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案例报告
并发的胃腺癌和十二指肠神经内分泌细胞癌:碰撞复合肿瘤或肿瘤?
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  1. H井一个,b,
  2. M高田c,d,
  3. T千叶b,
  4. R Kashiwagic,
  5. M Sakanec,
  6. F Tabatac,
  7. Y黑田d,
  8. Y建筑师一个,
  9. H川俣町一个,
  10. J Imura一个,
  11. T藤森一个
  1. 一个病理学系Dokkyo大学医学院Mibu,枥木,日本,b胃肠病学和肝脏病学,京都大学医学院毕业,京都,日本,cTabata胃肠医院,明石、日本、d第一外科学系,神户大学医学院的神户,日本,e高田H井和M的贡献同样这项工作。
  1. T博士藤森,Dokkyo大学医学院病理学系880年Kitakobayashi, Mibu, Shimotsuga、枥木321 - 0293,日本。t-fuji在{}dokkyomed.ac.jp

文摘

背景神经内分泌细胞(NEC)癌偶尔伴随着腺癌,但这两个形态不同的肿瘤之间的关系尚不清楚。两个假设出现有关协会的腺癌的机制和NEC癌。一是两者都来自一个共同的multipotential上皮干细胞。第二个假设是,腺癌和NEC癌起源于multipotential上皮干细胞和原始NEC,分别。

的目标是阐明两者之间的关系为不同的肿瘤,腺癌的胃和十二指肠的NEC癌。

病人/方法我们提出一个病例的肿瘤长在幽门环的胃部分显示腺癌而十二指肠部分显示嗜银的NEC癌。这两个组织学上不同的病变肿瘤通过免疫组织化学方法检测和遗传分析p53。

结果胃地区为阴性chromogranin染色,但癌胚抗原(CEA)染色阳性。相比之下,十二指肠地区呈阳性chromogranin东航但消极。所有的肿瘤区域显示一个点突变p53基因外显子7 (GTC GGC(甘氨酸)→(缬氨酸)密码子245)。的远端部分十二指肠肿瘤显示额外的点突变p53基因外显子5 (GTC GCC(丙氨酸)→(缬氨酸)密码子129)。

结论这两个组织学检查不同的肿瘤,腺癌的胃和十二指肠的NEC癌,似乎来自一个常见的上皮细胞。

  • 神经内分泌细胞癌
  • 腺癌
  • 复合肿瘤
  • 碰撞肿瘤

  • 略语

    东航
    癌胚抗原
    NEC
    神经内分泌细胞
    PCR-SSCP
    聚合酶链reaction-single链构象多态性

    • http://dx.doi.org/10.1136/gut.48.6.853

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      众所周知,偶尔神经内分泌细胞(NEC)癌伴有胃肠道腺癌。1,2形态,这种病变分为两个子组:复合式肿瘤,似乎这两个组件混合随意,2 - 4肿瘤和肿瘤collision-type视为双“肩并肩”或“一个在另一个模式。5,6根据这样的形态分类,出现两个假设有关协会的腺癌的机制和NEC癌。一是两者都来自一个共同的multipotential上皮干细胞,NEC癌组件造成分化腺癌的NEC表型在肿瘤进展。7第二个假设是,腺癌和NEC癌起源于multipotential上皮干细胞和原始NEC,分别,它们存在相邻巧合。8测试的假设是正确的,必须同时使用免疫组织化学和遗传学研究,但很少有报道靠近adenocarcinoma-NEC癌频谱以这样一种方式。9

      这里我们报告一个肿瘤患者幽门地区扩展到十二指肠幽门环之外,组织学检查显示幽门腺癌和NEC在十二指肠癌。阐明两者之间的关系为不同的肿瘤病灶,我们进行了免疫组织化学和遗传分析的两个病变。

      病例报告

      一位63岁的老人出现恶心。实验室研究结果显示没有异常尿液,周边血液或血清检查。上消化道内窥镜检查建议幽门地区有梗的肿瘤,与十二指肠溃疡形成扩展超出了幽门环。活检的胃部分肿瘤从十二指肠腺癌而透露,部分揭示了NEC癌。

