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条文本gydF4y2Ba

菜单条gydF4y2Ba
炎症性肠病gydF4y2Ba
中性粒细胞衍生的人S100A12 (EN-RAGE)在慢性活动性炎症性肠病中强烈表达gydF4y2Ba
免费的gydF4y2Ba
  1. D FoellgydF4y2Ba1gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
  2. T KucharzikgydF4y2Ba2gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
  3. 米卡夫gydF4y2Ba2gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
  4. T VoglgydF4y2Ba3.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
  5. C SorggydF4y2Ba3.gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
  6. W DomschkegydF4y2Ba2gydF4y2Ba，gydF4y2Ba
  7. J罗斯gydF4y2Ba1gydF4y2Ba
  1. 1gydF4y2Ba德国m nster大学儿科和实验皮肤病学研究所，m nstergydF4y2Ba
  2. 2gydF4y2Ba德国梅恩斯特大学医学B系，梅恩斯特gydF4y2Ba
  3. 3.gydF4y2Ba德国m nster大学皮肤病学实验研究所gydF4y2Ba
  1. 通信:gydF4y2Ba
    德国 nster大学实验皮肤病学研究所D Foell博士，Von-Esmarch-Str 58,48149德国;gydF4y2Ba
    dfoell在{}uni-muenster.degydF4y2Ba

摘要gydF4y2Ba

背景:gydF4y2Ba克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)的肠道炎症以中性粒细胞涌入肠粘膜为特征。S100A12是一种具有促炎特性的钙结合蛋白。它由活化的中性粒细胞分泌，并与晚期糖基化终产物(RAGE)的多配体受体相互作用。RAGE阻断剂在结肠炎小鼠模型中有很好的抗炎作用。gydF4y2Ba

目的:gydF4y2Ba探讨炎症性肠病(IBD)中S100A12的表达及血清浓度。gydF4y2Ba

方法:gydF4y2Ba我们对CD和UC患者的活检进行了免疫组织化学研究和免疫荧光显微镜检查。采用夹心ELISA法检测血清中S100A12的浓度。gydF4y2Ba

结果:gydF4y2Ba免疫组织化学研究显示，S100A12在IBD患者的炎症肠组织中有丰富的表达，而在健康对照组的组织中未发现表达。在慢性活动性CD和UC期间，S100A12的染色仅限于浸润中性粒细胞。活动性CD患者血清S100A12水平显著升高(470 (125)ng/ml;p<0.001, n=30)以及活动性UC患者(400 (120)ng/ml;P <0.01, n=15)，与健康对照组(75 (15)ng/ml;n = 30)。即使在非活动性疾病中，也发现血清浓度升高，至少在CD中是如此。S100A12水平与CD和UC的疾病活动性密切相关。gydF4y2Ba

结论:gydF4y2Ba我们证明中性粒细胞衍生的S100A12在慢性活动性IBD中被强烈上调，这表明在IBD的发病过程中起重要作用。血清S100A12可作为IBD患者疾病活动性的有用标志物。gydF4y2Ba

  • S100A12gydF4y2Ba
  • EN-RAGEgydF4y2Ba
  • calgranulin CgydF4y2Ba
  • 克罗恩氏病gydF4y2Ba
  • 溃疡性结肠炎gydF4y2Ba
  • IBD，炎症性肠病gydF4y2Ba
  • CD，克罗恩病gydF4y2Ba
  • UC，溃疡性结肠炎gydF4y2Ba
  • TNF-α，肿瘤坏死因子αgydF4y2Ba
  • NFκB核因子κBgydF4y2Ba
  • RAGE，晚期糖基化终产物受体gydF4y2Ba
  • (5)RAGE，可溶性RAGEgydF4y2Ba
  • EN-RAGE，细胞外新发现的RAGE结合蛋白gydF4y2Ba
  • C反应蛋白gydF4y2Ba
  • ESR，红细胞沉降率gydF4y2Ba
  • 白细胞计数gydF4y2Ba
  • 克罗恩病活动性指数gydF4y2Ba
  • CAI，结肠炎活动指数gydF4y2Ba
  • ELISA，酶联免疫吸附试验gydF4y2Ba
  • PBS，磷酸盐缓冲盐水gydF4y2Ba
  • 乳酸脱氢酶gydF4y2Ba

