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胃gydF4y2Ba
胃泌激素激活核因子κB (NFκB)通过蛋白激酶C涉及NFκB诱导激酶依赖的途径,抑制剂κB激酶(IκB)和肿瘤坏死因子受体相关因子6 (TRAF6) MKN-28与胃泌激素受体细胞转染gydF4y2Ba
免费的gydF4y2Ba
  1. M OgasagydF4y2Ba,gydF4y2Ba
  2. Y宫崎骏gydF4y2Ba,gydF4y2Ba
  3. 年代HiraokagydF4y2Ba,gydF4y2Ba
  4. 年代KitamuragydF4y2Ba,gydF4y2Ba
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  9. Y ShinomuragydF4y2Ba,gydF4y2Ba
  10. Y MatsuzawagydF4y2Ba
  1. 内科和分子科学,医学研究生院,大阪大学、日本大阪gydF4y2Ba
  1. 通信:gydF4y2Ba
    博士Y宫崎骏,内科和分子科学,医学研究生院,大阪大学,B5, 2 - 2 Yamadaoka, Suita大阪565 - 0871,日本;gydF4y2Ba
    宫崎骏在{}imed2.med.osaka-u.ac.jpgydF4y2Ba

文摘gydF4y2Ba

背景:gydF4y2Ba我们以前报道,科学家的胃泌激素诱导表达趋化因子通过核转录因子的激活κB (NFκB)在胃上皮细胞表达胃泌激素受体。gydF4y2Ba

目的:gydF4y2Ba澄清导致激活NFκB胃泌激素受体介导的信号。gydF4y2Ba

方法:gydF4y2BaMKGR26细胞是由使转染胃泌激素受体cDNA成MKN-28细胞。抑制剂κB退化(IκB)和磷酸化的蛋白激酶C (PKC) -δ都检测到免疫印迹分析。NFκB激活是由荧光素酶检测和电泳迁移率改变分析。gydF4y2Ba

结果:gydF4y2Ba胃泌激素诱导降解NFκB IκB-α和激活,废除的选择性胃泌激素受体拮抗剂l - 740093和普通PKC抑制剂GF109203X。胃泌激素诱导的磷酸化PKC-δ及其抑制剂rottlerin部分抑制NFκB激活。然而,有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)激酶抑制剂PD98059, p38 MAPK抑制剂SB203580, tyrphostin AG1478没有影响NFκB激活。引入的主要负突变IκB激酶,NFκB诱导激酶,和肿瘤坏死因子受体相关因子6 (TRAF6),但不是TRAF2,抑制胃泌激素诱导激活NFκB。gydF4y2Ba

结论:gydF4y2Ba胃泌激素通过PKC激活NFκB依赖途径包括IκB激酶,NFκB诱导激酶,TRAF6。gydF4y2Ba

  • 核因子κBgydF4y2Ba
  • 抑制剂κBgydF4y2Ba
  • 胃泌激素gydF4y2Ba
  • 胃泌激素受体gydF4y2Ba
  • 蛋白激酶CgydF4y2Ba
  • 肿瘤坏死因子受体相关因子6gydF4y2Ba
  • κB NFκB、核因素gydF4y2Ba
  • IκB,抑制剂κBgydF4y2Ba
  • MAPK,有丝分裂原激活蛋白激酶gydF4y2Ba
  • PKC,蛋白激酶CgydF4y2Ba
  • 表皮生长因子、表皮生长因子gydF4y2Ba
  • MEK, MAPK激酶gydF4y2Ba
  • IKK, IκB激酶gydF4y2Ba
  • 尼克,NFκB诱导激酶gydF4y2Ba
  • TGF-β转化生长因子βgydF4y2Ba
  • TAK1 TGF-β激活激酶1gydF4y2Ba
  • 肿瘤坏死因子,肿瘤坏死因子gydF4y2Ba
  • TRAF,肿瘤坏死因子受体相关因子gydF4y2Ba
  • ,白介素gydF4y2Ba
  • GPCR G蛋白耦合受体gydF4y2Ba
  • EMSA,电泳迁移率改变分析gydF4y2Ba
  • dn,主要负gydF4y2Ba
  • FCS,胎牛血清gydF4y2Ba
  • EDTA(乙二胺四乙酸gydF4y2Ba
  • BSA,牛血清白蛋白gydF4y2Ba

http://dx.doi.org/10.1136/gut.52.6.813gydF4y2Ba

来自Altmetric.com的统计gydF4y2Ba

    请求的权限gydF4y2Ba

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    肽激素胃泌激素调节不仅酸分泌胃上皮细胞的生长和分化。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba此外,我们最近报道,胃泌激素能够诱导表达白介素8(引发),一个强有力的白细胞的趋化和激活因子,在胃上皮细胞。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba这表明胃泌激素可能参与hypergastrinaemic条件下胃炎症。一般来说,转录因子核因子κB (NFκB)引发启动子基因的激活需要通过各种刺激。gydF4y2Ba3 -gydF4y2Ba,gydF4y2Ba5gydF4y2Ba我们之前证明NFκB也引发的胃泌激素激活启动子基因的关键。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba

    胃泌激素受体属于G蛋白耦合家族受体(GPCRs)包含七个膜覆盖地区。gydF4y2Ba6,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba受体激动剂结合受体激活磷脂酶C,导致水解磷酸二氢磷脂酰肌醇,从而生成肌醇1,4,5-triphosphate和甘油二酯,细胞内钙动员gydF4y2Ba2 +gydF4y2Ba分别和激活蛋白激酶C (PKC)。gydF4y2Ba6,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba之前的研究表明,胃泌激素受体介导的信号不仅PKC还涉及其他丝氨酸/苏氨酸激酶磷脂酰肌醇等3-kinase,皇家空军激酶,有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)激酶(MEK)和MAPK。gydF4y2Ba7 -gydF4y2Ba,gydF4y2Ba9gydF4y2Ba此外,胃泌激素transactivates表皮生长因子(EGF)通过EGF-like诱导生长因子受体。gydF4y2Ba10日,gydF4y2Ba11gydF4y2Ba然而,机制,即胃泌激素激活NFκB在很大程度上是未知的。gydF4y2Ba

