条文本
PDF
文摘
背景活化的肝星状细胞(hsc)染色法表型是肝纤维化的关键事件。调制识别转录因子的活动在HSC激活将会改善我们的理解的分子事件控制HSC激活。
的目标是来确定E-box DNA结合活性的变化发生在体外和体内活化的老鼠和人类肝星状细胞和调查任何观察到的变化机制。
方法核提取准备从正常大鼠肝星状细胞分离和培养的受伤和四氯化碳大鼠肝脏和肝星状细胞分离出人类肝脏。EMSA E-box分析DNA结合活性进行核提取物来确定变化在HSC激活。西部和北部的污点分析MyoD和Id1基本helix-loop-helix (bHLH)蛋白在HSC确认执行表达式。
结果HSC激活与诱导表达的两个低流动性E-box绑定复合物anti-MyoD抗体免疫反应性的。MyoD mRNA表达被发现在相似的水平在新鲜分离和激活肝星状细胞;相比之下,MyoD蛋白表达在活化肝星状细胞升高。大鼠肝星状细胞的活化是伴随着减少的表达抑制bHLH Id1的蛋白质。
结论体外和体内活化的老鼠和人类的肝星状细胞是伴随着感应MyoD绑定E-box DNA序列,从力学上看似乎与高架MyoD蛋白表达和抑制Id1蛋白的表达。澄清的作用MyoD和Id1 HSC激活和肝脏中蛋白质纤维发生现在是必需的。
- 肝纤维化
- 肝星状细胞
- 基本helix-loop-helix转录因子
- MyoD
- Id1
略语
- HSC
- 肝星状细胞
- α-SMA
- α-smooth肌肉肌动蛋白
- NFκB
- 核转录因子κB
- bHLH
- 基本helix-loop-helix
- Id
- 抑制剂的区别
- EMSA
- 电泳迁移率改变分析
- sds - page
- 钠十二烷基sulphate-polyacrylamide凝胶电泳
- rt - pcr
- 逆转录-聚合酶链反应
- PDGF
- 血小板衍生生长因子
来自Altmetric.com的统计
肝星状细胞(HSC)的能力transdifferentiate为增生性α-smooth肌肉肌动蛋白(α-SMA)积极myofibroblast为肝脏提供了一个实现伤口愈合的机制。1,2然而,过度或进步激活肝星状细胞的条件下可能发生酗酒和病毒感染和过多的细胞外基质积聚导致的疤痕组织最终导致肝硬化。1 - 5因此,重要的是研究分子事件的计划,控制HSC激活,以了解肝脏的正常和病理伤口愈合的过程控制。我们以前使用HSC活化的细胞培养模型来描述持续诱导蛋白质属于AP-1和核转录因子κB (NFκB)家庭调节转录的重要profibrogenic蛋白质等的金属蛋白酶组织抑制剂1和细胞粘附分子1。6,7这种类型的分析可以应用于其他转录因子包括那些属于基本helix-loop-helix (bHLH)家族的蛋白质已被证明作为主人转录监管机构的哺乳动物细胞的生长和分化。8 - 10
bHLH蛋白质的DNA结合识别序列是E-box (CANNTG),存在于大量发育调控基因的启动子和增强子区域。11,12bHLH蛋白质存在两种截然不同的家庭,A和B,绑定到E-box人类的形式,形成。11 - 14号类bHLH蛋白质通常被称为“E”蛋白质,广泛表达。相比之下,B类蛋白质往往是组织或细胞特定和包括肌原性的转录因子以原型因素MyoD控制骨骼肌分化。9第三组相关的bHLH蛋白质被称为抑制剂的区别(Id)缺乏一个DNA结合域和可以作为抑制剂的A类和B类蛋白质。15可想而知,戏剧性的表型变化与HSC的活化可能是部分受bHLH转录因子,我们调查的变化E-box DNA结合活性在体外和体内老鼠和人类肝星状细胞的激活。
方法
老鼠和人类肝星状细胞的分离和文化
主要鼠肝脏的肝星状细胞分离正常或四氯化碳治疗6个月大的雄性老鼠Sprague-Dawley 500克、如前所述。16诱导急性肝损伤的老鼠是通过政府的四氯化碳腹腔内注射0.2毫升/ 100 g无菌四氯化碳与橄榄油1:1的比例,如前所述。17人类肝星状细胞分离得到成年男性部分肝切除术后肝脏进行自愿的病人接受二次癌症起源于小肠切除的。只有那些判断肝组织当地发生的病理学家被用于细胞的准备工作。连续灌注与链霉蛋白酶和胶原酶进行所述的隔离大鼠HSC HSC在分离之前11.5% Optiprep梯度。孤立的老鼠和人类肝星状细胞培养到塑料在杜尔贝科的修改鹰中补充16%胎牛血清和维持在37°C的氛围中5%的股份有限公司2。