http://dx.doi.org/10.1136/gut.52.6.847gydF4y2Ba

来自Altmetric.com的统计数据gydF4y2Ba

    请求的权限gydF4y2Ba

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    慢性炎症性肠病(IBD)的病因和发病机制尚不清楚。人们提出了各种各样的假设来解释病理生理学，包括遗传改变，对正常肠道菌群成分的免疫反应失调，或不成功消除未知抗原。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba尽管在启动机制上存在明显差异，但克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)具有共同的免疫畸变，构成正在进行的炎症过程的状态。gydF4y2Ba2gydF4y2Ba在UC和CD中观察到的最突出的组织学特征之一是在炎症的早期阶段中性粒细胞浸润到炎症粘膜中。gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba4gydF4y2BaIBD的疾病活动与中性粒细胞涌入粘膜并随后进入肠腔有关，导致所谓的隐窝脓肿的形成。中性粒细胞穿越肠上皮的迁移诱导细胞间连接的短暂开放，但通常不会引起形态的不连续性。gydF4y2Ba5gydF4y2Ba在IBD炎症过程中诱导中性粒细胞浸润的可能介质之一是上皮源性白细胞介素8。gydF4y2Ba6，gydF4y2Ba7gydF4y2Ba活化的中性粒细胞分泌多种促炎细胞因子和趋化因子，从而引发各种炎症细胞的浸润，包括单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和粒细胞。gydF4y2Ba8 -gydF4y2Ba，gydF4y2Ba11gydF4y2BaIBD炎症过程中最重要的介质之一是肿瘤坏死因子α (TNF-α)，其在IBD患者肠黏膜中表达。gydF4y2Ba12，gydF4y2Ba13gydF4y2BaTNF-α通过细胞内核因子κB (NFκB)依赖的信号级联触发炎症。NFκB通过控制促炎细胞因子基因的转录，在慢性炎症(如IBD)的下游过程中发挥关键作用。gydF4y2Ba14日,gydF4y2Ba15gydF4y2Ba

    S100A12 (calgranulin C)是S100家族钙结合蛋白的一员，由粒细胞特异性表达。gydF4y2Ba16gydF4y2Ba细胞外S100A12具有促炎功能，包括与其他趋化剂相当的强效趋化活性。gydF4y2Ba17gydF4y2Ba牛S100A12是一种晚期糖基化终产物受体的配体，存在于巨噬细胞、内皮细胞和淋巴细胞中。S100A12与RAGE结合可介导其促炎特性。gydF4y2Ba18gydF4y2Ba细胞内信号传导诱导依赖NFκB的不同细胞因子的分泌。gydF4y2Ba19，gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba介绍了EN-RAGE(细胞外新鉴定的RAGE结合蛋白)的名称。特别有趣的是，可溶性RAGE(受体的细胞外配体结合域)已被证明可以抑制慢性结肠炎小鼠模型中的炎症。gydF4y2Ba21gydF4y2Ba对炎症过程最深刻的影响是通过与RAGE和RAGE阻断剂联合治疗实现的。最近，研究表明S100A12是由活化的人中性粒细胞分泌的。gydF4y2Ba22gydF4y2Ba

    由于中性粒细胞向炎症组织的迁移和浸润在IBD的炎症过程中起着关键作用，我们对S100A12在IBD中的作用感兴趣。因此，本研究的目的是确定慢性活动性IBD期间S100A12的组织表达和血清水平。gydF4y2Ba

    材料与方法gydF4y2Ba

    IBD患者gydF4y2Ba

    我们纳入了40例乳糜泻患者和34例UC患者，以将血清S100A12水平与整体疾病活动联系起来。同时测定C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、白细胞计数(WBC)和中性粒细胞计数。采用克罗恩病活动性指数(CDAI)记录CD患者的临床疾病活动性;gydF4y2Ba23gydF4y2Ba根据rachmilwitz的说法，UC使用结肠炎活动指数(CAI)gydF4y2Ba24gydF4y2Ba以及《真爱与威茨》的标准。gydF4y2Ba25gydF4y2Ba记录内镜和组织学疾病活动性(活动性评分0-3;0=无炎症，1=轻度炎症，2=中度炎症，3=重度炎症)。患者数据汇总见表1gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

