256.共培养人食管鳞状细胞和成纤维细胞激活promp -2导致整合素αvβ3表达和mmp-2, mt1-mmp表达下调

背景与目的:多种基质金属蛋白酶(MMPs)的过表达和金属蛋白酶组织抑制剂(TIMPs)的表达降低此前已被推测与多种癌症的肿瘤进展相关。本研究的目的是研究MT1-MMP和α v - β3在人食管癌细胞系与人成纤维细胞共培养时MMPs激活中的相互作用。

方法:采用明胶酶谱法、western blotting和real-time PCR检测OE19、OE33(腺癌)和OE21(鳞癌)细胞系中MMP-2、-9、MT1-MMP、TIMP1和TIMP2蛋白和基因的表达。免疫沉淀法western blotting检测整合素αVβ3水平。对肿瘤细胞和人成纤维细胞系46 Br.1G1进行了接触和非接触共培养实验。

结果:鳞状食管癌(OE21)与腺癌(oe19,33)相比，MMP-2和- 9mrna的表达水平显著提高了14倍(p<0.01)。这与蛋白质水平上proMMP-2(2.5倍)和proMMP-9(2倍)水平的增加有关。整合素αVβ3蛋白也仅在OE21细胞中表达。OE21与成纤维细胞接触共培养使MMP-2和MT1-MMP蛋白水平显著降低(p<0.01)，活性MMP-2蛋白水平升高(12倍)。整合素αVβ3表达随接触共培养而降低。

结论:与食管腺癌相比，鳞状食管癌中MMPs的基因和蛋白质水平较高。整合素αVβ3、MMP2和MT1-MMP在基因水平上的下调可能与proMMP-2的激活相关，仅在与成纤维细胞接触共培养的肿瘤细胞中发生。

257.效果不同的菌株幽门螺杆菌对环氧合酶-2启动子活性的影响- vaca和cag a不参与

一些研究已经证明了这一点幽门螺旋杆菌诱导COX-2，提示这可能解释了胃癌风险的增加幽门螺旋杆菌感染。我们之前描述了COX-2基因的调控幽门螺旋杆菌在转录水平上。有人认为某些菌株的幽门螺旋杆菌对消化性溃疡或胃癌的诱导毒性更强。因此，我们检查了不同菌株的效果幽门螺旋杆菌在启动子水平诱导COX-2。

通过短暂转染COX-2启动子驱动荧光素酶报告基因表达的5'缺失构建物，在胃源性癌细胞系(AGS)中测量COX-2启动子活性。使用8个片段，大小在转录起始位点上游的-50到-1840碱基对之间。转染细胞与4株菌孵育8小时幽门螺旋杆菌2例vacA和cagA阳性(60190和M99)， 2例vacA和cagA阴性(Tx30a和87203)(2x10⁸CFU /毫升)。结果经转染效率校正。

诱导COX-2启动子活性幽门螺旋杆菌菌株使用。在未处理和处理过的细胞中，在转录起始位点上游-50到-80 bp之间似乎存在一个正调控元件，该区域包含cAMP反应元件(CRE)。对于大于161个碱基对的构建物，在处理过的细胞中COX-2启动子的表达增加幽门螺旋杆菌与未感染细胞相比表达的增加与-222碱基对上NF-κB结合位点的包含有关。COX-2启动子诱导的总体模式与所使用的所有菌株相似，与生物体的Cag和Vac状态无关。

这些数据证实了幽门螺旋杆菌COX-2启动子上- 2323bp的NF-κB位点可能在这一调控中起关键作用。然而，CagA和VacA在COX-2诱导中起不了显著作用。

258.幽门螺杆菌增加内皮选择素和细胞黏附分子表达和中性粒细胞黏附

越来越多的证据表明幽门螺旋杆菌通过对胃血管系统的作用对胃施加一些影响。在血管内皮模型中，我们发现COX的两种亚型均有上调幽门螺旋杆菌并描述了一种机制幽门螺旋杆菌相关血小板聚集。在这项研究中，我们检查了幽门螺旋杆菌粘附分子的表达和随后的白细胞-内皮相互作用。

