶液(0.5毫克/毫升),动摇,并透过0.22μm微孔过滤器;4.0毫升ethanolic溶液含1.0毫克/毫升的每个胆汁酸,飙升100μl内部标准作为标准。20μl整除的样品或标准是注入到色谱仪。
默克公司(Merck,达姆施塔特,德国)液相色谱仪(l - 6200智能泵)配有紫外可变波长检测器(l - 4250紫外可见检测器),自动注射自动取样器(- 2000 A Autosampler),和柱温箱(l - 5025列恒温器)。一个octadecylsylil LiChroCART 250×4毫米的高效液相色谱墨盒Superspher 100 RP-18μm列(默克公司)LiChroCART 4×4毫米高效液相色谱中使用盒式LiChrospher 100 RP-18μm(默克公司)列。洗脱了1.0毫升/分钟的流量25°C。多步线性渐变,从时间0 A: B: C洗脱液组成41:31:28 (v / v %),是对超过90分钟。最初的成分,维持10分钟,被带到38:29:33在五分钟;这是维护以下10分钟。当时构成线性带到2:2:96在接下来的45分钟,然后在两分钟内原始条件。列是re-equilibrated下注射前18分钟。乙腈的有效梯度洗提更多的保留了污染物,否则可能出现在随后的色谱图。最佳色谱流动相的性能是获得准确的准备。 The column was periodically cleaned by flushing with pure acetonitrile. Peak height was measured using a Merck Hitachi D-2500 Chromato-Integrator. Detection was performed at 200 nm, the detector output was set at 0.002 absorbance units at full scale, and the integrator input was 128–256 mV at full scale. Reproducibility, assessed by repeated assays of bile samples, and accuracy, evaluated by adding increasing concentrations of standards to bile acid specimens, were always greater than 98%.
统计分析
结果表示为平均(95%置信区间)。组间显著差异使用学生的评估t测试未配对的数据。线性回归分析用于评估存在显著相关性。p < 0.05的值被认为是重要的。
结果
除了胆固醇microlithiasis患者来说,这是入口准则,胆固醇晶体一水的显微镜检查发现患者胆汁中胆石病;没有发现晶体在健康受试者的胆汁。11中胆固醇microlithiasis患者,也有胆道bilirubinate颗粒。
总脂质浓度为6.36 (5.45 - -7.27)g / dl microlithiasis患者,6.06 (5.63 - -6.49)g / dl胆固醇胆石患者,和6.16(5.74 - -6.57)在健康受试者(NS的比较)。
CSI是显著增加患者的胆固醇microlithiasis(1.30(1.05 - -1.54))与控件(0.90 (0.72 - -1.08);p < 0.02)和胆石患者(1.51 (1.40 - -1.63);p < 0.0001v控制)。图1显示个人胆汁脂质组成的三组数据。百分之胆汁胆固醇相似microlithiasis患者和对照组(5.3(4.5 - -6.1)%,5.6(4.3 - -6.8)%,分别)而在胆石患者显著增加(10.9 (9.3 - -12.4)%;p < 0.0001v两组)。百分之胆道磷脂显著减少患者的胆固醇microlithiasis(10.0(7.1 - -12.8) %)与控件(21.4 (18.1 - -24.6)%;p < 0.0001)和胆石患者(24.9 (20.5 - -29.3)%;p < 0.0001)。胆汁酸是增加患者的百分之microlithiasis(84.7(81.8 - -87.7) %)与控件(73.1 (69.3 - -76.8)%;p < 0.0002)和胆石患者(64.7 (58.6 - -70.7)%;p < 0.0002)在他每分钱胆汁酸也显著低于对照组(p < 0.05)。
个人数据每分钱摩尔浓度的胆汁脂质在健康对照组,患者的胆固醇microlithiasis和胆固醇胆石患者。箭头表示统计组之间的差异。(一)%摩尔胆固醇;(B) %摩尔磷脂;和(C) %摩尔胆汁酸。
由于这胆汁脂质组成模式,胆固醇/磷脂比增加两microlithiasis(0.69(0.44 - -0.93))和胆石患者(0.49(0.42 - -0.55))与健康对照组(0.28 (0.20 - -0.36);分别为p < 0.002和p < 0.001)。胆固醇胆石患者/胆汁酸比率增加(0.18(0.15 - -0.22))的患者相比microlithiasis (0.06 (0.05 - -0.07);p < 0.0001)和控制(0.08 (0.06 - -0.10);p < 0.0001);胆汁酸/磷脂比值增加患者microlithiasis(11.2(7.3 - -15.1))与控件(3.9 (3.1 - -4.8);p < 0.001)和胆石患者(4.2 (2.1 - -6.2);p < 0.001)。
CSI是百分之胆汁胆固醇显著相关的三个组:r= 0.74 microlithiasis患者(p < 0.01),r= 0.80 (p < 0.0001),在控制r= 0.76在胆石患者(p < 0.0001)。CSI是反向每分钱磷脂与microlithiasis患者(r=−0.65 (p < 0.05),而在其他两组没有发现协会。之间不存在相关性CSI和胆汁酸百分之三组。
