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高水平的细胞核周围的antineutrophil细胞质抗体(pANCA)在溃疡性结肠炎患者结肠切除术前预测慢性pouchitis回肠pouch-anal吻合后的发展
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背景累积的风险报告的发展中pouchitis溃疡性结肠炎(UC)患者回肠pouch-anal吻合术10年后(IPAA)接近50%。到目前为止,没有发现术前pouchitis的血清学指标。

的目标是评估术前是否细胞核周围的antineutrophil细胞质抗体(pANCA)表达与急性或慢性pouchitis IPAA之后。

方法患者前瞻性评估临床和内窥镜的发展证明pouchitis。血清结肠切除术时获得95年分析了UC患者接受IPAA pANCA ELISA和间接免疫荧光法。pANCA +患者分为高(> 100 ELISA单位(欧盟)/毫升)(n = 9),中度(40 - 100欧盟/毫升)(n = 32)和低水平(< 40欧盟/毫升)子组(n = 19)。

结果六十pANCA 95名患者(63%)的表达。后平均随访32个月(范围1 - 89),32个(34%)患者出现急性(n = 14)或慢性(n = 18) pouchitis。Pouchitis pANCA + 42%的患者相比有20%的pANCA−患者(p = 0.09)。没有显著差异的发病率之间的急性pouchitis三pANCA +耐心的子组。累积的风险患慢性pouchitis患者高水平pANCA(56%)患者结肠切除术之前明显高于中等水平(22%),低水平(16%),和那些pANCA−(20%) (p=0.005)。多变量分析显示,唯一参数显著相关的发展慢性pouchitis IPAA后存在的高水平pANCA之前结肠切除术(p = 0.005)。

结论高水平pANCA结肠切除术前的发展显著相关慢性pouchitis IPAA之后。

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    腹部与回肠结肠切除术pouch-anal吻合术(IPAA)已经成为标准的手术方法对溃疡性结肠炎(UC)患者需要结肠切除术对发育不良,癌症,或医学上反应迟钝的疾病。这个过程移除所有病变粘膜而保留自制transanal排便和相关联的功能结果,患者满意度高。1 - 3

    最常见的长期并发症IPAA加州大学是一种非特异性的炎症后回肠袋俗称pouchitis。2 - 4extraintestinal表现的存在(eim)结肠切除术前加州大学,尤其是原发性硬化性胆管炎(PSC),随着pouchitis的发展有关。4,5然而,阳性预测值的eim pouchitis很低,只有约25%的所有UC患者eim。4尽管PSC的阳性预测值为pouchitis较高,少于5%的加州大学发展PSC患者。5临床上更有用的预测pouchitis发生显然是必要的。

    血清antineutrophil细胞质与细胞核周围的抗体染色(pANCA)被发现在大多数UC患者IPAA之前和之后。6 - 9最近的研究显示,这种标记抗体的表达反映了免疫反应的抗原产品肠道细菌。10,11Seibold证明pANCA交叉与小鼠盲肠的细菌抗原反应。10此外,Cohavy发现pANCA结合大肠杆菌派生的外膜孔蛋白OmpC。11虽然寻找一个传染病导致pouchitis尚未成功,有充分的证据表明,肠道细菌和他们的产品是参与这一疾病的发病机制。与腺瘤息肉病杆菌患者相比,很少开发pouchitis IPAA之后,UC患者容易粘膜炎症的发展由肠道细菌殖民化后回肠袋。2,12 - 15此外,用抗生素治疗pouchitis几乎是屡试不爽。16

    这些一起观察表明,pANCA可能代表的血清学标记pouchitis IPAA后发展。之前研究pANCA表达之间的相关性和pouchitis矛盾的,有三个研究表明积极的协会17日至19日和一些研究证明在pANCA表达无显著差异或没有pouchitis患者。20 - 22所有这些研究是回顾性的设计,许多测量时pANCA pouchitis诊断和手术前,和一些患者检查治疗耐药pouchitis和没有评估治疗急性或慢性反应pouchitis更为普遍。此外,pANCA表达式之间的关系和急性pouchitis尚未解决。这个研究是专门设计来解决这些方法论问题。