人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在96孔板中培养至融合，血清饥饿过夜，然后暴露于对照培养基，白细胞介素(IL) 1β (100U/ml)或幽门螺旋杆菌M99, 18小时。使用抗p -选择素、e -选择素、VCAM-1和ICAM-1(血管或细胞内粘附分子)的单克隆抗体，采用标准ELISA法检测HUVEC黏附分子的表达。将多形核细胞(PMN)与HUVEC结合在24个孔板上以相同方式预处理的细胞上进行。允许PMN粘附20-30分钟，去除非粘附细胞，使用髓过氧化物酶测定粘附细胞。

p -选择素和VCAM-1的吸光度读数分别增加46%(±14%)和36%(±10%)幽门螺旋杆菌暴露HUVEC与对照组相比。有较小的增长幽门螺旋杆菌e -选择素和ICAM-1的暴露PMN对IL-1β处理的HUVEC的粘附力增加了2-3倍，而对IL-1β处理的HUVEC的粘附力增加了5-7倍幽门螺旋杆菌细胞治疗。

幽门螺旋杆菌引起内皮细胞黏附分子上调，导致中性粒细胞黏附增加。p -选择素的上调也被认为是重要的幽门螺旋杆菌激活血小板。增加的白细胞粘附可能在发病机制中起作用幽门螺旋杆菌诱发性溃疡。

259.“组成型”环氧化酶-1基因的转录调控幽门螺杆菌

虽然COX-1通常被认为是组成型表达基因，但我们之前已经描述了COX-1和COX-2的诱导幽门螺旋杆菌这表明COX-1可能有助于炎症反应。我们还证明了COX-2基因的转录调控幽门螺旋杆菌使用启动子结构。这项研究的目的是确定是否幽门螺旋杆菌对COX-1启动子有调节作用。

通过短暂转染COX-1启动子驱动荧光素酶报告基因表达的5'缺失构建，在胃癌细胞系(AGS)中测量COX-1启动子活性。COX-1启动子与COX-2的不同之处在于它不包含TATA盒，但有几个转录起始位点。我们使用了一个2075个碱基对的片段(相对于翻译起始密码子-2095到-21)。转染细胞活培养8小时幽门螺旋杆菌(菌株60190,tox++，cagA+)，浓度为2x10⁸每毫升细菌数。

幽门螺旋杆菌与未感染的细胞相比，该结构的COX-1启动子活性平均增加31.3%(+/- 6.9%)。值得注意的是，COX-1启动子的这一区域包含两个Sp1结合位点，已知可激活基础基因转录。

这是COX-1基因调控的首次报道幽门螺旋杆菌在启动子层面。我们推测，先前描述的“管家”启动子结合位点如Sp1可能在这一调控中很重要。这项工作有力地支持了这样一种观点幽门螺旋杆菌通过诱导COX-1和COX-2对胃产生作用。

260.幽门螺杆菌氧化损伤和胃癌

背景:肿瘤抑制基因p53的突变是人类癌症中最常见的基因改变，并被认为是早期胃癌发生的关键因素。此外，幽门螺杆菌(HP)是一类致癌物，其存在与胃中端或远端癌症有关。我们推测HP可能通过促进活性氧产生致癌作用。

目的:研究这种关系在体外系统，使用过氧化氢作为活性氧的发生器。

方法:用0μM、100μM和300μM过氧化氢模拟人胃细胞氧化损伤。提取DNA后，采用限制性内切位点突变(RSM)法分析人p53基因外显子5-8的8个限制性内切酶位点发生的突变。每个限制位点对每个剂量范围进行三次重复分析。

结果:突变仅出现在Msp1限制位点(热点248)，主要是GC到AT的转变(60%)。该实验数据表明，5-羟基胞嘧啶加合物在这些突变中，而不是8-羟基鸟苷加合物，后者是氧化损伤的最常见原因。这一发现并不令人惊讶，因为8-羟基鸟苷只具有弱诱变性，易于修复，而5-羟基胞嘧啶具有高度诱变性。

结论:本实验表明，RSM试验可作为早期胃癌氧化损伤的检测方法。现在它将被应用于病人的活检样本(正常、胃炎和肠化生)，以阐明在潜在的癌前胃组织中发生了什么突变。

261.的机制幽门螺旋杆菌诱导血小板聚集-血小板GPIb和FcγRIIa之间的共信号，但对血小板激活因子无作用

人类和动物的数据已经证明已经证实诱导胃血管内血小板聚集。血小板聚集物的形成可能与疾病的发病有关已经证实相关的胃损伤，也可以解释与心血管事件的联系。最近的研究表明，血小板聚集的诱导幽门螺旋杆菌是由于血小板激活因子(PAF)或PAF样物质的分泌所致幽门螺旋杆菌．我们以前描述了一种机制，诱导血小板聚集幽门螺旋杆菌这是血小板糖蛋白(GP) Ib依赖。本研究的目的是进一步明确这一机制的信号通路，并研究PAF的作用。