      胃十二指肠癌的诊断后,远端胃切除术与淋巴结解剖。总检查手术标本显示相邻球形肿瘤在幽门环(图1)。尽管infrapyloric淋巴结、淋巴结后组常见的肝动脉,和这些胰脏头部的后表面是阳性转移,减少切除的样本显示负面结果。针对病人的愿望和生活质量,增加胰十二指肠没有执行。术后当然是平淡无奇,病人出院手术后45天。以下研究Dokkyo大学外科病理学委员会批准和患者知情同意。

      (A) Macroscopic view of the resected specimen showing a spherical tumour located at the pre-pylorus and duodenum. Tissues from six parts in and around the gastroduodenal carcinoma were microdissected to analyse p53 gene mutations: normal duodenum (N1), anal side of duodenal tumour (T1), centre of duodenal tumour (T2), tumour at the pyloric ring (T3), tumour of the stomach (T4), and normal stomach (N2). (B) Distinct areas (T1–T4) which were analysed for p53 gene mutation are indicated by the solid lines. (C) The well circumscribed tumour cell nests in the duodenal region revealed typical medullar growth of neuroendocrine carcinoma (left side). Poorly differentiated adenocarcinoma in the stomach showed small acinar pattern (right side). The pyloric sphincter (asterisk) clearly divides the two histologically distinct lesions.
      " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图1
      图1

      (A)切除标本的宏观视图显示一个球形肿瘤位于pre-pylorus和十二指肠。在胃十二指肠癌的组织从六个部分microdissected分析p53基因突变:正常十二指肠(N1),肛门的十二指肠肿瘤(T1)、十二指肠肿瘤中心(T2),肿瘤在幽门环(T3),胃肿瘤(T4)和正常胃(N2)。(B)不同领域(T1-T4)分析p53基因突变是实线所示。(C)以及限制肿瘤细胞巢显示十二指肠地区典型medullar神经内分泌癌(左侧)的增长。胃低分化腺癌显示小腺泡的模式(右侧)。幽门括约肌(星号)清楚地把两个截然不同的病变。

      方法

      组织病理学检查

      组织在10%缓冲福尔马林固定石蜡和嵌入。部分3μm厚被削减和受到haematoxylin-eosin Grimelius染色。进行免疫组织化学染色和avidin-biotin复杂immunoperoxidase方法使用以下抗体:单克隆鼠标反人类的chromogranin(稀释1:10 0)抗体(Dako日本有限公司、日本京都),单克隆反人类的癌胚抗原(CEA);稀释1:50)抗体(Dako日本公司),和多克隆反人类的p53蛋白(稀释1:20 00)抗体(NCL-p53pCM1;英国纽卡斯尔Novocastra实验室。)。

      遗传分析p53通过聚合酶链REACTION-SINGLE链构象多态性和直接测序

      突变的p53在胃十二指肠癌的基因进行了聚合酶链reaction-single链构象多态性(PCR-SSCP)10和直接测序。胃十二指肠癌的组织从六个部分进行(无花果1从10毫米)。DNA提取每个组织石蜡标本,使用DNA隔离器PS工具包(Wako、日本)。一双每四个外显子的寡核苷酸引物p53准备:外显子5,5′-TCTTCCTGCAGTACTC CCCT-3′(意义)和5′-AGCTGCTCACCA TCGCTATC-3′(反义);外显子6、5′-TGAT TCCTCACTGATTGCT CT-3′(意义)和5′-GAGACCCCAGTTGCAAACC-3′(反义);外显子7、5′-TTGTC TCCTAGGTTG GCTCT-3′(意义)和5′-GCTCCTGAC CTGGAGTCTTC-3′(反义);和外显子8、5′-GCTTCTCTTTTCCTATCCTGA-3′(意义)和5′-CGCTTCTTGTCCTGCT TGC-3′(反义)。PCR反应混合物包含0.1μg每个引物的DNA样本和25 pmol受到放大紧随其后40 94°C的周期为30秒,60°C一分钟,一分钟72°C。两毫升每个放大产品的混合6μl加载缓冲区(95%的甲酰胺,10毫米EDTA, 0.05%溴酚蓝,0.05%二甲苯苯胺)和变性通过加热在95°C 10分钟。5μl整除的示例加载到18%聚丙烯酰胺凝胶(60 W 5小时20°C)和DNA染色使用+ 1银染色设备(法玛西亚生物技术,瑞典)。PCR产品也通过直接测序分析的协议大染料终结者循环测序反应准备工具包(优秀、千叶、日本)。