    查看该表:gydF4y2Ba
    表1gydF4y2Ba

    克罗恩病合并溃疡性结肠炎患者的特点gydF4y2Ba

    此外，我们对10名患者(6名乳糜泻患者和4名UC患者)进行了为期8个月(范围3-12)的随访，以确定S100A12血清水平与个体疾病活动过程的相关性。gydF4y2Ba

    严重细菌感染/败血症患者gydF4y2Ba

    15例患者(男7例，女8例;平均年龄36岁(范围10-75岁)，伴有严重细菌感染，分析系统性中性粒细胞活化疾病患者血清S100A12浓度。13例患者血培养呈阳性，其余分别为肺炎和阑尾炎。记录CRP和中性粒细胞计数。gydF4y2Ba

    正常血清S100A12水平的估计gydF4y2Ba

    我们估计了30例无炎症症状的健康对照者血清中S100A12的正常水平(男性14例，女性16例;平均年龄34岁(范围19-57岁)，他们要么在梅斯特大学医院接受了常规血液检查，要么在我们的实验室做了志愿者。患者和对照组在年龄和性别分布上没有显著差异。gydF4y2Ba

    纯化S100A12蛋白及抗体gydF4y2Ba

    S100A12从人粒细胞中分离得到，重组蛋白如前所述。gydF4y2Ba16日,gydF4y2Ba26gydF4y2Ba根据文献报道制备了兔抗人S100A12多克隆亲和纯化血清。gydF4y2Ba16gydF4y2Ba兔抗人S100A12抗体对纯化的人和重组的S100A12抗体的免疫反应性和粒细胞裂解物的western blot分析，分析了兔抗人S100A12抗体的单特异性。gydF4y2Ba

    夹心ELISA法测定S100A12浓度gydF4y2Ba

    采用本实验室建立的双夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)系统测定患者血清和体外实验上清中S100A12的浓度。平底96孔微量滴定板(Maxisorp;Nunc, Wiesbaden, Germany)在0.1 M碳酸钠缓冲液(pH 9.6)中以50 μl/孔包被10 μg/孔的抗s100a12，在4°C下孵育16小时，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)和0.1% Tween 20 (pH 7.4)洗涤3次，用含有0.25%牛血清白蛋白(块缓冲液)的洗涤缓冲液在37°C下阻断1小时。用洗涤缓冲液洗涤1次，用块缓冲液至少稀释3倍，加50 μl样品，室温下静置2小时。ELISA用纯化的S100A12进行校准，浓度范围为0.016 ~ 125 ng/ml。3次洗涤后，加入生物素化兔抗人s100a12 (10 μg/孔)，37℃孵育30分钟。用链霉亲和素-辣根过氧化物酶偶联物(1:5000稀释)孵育;Pierce, Rockford, Illinois, USA)，在37°C下加热30分钟。洗涤三次后，用ABTS(2,2′-氮化喹啉(3-乙基苯并噻唑啉磺酸)孵育;罗氏诊断，曼海姆，德国)和HgydF4y2Ba2gydF4y2BaOgydF4y2Ba2gydF4y2Ba在0.05 M柠檬酸缓冲液中，pH 4.0，室温下20分钟。20min后用酶联免疫吸附试验仪(MRX酶标仪)测定405 nm吸光度;Dynatech实验室，Denkendorf，德国)。该检测具有0.5 ~ 20ng /ml的线性范围和<0.5 ng/ml的灵敏度。测定间变异系数<9% (n=10)，测定内变异系数< 8% (n=10)。gydF4y2Ba

    免疫组织化学研究gydF4y2Ba

    采用兔抗S100A12抗体检测活动性乳糜泻或活动性UC患者及无肠道炎症对照组肠道活检组织石蜡包埋和冷冻切片。在苏木精和伊红染色切片上测定疾病活动性。单克隆小鼠抗人粒细胞相关抗原CD15抗体(Dako, Hamburg, Germany)是一种敏感的中性粒细胞标志物，用于检测浸润中的中性粒细胞。连续切片染色检测浸润组织中S100A12和CD15的共表达。作为对照，采用不相关特异性的小鼠单克隆IgM (Dianova, Hamburg, Germany)和兔多克隆IgG (Amersham Biosciences, Freiburg, Germany)。二抗和底物用于显色反应如前所述。gydF4y2Ba26，gydF4y2Ba27gydF4y2Ba