电泳迁移率改变分析(EMSA)
制备核提取物和电泳迁移率改变分析条件(EMSA)反应是如前所述。7,8寡核苷酸用于EMSA反应如下:“mE-box”,有义链(S) 5′-CGCCGACCACGTGGTCCCTC-3′和反义链(A) 5′-GAGGGACCACGTGGTCGGCG-3′;“ΔmE-box”(突变mE-box), (S) 5′-CGCCGACATCGCTGTCCCTC-3′和(A) 5′-GAGGGACAGCGATGTCG GCG-3′;“α-SMA E-box”(S) 5′-GATCATAA GCAGCTGAACTGCC-3′和(A) 5′ggc AGTTCAGCTGCTTATGATC-3′;“Δα-SMA E-box”(S) 5′-GATCATAAGTAGGCGAACT gcc 3′和(A) 5′-GGCAGTTCGCCTACTTATGATC-3′;“mα-SMA E-box”(α-SMA E-box核心与mE-box侧翼序列),(S) 5′-CGCCGACCAGCTGGTCCCTC-3′和(A) 5′-GAGGGACCAGCTGGTCGG CG-3′。Supershift /抗体干扰EMSA EMSA反应混合物的反应是由孵化16小时在4°C电泳前4μg多克隆抗体。多克隆抗体都是购自圣克鲁斯(Autogen Bioclear,英国),包括anti-MyoD (m - 318), anti-MyoD (C-20) anti-myogenin (m - 225), anti-c-Myc (n - 262), anti-Max (c - 124)和anti-Mad-1 (fl - 221)。
RNA提取和北方的印迹
从大鼠HSC RNA制备如前所述。16整除20μg总RNA分离变性琼脂糖凝胶1%,转移到尼龙过滤器(Hybond N, Amersham)毛细管洗脱,被暴露在紫外线和固定为5分钟(254海里)。探讨了过滤器与一个寡核苷酸(5′-CGGGGCCTATCAAGTCTGT GTCCCGGAGTGGCGGCGATAGTAGCT CCAT-3′)旨在杂交的第一个49编码核苷酸MyoD cDNA序列;鼠标Id1 Id1的cDNA(约翰·诺顿博士的一种礼物,曼彻斯特,英国);和β-actin鼠β-actin cDNA探针。所有DNA探针用于northern和[α-标签32P] ATP通过随机启动。杂交后16小时42°C,过滤器清洗三次15分钟50°C 0.2×SSC + 0.2%钠十二烷基硫酸盐(SDS)。过滤器受到放射自显影法使用预照光富士AR电影24 - 72小时−70°C。
钠十二烷基硫酸盐(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和免疫印迹
相等的数量(20μg)核蛋白质的提取受到在叠加4% / 12.5% sds - page凝胶电泳加工immunodetection分析如前所述。6,7
逆转录-聚合酶链反应(rt - pcr)检测MyoD mRNA。
提取细胞总RNA(1μg)从7天激活大鼠肝星状细胞是反向使用反义转录MyoD引物5′-CTGCAGACCTTCAATGTAGC-3′。RT反应混合物然后使用感觉MyoD直接用于PCR引物(5′-AAGACCACTAACGCTGATCG-3′)。PCR产品获得1毫米毫克2 +被孵化与钝结束之前发泄聚合酶切除的琼脂糖凝胶电泳和提取产品使用QIAquick凝胶萃取设备(英国试剂盒)。纯化钝端PCR产品就结扎了EcoR V网站pcDNA3(表达载体、英国),变成了大肠杆菌。六个独立的包含PCR克隆产品被测序。
结果
活化诱导调制E-box DNA结合在老鼠和人类肝星状细胞的活动