    肿瘤坏死因子(TNF)受体和il - 1受体介导的上游信号导致激活NFκB已经有据可查的文学。gydF4y2Ba12 -gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2BaNFκB由人类和形成的Rel家庭成员在细胞质中举行的抑制剂κB (IκB)的蛋白质。IκB激酶(IKK)复杂,由IKKαIKKβ,诱发的两个丝氨酸残基磷酸化IκB附近gydF4y2BaNgydF4y2Ba终点站,导致ubiquitylation和退化的IκB 26 s蛋白酶体。NFκB IκB毁灭之后,可以把原子核从而激活靶基因。IKK复杂由NFκB激活诱导激酶(尼克)和尼克Thr559本身是通过磷酸化激活。gydF4y2Ba18日,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)家族的适配器蛋白质,而被雇来配体受体,参与尼克的激活。gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba虽然在尼克激活TRAFs的精密机械的作用尚不清楚,转化生长因子β(TGF-β)活化激酶1 (TAK1)似乎与TRAF6和激活尼克的il - 1信号通路激活NFκB。gydF4y2Ba21日,gydF4y2Ba22gydF4y2Ba

    本研究进行澄清NFκB胃泌激素诱导激活机制的胃上皮细胞。我们先前建立一个胃上皮细胞系,稳定表达胃泌激素受体DNA转染。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba在这里,我们报告的影响抑制剂和/或显性负突变体的几个胃泌激素诱导激活的蛋白激酶NFκB使用这个模型系统。gydF4y2Ba

    材料和方法gydF4y2Ba

    试剂gydF4y2Ba

    rpmi - 1640中,胎牛血清(FCS)和geneticin (G418)从Gibco BRL购买(美国纽约大岛)。胃泌激素得到17肽研究所(日本大阪)。MEK抑制剂PD98059和PKC抑制剂GF109203X买来σ(圣路易斯,密苏里州,美国)。Rottlerin,抑制剂PKC-δ和PKC-θHBDDE,抑制剂PKC-α和PKC-γGo6976, PKC-α的抑制剂和PKC-βp38 MAPK抑制剂SB203580取自Calbiochem(美国加州圣地亚哥)。抗体和兔兔反人类的IκB-αantiphosphorylated (Thr505) PKC-δ抗体购自圣克鲁斯生物技术有限公司(美国加州Santa Cruz)和细胞信号技术(美国马萨诸塞州贝弗利),分别。[α-gydF4y2Ba32gydF4y2BaP] dCTP购买从Dupont-NEN(美国马萨诸塞州波士顿)。gydF4y2Ba

    选择性胃泌激素受体拮抗剂l - 740093gydF4y2Ba23gydF4y2Ba和一个特定tyrphostin EGF受体AG1478gydF4y2Ba24gydF4y2Ba是由默克公司慷慨地捐赠大幅& Dohme研究实验室(美国新泽西州的法律)和一个博士Levitzki(耶路撒冷希伯来大学、以色列),分别。gydF4y2Ba

    细胞系gydF4y2Ba

    MKGR26转染的细胞在实验室建立了完整的人类CCK-B /胃泌激素受体cDNA MKN-28,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba一个人胃癌细胞系。gydF4y2Ba25gydF4y2Ba控制细胞系(MKN-neo细胞)是由pSV2-neo单独成MKN-28细胞的转染。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba生长在rpmi - 1640细胞中补充10% FCS 100单位/毫升青霉素G和100毫克/毫升链霉素。gydF4y2Ba

    质粒gydF4y2Ba

    包含5份共识的pNFκB-LUC NFκB网站链接到一个最小E1B promoter-luciferase报告基因从Stratagene购买(美国加州拉霍亚)。表达向量pRK5-IKKα(K44A) pRK5-IKKβ(K44A) pRK5-NIK (kk429 - 430 - aa), pRK5-TRAF2(87 - 501),和pRK5-TRAF6(289 - 522)被Tularik公司捐赠。gydF4y2Ba20.gydF4y2BapCMV-HA-TAK1 (K63W)博士的礼物K松本(日本名古屋大学)。gydF4y2Ba21gydF4y2Ba表达向量pTB701HA / PKC-δgydF4y2Ba26gydF4y2Ba(野生型PKC-δ)和pHACE-PKC-δ(K / R)gydF4y2Ba27gydF4y2Ba捐赠了小野Y(日本神户大学)博士和博士Jae-Won Soh(美国纽约哥伦比亚大学)。pEF-PKC-θ(K / R)gydF4y2Ba28gydF4y2Ba戈特弗里德博士是一个礼物-拜尔(奥地利因斯布鲁克大学)。gydF4y2Ba

    转染和荧光素酶检测gydF4y2Ba

    Lipofectamine-Plus (Gibco BRL)是用于转染。在一个典型的实验,为35毫米直径盘包含1×10gydF4y2Ba6gydF4y2BaMKGR26细胞,0.5μg pNFκB-LUC转染使用。在每个实验,细胞与0.1μg cotransfected pRL-SV40 (Promega,麦迪逊,威斯康辛州,美国)作为内标。二十四小时含荧光素酶报告基因的转染后,胃泌激素17添加到培养基的浓度为10gydF4y2Ba−8gydF4y2Bam .确定转染效率,MKGR26细胞转染与pEGFP-C1含有绿色荧光蛋白基因(生活技术,大岛,纽约,美国)。24小时后,观察转染细胞体内通过反向激光扫描显微镜(蔡司LSN510)。我们取得了瞬时转染效率15(2)%(意味着(SD), n = 3) MKGR26细胞使用这个协议。gydF4y2Ba

    24小时后的孵化与胃泌激素,细胞细胞溶解1×荧光素酶裂解缓冲(东洋油墨公司、东京、日本)。使用PicaGene荧光素酶活性测定试剂盒(东洋油墨)Lumat LB9501光度计(离开,Wildbad,德国)。酶活性是正常的转染效率的基础上SeaPansy荧光素酶活性和相对价值确定。独立转染实验进行了6次,平均计算的值。在一些考试细胞preincubated AG1478, PD98059, SB203580, GF109203X, l - 740093, Go6976或rottlerin一小时前胃泌激素刺激。在其他实验细胞与质粒编码主要负IKKαcotransfected IKKβ,尼克,TRAF2, TRAF6, TAK1, PKC-θ或PKC-δ。gydF4y2Ba