    免疫荧光显微镜gydF4y2Ba

    肠段双标记实验，先抗s100a12抗体，再抗cd15抗体。我们使用亲和纯化的山羊抗小鼠或山羊抗兔二抗与Texas Red或FITC (Dianova)结合。荧光分析使用连接到Axiocam相机电源的蔡司Axioskop，使用Axiovision 3.0 for windows软件(蔡司，Göttingen，德国)。在对照实验中，在省略特异性抗体或用不相关特异性的同型匹配对照抗体替代特异性抗体后，未检测到交叉反应或溢出。gydF4y2Ba

    中性粒细胞的制备和刺激gydF4y2Ba

    如前所述，从黄皮毛(德国红十字会，德国梅恩斯特)中分离出人类混合供体粒细胞。gydF4y2Ba16gydF4y2Ba简单地说，通过Ficoll-Hypague (Biocoll;Biochrom, Berlin, Germany)从单核细胞和血小板中分离粒细胞。右旋糖酐沉淀法分离红细胞。剩余的细胞在PBS中洗涤两次。经台盼蓝染色细胞形态学分析，细胞纯度在95%以上。以终浓度1×10重悬粒细胞gydF4y2Ba7gydF4y2Ba在无血清RPMI培养基(Biochrom)中添加1%谷氨酰胺、1%非必需氨基酸和1%青霉素/链霉素。立即加入TNF-α诱导分泌(重组人TNF-α;细胞生物学勃林格，曼海姆，德国)，最终浓度为2或5ng /ml。刺激和非刺激细胞分别在37°C下孵育15或30分钟。最后，粒细胞在500时成球gydF4y2BaggydF4y2Ba在4°C下保存5分钟，保存上清用于夹心ELISA分析S100A12。加入终浓度为1mm的苯基甲基磺酰氟以防止蛋白水解降解。通过分析乳酸脱氢酶(LDH)将NADH转化为NAD的能力来评估细胞裂解gydF4y2Ba+gydF4y2Ba在340 nm处测定NADH吸光度的下降。gydF4y2Ba

    统计分析gydF4y2Ba

    采用Mann-Whitney U检验确定不同类别之间S100A12和CRP表达的显著差异。血清标志物与疾病活动度的相关性分析采用Pearson检验，软件为SPSS 9.0。数据以平均值(95%置信区间)表示。p值<0.05被认为是显著的。gydF4y2Ba

    结果gydF4y2Ba

    免疫组织化学和免疫荧光gydF4y2Ba

    对IBD患者组织的免疫组织化学研究显示，S100A12通过浸润炎症区域的细胞表达特异性模式，而在非活动性疾病患者组织中未发现染色。此外，S100A12在S100A12阳性细胞周围的细胞外分布，反映了S100A12的分泌，并可能与浸润细胞中其他携带RAGE的细胞结合。在活动性CD患者的组织中，在肉芽肿病变周围检测到S100A12(图1A)gydF4y2Ba⇓gydF4y2BaUC中，隐窝脓肿主要由S100A12阳性细胞组成(图1D)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba）.在CD和UC中，通过上皮转移到管腔的细胞也表现为S100A12阳性。单克隆抗cd15染色证明S100A12的表达仅限于浸润炎症组织的粒细胞(图1)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba）.gydF4y2Ba