    这项前瞻性研究的目的是评估是否术前pANCA表达与急性或慢性pouchitis IPAA之后。此外,绑定的细菌抗原pANCA才被确认患者的高水平的抗体表达,11我们也评估是否术前水平有任何与急性或慢性的发病率pouchitis IPAA之后。结果表明考虑的重要性宿主的免疫反应,高水平pANCA表达式之前结肠切除术后发生率增加慢性pouchitis IPAA。

    材料和方法

    研究人群

    作为前瞻性研究的一部分相关血清学和临床表型遗传标记在炎症性肠病(IBD),一群95 UC患者结肠切除术需要医学上反应迟钝的疾病或发育异常进行了研究。所有患者手术在cedars - sinai医学中心的外科医生(脉冲)截至2000年3月在六年期间符合条件的研究。完成mucosectomy中执行所有的病人。此外,所有患者暂时转移回肠造口术袋时创建。所有患者的临床、影像学和组织学特性UC的诊断。临床、肛周疾病没有和内镜特征包括连续宏观疾病不同距离向近端延长齿状线。放射学评估显示明显缺乏结肠狭窄或小肠疾病。组织学连续微炎症和模式缺乏non-caseating肉芽肿是强制排除克罗恩氏病。此外,这些特性也被审查后确定术中发现并切除标本的病理评价。不定结肠炎患者,于回肠造口术没有逆转,和那些不同意血液用于研究并不包括在研究人口。 Patients with recognised mechanical complications of surgery such as an anal stricture or anastomotic dehiscence were also specifically excluded.

    评估的临床特点

    详细耐心的概要文件被生成的前瞻性调查人员之一(脉冲)个别病人的ANCA蒙蔽状态。病人临床信息收集的图审查和面试。患者被跟踪后第一年每三个月检查气孔关闭,然后每年。临床特点研究包括病人手术的年龄,年龄在UC的诊断,疾病持续时间、性、炎症性肠病家族史,加州大学的解剖位置,eim IBD的反溅回肠炎的存在与否,对手术适应症,pouchitis和时间的发展。疾病的解剖位置的类别分为pancolitis,左路结肠炎、直肠炎。eim包括PSC和皮肤损伤(脓皮病gangrenosum,结节性红斑),骨/关节疾病(关节炎、强直性脊柱炎、sacroileitis),或眼睛疾病(葡萄膜炎,episcleritis)被调查人员和病人的医生认为是炎症性肠病的表现。逆流回肠炎定义的存在宏观或组织学证据表明炎症局限于极端的远端3厘米回肠末端不认为是与克罗恩病相关。手术的适应症包括医学上反应迟钝的疾病、发育不良,或者癌症。

    诊断POUCHITIS

    Pouchitis被定义为临床综合征的特点是增加了粪便的发病频率通常与出血性腹泻,盆腔不适,紧迫感,不适、发烧。的诊断pouchitis被灵活的内窥镜检查确认在所有情况下。内窥镜发现在pouchitis包括粘膜炎症扩散的情况下,通常涉及整个袋,特点是分泌物,溃疡,和红斑,爱惜的近端回肠。急性pouchitis被定义为抗生素响应耀斑发生至少四个月期间病人完全无症状,回到他/她通常肠模式。慢性pouchitis需要连续抗生素治疗症状缓解,还包括那些对抗生素治疗难治的病人。凳子文化时获得常规抗生素治疗失败或慢性pouchitis患者。组织学评价袋不定期进行。患者持续症状,研究排除机械手术并发症如肛门狭窄或部分小肠阻塞。时间来诊断pouchitis被定义为回肠造口术关闭的时间。