核提取物新鲜分离和培养大鼠肝星状细胞被EMSA E-box DNA结合活动的探测之前使用一个回文E-box序列(mE-box)用于检测原癌基因DNA结合事件。18核提取新鲜分离大鼠肝星状细胞形成一个mE-box绑定复杂(C)中间流动的凝胶(无花果1一个,1B)。核提取物肝星状细胞培养在时间点从三个小时到14天缺乏形成复杂的C(图的能力1一双),而是形成了一个低流动性复合物(A和B)。复杂总是比复杂的B后者复杂丰富的在一些实验上依稀可见。图1结果也显示了相同数量的核相结合的提取从新鲜孤立和14天激活肝星状细胞在同一EMSA反应混合(FI + 14 d)。在后者的反应,复杂的C是聚集在类似观察反应的水平仅包含来自新孤立肝星状细胞的核内蛋白;相比之下,A和B的复合物水平是大大减少相对于包含核蛋白质完全激活肝星状细胞的反应。
分析E-box DNA结合活动主要鼠和人类肝星状细胞(hsc)。(一)调制E-box培养的大鼠肝星状细胞的DNA结合。核提取物(10μg)准备从新鲜分离(FI)和培养(三个小时到14天)大鼠肝星状细胞被用来检测E-box EMSA DNA结合的活动。控制跟踪(−)缺乏核提取包含在最左边的凝胶。FI + 14天显示添加相同量的影响(10的μg)核提取到同一个EMSA反应混合物。A、B和C表示推迟E-box DNA:蛋白质绑定复合物。(B)调制的E-box DNA结合在体内大鼠肝星状细胞的激活。控制和四氯化碳(三地4)治疗大鼠(48小时)被用来准备肝星状细胞的收获(FI和FI(三地4)为7天(7)或培养7 d和d (CCl4)前核提取物的制备;10μg每个提取的用于电泳迁移率改变分析(EMSA)。(C)的对比老鼠和人类HSC E-box DNA结合活动:10μg核从新鲜提取准备孤立(FI)或8天培养(8 d)大鼠和人类肝星状细胞被用于EMSA化验。凝胶都是代表至少有三个独立的实验。
许多生物化学变化与体外激活肝星状细胞是忠实的变化观察到在HSC激活和肝纤维化动物模型。2,3,19确定如果也这样E-box DNA结合活动,核提取物是从刚准备分离肝星状细胞纯化大鼠的肝脏四氯化碳腹腔注射后48小时,HSC激活的诱导物。17图1B显示核提取准备从这些细胞没有组装复杂的C,而是两个复合物形成相同的机动性复合体A和B中观察到培养的大鼠肝星状细胞分离控制。这个结果是可再生的使用核提取纯化从几个四氯化碳大鼠治疗包括动物暴露在化学三个星期(数据没有显示)。培养的肝星状细胞来源于四氯化碳大鼠治疗导致增加大量的复合体A和B的水平超过控制肝星状细胞培养中观察到一个类似的一段时间。我们得出结论,在体内活化的肝星状细胞的结果类似的调制E-box DNA结合体外观察到的活动。E-box DNA结合活动也比较人类和大鼠肝星状细胞(图1C),表明激活诱导的一般性转移流动的蛋白质:E-box序列DNA的相互作用。
HSC mE-box DNA结合特定的活动序列
测试特异性HSC E-box蛋白质:DNA的相互作用,竞争EMSA反应是使用过多的未标记的具体执行(E-box)或非特异性(SP1)双链寡核苷酸。复合物的组装,B(图2),C(图2B)是有效竞争使用20倍或80倍超过特定的竞争对手;相比之下,没有观察到竞争使用一个80倍超额的非特异性的竞争对手。要求一个完整的E-box形成蛋白质:DNA复合物在mE-box被证明缺乏竞争的突变mE-box寡核苷酸(ΔmE-box)的核心E-box序列5′-CACGTG-3′改为5′-ATCGCT-3′(无花果3直接绑定)。研究表明,一个E-box源自α-SMA基因启动子(“α-SMA E-box”)才能够组装非常弱的蛋白质:DNA复合物与核提取物激活肝星状细胞(数据未显示)。因为这些复合物似乎不同的机动性可以同mE-box,竞争EMSA反应被用来建立如果蛋白质绑定到mE-box也可以绑定到α-SMA E-box。图中所示3一个,野生型和突变体α-SMA E-box可以用mE-box争夺绑定。序列差异的核心E-boxes mE-box (5′caCGTG-3′)和α-SMA E-box (5′caGCTG-3′)探测器中央二核苷酸。当中央CG一双mE-box突变来一双GC合成E-box (mα-SMA E-box)争夺mE-box绑定(无花果3B)。直接绑定研究也证明了嵌合mα-SMA E-box A和B可以组装复合物活化HSC核提取物(数据没有显示)。这些数据表明,侧翼序列的E-box主题有强烈影响的能力特别是与HSC派生bHLH蛋白质。