50 μl菌悬液(幽门螺旋杆菌60190个4 x10⁹在450 μl富血小板血浆中加入CFU/ml)。血小板聚集是通过光透射的变化来测量的。在另一个单独的实验中，CHO β-IX细胞瞬时转染GPIbα (GPIb的相互作用位点)。FITC标记的模拟CHO细胞和转染的CHO细胞与标记的CHO细胞孵育幽门螺旋杆菌60190菌株。

幽门螺旋杆菌60190株诱导血小板聚集(平均62%±2%)。通过共聚焦显微镜，我们发现CHO β-IX细胞转染了GPIbα结合物幽门螺旋杆菌60190而在模拟转染细胞中没有发生结合，证实了GPIb的作用。同时,幽门螺旋杆菌-通过GPIb诱导的血小板聚集依赖于通过血小板结合的FcγRIIa受体的信号，FcγRIIa阻断抗体(CD 16/32)(10μg/ml)被抑制幽门螺旋杆菌诱导血小板聚集率为99±0.4% (p=0.0001)。但PAF不参与，PAF拮抗剂(1μm)对其无作用幽门螺旋杆菌但完全抑制了PAF诱导的血小板聚集。

这些数据证实了幽门螺旋杆菌通过与血小板FcγRIIa受体共信号的GPIbα初始激活血小板诱导血小板聚集。这种机制独立于PAF。这些数据支持了这样的观点幽门螺旋杆菌胃血管系统中诱导的血小板微血栓可能是胃损伤的一个重要早期事件。

262.ras亚型在正常人胰腺中的差异表达在活的有机体内IMMUNO-HISTOCHEMICAL分析

背景:Ras单体GTPases通过将细胞表面受体和整合素连接到细胞内机制，从而影响增殖和凋亡事件，在细胞信号通路中发挥重要作用。已知其突变的致癌形式的Ki-Ras通常发生在各种胰腺病理中，但野生型Ras亚型(Ha-， Ki-和N-)尚未在正常人类胰腺中研究过。

方法:切取正常胰腺的档案甲醛固定石蜡包埋标本，连续4μm切片处理，并与pan-Ras和异形特异性Ras单克隆抗体(mAb)孵育(4℃过夜)，适当的阳性和阴性对照。免疫组织化学检测涉及使用改性聚合物体系。两名独立观察员进行了半定量分析。

结果:胰导管细胞在细胞质中表达Ha-Ras，在根尖区表达Ki-Ras，在上端表达N-Ras (50%)-核分布。腺泡细胞复合体呈轻度平底染色-Ras，核用Ki-Ras和supra染色-N-Ras核分布(50%)。朗格汉斯岛细胞泛ras、Ha染色明显-和Ki-Ras单抗，但N-Ras单抗染色轻微。成纤维细胞呈平底锅染色-Ras和Ki-Ras单抗，但Ha未染色-或N-Ras单抗。

结论:这项工作表明，Ras亚型具有独特和独立的细胞功能。如果要通过基因治疗在胰腺中靶向Ras，详细了解这些功能是必不可少的一步。

263.组织转谷氨酰胺酶增加了a -麦胶蛋白31-49(一种腹腔毒性表位)和a -麦胶蛋白51-70与hla-dq8的结合

作品简介:与DQ2或DQ8相关的麦胶蛋白肽向谷蛋白特异性小肠t细胞的表达被认为是乳糜泻(CD)的关键发病机制之一。组织谷氨酰胺转胺酶(tTG)通过特定谷氨酰胺残基的去酰胺化，增强某些麦胶蛋白肽段与DQ2和DQ8的结合。a -麦胶蛋白31-49(31-49)已经被我们证明在活的有机体内而且在体外腹腔毒性活性，并与DQ2和DQ8结合。然而，最近有证据表明，在a -麦胶蛋白56-75中有一个或两个显性DQ2限制性表位，Q65的tTG去酰胺化对t细胞识别很重要。在这里，我们评估了含有推定显性表位的31-49和a -麦胶蛋白51-70(51-70)与DQ8的结合，有tTG和没有tTG。