    核提取制备和电泳迁移率改变分析(EMSA)gydF4y2Ba

    细胞被刺激的存在与否10gydF4y2Ba−8gydF4y2Ba胃泌激素0.5小时。核提取物Digman细胞准备使用修改的过程。gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba在一些实验细胞preincubated AG1478, PD98059, SB203580, GF109203X, l - 740093, HBDDE,或rottlerin一小时,或被转染质粒编码的主要负面IKKα,IKKβ,尼克,TRAF2, TRAF6 PKC-θ,或PKC-δ,24小时前胃泌激素刺激。蛋白质浓度测定用BCA测定试剂(皮尔斯,罗克福德,伊利诺斯州,美国)。EMSA NFκB是由凝胶转变分析系统(Promega)根据生产的指导方针。的双链寡核苷酸探针NFκB (5 ' -AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC-3 ')和[γ-结束标签gydF4y2Ba32gydF4y2BaP] ATP。每10μg核蛋白质是孵化gydF4y2Ba32gydF4y2BaP标记探针(5×10gydF4y2Ba4gydF4y2Bacpm /反应)和0.5μg /毫升保利(dI-dC)聚(dI-dC) 10μl MgCl绑定缓冲(4%的甘油,1毫米gydF4y2Ba2gydF4y2Ba乙二胺四乙酸(EDTA) 0.5毫米,0.5毫米德勤,50 mM氯化钠,10毫米三羟甲基氨基甲烷盐酸,液pH值7.5)在室温下20分钟。样品被加载到4%聚丙烯酰胺凝胶(acryoamid /gydF4y2BaNgydF4y2Ba,gydF4y2BaNgydF4y2Ba“亚甲基bisacryoamide 30:1的)0.5%硼酸三EDTA缓冲区。经过电泳,凝胶干燥和暴露于柯达XOMAT AR电影(美国伊士曼柯达公司,罗彻斯特,纽约)。gydF4y2Ba

    免疫印迹分析gydF4y2Ba

    细胞生长在60毫米subconfluence菜肴和血清剥夺了24小时。此后他们刺激10gydF4y2Ba−8gydF4y2BaM胃泌激素5、15、30或60分钟,然后在裂解细胞溶解缓冲区包含20毫米三(pH值8.0),137毫米生理盐水、10%甘油、1%诺乃清洁剂p 40, 10毫米EDTA, 100毫米氟化钠,PMSF 1毫米,0.25蒂乌/毫升抑肽酶,和10毫克/毫升亮抑酶肽。整除包含50μg总蛋白质的大小分级,钠十二烷基sulphate-polyacrylamide凝胶电泳梯度凝胶(5 - 20%),和蛋白质被转移到polyvinylidine二氟化物膜(止动剂;微孔,贝德福德,马萨诸塞州,美国)。膜被封锁与块Ace (Dainihon、大阪、日本)和孵化12小时在4°C兔子antihuman-phospho-PKC-δ(Thr505)多克隆抗体(细胞信号技术,Inc .)或兔子antihuman-IκB-α抗体(圣克鲁斯生物技术有限公司)。经过三与三羟甲基氨基甲烷缓冲液渐变20 0.1%生理盐水洗,膜被孵化一小时在室温下与过氧化物酶共轭山羊antirabbit免疫球蛋白(N Pharmaceuticals Inc .,极光,俄亥俄州,美国)。后再洗膜,过氧化物酶与增强化学发光检测系统(发射极耦合逻辑;Amersham)。匀浆的蛋白质浓度测定用BCA蛋白质测定试剂(皮尔斯)。gydF4y2Ba

    隔离壁细胞gydF4y2Ba

    豚鼠隔离壁细胞制备和丰富如前所述。gydF4y2Ba11gydF4y2Ba简而言之,两只雄性豚鼠体重约300克,曝露了戊巴比妥牺牲和腺胃被切除。胃底粘膜被刮掉,放置在40毫升的缓冲区(0.5毫米不gydF4y2Ba2gydF4y2Ba阿宝gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,1.0毫米NagydF4y2Ba2gydF4y2BaHPOgydF4y2Ba4gydF4y2Ba70毫米氯化钠5毫米氯化钾,11毫米葡萄糖,2毫米EDTA, 50 mM玫瑰(pH值7.2),20毫米NaHCOgydF4y2Ba3gydF4y2Ba,2%的牛血清白蛋白(BSA)为2.5毫克/毫升链霉蛋白酶(Kaken制药有限公司、东京、日本),随后孵化在温和搅拌15分钟37°C。粘膜片段然后离心机为一分钟250gydF4y2BaggydF4y2Ba在室温下。浮在表面的丢弃,其余组织块resuspended 40毫升(1.0毫米CaCl缓冲BgydF4y2Ba2gydF4y2Ba和1.5毫米MgClgydF4y2Ba2gydF4y2Ba相反的EDTA缓冲区),而且进一步孵化不断吹嘘95% OgydF4y2Ba2gydF4y2Ba/ 5%股份有限公司gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。孵化混合物通过尼龙布料和离心过滤,随后再悬浮rpmi - 1640中含0.1% BSA和10毫米玫瑰(pH值7.2)。分离不同的细胞群是通过逆流离心淘洗系统(SRR6Y;日立工业,日本东京)。细胞悬液是在10毫升/分钟的流量加载到淘洗室,1800 rpm。七种不同的细胞分数(F1-F7)分离以下流速:F1, 10毫升/分钟;F2, 15毫升/分钟;F3, 20毫升/分钟;F4, 25毫升/分钟;F5, 30毫升/分钟; F6, 40 ml/min; and F7, 80 ml/min. Cells in F6 and F7 were collected, resuspended in serum free RPMI medium containing 5 mMNgydF4y2Ba乙酰半胱氨酸(σ)。与GF109203X或rottlerin两小时的预处理后,细胞孵育10gydF4y2Ba−8gydF4y2Ba胃泌激素30分钟。核提取收集并受EMSA如上所述。gydF4y2Ba