测定特异性的肝星状细胞(HSC) E-box DNA:蛋白质复合物。(一)竞争电泳迁移率改变分析(EMSA)进行了使用核提取物的大鼠肝星状细胞激活和特定的80倍超额(E-box)或非特异性(Sp1)未标记的双链寡核苷酸作为竞争对手。(B)竞争EMSA执行核提取物新鲜分离大鼠肝星状细胞过度使用一个80倍的具体(E-box)或非特异性寡核苷酸(Sp1)。凝胶都是代表至少有三个独立的实验。
mE-box DNA序列要求绑定。(A)之间的竞争分析mE-boxα-smooth肌肉肌动蛋白(α-SMA) E-box。核提取激活大鼠肝星状细胞(hsc)最初是在孵化80倍超额的未标记的野生型mE-box,突变体(Δ)mE-boxα-SMA E-box,或突变体(Δ)α-SMA E-box孵化与放射性标记之前野生型mE-box调查。(B)竞争分析mE-box与mα-SMA E-box。核提取大鼠肝星状细胞激活最初孵化80倍超额的未标记的野生型mE-box或嵌合mα-SMA E-box寡核苷酸与放射性标记mE-box孵化前调查。凝胶是代表两个独立的实验。
识别bHLH活化HSC的mE-box蛋白质绑定
为了确定HSC bHLH蛋白质表达和mE-box互动,小组抗体识别各种bHLH蛋白质用于supershift /绑定干扰实验。多克隆抗体识别马克斯,Mad-1或肌原性的转录因子myogenin未能生成supershift复合物,不干扰复杂的形成(图4)。相比之下,多克隆抗体(m - 318)承认全长MyoD蛋白质造成的损失a和B .第二个多克隆抗体复合物(C-20)承认只有终端20种氨基酸的羧基端MyoD未能阻止复杂的a和B装配。偶尔一个多克隆抗体识别原癌基因引起了弱干扰复杂的A和B的形成。类似supershift研究也进行复杂的C但是这些实验未能产生显著的反应性与m - 318或C-20 anti-MyoD抗体或其他anti-bHLH试剂用来对付复合体A和B (Vincent,数据未显示)。复杂的蛋白质成分的身份因此C仍然未知。
反应性的肝星状细胞(HSC) mE-box anti-MyoD抗体复合物。电泳迁移率改变分析(EMSA)反应核提取物组成的大鼠肝星状细胞激活和野生型mE-box探针孵化了16个小时在4°C unsupplemented(+)或补充与多克隆抗体识别MyoD (M318或C-20), myogenin,原癌基因,马克斯,Mad-1。这种凝胶是代表两个独立的实验。
MyoD及其抑制剂Id1的表达主要的大鼠肝星状细胞
能力anti-MyoD抗体的m - 318干扰mE-box交互建议主要肝星状细胞可能表达肌原性的转录因子。这是最初使用m - 318抗体经免疫印迹。图5显示大鼠肝星状细胞表达的主要免疫反应性的物种还带有明显的分子量大约50 kDa的协议与以前的报告。20.而表达只是弱新鲜孤立肝星状细胞,文化激活一个或九天导致显著增加50 kDa的物种。巨噬细胞细胞株RAW264.721没有检测到免疫反应性与m - 318演示细胞类型MyoD的具体表达式。类似的结果使用anti-MyoD抗体甜(Vincent和曼,未发表的数据)。北部污点的总RNA寡核苷酸,生存MyoD mRNA显示出同等水平的2.1 kb mRNA的表达新鲜孤立和文化激活大鼠HSC(无花果5B)。MyoD RNA的表达在大鼠肝星状细胞激活使用引物通过rt - pcr分析证实,特别是放大MyoD cDNA序列的核苷酸468年至642年,包容的高度保守的bHLH主题。22一个174个基点MgCl rt - pcr获得的产品21毫米的浓度DNA序列分析证实了有100%的序列的身份与鼠MyoD(无花果5C)。北方的屁股也被探测与互补抑制bHLH Id1的蛋白质。15与MyoD相比,Id1 mRNA水平明显减毒在HSC激活与高水平在新鲜分离细胞表达下调降低但仍可检测水平文化激活细胞(图5B)。Reprobing北部的污点过滤器β-actin cDNA证实一个大致相等的载荷之间的RNA样品。这些后者结果提高Id1的可能性可能在新孤立肝星状细胞因子能抑制组装复杂的新孤立肝星状细胞(图A和B1一个)。
