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背景:可靠的非侵入性检测的方法幽门螺杆菌感染需要调查发病率、传输、和间隙感染的童年。
目的:评估一个新的单克隆酶免疫测定(EIA) (FemtoLab H螺杆菌Cnx)检测H幽门抗原在凳子上一大群孩子而与侵入性诊断方法13C尿素呼气试验。
患者和方法:共有302个症状以前未经治疗的儿童(0.5 - -18.7岁;148个女孩)招募了三个中心。H幽门状态是由文化的结果、组织学、快速尿素酶试验,13C尿素呼气试验。粪便样本进行调查当地的环境影响评价使用两种不同的生产很多。根据制造商的建议,光学密度(OD) 0.150被用作切断值。
结果:92年之间的OD值明显分化H幽门感染和210名未受感染的儿童(中位数(5 th - 95百分位数)2.729 (0.232 - > 4.000)v0.021 (0.009 - -0.075))。只有两个假阳性和假阴性的结果发生,敏感性,特异性,阳性预测值,阴性预测值为98%,99%,98%,和99%,分别。没有明显的年龄和OD值之间的关系被发现受感染或非受感染的儿童。
结论:单克隆粪便抗原环评是优秀的诊断H幽门感染症状的孩子。准确性是独立的实验室,生产批量使用,或孩子的年龄。因为只有18/116 < 6岁的儿童被感染H幽门,进一步验证测试是需要年轻的受感染的儿童。
- 孩子们
- 幽门螺杆菌
- 凳子的测试
- 单克隆酶免疫分析法
- 环境影响评价、酶免疫测定
- UBT,13C尿素呼气试验
- 开发部,光密度
来自Altmetric.com的统计
幽门螺杆菌感染几乎总是在儿童早期,通常持续一生,除非特定的治疗。调查传播、发病率、自发的间隙,和预防措施H幽门感染、非侵入性的测试需要在所有年龄组必须可靠,包括幼儿,新感染的发病率最高。1,2在幼儿血清学测试显示低灵敏度;同时,血清学儿童不能被认为是一个非侵入性的测试。3 -,5的13C尿素呼气试验(UBT)有一个很好的敏感性不论年龄,但是特异性降低婴幼儿。5 -,7此外,在这个年龄段UBT需要训练有素的工作人员对空气采样面罩,这可能是不愉快的孩子。酶免疫测定(EIA)检测H幽门抗原在凳子上克服这些困难,粪便样本可以从孩子没有他们获得积极的合作。此外,环评的测试不需要昂贵的仪器如UBT质谱仪。经验获得了HpSA(美国辛辛那提经络诊断),使用多克隆抗体检测抗原在凳子上。8日,9整体性能诊断H幽门感染或评估的成功根除治疗好10 -,12但一些局限性和已报告差异对国际米兰电荷变化,切断值,根除治疗后较低的精度。13 -,15FemtoLab H螺杆菌Cnx是一种新型的基于单克隆抗体检测试验H幽门在粪便抗原。初步结果使用发育测试套件报告了孩子。13本前瞻性多中心研究的目的是评估单克隆EIA检测H幽门感染大量的儿童而良好定义的H幽门建立了侵入性诊断技术和UBT地位。
患者和方法
病人
302多两年,没有孩子(148,154)与腹部症状是参加三个儿科医院(慕尼黑n = 173;阿姆斯特丹n = 97;巴黎n = 32)。所有儿童接受上消化道内窥镜检查,因为腹部的有机胆囊疾病症状。在所有302名儿童,凳子测试结果进行了比较H幽门基于定义的状态活组织检查的结果的方法(快速尿素酶试验、文化和组织学)和/或UBT。
孩子被排除在外,如果他们采取了抗生素或酸抑制药物(质子泵抑制剂,H2受体拮抗剂、抗酸药、铋制剂)在四个星期前测试,如果他们收到了之前的反H幽门治疗,或者H幽门地位不明确。这项研究是由当地伦理委员会批准,并获得了知情同意的家长和孩子,如果合适。