    统计数据gydF4y2Ba

    数据表示为(SEM)方法。使用学生的统计进行了比较gydF4y2BatgydF4y2Ba测试。p < 0.05被认为是统计上的显著水平。gydF4y2Ba

    结果gydF4y2Ba

    激活NFκB胃泌激素及其抑制胃泌激素受体拮抗剂和PKC抑制剂gydF4y2Ba

    胃泌激素的影响的绑定活动了NFκB EMSA(图1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。NFκB特定dna蛋白质复合物被观察到在核MKGR26细胞的蛋白质与胃泌激素治疗。然而,这种效应被废除的预处理与胃泌激素受体拮抗剂l - 740093。我们也检查了GF109203X PKC抑制剂的影响,MEK抑制剂PD98059, p38 MAPK抑制剂SB203580, tyrphostin AG1478 NFκB特定dna蛋白质复合体的形成。预处理GF109203X废除这胃泌激素诱导形成复杂而AG1478 PD98059和SB203580没有影响NFκB绑定活动(图1)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

    Effects of tyrphostin AG1478, the protein kinase C inhibitor GF109203X, the mitogen activated protein kinase kinase inhibitor PD98059, the p38 mitogen activated protein kinase inhibitor SB203580, and the gastrin receptor antagonist L-740,093 on gastrin induced activation of nuclear factor κB (NFκB), assessed by electrophoretic mobility shift assay (EMSA). (A) After incubation with the inhibitors for one hour, MKGR26 cells were treated with gastrin for 0.5 hours. Nuclear cell extracts of MKGR26 cells were assayed for NFκB DNA binding activity using the labelled oligonucleotide probes. (B) MKGR26 cells were transfected with pNFκB-LUC and pRL-SV40 as an internal standard. After preincubation with the inhibitors for one hour they were treated with gastrin for eight hours and the luciferase assay was performed. The results are expressed as fold induction compared with control cells treated with vehicle alone. Values are means (SEM) from six independent experiments (*p<0.05 v bar 1; †p<0.05 v bar 2).
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图1gydF4y2Ba
    图1gydF4y2Ba

    影响tyrphostin AG1478,蛋白激酶C抑制剂GF109203X,有丝分裂原激活蛋白激酶激酶抑制剂PD98059, p38有丝分裂原激活蛋白激酶抑制剂SB203580,和胃泌激素受体拮抗剂l - 740093胃泌激素诱导活化的核因子κB (NFκB),电泳迁移率改变分析评估(EMSA)。(A)与抑制剂的孵化后一个小时,MKGR26细胞治疗胃泌激素0.5小时。核细胞提取物的MKGR26细胞化验NFκB使用标记的寡核苷酸探针DNA结合活性。(B) MKGR26细胞转染和pNFκB-LUC pRL-SV40作为内部标准。与抑制剂的预培养后一个小时他们八小时胃泌激素处理和荧光素酶检测。结果表示为褶皱感应而控制细胞单独处理车辆。值方法(SEM)从六个独立实验(* p < 0.05gydF4y2BavgydF4y2Ba酒吧1;†p < 0.05gydF4y2BavgydF4y2Ba2)。gydF4y2Ba

    我们接下来与MKGR26细胞进行荧光素酶化验使用报告基因pNFκB-LUC包含NFκB五串联重复序列的结合位点。如图1所示gydF4y2Ba⇑gydF4y2BaGF109203X抑制胃泌激素诱导是AG1478检测荧光素酶活性,但没有影响,PD98059或SB203580。这是在与EMSA通用协议的结果。gydF4y2Ba

    NFκB PKC-δ参与胃泌激素诱导激活gydF4y2Ba

    NFκB的含义的PKC激活胃泌激素促使我们确定哪些PKC同功酶负责诱导这一现象。我们首先检查PKC抑制剂的影响胃泌激素NFκB特定dna蛋白质复合体的形成。Rottlerin,一个已知的抑制剂PKC-δPKC-θ,部分抑制dna蛋白质复杂的形成(图2gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。相比之下,HBDDE抑制剂PKC-αPKC-γ,没有影响复杂的形成(图2gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。我们下一个决心和Go6976 rottlerin的影响,对荧光素酶抑制剂PKC-αPKC-β,使用pNFκB-LUC活动。与EMSA结果一致,rottlerin抑制胃泌激素诱导转录活动的NFκB MKGR26细胞。然而,Go6976没有影响这个过程(图2 bgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。我们还证实,在豚鼠胃泌激素激活NFκB隔离壁细胞和GF109203X和rottlerin减少胃泌激素诱导NFκB绑定活动(图2 cgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。胃泌激素rottlerin抑制NFκB激活,是否引入显性负突变PKC-δ或PKC-θ会抑制胃泌激素诱导NFκB荧光素酶活性在MKGR26细胞检查。因此,占主导地位的消极(dn) PKC-δ废除胃泌激素刺激NFκB激活而dnPKC-θ没有影响(图3所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

    Effects of protein kinase C inhibitors on gastrin induced activation of nuclear factor κB (NFκB). (A) After incubation with rottlerin or HBDDE for one hour, MKGR26 cells were treated with gastrin for 0.5 hours. Nuclear cell extracts of MKGR26 cells were assayed for NFκB DNA binding activity using the labelled oligonucleotide probe. (B) MKGR26 cells were transfected with pNFκB-LUC and pRL-SV40 as an internal standard. After preincubation with rottlerin or Go6976 for one hour, they were treated with gastrin for eight hours and the luciferase assay was performed. The results are expressed as fold induction compared with control cells treated with vehicle alone. Values are means (SEM) from six independent experiments (*p<0.05 v bar 1; †p<0.05 v bar 2). (C) Guinea pig parietal cells were isolated and incubated with or without GF109203X or rottlerin for two hours. Then, cells were treated with gastrin for 0.5 hours and the nuclear cell extracts were assayed for NFκB DNA binding activity using the labelled oligonucleotide probe.
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图2gydF4y2Ba
    图2gydF4y2Ba