MyoD表达调节大鼠肝星状细胞(hsc)。(一)免疫印迹检测MyoD鼠肝星状细胞的蛋白表达。钠十二烷基sulphate-polyacrylamide凝胶电泳和免疫印迹进行描述的方法使用相同数量的核内蛋白提取物RAW264.7巨噬细胞(R),新鲜分离大鼠肝星状细胞(FI)和大鼠HSC培养(1 d)或九(9 d)天塑料。(B)北部污点MyoD信使rna检测大鼠肝星状细胞。Northern执行所述方法使用相同数量的完整的细胞RNA提取新鲜孤立(FI)大鼠肝星状细胞和大鼠肝星状细胞培养在塑料七(7 d)或九(9 d)天。过滤器是探测与放射性标记cDNA探针MyoD, Id1,β-actin。(C)逆转录-聚合酶链反应(rt - pcr)检测MyoD mRNA的大鼠肝星状细胞激活。反转录后,相同数量的cDNA放大使用引物生成MyoD cDNA序列的核苷酸468年到642年在0.5到2.5毫米MgCl的存在2。单一使用1.0毫米MgCl PCR产品获得了174个基点2是subcloned成pcDNA3和确认为外显子1派生MyoD序列DNA序列分析。
讨论
在这项研究中我们已经证明了主要肝星状细胞表达肌原性的转录因子MyoD和显示该类的E-box DNA结合B bHLH蛋白质在体外和体内激活诱导的大鼠和人类肝星状细胞。MyoD是一个家庭的成员被转录因子调节肌肉在开发过程中特定基因的表达。9蕴涵MyoD DNA结合活性的表达在活化肝星状细胞的转录因子调控基因的控制这些细胞的肌原性的特性。19,第23 - 25在早前的报告,MyoD表达肝星状细胞株中演示了组织化学染色。23然而,它仍然是证明了细胞系,2 g,用于这项研究提供了一个准确的细胞主要激活肝星状细胞的代表。此外,据报道,应该小心谨慎解释免疫染色结果时anti-MyoD抗体的交叉反应目前未知的细胞蛋白质生成出土文物数据。26我们的研究因此大幅进步这个早些时候报告展示的MyoD mRNA的表达,蛋白质和DNA结合活动主要肝星状细胞。
如我们以前所示AP-1和NFκB,6,7活化的肝星状细胞组织培养塑料是伴随着DNA结合蛋白质活性的变化,认识到E-box监管的主题。两项研究以前记录的变化E-box DNA结合在HSC激活,但是没有研究表明MyoD的角色。27,28李等证明了诱导c-Myb: E-box复合物在鼠肝星状细胞激活使用α-SMA E-box序列描述在我们的研究中。27最近,韦纳和同事28描述要求E-box激活启动子序列的甘露糖6-phosphate受体基因对血小板衍生生长因子(PDGF)治疗大鼠肝星状细胞的激活。后者研究E-box元素赋予PDGF响应形成一个复杂的HSC核提取物HSC激活和PDGF诱导的肝星状细胞治疗血清剥夺了。bHLH蛋白质负责这E-box绑定活动没有描述。在目前的研究中,我们已经表明,体外和体内体外大鼠肝星状细胞的激活和人类肝星状细胞的活化是伴随着低流动性的感应E-box绑定复合物(A和B)至少部分由MyoD包含bHLH二聚体。组装MyoD: E-box复合物因此HSC激活的一般特征和可能的功能意义的活化的HSC表现型。
我们的结论mE-box DNA的基础:HSC A和B蛋白复合物含有MyoD组装所需的严格的序列特异性这些复合物加上他们的反应与anti-MyoD多克隆抗体承认全长MyoD m - 318。MyoD包含复合物的组装与mE-box序列,但没有形成相关α-SMA E-box序列。MyoD二聚体已报告喜欢E-box回文的主题,包含5′侧翼一边嘌呤和嘧啶在3′侧翼。11mE-box (5′-广汽CACGTG吸收3′)回文,嘌呤丰富5’侧翼DNA和嘧啶丰富3 '侧翼DNA;相比之下,α-SMA E-box (5 ' -亚美大陆煤层气有限公司CAGCTGAAC格式3 ')不是回文和含有嘌呤丰富的侧翼序列两侧的核心E-box图案。