的定义H幽门状态
在胃镜检查过程中,两个活检胃腔和语料库的组织学检查,福尔马林固定,沾染了染色haematoxylin-eosin和修改和查看的存在H幽门由当地一位病理学家其他测试的结果是不可见的(n = 302)。一个窦的标本是获得快速尿素酶试验(n = 222)和细菌培养(n = 309)。活检被运送到了当地微生物实验室的传输媒体,并在四个小时内处理。UBT (n = 274)根据标准化执行协议,如前所述。6测试被定义为积极的从基线值更改时30分钟后≥5%。
H幽门状态被定义为积极的文化和/或至少两个的其他方法(组织学、快速尿素酶试验、UBT)给了积极的结果。一个负H幽门状态被认为是所有的测试给了负面结果一致。
粪便抗原检测
儿童的父母将内窥镜被要求把他们的孩子大便时的过程或通过邮件发送后三天内内镜治疗开始之前。样本储存在−20°C到分析。
粪便抗原测试(FemtoLab H螺杆菌Cnx (Martinsried、德国),相同HpStAR (DakoCytomation GmbH,汉堡,德国)和Ridascreen FemtoLab (R-Biopharm AG),达姆施塔特,德国)执行根据制造商的建议在三个地方微生物实验室使用两种不同的生产很多。这些表现和阅读测试的都不知道H幽门地位的儿童进行测试。粪便抗原测试是一个环境影响评价,使用单克隆鼠标反H幽门抗体吸附microwells捕获抗体。首先,50μl上层清液的稀释粪便样品在0.5毫升(0.1克粪便样本稀释剂),此后50μl共轭单克隆抗体溶液添加到井和孵化瓶一小时在室温下。未装订的材料被洗四次洗涤缓冲。洗后,100μl衬底的解决方案是添加和孵化10分钟。添加100μl停止后的解决方案,结果读了分光光度法(450/630 nm双波长)。
根据制造商的指导方针,光学密度(OD) < 0.150被定义为一种消极和OD≥0.150作为积极的测试结果。
统计数据
敏感性和特异性与置信区间、正面和负面预测值的凳子对定义的测试计算H幽门黄金标准的地位。统计分析了使用SPSS(社会科学统计软件包版本9.1;SPSS Inc .)、芝加哥,伊利诺斯州,美国)。年龄和OD值之间的相关性被Spearman-Rho测试分析。积极和消极的可能性比试验结果确定。16
结果
根据预定义的标准,92(30.5%)的302名患者H幽门积极的;在88/92的孩子,文化是积极的H幽门。剩余的210名(69.5%)儿童在所有负面结果诊断测试执行,因此考虑H幽门负的。
孩子的年龄范围从0.5到18.7年。共有116名患者< 6岁时(98年18阳性和阴性H幽门106),≥6 - < 12年(64年42积极、消极的),剩下的80名儿童被≥12岁(32积极,48 -)(表1⇓)。感染的比例未受感染的儿童三个中心如下:在慕尼黑,55到118;在阿姆斯特丹,27到70;在巴黎,10 - 22所示。儿童家庭的地理背景是欧洲北部或西部188例,23个家庭来自欧洲南部,三个来自东欧,45从土耳其,九个来自亚洲,27个来自非洲,和七个来自美国。
显然环评中的OD值之间的分化H幽门感染(平均2.729 (5 th - 95百分位数0.232 - > 4.000))和未受感染的儿童(0.021 (0.009 - -0.076))。之间没有显著相关性是年龄的病人和OD值H幽门正面的(r=−0.077,p = 0.265)或负面(r=−0.024,p = 0.821)组(无花果1、2⇓⇓)。
光密度值(OD)与年龄与积极的92名儿童幽门螺杆菌的地位。切断值被设定为0.150的OD。