    影响胃泌激素诱导激活的蛋白激酶C抑制剂抑制核转录因子κB (NFκB)。(A)与rottlerin或HBDDE孵化后一个小时,MKGR26细胞治疗胃泌激素0.5小时。核细胞提取物的MKGR26细胞化验NFκB使用标记的寡核苷酸探针DNA结合活性。(B) MKGR26细胞转染和pNFκB-LUC pRL-SV40作为内部标准。与rottlerin或Go6976预培养后一个小时,他们对待八小时胃泌激素和荧光素酶检测。结果表示为褶皱感应而控制细胞单独处理车辆。值方法(SEM)从六个独立实验(* p < 0.05gydF4y2BavgydF4y2Ba酒吧1;†p < 0.05gydF4y2BavgydF4y2Ba酒吧2)。(C)豚鼠壁细胞被孤立和孵化有或没有GF109203X或rottlerin了两个小时。然后,细胞治疗胃泌激素0.5小时和核细胞提取化验了NFκB使用标记的寡核苷酸探针DNA结合活性。gydF4y2Ba

    Effects of protein kinase C (PKC) isozyme mutants on gastrin induced nuclear factor κB (NFκB) activation. MKGR26 cells were cotransfected with 0.5 μg of pNFκB-LUC and a construct encoding the dominant negative (dn) mutant of PKC-δ or PKC-θ. After 24 hours, cells were treated with gastrin for eight hours and the luciferase assay was performed. The results are expressed as fold induction compared with control cells treated with vehicle alone. Values are means (SEM) from six independent experiments (*p<0.05 v bar 1; †p<0.05 v bar 2).
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图3gydF4y2Ba
    图3gydF4y2Ba

    蛋白激酶C (PKC)同工酶突变体的影响胃泌激素诱导核因子κB (NFκB)激活。MKGR26细胞cotransfected 0.5μg pNFκB-LUC和构造编码的主要负面(dn)突变PKC-δ或PKC-θ。24小时后,细胞胃泌激素治疗,疗程8小时和荧光素酶检测。结果表示为褶皱感应而控制细胞单独处理车辆。值方法(SEM)从六个独立实验(* p < 0.05gydF4y2BavgydF4y2Ba酒吧1;†p < 0.05gydF4y2BavgydF4y2Ba2)。gydF4y2Ba

    胃泌激素磷酸化PKC-δMKGR26细胞gydF4y2Ba

    因为PKC-δ似乎调解NFκB胃泌激素诱导激活,我们下决定是否胃泌激素诱发的磷酸化PKC-δ使用phospho-PKC-δ抗体免疫印迹分析。如图4所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba,胃泌激素诱导的磷酸化PKC-δMKGR26细胞在时间依赖方式,虽然它不是MKN-neo观察到的细胞。的磷酸化形式PKC-δ开始后5分钟内检测胃泌激素刺激和磷酸化水平达到15分钟,然后仍超过60分钟。gydF4y2Ba

    Gastrin induced phosphorylation of protein kinase C (PKC)-δ. MKGR26 cells and MKN-neo cells were treated with gastrin for 0, 5, 15, 30, or 60 minutes and cell lysates were then obtained. Proteins were size fractionated by sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis and transferred to membranes. Membranes were reacted with rabbit antihuman-phospho-PKC-δ (Thr505) polyclonal antibody, incubated with peroxidase conjugated goat antirabbit IgG, and peroxidase was detected with an enhanced chemiluminescence system.
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图4gydF4y2Ba
    图4gydF4y2Ba

    胃泌激素诱导的磷酸化蛋白激酶C (PKC) -δ。MKGR26细胞和MKN-neo细胞胃泌激素治疗,疗程0 5、15、30、60分钟和细胞溶解产物被获得。蛋白质是由钠十二烷基大小分级sulphate-polyacrylamide凝胶电泳和转移膜。膜反应了兔子antihuman-phospho-PKC-δ(Thr505)多克隆抗体,孵化与过氧化物酶共轭山羊antirabbit免疫球蛋白,和过氧化物酶与增强化学发光检测系统。gydF4y2Ba

    胃泌激素诱发IκB退化gydF4y2Ba

    众所周知,il - 1和TNF-α诱导激活NFκB通过磷酸化依赖IκBs退化。gydF4y2Ba16gydF4y2Ba免疫印迹分析使用anti-IκB-α抗体是否胃泌激素诱发IκB-α退化。减少IκB-α蛋白质开始后的五分钟内观察胃泌激素刺激MKGR26细胞虽然我们找不到MKN-neo细胞退化(图5所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

    Gastrin induced degradation of inhibitor κB (IκB)-α. MKGR26 cells and MKN-neo cells were treated with gastrin for 0, 5, 15, or 30 minutes and cell lysates were obtained. Proteins were size fractionated by sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis, and then transferred to polyvinylidine difluoride membranes. Membranes were reacted with rabbit antihuman-IκB-α antibody, incubated with peroxidase conjugated goat antirabbit IgG, and peroxidase was detected with an enhanced chemiluminescence system. Quantitated signals were determined by densitometry.
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图5gydF4y2Ba
    图5gydF4y2Ba

    胃泌激素诱导退化抑制剂κB -α(IκB)。MKGR26细胞和MKN-neo细胞胃泌激素治疗,0,5、15日或30分钟和细胞溶解产物。蛋白质是由钠十二烷基大小分级sulphate-polyacrylamide凝胶电泳,然后转移到polyvinylidine二氟化物膜。膜与兔子antihuman-IκB-α抗体反应,孵化与过氧化物酶共轭山羊antirabbit免疫球蛋白,和过氧化物酶与增强化学发光检测系统。量化信号由微。gydF4y2Ba

    激酶缺陷IKKs和尼克抑制胃泌激素NFκB激活gydF4y2Ba

    所需的由IKK IκB磷酸化其退化,gydF4y2Ba12日,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba我们决定IKKs参与胃泌激素诱导NFκB激活。EMSA进行评估的参与IKKs NFκB特定dna蛋白质复杂的地层由胃泌激素。MKGR26细胞转染和0.5μg dnIKKαdnIKKβ前胃泌激素刺激。表达dnIKKα或dnIKKβ抑制胃泌激素诱导NFκB绑定活动,表明IKKs所需的响应(图6gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。因为尼克IKK复杂被激活,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba尼克参与NFκB激活被胃泌激素检查。的Coexpression dnNIK抑制胃泌激素诱导NFκB激活(图6 agydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