mE-box序列的侧翼序列的重要性被显示了一个嵌合E-box(称为mα-SMA E-box)组成的核心序列α-SMA E-box的侧翼序列mE-box能够争夺与原mE-box探针蛋白结合。这种严格的序列特异性因此支持我们的论点MyoD mE-box蛋白质的组成:在HSC激活DNA相互作用引起的。提供了进一步支持的能力anti-Myo D抗体m - 318 A和B抑制复合物的组装而形成鲜明对比的是抗体识别各种bHLH蛋白质包括相关的肌原性的转录因子myogenin没有效果。然而,第二个MyoD抗体(C-20)提高了对羧基终端也未能识别的蛋白质复合体a和b可能构象限制MyoD: mE-box交互不允许承认C C-20 MyoD的终端区域。mE-box序列类似于一个扩展回文E-box (CCACGTGG)出现在老鼠和仓鼠基因编码嘧啶生物合成的酶carbomyl磷酸合成酶是所需的S期细胞周期。29日,30.插入三个串联mE-box网站上游的单纯疱疹病毒胸苷激酶启动子导致减少的子活动激活大鼠肝星状细胞(曼和文森特,未发表的观察)。因此可能MyoD的其中一个功能是对HSC增殖产生负面影响。其他基因携带扩展回文mE-box像图案包括老鼠CTL-1基因(ACCACGTGGT),编码一个胆碱转运体,31日人类IκB-ε基因(CCCACGTGGG),32和人类电压依赖性钙通道αIG亚基基因(GACCACGTGGTC)。33
诱导形成复杂的A和B在HSC激活伴随着复杂的C和海拔损失MyoD蛋白表达。与HSC激活MyoD mRNA水平保持不变,我们建议MyoD表达式在HSC活化可能是由转录后控制机制。增加的速度合成和/或蛋白水解降解率下降可能导致海拔MyoD的稳态水平。另外,增强MyoD表达式可能的结果归纳MyoD DNA结合活性的最近被证明MyoD绑定到E-box包含DNA可能不太容易泛素介导的退化。34这种稳定效果的DNA MyoD可以废除抑制bHLH蛋白质Id1块MyoD: DNA的相互作用。34我们展示了在目前的研究中,文化大鼠HSC的活化是伴随着快速和长期减少Id1 mRNA水平表明活化肝星状细胞的抑制剂可能会减少。Id家庭蛋白质相对短暂的因素,35Id1 mRNA的观察到的减少会导致类似Id1蛋白表达在活化肝星状细胞的损失。Id1的四个bHLH蛋白质缺乏必需的氨基末端基本区域DNA结合还保留的能力dimerise A类和B类bHLH因素,从而防止其形成DNA结合homo -或形成的能力。15尽管Id1最高亲和力为类蛋白质也热切地绑定到包括MyoD B类蛋白质的一个子集。36因此在静止肝星状细胞,形成高水平的Id1将防止MyoD homo和形成及其与DNA和支持泛素介导的退化。激活,减少水平的Id1将推动MyoD二聚体的形成将稳定的蛋白水解作用导致了稳态MyoD蛋白激活肝星状细胞的水平。我们建议Id1表达式将允许形成的复合物MyoD A和B。也有可能改变DNA结合和/或表达水平的蛋白质成分复杂的C如果复合物的形成也需要A / B和C是互斥的。Downregulation Id1已经与骨骼肌细胞分化而被迫表达Id1可以扰乱各种细胞类型分化的暗示Id1一般细胞分化的抑制剂。36我们示范Id1 mRNA表达的减少与HSC激活表明Id1也作为负调节肝星状细胞的分化转移。未来的研究现在应该指向确定监管的功能角色MyoD和Id1 HSC激活和肝纤维化的分子病理学。这些研究应该包括识别HSC表达基因MyoD DNA结合的目标。
确认
这项工作是由威康信托基金会提供的资助,希望(威塞克斯医疗信托),英国医学研究委员会。KV MRC研究学生和DES是威塞克斯的接受者医疗信托禧博士奖学金。作者感谢约翰·诺顿博士Id1 cDNA礼物。
略语
- HSC
- 肝星状细胞
- α-SMA
- α-smooth肌肉肌动蛋白
- NFκB
- 核转录因子κB
- bHLH
- 基本helix-loop-helix
- Id
- 抑制剂的区别
- EMSA
- 电泳迁移率改变分析
- sds - page
- 钠十二烷基sulphate-polyacrylamide凝胶电泳
- rt - pcr
- 逆转录-聚合酶链反应
- PDGF
- 血小板衍生生长因子