    血清ANCA决心和ANCA子类型描述

    研究病人血清结肠切除术前立即被吸引,编码,为未来的分析和存储。血清ANCA表达的分析进行盲评的普罗米修斯实验室(美国加州圣地亚哥)。ANCA的存在是由固定的中性粒细胞ELISA,如前所述。6聚苯乙烯microtitre盘子被涂上一层2.5×105每口井的正常的人类捐赠整个外周血中性粒细胞,然后用100%甲醇固定。细胞培养与牛血清白蛋白(0.25%)在磷酸缓冲盐块非特异性抗体绑定。接下来,控制和编码血清添加1:10 0稀释。孵化和洗涤后,山羊F (ab′)2反人类的免疫球蛋白G(γ链具体)抗体(杰克逊Immunoresearch实验室,Inc .)、西树林,宾夕法尼亚州,美国)共轭添加碱性磷酸酶在1:1000稀释中性粒细胞结合抗体的标签。底物的解决方案包含p硝基酚磷酸随后补充道。显色被允许继续下去,直到吸收能力在405 nm,参考波长为650纳米分子设备(美国加州门洛帕克)E-Max microtitre板读者,在积极控制井0.8 - -1.0光密度单位大于空白的井。水平测定相对于普罗米修斯实验室标准组成的混合血清获得pANCA + UC患者的特征。结果表示为ELISA单位(欧盟/毫升)。血清与循环antineutrophil细胞质IgG抗体超过正常参考范围的值被称为“ANCA +。“负面价值相对于小组汇集pANCA +控制血清称之为“ANCA−。”

    ANCA +血清通过间接免疫荧光染色法来确定进一步的子类型ANCA中性粒细胞绑定模式。包含大约10玻片5正常的人类捐赠整个外周血中性粒细胞每张幻灯片都由cytocentrifugation (Shandon Cytospin,柴郡,英国)。细胞被固定在100%甲醇,风干,储存在−20°C。编码的病人血清稀释(1:20),然后是分层的固定的中性粒细胞,孵化在37°C,然后洗净。荧光素标记F (ab′)2γ链具体山羊反人类的抗体增加,孵化,然后洗,如前所述。6是由荧光显微镜检查的部分使用一个装备数字化的尼康显微镜(美国新泽西州花园城市)。血清出现细胞核周围的突出特点然后失去这一特点染色模式首次接受DNase时被称为“pANCA +”。23

    基于抗体水平分层pANCA +病人

    最近的一项研究Vasiliauskas证明了水平血清免疫标志物,不仅他们的缺席或存在,允许分层IBD患者更同质免疫不同的子组常见的亚临床和临床特征。24Cohavy在研究pANCA水平之间的关系和绑定的大肠杆菌外膜孔蛋白OmpC,发现只有高pANCA血清水平(滴定度> 1/1000,相当于100年欧盟/毫升)有显著的细菌抗原绑定。11这些数据表明,高水平pANCA表达式可能确定的一个子集UC患者可能有不同类型的粘膜炎症代表一个细腻敏感细菌抗原的存在。这些生物模型刺激我们对病人的分析基于定量pANCA抗体表达。pANCA +患者因此基于抗体水平分层分成三组:高水平pANCA患者水平> 100欧盟/毫升;中等水平,欧盟40 - 100 /毫升;和低水平,< 40欧盟/毫升。

    统计分析

    所有数据都进入到一个标准化数据库计算机程序(微软,西雅图,华盛顿,美国)。与SPSS统计分析(SPSS,芝加哥,伊利诺斯州,美国)统计软件包为Windows。我们首先对数转换ANCA水平(包括那些低于参考值范围)来获得更多相关之前准备好了正态分布进行计算和统计测试。正常化变量之间的相关性进行评估的皮尔森相关系数和相应的p值计算。评估血清pANCA和基线临床特征之间的关系,线性回归分析是由指定的抗体水平作为因变量和临床特点为独立变量,使用一个逐步的过程。连续,意味着比较学生的使用t测试。分类变量是使用χ相比2方法或确切概率法(如果预期的细胞计数小于5)。慢性pouchitis自由生存然后绘制使用kaplan meier协变量的各种测试方法。日志等级测试是用来比较这些生存曲线不同的根基。最后,进行了多元分析慢性pouchitis自由生存的使用根据Cox比例风险模型。假设检验是两个站在被认为具有统计显著性p值小于0.05。由于本研究的假设自然生成,Bonferroni调整是不习惯。