    Effects of inhibition of inhibitor κB kinase (IKK) or NFκB inducing kinase (NIK) on gastrin induced nuclear factor κB (NFκB) activation. (A) MKGR26 cells were transfected with 1 μg of pRK5 or a construct encoding the dominant negative (dn) mutant of IKKα, IKKβ, or NIK. After 24 hours, MKGR26 cells were treated with gastrin for 0.5 hours. Nuclear cell extracts of MKGR26 cells were assayed for NFκB DNA binding activity using the labelled oligonucleotide probe. (B) MKGR26 cells were transfected with pNFκB-LUC and pRK5 or a construct encoding the dominant negative (dn) mutant of IKKα, IKKβ, or NIK. pRL-SV40 was cotransfected as an internal standard. After 24 hours they were treated with gastrin for eight hours and the luciferase assay was performed. Results are expressed as fold induction compared with control cells treated with vehicle alone. Values are means (SEM) from six independent (*p<0.05 v bar 1; †p<0.05 v bar 2).
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图6gydF4y2Ba
    图6gydF4y2Ba

    抑制剂的抑制效果κB激酶(IKK)或NFκB诱导激酶(尼克)胃泌激素诱导核因子κB (NFκB)激活。(A) MKGR26细胞转染与1μg pRK5或构造编码的主要负面(dn)突变IKKα,IKKβ或尼克。24小时后,MKGR26细胞胃泌激素治疗,疗程0.5小时。核细胞提取物的MKGR26细胞化验NFκB使用标记的寡核苷酸探针DNA结合活性。(B) MKGR26细胞转染和pNFκB-LUC pRK5或构造编码的主要负面(dn)突变IKKα,IKKβ或尼克。pRL-SV40 cotransfected作为内部标准。24小时后他们八小时胃泌激素处理和荧光素酶检测。结果表示为褶皱感应而控制细胞单独处理车辆。值方法(SEM)从六个独立的(* p < 0.05gydF4y2BavgydF4y2Ba酒吧1;†p < 0.05gydF4y2BavgydF4y2Ba2)。gydF4y2Ba

    我们还进行了荧光素酶检测评估的参与IKKs和尼克激活NFκB胃泌激素。MKGR26细胞与pNFκB-LUC结合dnIKKαcotransfected dnIKKβ或dnNIK。如图6所示gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba,引入dnIKKαdnIKKβ或dnNIK NFκB的胃泌激素诱导绑定活动减少。gydF4y2Ba

    占主导地位的消极TRAF6但不是TRAF2抑制胃泌激素诱导NFκB激活gydF4y2Ba

    TRAF6和TRAF2在尼克的激活il - 1、TNF受体介导的信号,分别。gydF4y2Ba19日,gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba因此,我们决定TRAF2和TRAF6是否参与胃泌激素受体信号通路介导的。Coexpression dnTRAF6抑制NFκB特定dna蛋白质复杂的形成而dnTRAF2没有效果(图7gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。EMSA一致结果,引入dnTRAF6造成减少胃泌激素诱导NFκB活动而dnTRAF2没有影响(图7 bgydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

    Effects of inhibition of tumour necrosis factor receptor associated factor (TRAF) 2 or TRAF6 on gastrin induced nuclear factor κB (NFκB) activation. (A) MKGR26 cells were transfected with 1 μg of pRK5 or a construct encoding the dominant negative (dn) mutant of TRAF2 or TRAF6. After 24 hours cells were treated with gastrin for 0.5 hours. Nuclear cell extracts of MKGR26 cells were assayed for NFκB DNA binding activity using the labelled oligonucleotide probe. (B) MKGR26 cells were transfected with pNFκB-LUC and pRK5 or a construct encoding the dominant negative (dn) mutant of TRAF2 or TRAF6. pRL-SV40 was cotransfected as an internal standard. After 24 hours they were treated with gastrin for eight hours and the luciferase assay was performed. Results are expressed as fold induction compared with control cells treated with vehicle alone. Values are means (SEM) from six independent (*p<0.05 v bar 1; †p<0.05 v bar 2).
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图7gydF4y2Ba
    图7gydF4y2Ba

    抑制肿瘤坏死因子受体相关因子的影响(TRAF) 2或TRAF6胃泌激素诱导核因子κB (NFκB)激活。(一)MKGR26细胞转染与1μg pRK5或构造编码的主要负面(dn)突变TRAF2或TRAF6。24小时后细胞治疗胃泌激素0.5小时。核细胞提取物的MKGR26细胞化验NFκB使用标记的寡核苷酸探针DNA结合活性。(B) MKGR26细胞转染和pNFκB-LUC pRK5或构造编码TRAF2的主要负面(dn)突变或TRAF6。pRL-SV40 cotransfected作为内部标准。24小时后他们八小时胃泌激素处理和荧光素酶检测。结果表示为褶皱感应而控制细胞单独处理车辆。值方法(SEM)从六个独立的(* p < 0.05gydF4y2BavgydF4y2Ba酒吧1;†p < 0.05gydF4y2BavgydF4y2Ba2)。gydF4y2Ba

    因为TAK1报道与TRAF6和激活尼克il - 1信号通路,gydF4y2Ba21日,gydF4y2Ba22gydF4y2Ba我们接下来检查TAK1参与这个途径。如图8所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba,dnTAK1抑制胃泌激素诱导NFκB荧光素酶的活动。gydF4y2Ba

    Effect of the dominant negative transforming growth factor β activated kinase 1 (dnTAK1) on gastrin induced nuclear factor κB (NFκB) activation. MKGR26 cells were transfected with pNFκB-LUC and control vector or a construct encoding the dominant negative mutant of TAK1. pRL-SV40 was cotransfected as an internal standard. After 24 hours they were treated with gastrin for eight hours and the luciferase assay was performed. The results are expressed as fold induction compared with control cells treated with vehicle alone. Values are means (SEM) from six independent (*p<0.05 v bar 1; †p<0.05 v bar 2).
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图8gydF4y2Ba
    图8gydF4y2Ba