方法:用仅表达人DQ8的小鼠成纤维细胞转染物评估生物素化肽的结合。孵育后，用亲和素D-FITC进行双染色，然后对活细胞进行FACS分析。平均FL-1荧光，结合的测量，调整II类表面表达使用单克隆到DQ8。对于tTG(豚鼠肝)测定，多肽与tTG在37℃孵育^oC浸泡2小时后加入细胞。

结果:与31-49相比，51-70与DQ8的结合水平平均为128.3%。tTG处理增强了两种多肽的结合，51-70的结合系数约为3.5,31-49的结合系数为1.5。

讨论:目前尚不清楚与乳糜泻密切相关的DQ2和DQ8是否具有类似的麦胶蛋白t细胞表位序列。这两个分子的结合基序相似，都有接受负电荷残基的倾向，这些残基可以通过tTG的作用产生。在这里，一种类似于被认为是主要CD表位的肽与DQ8的结合具有更高的亲和力在活的有机体内CD活性(这是否在DQ8中特别正确⁺患者不详)。tTG增强了这种绑定。提示在DQ8中51-70可能参与疾病的发病机制⁺和DQ2⁺这些II类异源二聚体可能共享相同的，可能狭窄的麦胶蛋白表位序列。

264.转化生长因子(TGF) β异构体对肠道肌成纤维细胞(IMFs)中金属蛋白酶组织抑制剂-1 (TIMP-1)和基质金属蛋白酶-3 (MMP-3)表达的不同影响:对克罗恩病狭窄形成的意义

背景与目的:我们之前的研究表明，与正常和溃疡性结肠炎的imf相比，克罗恩病的imf在构成性上释放更多的TGFβ-2，而更少的TGFβ-3。TIMP-1和MMP-3在活动性炎症性肠病的黏膜组织中表达。在本研究中，我们研究了TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3重组异构体对MMP-3及其抑制剂TIMP-1表达的影响。

方法:将原代正常结肠IMFs (n=10)单层用rTGF-β1、rTGF-β2、rTGF-β3 (5ng/ml)或对照培养基培养24 h, ELISA法测定上清样品中MMP-3和TIMP-1的浓度。结果以TIMP-1: MMP-3比值的中位数(范围)表示。

结果:与对照[14.8(9.4-18.4)]、rTGF-β1[17.0(14.7-22.9)]和rTGF-β2[16.4(11.4-18.7)]处理的IMFs相比，rTGF-β3[12.1(6.9-15.2)]处理的IMFs TIMP-1: MMP-3比值显著降低(p<0.046、p<0.005和p<0.011)。TIMP-1:对照组与rTGF-β1处理的细胞MMP-3比值未达到统计学意义(p=0.059)。

结论:相对于rTGF-β1和rTGF-β2, rTGF-β3显著降低了TIMP-1相对于MMP-3在IMFs中的表达。在TGF-β3存在的情况下，MMP-3更大的活性可能通过分解细胞外基质的成分来抑制纤维组织的过度沉积。因此，克罗恩病IMFs减少TGF-β3的本构表达可能导致纤维组织过度沉积和狭窄形成。

265.结肠上皮细胞中Cox2的表达和活性依赖于p38应激活化蛋白激酶

作品简介:COX2在炎症性肠病(IBD)和大肠癌(CRC)中表达上调。事实上，有人提出，IBD表达的增加可能是这些患者CRC风险增加的原因。因此，了解COX2的调控在这些条件下是至关重要的。p38应激激活蛋白激酶(SAPKinase)已被证明在其他系统的COX2诱导中发挥作用，尽管这从未在结肠中得到证实。

目的:目的探讨p38在结肠上皮细胞COX2表达及活性中的作用。

方法:在HT-29结肠上皮细胞系中评估COX2的表达和活性。采用northern分析法检测COX2 mRNA表达。通过PGE定量检测COX2的功能活性₂使用ELISA法生产。

结果:分别用TNFα (100ng/ml)和IL-1α (10ng/ml)诱导HT-29细胞中COX2 mRNA的表达。对于这两种细胞因子，通过特异性p38 SAPKinase抑制剂SB203580预孵育，以浓度依赖的方式(0.3-30μM)部分抑制COX2的诱导。为了评估这种影响是否反映在COX2功能活性上，TNFα诱导了PGE₂在72小时评估产量。SB203580 (3 μ m和10μM)对PGE的抑制率为90%₂与COX2 mRNA相比，其作用更为显著。