    结果

    病人的人口统计和临床特点

    六十一95年研究的患者(64%)是男性(表1)。74年医学上反应迟钝的疾病患者,19(26%)类固醇依赖、55(74%)耐火材料和其他免疫调节疗法,包括6 -巯基嘌呤(n = 51)和/或环孢菌素(n = 37)。回肠造口术关闭后随访时间中位数为32个月(范围1 - 89)。没有病人失去了跟进。

    表1

    病人研究人口的特点

    POUCHITIS

    三十发达pouchitis两个病人,代表总发病率34%。急性pouchitis 14个患者(15%)和慢性pouchitis 18 (19%)。pouchitis诊断的研究小组的平均时间是五个月(范围1 - 63)。没有区别之间的平均时间pouchitis诊断患者急性(5个月)或慢性pouchitis(6个月)。此外,病人年龄、性别、疾病程度,extraintestinal疾病,手术适应症,使用免疫调节药物,存在回流回肠炎pouchitis两组之间没有显著差异。

    和POUCHITIS pANCA表达之间的关系

    血清ANCA检测82例(86%)在结肠切除术前采集的样本。60例患者(63%)有一个细胞核周围的染色模式与DNAse消失(pANCA +)治疗。患者人口统计学没有显著差异或疾病特征之间DNAse敏感pANCA +和pANCA−病人组。

    pouchitis和术前pANCA状态之间的联系图所示1。没有显著差异的总体发病率之间pouchitis pANCA +和pANCA−病人组(p = 0.09)。急性pouchitis的发病率也没有这两个病人组之间明显不同。虽然发病率高的慢性pouchitis pANCA +病人组(25%)比pANCA−病人组(9%),差异无统计学意义(p = 0.09)。

    图1

    在细胞核周围的发病率pouchitis antineutrophil胞质抗体阳性(pANCA +)和消极(pANCA−)患者组。急性的发生率无显著差异(p = 0.7)或慢性(p = 0.09)之间pouchitis pANCA +和pANCA−病人组

    pANCA抗体水平和POUCHITIS之间的关系

    术前pANCA表达式的大小由ELISA定量评价结肠切除术之前主机标记抗体的生产水平。中位数pANCA +病人术前抗体水平组56欧盟/毫升。然而,有一个广泛的术前抗体水平在这个病人组指出,欧盟从10到170 /毫升(无花果2)。有9例(15%)高水平组32例中水平组(53%),和19个病人(32%)低水平组(见方法)。病人特征没有显著不同的三种不同pANCA +组(表2)。多重回归分析使用定量抗体水平作为因变量也证实无显著关系pANCA水平和术前病人临床特征(表3)。

    图2

    术前抗体滴定度(欧盟/毫升)高水平、中等水平,低水平细胞核周围的antineutrophil胞质抗体阳性(pANCA +)患者组。

    表2

    病人的特点在三个不同的细胞核周围的antineutrophil胞质抗体阳性(pANCA +)组

    表3

    使用细胞核周围的线性多元回归分析antineutrophil细胞质抗体水平(pANCA)作为因变量

    pouchitis指出在三个不同的发病率pANCA +患者团体图所示3。78%的pouchitis发病率高水平pANCA +病人组的发生率高于41% pouchitis指出中等水平pANCA +病人组和22%的发病率明显高于低水平pANCA +病人组(p = 0.03)。有趣的是,22%的发病率pouchitis指出在低水平pANCA +病人组类似于pANCA−病人组(20%)。尽管pouchitis的发生率明显高于高水平pANCA +病人组,这种差异的基础上只占慢性pouchitis (p = 0.03)。没有显著差异的发病率之间的急性pouchitis三种不同pANCA +患者团体。