    占主导地位的负面效应转化生长因子β活化激酶1 (dnTAK1)胃泌激素诱导核因子κB (NFκB)激活。MKGR26细胞转染pNFκB-LUC和控制向量或构造编码TAK1的显性负突变。pRL-SV40 cotransfected作为内部标准。24小时后他们八小时胃泌激素处理和荧光素酶检测。结果表示为褶皱感应而控制细胞单独处理车辆。值方法(SEM)从六个独立的(* p < 0.05gydF4y2BavgydF4y2Ba酒吧1;†p < 0.05gydF4y2BavgydF4y2Ba2)。gydF4y2Ba

    激活NFκB PKC-δ及其抑制由显性负TRAF6尼克或IKKsgydF4y2Ba

    是否强制表达PKC-δ单独激活NFκB MKGR26细胞检查。MKGR26细胞cotransfected pNFκB-LUC和pTB701HA / PKC-δ,野生型PKC-δ构造编码。如图9所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba,强迫PKC-δ诱导表达NFκB激活。然而,这种效应被cotransfection TRAF6的主要负突变,尼克,或者IKKs(图9所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

    Effects of inhibition of inhibitor κB kinase (IKK), NFκB inducing kinase (NIK), or tumour necrosis factor receptor associated factor (TRAF) 6 on nuclear factor κB (NFκB) activation induced by forced expression of protein kinase C (PKC)-δ. MKGR26 cells were cotransfected with 0.5 μg of pNFκB-LUC, pTB701HA/PKC-δ, a construct encoding wild-type PKC-δ, and the dominant negative (dn) mutant of IKKα, IKKβ, NIK, or TRAF6. After 24 hours, the luciferase assay was performed. Values are means (SEM) from six independent (*p<0.05 v bar 1; †p<0.05 v bar 2).
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图9gydF4y2Ba
    图9gydF4y2Ba

    抑制剂的抑制效果κB激酶(IKK) NFκB诱导激酶(尼克),或肿瘤坏死因子受体相关因子6 (TRAF)核因子κB迫使表达式(NFκB)激活诱导的蛋白激酶C (PKC) -δ。MKGR26细胞与0.5μg pNFκB-LUC cotransfected, pTB701HA / PKC-δ构造编码野生型PKC-δ,和占主导地位的负面(dn)突变IKKα,IKKβ,尼克或TRAF6。24小时后,荧光素酶检测。值方法(SEM)从六个独立的(* p < 0.05gydF4y2BavgydF4y2Ba酒吧1;†p < 0.05gydF4y2BavgydF4y2Ba2)。gydF4y2Ba

    讨论gydF4y2Ba

    目前的研究清楚地表明,胃泌激素能够激活NFκB,其中最重要的转录因子。在胃泌激素受体激活NFκB转染细胞是由NFκB特定dna蛋白质复杂的形成和荧光素酶活动使用一个包含5个报告基因串联重复序列NFκB结合位点。从两种不同的方法获得的数据在通用协议和胃泌激素诱导NFκB激活与l - 740093被预处理,表明这是一个胃泌激素受体介导的反应。我们的研究还表明,胃泌激素能够诱导形成NFκB特定dna蛋白质复杂的孤立的壁细胞,表明这种影响胃泌激素的生理意义。gydF4y2Ba

    胃泌激素受体家族成员GPCRs由七个跨膜域特征结构。gydF4y2Ba6,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba白细胞、间充质细胞和上皮细胞表达特定GPCRs各种细胞类型gydF4y2Ba30 -gydF4y2Ba,gydF4y2Ba33gydF4y2Ba;参与生理功能已得到验证。最近的研究表明,NFκB参与GPCR白细胞介导的生物功能,平滑肌细胞和内皮细胞。例如,细胞因子和化学引诱物结合GPCRs已知诱导生产促炎细胞因子和趋化因子通过激活NFκB白细胞。gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba凝血酶激活NFκB与平滑肌细胞增殖,增强ICAM-1表达式和中性粒细胞粘附。gydF4y2Ba31日,gydF4y2Ba33gydF4y2Ba胃泌激素/ NFκB途径也可能在胃粘膜发挥生理作用。一个可能的作用是调节在胃上皮细胞趋化因子生产。我们之前的体外研究表明,胃泌激素诱导引发生产表现为协同作用gydF4y2Ba幽门螺杆菌gydF4y2Ba。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba这可能增加胃粘膜引发生产的gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba受感染的受试者hypergastrinaemiagydF4y2Ba34 -gydF4y2Ba,gydF4y2Ba36gydF4y2Ba并通过胃泌激素在增强胃炎症gydF4y2Ba幽门螺杆菌gydF4y2Ba被感染的动物模型。gydF4y2Ba37gydF4y2Ba另一个可能的作用是调节胃粘膜生长和分化是一个众所周知的胃泌激素的功能。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba有趣的是,老鼠缺乏NFκB2的羧基末端锚蛋白域显示胃增生,暗示NFκB家族参与胃上皮细胞生长和/或凋亡。gydF4y2Ba38gydF4y2Ba

    因为胃泌激素受体介导的信号与几个相关蛋白激酶,gydF4y2Ba7 -gydF4y2Ba,gydF4y2Ba11gydF4y2Ba我们确定的特定激酶参与NFκB胃泌激素激活。测试的激酶抑制剂,一般的PKC抑制剂GF109203X废除胃泌激素诱导NFκB激活。PKC总科包含三个subfamilies-that,传统PKC (PKC-α-β,-γ),小说PKC (PKC-δ、-ε-μ,-θ和-η),和非典型PKC (PKC-ζ和-λ/ι)。gydF4y2Ba39gydF4y2Ba最近的调查提出不同的PKC参与NFκB激活根据细胞类型。例如,PKC-θ需要T细胞受体诱导NFκB激活gydF4y2Ba40gydF4y2Ba和PKC-δ与凝血酶诱导NFκB激活内皮细胞。gydF4y2Ba33gydF4y2Ba在目前的研究中,胃泌激素诱导的磷酸化PKC-δ及其抑制抑制胃泌激素诱导NFκB激活部分。此外,强制表达PKC-δ仅能够诱导NFκB MKGR26细胞活化。这表明PKC-δ扮演了一个角色在胃泌激素/ NFκB通路在胃上皮细胞,至少在部分。gydF4y2Ba