光密度值(OD)对数尺度与年龄与消极的210名儿童幽门螺杆菌的地位。切断值被设定为0.150的OD。
四个孩子被粪便抗原分类错误的测试。两个病人从慕尼黑假阳性结果;一个是感染了弯曲杆菌jejunii内窥镜检查的时候。两个假阴性结果患者来自阿姆斯特丹;都有积极的细菌培养。的四个错误的结果有一个OD值接近切断值(图1⇑)。敏感性、特异性、准确性、阳性和阴性预测值(95%置信区间)表1中给出⇑根据三个不同的年龄组和全球总群。测试结果为阳性的似然比是计算为103。
讨论
尽我们最好的知识,这是第一个基于前瞻性多中心研究的一种新型单克隆环评测试用于建立一个诊断大便H幽门感染孩子。对于每一个孩子,H幽门地位是使用三个不同的测试评估。事实上,文化,被认为是特定的,100%是成功与一个积极的88/92的孩子H幽门的地位。单克隆EIA在粪便样本正确分类的298 302名儿童,给予98%的准确性。
迄今为止,只有一项研究发表之前使用这个单克隆EIA在儿童治疗。Makristathis等厂家提供的使用发展装备时测试还没有销售。13作者在79名儿童进行测试,39人被认为是H幽门积极的根据UBT和血清学阳性结果。测试产生的敏感性为98%,特异性为97%,这是类似于我们的结果的98%和99%,分别。在我们的研究中,这些优秀的结果尽管测试在三个不同的实验室进行了使用两种不同的生产很多。相比之下,HpSA,多克隆起源,似乎有很多问题很多可变性。13这种变化反映广泛的敏感性和特异性的价值观,在一些研究报道低至63%,即使在患者治疗前。8在最近的一次欧洲多中心试验涉及非侵入性测试与基于活检的316名儿童H幽门地位,HpSA实现只有72.7%的敏感性。17
区分正面和负面的结果(无花果1、2⇑⇑)是有价值的。与HpSA测试相比,没有灰色地带是必要的。改善HpSA的准确性,有些研究人员还提出调整切断值。12日,14日,15
依照我们的经验多克隆测试,我们并没有发现任何OD值和患者年龄之间的关系。这是特别有利的儿科设置血清学和UBT都不准确在年幼的儿童。3,5,6,18对特异性,我们相信单克隆EIA检测H幽门抗原在凳子上是优秀的在六岁以下的儿童,在98年未受感染的儿童在我们的研究中属于这个年龄段,和47的不到三岁。相比之下,只有18岁H幽门受感染的儿童不到六岁,只有四个都不到三岁。这反映较大的95%置信区间这个年龄段的敏感性与特异性。因此,对于有关敏感性,最后的结论H幽门受感染的婴幼儿需要研究单克隆抗体测试。
我们不能判断测试将执行腹泻患病率高的发展中国家的儿童由于胃肠道感染。值得注意的是两个孩子的假阳性测试结果遭受弯曲杆菌jejunii感染时的测试,表明两者之间可能会有一些交叉反应性细菌物种。同时,我们需要建立多酸抑制的药物或最近摄入不同的抗生素影响测试结果。我们排除了所有这些药物的患者采取任何在四个星期前测试,以获得一个良好定义的H幽门地位,因为这两种类型的物质可能抑制增长H幽门并导致假阴性结果。8
总之,单克隆EIA凳子的测试是容易执行,并提供优秀的区分正面和负面测试结果。在有症状的儿童的测试非常适合评估H幽门的地位。高精度似乎是独立的实验室,生产很多,和年龄的孩子。一个特定年龄切断值不是必需的,即使在年幼的孩子。因此,如果进一步研究儿童的确认我们的结果,这个测试会成为一名优秀的工具来研究发病率,自发的间隙H幽门感染,预防接种等措施的影响。
确认
这项研究是儿童健康基金会的支持下,慕尼黑。连通GmbH, Martinsried,德国,免费提供测试套件粪便抗原的测定。