    图3

    急性和慢性pouchitis发病率高水平,中等水平,低水平细胞核周围的antineutrophil胞质抗体阳性(pANCA +)患者组。尽管pouchitis的总发病率明显高于高水平pANCA +病人组,这种差异的基础上只占慢性pouchitis (p = 0.03)。没有显著差异的发病率急性pouchitis (p = 0.21)之间的三种不同pANCA +患者团体

    kaplan meier分析进行的风险评估慢性pouchitis患者结肠切除术前pANCA水平不同(图4)。后的风险患慢性pouchitis IPAA患者结肠切除术前高级pANCA pANCA患者明显高于中等水平,低水平pANCA,患者pANCA−(p=0.005)。

    图4

    累积的慢性pouchitis发病率高水平、中等水平,低水平细胞核周围的antineutrophil胞质抗体阳性(pANCA +)病人团体和pANCA−病人组。后的风险患慢性pouchitis IPAA患者结肠切除术前高级pANCA pANCA患者明显高于中等水平,低水平pANCA,患者pANCA−整体(p = 0.005)。

    多变量分析显示,唯一人口或临床特征的发展显著相关慢性pouchitis IPAA后高水平pANCA表达式之前结肠切除术(p = 0.005)。发展长期的相对风险pouchitis这个病人组高出8倍(风险比8.47;的患者相比,95%置信区间1.67 - -16.95)之前没有表达高水平pANCA结肠切除术(表4)。

    表4

    慢性pouchitis多变量分析的发展

    讨论

    世界各地的许多中心显示pANCA在多数人的血清的UC患者结肠切除术之前,大多数系列的发病率从60%降至80%。9,25日- 27日临床上,pANCA表达式在加州大学与不同的临床表型,包括治疗耐药左路疾病,28积极的疾病,29日,30.和在疾病的早期外科干预的必要性。31日这些研究表明血清pANCA在加州大学反映了不同的生产类型的粘膜炎症。目前的研究表明高水平pANCA结肠切除术前表达与慢性pouchitis IPAA之后的发展。虽然之前pANCA在加州大学的研究主要集中在其缺席或存在随机点IPAA之后,我们的研究是第一次观察到pANCA表达之前结肠切除术,以免疫标记水平,与一个特定的UC患者的临床表型。这种免疫标记的研究结果表明,表达可能反映了不同的炎症机制,影响疾病表达式(即pouchitis开发)。

    Pouchitis transanal大陆水库是最常见的并发症的病人接受IPAA。2 - 4第一次被考克“袋回肠炎”大陆回肠造口术,患者的特点是袋内的细菌和组织学变化。32今天,据悉,pouchitis原因不明的急性或慢性炎症条件影响水库transanal大陆和大陆回肠造口术袋。的频率pouchitis患者接受IPAA变化在15%和51%之间。1 - 512 - 1533-38pouchitis频率的大变化的报告在文献中可以占主要是因为缺乏公认的诊断标准。一些作者定义pouchitis临床理由,2 - 5,8,33,35其他需要内镜确认1,15,18,34,36,37同时其他团体要求具体的组织病理学标准得到满足。12 - 14,17,19,22,38,39使用临床、内镜和特定的组织病理学标准,Sandborn提出了一个索引来评估pouchitis活动。40在我们看来,症状和内镜粘膜炎症的证据可以不再需要大多数患者的活检和组织病理学评价。pouchitis的总发病率的34%是在报告的其他调查人员使用类似的诊断标准。1,15,18,34,36,37