结论:这项工作首次证明了特异性p38 SAPKinase抑制细胞因子诱导的COX2在结肠上皮细胞中的表达和活性。这也表明TNFα和IL-1α对p38的激活在结肠上皮COX2的诱导中起着重要作用。因此，抑制p38可能为未来抑制COX2提供一个有用的治疗靶点。

266.人散发性结直肠腺瘤的环氧合酶-2与血管生成

背景:我们之前报道过环加氧酶(COX)-2在人散发性结直肠腺瘤中主要由间质巨噬细胞表达。在本研究中，含有cox -2阳性巨噬细胞的浅表区域通常被注意到血管密集。COX-2在肠道肿瘤发生过程中的一个假定作用是通过促进血管生成。因此，我们研究了人散发性结直肠腺瘤中微血管密度(MVD)、COX-2表达和几种临床病理相关因素之间的关系。

方法:我们对一系列人散发性结直肠腺瘤(n=37)进行了CD31免疫组化(IHC)，我们之前通过IHC检测了COX-2的表达水平。由两名独立观察人员对腺瘤起源和COX-2表达水平盲视，评估3个高倍场(x400)视图下浅层和深层间质区血管“热点”的平均MVD。MVD与腺瘤特征相关，包括COX-2表达水平(0-3分)。

结果:与cox -2阴性腺瘤相比，cox -2阳性腺瘤的浅表MVD增加(中位[IQR] 35 [18-45]) (13 [7-30];P=0.037, Mann-Whitney U检验)。随着COX-2表达水平的升高，浅表MVD增加的趋势不显著(P=0.08，单因素方差分析)。然而，临床病理资料(包括COX-2水平)的多元线性回归分析显示，腺瘤大小(P=0.007)是MVD唯一显著的预测因子。腺瘤深部间质区COX-2表达水平与MVD无明显相关性。

结论:人散发性结直肠腺瘤中浅表间质细胞COX-2蛋白表达与血管生成增加相关。然而，在这个系列中，腺瘤大小是腺瘤浅表区域MVD增加的一个更强的预测因子。促进血管生成可能在人类肠道肿瘤发生的早期阶段发挥重要作用。

267.人结直肠癌与Ca下调有关^{2 +}-激活氯离子通道CLCA1和CLCA2

背景:离子通道在癌变和肿瘤进展中的作用尚不清楚。CLCA1和clca2是一个新Ca的成员^{2 +}主要在消化道中表达的依赖氯通道家族。两者都具有双重功能细胞粘附/氯离子通道分子的显著序列一致性，CLCA2是乳腺癌中的肿瘤抑制因子。

方法:抑制减法杂交，反向北点杂交等分析在网上克隆结果鉴定了配对正常结肠上皮和癌之间差异表达的mrna。其中一个是CLCA1，它的转录以及CLCA2的转录，通过实时RT-PCR分析，在另外44对正常和癌样本中定量。

结果:44对和38对样本检测到CLCA1和CLCA2 mRNA, 9对和4对样本的mRNA拷贝数无差异。CLCA1 mRNA水平在1个肿瘤中显著升高，在35个肿瘤中显著降低，中位拷贝数从3.2x10下降⁷5.5 x10⁵(p<0.00001, Mann Whitney u检验)。CLCA2在2个肿瘤中上调，在32个肿瘤中下调，其拷贝数从2.7x10减少⁶1.3 x10⁵(p<0.001)。在正常组织中，CLCA1的转录与c-myc的转录显著相关(R=0.82, p<0.0001, Spearman秩相关)，在肿瘤样本中观察到失调(R=0.36, p<0.015)。这两种mrna的转录在三种结直肠癌细胞系T84、HT29和Caco2中几乎不存在(<1拷贝/细胞)。

结论:我们的研究结果表明，CLCA1/2转录的降低与结直肠癌的发生有关，并提示它们的基因产物可能在结直肠癌中起抑癌作用。

268.HT29人结肠癌细胞中生长抑制菌凝集素及其胞内结合配体Grp170亚细胞定位的电镜研究

Thomsen-Friedenreich抗原(TF, Galβ1-3GalNAcα -)的细胞表面表达增加在恶性和增生性上皮中很常见。我们之前的研究表明，从常见的食用菌中发现了一种TF抗原结合凝集素双孢蘑菇(ABL)对上皮细胞增殖产生显著的可逆抑制作用(癌症Res1993;53:4627)，这种效应与内化后抑制核定位序列(NLS)依赖的核蛋白输入有关(生物化学1999;274: 4890)。我们最近的研究表明，葡萄糖调节蛋白170 (Grp170)是细胞内主要的ABL配体，我们已经证明它表达唾液酸- tf抗原。本研究的目的是利用电子显微镜研究ABL和Grp170的亚细胞定位，并观察这两种蛋白是否与nls依赖性核蛋白输入所需的已知细胞质因子共定位。