      结果

      肿瘤在幽门环被手术切除(无花果1),组织病理学检查显示肿瘤胃地区是一个在十二指肠腺癌而地区NEC癌,显示一个典型的质量组成的浸润巢的小统一的肿瘤细胞(图1B、C)。这些神经内分泌肿瘤细胞中未见胃腔。这两个地区的肿瘤明显除以幽门括约肌(无花果1B、C)。胃地区为阴性chromogranin染色但CEA阳性染色。相比之下,十二指肠地区呈阳性chromogranin CEA(图但消极2)。

      Immunohistochemical staining of the gastroduodenal tumour. (A) The duodenal lesion (neuroendocrine cell carcinoma) was positive for chromogranin A but the gastric lesion (adenocarcinoma) gave a negative result. (B) In contrast, the gastric lesion was positive for carcinoembryonic antigen but the duodenal lesion was negative.
      " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图2
      图2

      胃十二指肠肿瘤的免疫组织化学染色。(一)十二指肠病变(神经内分泌细胞癌)阳性chromogranin但是胃损伤(腺癌)给一个负面的结果。(B)相反,胃损伤是癌胚抗原阳性但十二指肠病变是负面的。

      我们检查核积累p53蛋白在肿瘤细胞的免疫组织化学染色。我们发现核积累p53蛋白在大多数肿瘤细胞腺癌组件(图3A)。相比之下,只有少数细胞NEC癌地区被anti-p53抗体染色(图3B)。尽管整个区域的NEC癌不是无花果所示3B在p53染色模式没有区别的不同部分NEC癌(T1、T2和T3)。

      Immunohistochemical staining for p53 protein. (A) Strong nuclear accumulation of the p53 protein in most of the tumour cells in the adenocarcinoma component was observed. (B) Only a few cells in the neuroendocrine cell (NEC) carcinoma region were positive for p53 protein. There was no difference in p53 staining pattern in the different portion (T1, T2, and T3) of the NEC carcinoma (data not shown).
      " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图3
      图3

      p53蛋白免疫组织化学染色。(一)强烈的p53蛋白核积累在大多数肿瘤细胞的腺癌组件被观察到。(B)只有少数细胞神经内分泌细胞(NEC)癌地区p53蛋白阳性。在p53染色模式没有区别在不同的部分(T1、T2和T3) NEC癌(数据没有显示)。

      基因改变的p53(外显子5、6、7和8)进一步研究这两个使用PCR-SSCP肿瘤。所有的肿瘤区域(T1-T4)显示相同的异常乐队p53基因外显子7。只有远端十二指肠肿瘤的一部分(T1)显示异常的乐队p53基因外显子5除了的外显子7(数据未显示)。我们反复检查了突变的外显子5p53NEC的T2和T3地区PCR-SSCP癌,但未能发现乐队从外显子5的流动转变p53在这些地区。我们还研究了突变的p53基因在正常的部分样本由PCR-SSCP (N1和N2)。没有迁移转变中观察到的样本准备正常部分(N1和N2)。确认的突变p53在肿瘤细胞中,PCR产品使用DNA测序(表进行分析1)。所有的肿瘤区域(T1-T4)显示第7外显子点突变(GTC GGC(甘氨酸)→(缬氨酸)密码子245)。的远端部分十二指肠肿瘤(T1)外显子5中显示额外的点突变(GTC GCC(丙氨酸)→(缬氨酸)密码子129)。