    之前研究pANCA表达之间的相关性和pouchitis矛盾。17-22三个研究发现没有pouchitis和pANCA表达的发病率之间的联系。17日至19日艾森伯格发现pANCA的频率在IPAA“难治性”pouchitis患者没有明显不同,在没有pouchitis IPAA病人。然而,确定pANCA pouchitis时进行诊断,手术前,水平没有考虑。此外,他们研究了患者治疗耐药pouchitis和没有评估治疗慢性反应pouchitis更为普遍。17虽然两个其他的研究没有发现显著差异或没有pouchitis患者之间在pANCA表达式,18,19回顾性研究设计和测量的pANCA变量乘以结肠切除术后不坚决驳斥的可靠性使用pANCA作为术前标记来识别这些患者可能发展pouchitis。另一方面,Sandborn从梅奥诊所测量pANCA一群成年UC患者已经经历了IPAA pANCA的频率,发现患者的慢性pouchitis是100%,相比之下,只有50%的病人没有pouchitis。21另外两个研究已经证实了这些结果。20.,22这三个研究综合起来表明pANCA可能预测pouchitis IPAA之后的发展;然而,这些研究不能回答的回顾性本质是否pANCA测定水平在结肠切除术手术后可以预测pouchitis。此外,他们没有完全检查结肠切除术和急性pouchitis之前pANCA表达之间的联系。

    本研究旨在解决方法论的问题与之前研究的影响pANCA表情pouchitis发展。真正的潜在价值的评估pANCA作为pouchitis血清学标志发展保证了绘制病人血清结肠切除术前立即。后所有患者随访前瞻性IPAA pouchitis使用严格的临床和内窥镜的发展标准由一个调查员失明患者pANCA地位。此外,pANCA决心执行没有知识的病人的临床状态。我们的研究设计也允许两个急性和慢性pouchitis的评估。最后,宿主抗体表达和水平测量方法,使用三个步骤的方法最近已被证明是最敏感的pANCA分析基于人口的群体。41

    急性或慢性的发病率pouchitis pANCA +病人组没有明显高于在pANCA−病人组。因此,术前pANCA表达式本身没有出现预测pouchitis结肠切除术和IPAA之后,确凿的其他研究的结果。17日至19日然而,我们发现了一些有趣的观察检查患者不同pANCA pouchitis发病率水平。我们觉得这个亚组分析是需要基于证据表明:(1)pouchitis是一种细菌免疫介导的疾病2,12日至16日和(2)最近的一项研究结果显示显著的绑定只与UC患者血清高水平pANCA欧盟(> 100 /毫升)和细菌壁抗原(OmpC)位于外膜壁大肠杆菌。11整体pouchitis发病率明显受到高水平的存在pANCA结肠切除术。这种相关性的影响主要是由于高级别pANCA慢性pouchitis的发病率。占本协会的致病的机制仍然未知。高水平pANCA患者可能倾向于细菌产品开发一个活跃的免疫反应。或许进一步描述角色OmpC或其他细菌抗原在炎症级联可以提供洞察这些问题和描绘pouchitis甚至溃疡性结肠炎的发病机制本身。

    患者临床,这项研究表明,高水平pANCA结肠切除术前应告诉他们更高的风险患慢性pouchitis手术后,可能需要长期抗生素治疗。然而,正如大多数慢性pouchitis患者临床改善抗生素治疗,16病人可能会仍然选择长期抗生素治疗的风险代替永久回肠造口术。pANCA此外,高水平表达结肠切除术前加州大学是一个重要的预测慢性pouchitis IPAA之后,这将是有趣的调查是否预防性抗生素治疗UC患者IPAA拥有高水平pANCA表达式后结肠切除术可以防止或推迟pouchitis发展。

    总之,高水平pANCA表达式结肠切除术前预测慢性但不是急性pouchitis IPAA之后。患者高水平pANCA可能代表一个不同的子群的UC患者IPAA后,不同临床表现为行为。

    确认

    作者要感谢罗兰卡普社论援助。支持USPHS格兰特阿宝1 DK46763 Feintech家族椅子在炎症性肠病。

    略语

    加州大学
    溃疡性结肠炎
    PSC
    原发性硬化性胆管炎
    pANCA
    细胞核周围的antineutrophil胞质抗体
    IPAA
    回肠pouch-anal吻合
    EIM
    extraintestinal表现
    欧盟
    ELISA单位

    引用