HT29人结肠癌细胞用FITC-ABL在无血清DMEM中孵育24小时。然后将细胞固定在2.5%的戊二醛中，脱水并嵌入，在树脂中硬化24h。将FITC-ABL处理和未处理的切片进行ABL和Grp170免疫标记1小时，然后用10nm次级金孵育1h。电镜检查显示24h后细胞质中有大量的ABL和Grp170。也观察到Grp170的ER定位。有趣的是，ABL和Grp170都被观察到在核孔周围共定位。Ran是nls依赖性核蛋白导入所必需的细胞质因子之一，在核孔附近也被观察到。这些结果表明，高度发散的hsp70样蛋白Grp170可能直接参与nls依赖的核蛋白输入。需要进一步的研究来评估其与sialylTF糖基化的功能重要性，并评估其作为癌症治疗靶点的潜力。

269.内皮素-3阻断促进巨结肠疾病器官培养模型中神经元过早分化

目的:胚胎小鼠肠道培养系统中肠内皮素-3 (ET3)的药物阻断导致肠神经嵴细胞(NCC)沿肠道的不完全迁移，从而导致远端结肠神经节增生。我们的目的是通过分析内皮素阻断对NCC增殖、分化和凋亡的影响来确定控制迁移的机制。

方法:从第11.5天的小鼠胚胎中解剖肠道，并转移到有或没有BQ788的培养液中，BQ788是ET3受体(ET_B受体)。培养24h后，通过加入BrdU和TUNEL反应分别检测NCC的增殖和凋亡。培养24-72h后，采用一氧化氮合酶(NOS)免疫反应测定NCC分化。

结果:ET3阻断对肠内NCC增殖和凋亡均无影响。72h后，在用BQ788培养的肠道中鉴定出大量nos阳性神经元，但在对照组中没有，这与远端结肠神经节增生有关。

结论:ET3阻止NCC肠内分化，而不影响增殖或凋亡。因此，在ET3缺失的情况下，迁移性肠内NCC过早分化为非迁移性神经元和远端神经节增生(Hirschsprung病)结果。

270.表皮生长因子及其受体与神经节苷类化合物的作用_M1和G_M3

内吞作用是真核细胞通过各种不同的机制吸收细胞外物质的过程。这些内吞功能涉及细胞表面受体表达的调节、细胞极性的维持、胆固醇稳态和许多其他生理过程。在这项研究中，我们特别关注受体介导的内吞作用(RME)，这是一种用于配体/受体复合物内化的途径，在这种情况下，表皮生长因子(EGF)及其受体(EGFr)。神经节苷对这一过程的有效运作是必要的，本研究着眼于EGFr和神经节苷G之间的关系_M1和G_M3以及神经节苷类物质对RME的影响。我们还定量了细胞系中EGFr和神经节苷的含量。

背景:EGF在细胞表面与它的受体紧密结合，一个175 kd的单跨膜蛋白。一旦结合，特定蛋白激酶的激活发生，诱导一系列细胞反应。许多神经节苷类化合物都是基于其碳水化合物结构，主要表达在质膜的外表面。它们在细胞粘附、信号转导、细胞生长和分化等多种细胞反应中发挥着重要作用。

方法:在组织培养中研究了四种食管细胞系，两种鳞状细胞癌(SCC)细胞系和两种腺癌(AC)细胞系。细胞用荧光标签培养，收集用于FACScan®分析或固定载玻片用于共聚焦显微镜。

结果:EGFr和神经节苷在细胞膜上的共定位;EGFr表达较高的细胞系也有较多的神经节苷酸;与AC相比，SCC中EGFr水平升高;SCC中神经节苷的含量高于AC;G_M3抑制鳞状细胞癌中EGF的作用方式，但对AC无抑制作用。

结论:这些结果为我们提供了EGFr和神经节苷在细胞膜上的位置信息。它们的共同定位表明它们之间存在合作关系。这一证据表明，神经节苷类直接参与了当EGF与EGFr结合时诱导的信号传导机制，这一原则得到了G的抑制方面的支持_M3EGF的一种作用