结果每分钱胆汁酸成分如下:胆酸为35.5(30.2 - -40.8)%,35.1(30.8 - -39.4)%,和30.1 (25.4 - -34.8)% microlithiasis患者,控制,和胆石患者,分别所有比较(NS);鹅去氧胆酸为40.1(35.7 - -44.5)%,40.4(36.5 - -44.2)%,和41.5(37.9 - -45.2)%,分别所有比较(NS);熊去氧胆酸为1.8(1.0 - -2.6)%,3.4(2.0 - -4.8)%,和2.1(1.5 - -2.6)%,分别所有比较(NS);石胆酸是2.1(1.1 - -3.1)%,2.2(0.8 - -3.6)%,分别为1.0 (0.8 - -1.1)% (NS的比较)。有一个显著增加脱氧胆酸胆石患者:27.3 (24.8 - -29.7)%v19.0(15.7 - -22.2)%控制(p < 0.001)v20.6 (14.9 - -26.2)% microlithiasis患者(p < 0.02)。脱氧胆/胆酸比> 1被发现更频繁地在胆石患者20例(8)比在控制microlithiasis患者(17)和(11)之一。
讨论
在这项研究中我们发现患者胆固醇microlithiasis,类似于胆固醇胆石患者,会增加CSI与健康受试者相比。过度饱和的胆汁胆固醇晶体沉淀的先决条件。19CSI的增加可能是由于增加胆汁胆固醇或减少百分之百分之胆汁酸和/或磷脂。在我们的胆固醇胆石病患者,CSI增加由于摩尔百分数的增加胆汁胆固醇,在文献中被广泛接受。20 - 22相反,在我们的患者microlithiasis, CSI增加由于摩尔百分数明显降低磷脂而百分之十二指肠胆汁中胆固醇是正常的。
磷脂胆发挥关键作用溶解胆固醇在胆囊内胆汁的大部分胆固醇在胆囊胆汁液晶的形式存在或薄片,主要含有磷脂。23,24这表明,减少胆汁磷脂会导致胆固醇沉淀的解决方案。胆固醇的普遍效应增加CSI表明这两个因素之间的关系在所有三个病人组。相反,摩尔百分数磷脂没有显示出与CSI在健康受试者和胆石患者,但与CSI microlithiasis患者呈负相关,进一步支持减少胆汁磷脂的作用在决定CSI microlithiasis患者的增加。多变量分析不能被执行,因为小样本大小。
肝磷脂的分泌部分得到了胆汁酸的分泌。25一个特定的分泌机制已被确定在小鼠肝细胞的微管的膜,由mdr2 22。26纯合子小鼠的mdr2基因缺失(mdr2−−)完全没有磷脂胆汁,大大减少肝脏胆固醇分泌,和发展严重淤胆型肝病。26杂合的老鼠不患肝脏疾病但磷脂分泌减少约50%,胆固醇分泌无显著变化,增加胆汁胆汁酸输出。27此模式类似于胆汁脂质中发现患者的胆汁胆固醇microlithiasis。人类的同系物mdr2基因已被确定为MDR3在人类疾病,但其可能的临床意义不完全理解。纯合子缺失的基因已被证明在儿童3型进行性家族性肝内胆汁郁积28但没有信息可在杂合的科目。因此胆固醇microlithiasis可能有遗传基础的可能性是一个有吸引力的工作假说。
的相对摩尔组成胆汁脂质也取决于他们的胆囊粘膜吸收。体外研究执行使用一个孤立的胆囊模型表明,人类胆囊粘膜的接触每分钱胆汁减少胆汁中胆固醇和磷脂,并增加百分之胆汁酸由于粘膜吸收。29日在相同的研究中,在与猪体内实验进行胆囊、磷脂的相对减少,增加胆汁酸、胆固醇水平已经观察到百分之不变,29日类似于我们的microlithiasis病人。减少粘膜吸收胆固醇和磷脂被证明发生在胆固醇胆石患者。30.异常microlithiasis患者可能是由于胆汁,至少在一定程度上增加或异常胆囊粘膜吸收磷脂。沙玛等最近显示异常患者胆囊运动模式胆固醇microlithiasis中间之间在健康受试者和胆固醇胆石患者。9胆囊壁胆固醇含量影响胆囊的能动性,31日和胆囊胆固醇含量的肌肉已经发现胆固醇胆石患者增加。32可以假定,脂质吸收患者的胆囊粘膜microlithiasis有不同的模式,在胆固醇胆石患者,但在这个问题上没有可用的信息。
特点增加胆固醇胆石患者的比例/胆汁酸33并不存在于我们的microlithiasis患者,谁有一个增加胆固醇/磷脂比,进一步表明胆汁成分这两组患者之间的差异。
microlithiasis患者胆汁酸成分类似于发现在健康受试者,缺乏特点增加百分之胆汁胆固醇胆石患者的脱氧胆酸34我们确认在我们群胆石患者。脱氧胆酸有致病作用,增加胆固醇胆石的形成通过增加肝脏分泌的胆汁中胆固醇。10这一发现可能有助于解释正常的每分钱microlithiasis患者胆固醇。
我们的研究结果表明,胆固醇在胆汁过饱和microlithiasis形式通过一个不同的机制与胆固醇,胆固醇胆石患者。自然历史microlithiasis不是完全定义。只有少数患者超声的污泥开发胆结石,6以及是否microlithiasis发展胆石病仍然是一个争议的问题。3成核时间越长时间胆汁和更好的胆囊排空,9一起的多个不同的脂质成分microlithiasis患者胆汁与胆固醇胆石患者相比表明,胆固醇microlithiasis可能从胆固醇胆石病不同的疾病。我们的数据提供进一步支持这一假说,但不能明确是否microlithiasis是胆固醇胆石形成的早期阶段。进一步的研究,对自然历史和microlithiasis的发病机理,需要解决这个问题。
总之,我们已经表明,胆固醇microlithiasis会增加患者CSI类似胆固醇胆石患者。胆汁过饱和microlithiasis不过是因为患者减少百分之胆道磷脂而不是特点增加百分之胆汁胆固醇胆石患者。Microlithiasis病人没有浓缩的胆汁酸池与脱氧胆酸、胆固醇胆石患者一样。
略语
- CSI
- 胆固醇饱和指数
- 高效液相色谱法
- 高效液相色谱法