    il - 1和TNF-α激活NFκB在大多数细胞通过尼克/ IKK IκB信号通路。gydF4y2Ba20 -gydF4y2Ba,gydF4y2Ba22gydF4y2Ba我们的研究表明,胃泌激素诱导退化IκB激酶缺陷尼克的引入或IKKs抑制胃泌激素NFκB激活。这些结果表明,胃泌激素也使用尼克/ IKK / IκB通路激活NFκB。信号通路的上游尼克根据不同受体有关。据报道,il - 1受体与适配器蛋白质Myd88和伊拉克的复杂形式,招募TRAF6,gydF4y2Ba41岁的gydF4y2Ba42gydF4y2Ba虽然TNF-α受体结合适配器蛋白质TRADD和RIP,新兵TRAF2和复杂。gydF4y2Ba43gydF4y2Ba尽管TRAF2和TRAF6都可以激活尼克,gydF4y2Ba19日,gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba目前的研究表明,TRAF6,但不是TRAF2,需要胃泌激素诱导NFκB激活。此外,TAK1,与TRAF6 il - 1的信号,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba也需要胃泌激素诱导NFκB激活,表明胃泌激素的信号是il - 1的类似。gydF4y2Ba

    如无花果6和7所示gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba的抑制效应占主导地位的消极TRAF6,尼克,IKKs胃泌激素诱导NFκB活动似乎少EMSA比荧光素酶检测。这可能是解释如下。因为每个主导-质粒被引入细胞连同记者pNFκB-LUC基因,它是合理的建议不会影响其转染效率的抑制效果评估荧光素酶检测。相比之下,很可能占主导地位的消极的抑制效应复杂地层评价EMSA NFκB DNA质粒将完全依赖于转染效率。转染效率低可能掩盖了EMSA完全抑制效应,如无花果6和7所示gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba。在图6中gydF4y2Ba⇑gydF4y2Ba,抑制IKKβ似乎不那么有效的测试时,尼克EMSA虽然这些抑制性影响荧光素酶测试分析时是相似的。这也可以解释为在转染效率这两个质粒之间的区别。gydF4y2Ba

    我们的研究还表明,被迫表达PKC-δ单独诱导激活TRAF6 NFκB而失活,尼克或IKKs抑制这种效应。因此PKC-δ可能直接或间接与尼克/ IKK / IκB信号。据报道,p38 MAPK发挥作用的下游PKC-δNFκB激活凝血酶诱导的内皮细胞。gydF4y2Ba33gydF4y2Ba然而,我们的数据不显示相同的机制是手术的胃泌激素/ NFκB通路。虽然一份报告表明,PKC-ζ能够直接与伊拉克的交互,gydF4y2Ba44gydF4y2Ba我们不能找到一个与伊拉克的直接PKC-δ协会或TRAF6(未发表的观察)。因此,通路链接PKC-δ尼克/ IKK / IκB信号仍然是未知的。gydF4y2Ba

    总之,我们的结果表明,胃泌激素能够通过PKC激活NFκB依赖途径,即直接或间接与尼克/ IKK IκB信号通路。还需要进一步的研究来阐明这个信号在hypergastrinaemia的病理生理意义。gydF4y2Ba

    确认gydF4y2Ba

    作者感谢竹内M博士(我去地狱谷野生猴园制药有限公司、筑波、日本)的讨论。gydF4y2Ba

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      DiDonato JAgydF4y2Ba,sessue Hayakawa M, Rothwarf DM,gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。一个细胞因子激活转录因子NF-kappaB IkappaB激酶反应。gydF4y2Ba自然gydF4y2Ba1997年gydF4y2Ba;gydF4y2Ba377年gydF4y2Ba:gydF4y2Ba548年gydF4y2Ba-54年。gydF4y2Ba
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      墨丘里奥教练FgydF4y2Ba,朱镕基H,默里BW,gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。IKK-1 IKK-2: Cytokine-activated IκB激酶NF-κB激活的必要条件。gydF4y2Ba科学gydF4y2Ba1997年gydF4y2Ba;gydF4y2Ba278年gydF4y2Ba:gydF4y2Ba860年gydF4y2Ba6。gydF4y2Ba
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    14. 雷尼埃CHgydF4y2Ba、歌曲,为什么高X,gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。Ikappa激酶的鉴定和表征。gydF4y2Ba细胞gydF4y2Ba1997年gydF4y2Ba;gydF4y2Ba90年gydF4y2Ba:gydF4y2Ba373年gydF4y2Ba-83年。gydF4y2Ba
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    15. Zandi EgydF4y2BaRothwarf DM, Delhase M,gydF4y2Ba等gydF4y2Ba。Ikappa激酶复杂(IKK)包含两个激酶子单元,IKKalpha IKKbeta, IkappaB磷酸化和NF-kappaB激活所必需的。gydF4y2Ba细胞gydF4y2Ba1997年gydF4y2Ba;gydF4y2Ba91年gydF4y2Ba:gydF4y2Ba243年gydF4y2Ba-52年。gydF4y2Ba
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      巴恩斯摩根大通gydF4y2Ba卡琳·m .核factor-kappa B:一个关键的转录因子在慢性炎症性疾病。gydF4y2BaN拉米夫地中海gydF4y2Ba1997年gydF4y2Ba;gydF4y2Ba336年gydF4y2Ba:gydF4y2Ba1066年gydF4y2Ba-71年。gydF4y2Ba
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      陈ZJgydF4y2BaL,母公司则称t位点磷酸化的IκBα小说ubiquitination-dependent蛋白激酶活性。gydF4y2Ba细胞gydF4y2Ba1996年gydF4y2Ba;gydF4y2Ba84年gydF4y2Ba:gydF4y2Ba853年gydF4y2Ba-62年。gydF4y2Ba
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