      把这个表:
      表1

      测序分析p53基因突变

      讨论

      据报道,NEC癌发生在整个胃肠道。1一般来说,NEC癌的特点是它的亲和力银、内分泌秘书颗粒的存在,和积极pan-neuroendocrine细胞标记,如chromogranin染色。11,12十二指肠肿瘤的一部分在我们目前的情况下显示银染色和积极的免疫反应性chromogranin特点,确认NEC癌的诊断。在这种情况下,NEC的十二指肠癌伴有腺癌在胃幽门区,这两个显然是著名不仅通过苏木精和伊红染色,而且通过免疫组织化学,这表明目前的肿瘤可能是归类为collision-type肿瘤。5,6

      从组织学的角度,认为collision-type肿瘤包括腺癌和NEC出现癌均独立于multipotential上皮干细胞或原始NEC,分别。8相比之下,复合式肿瘤被认为由腺癌和NEC癌出现从一个共同的multipotential上皮干细胞与biphenotypic上皮分化。7阐明致癌腺癌和NEC癌之间的联系更准确地说,我们进行了遗传分析p53基因。一个共同的点突变的外显子7p53基因出现在整个肿瘤,强烈表明腺癌在胃里和NEC在十二指肠癌起源于一个共同的上皮干细胞。在这种类型的肿瘤,它可能很难确定腺癌或NEC癌是主要的病变。在我们目前的情况下,除了常见的p53基因突变的外显子7中,我们发现一个额外的突变的外显子5p53在远端十二指肠NEC癌的一部分。这种突变必须发生后常见的突变的外显子7p53在整个肿瘤,NEC的十二指肠癌可能由腺癌细胞内分泌细胞的表型改变在肿瘤进展。事实上,即使是典型的胃与神经内分泌腺癌通常包含细胞表型可能支持这种可能性。1

      p53蛋白免疫组织化学染色,我们观察到强大的核染色在大多数肿瘤细胞腺癌和模糊核染色的NEC的一些肿瘤细胞癌。然而,我们发现同样的突变p53基因外显子5 (T4)和腺癌地区NEC癌地区(T1、T2和T3),和一个额外的突变p53基因外显子7只在T1样品,NEC的远端部分癌。这些观察结果的可能原因有:(a)虽然p53蛋白在T1, T2和T3部分包含相同的氨基酸替换,p53的表达相关蛋白如MDM2和p14ARF可能与不同的组织病理学特征,不同的细胞和p53蛋白的稳定性可能会改变在这些细胞;此外,一些细胞在T1部分可能收到的第二个突变p53基因,因为这部分是一个扩散的边缘NEC癌但这些第二突变p53不改变基因的稳定性p53蛋白或细胞的表型;(b)虽然我们不能发现额外的突变T2和T3 NEC癌,部分相同的额外的突变p53基因发生在整个NEC癌的一部分,这些第二突变可能改变细胞的表型和p53蛋白的稳定性。

      神经内分泌癌的分化细胞的机制目前还不清楚。据报道,menin是NEC肿瘤发生的基因吗13但它并不总是参与NEC癌的发展。14,15在这项研究中,虽然我们没有分析变更menin在肿瘤,可能第二次突变的外显子5p53与神经内分泌分化相关基因可能是腺癌。目前肿瘤是清晰可辨的NEC分量从幽门腺癌打电话边境只有一个解剖结,但也是一个环境这两个腔的器官。事实上,许多生物因素,如酸度、储存食物的能力,和流动性两个器官之间的不同。

      总之,我们的分子病理方法清楚地表明,腺癌胃和十二指肠的NEC癌来自同一个上皮干细胞,这额外的突变p53基因可能参与了神经内分泌分化腺癌。

      略语

      东航
      癌胚抗原
      NEC
      神经内分泌细胞
      PCR-SSCP
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