    Expression of S100A12 in tissues from patients with active Crohn’s disease (CD) or ulcerative colitis (UC). Immunohistochemical staining showed extensive expression of S100A12 in inflamed colonic tissue of patients with active CD (A). S100A12 positive cells surrounded granulomatous lesions in CD (B). Similar local expression of S100A12 was found in UC (C). Numerous S100A12 positive cells assembled in crypt abscesses in UC (D). Staining of serial sections revealed colocalisation of S100A12 positive cells (E) and CD15 positive cells (F). In destructive crypt abscesses, S100A12 positive neutrophils transmigrated through the epithelium into the lumen (G). Immunofluorescence microscopy of double labelling studies with a-S100A12 Texas Red (red) and a-CD15-FITC (green) clearly proved expression of S100A12 by infiltrating CD15 positive granulocytes (H). Double labelled cells appear yellow due to summation of colours. The inserted figures in (H) show emission at a single wavelength for both fluorochromes. Scale bars indicate 100 μm.
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图1gydF4y2Ba
    图1gydF4y2Ba

    活动性克罗恩病(CD)或溃疡性结肠炎(UC)患者组织中S100A12的表达免疫组织化学染色显示，活动性CD患者的炎性结肠组织中广泛表达S100A12 (A)， CD肉芽肿病变周围有S100A12阳性细胞(B)， UC中也发现了类似的S100A12局部表达(C)， UC中隐窝脓肿中聚集了大量S100A12阳性细胞(D)。连续切片染色显示S100A12阳性细胞(E)和CD15阳性细胞(F)共定位。S100A12阳性的中性粒细胞通过上皮转移到管腔(G)。a-S100A12德克萨斯红(红色)和a-CD15-FITC(绿色)双标记研究的免疫荧光显微镜清楚地证明了S100A12通过浸润CD15阳性粒细胞(H)表达。双标记细胞由于颜色叠加而呈现黄色。(H)中插入的数字显示了两种荧光色在单一波长上的发射。标尺表示100 μm。gydF4y2Ba

    血清分析gydF4y2Ba

    与健康对照(470 (125)ng/ml)相比，活动性CD患者(CDAI bb0 150, n=30)血清S100A12水平显著升高gydF4y2BavgydF4y2Ba75 (15) ng/ml;p < 0.001)。活动性CD患者的血清S100A12水平与非活动性CD患者的血清S100A12水平也有显著差异(470 (125)ng/ml)gydF4y2BavgydF4y2Ba215 (95) ng/ml;p < 0.01)。即使是非活动性疾病患者的血清水平也与健康对照有显著差异(215 (95)ng/ml)gydF4y2BavgydF4y2Ba75 (15) ng/ml;p < 0.05)。CAI≥4 (n=15)的活动性UC患者血清S100A12水平也显著高于健康对照组(400 (120)ng/ml)gydF4y2BavgydF4y2Ba75 (15) ng/ml;p < 0.001)。活性和非活性UC血清中S100A12水平的差异(400 (120)ng/ml)gydF4y2BavgydF4y2Ba115 (55) ng/ml;p<0.001)比乳糜泻更明显。与乳糜泻相比，非活动性UC患者的血清水平与健康对照相当。我们的数据未显示类固醇治疗对血清S100A12水平有任何直接影响(数据未显示)。严重细菌感染患者血清S100A12平均浓度为630 (255)ng/ml。数据汇总如图2所示gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

    Serum levels of S100A12 in bacterial infection, inflammatory bowel disease (IBD), and healthy controls. S100A12 levels were determined in 15 patients with severe bacterial infections, 40 patients with Crohn’s disease (CD), 34 patients with ulcerative colitis (UC), and 30 healthy controls. Symbols show individual serum levels; diamonds indicate mean values with 95% confidence intervals (error bars). *p<0.05, **p<0.01, mean differences from healthy controls. Patients with active IBD had S100A12 serum levels comparable with patients with severe bacterial infections/sepsis.
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图2gydF4y2Ba
    图2gydF4y2Ba

    细菌感染、炎症性肠病(IBD)和健康对照者血清S100A12水平在15例严重细菌感染患者、40例克罗恩病(CD)患者、34例溃疡性结肠炎(UC)患者和30例健康对照中检测了S100A12水平。符号表示个体血清水平;菱形表示95%置信区间的平均值(误差条)。*p<0.05， **p<0.01，平均值与健康对照差异。活动性IBD患者的血清S100A12水平与严重细菌感染/败血症患者相当。gydF4y2Ba

    活动性CD患者CRP水平高于非活动性CD患者(2.0 (1.0)ng/ml)gydF4y2BavgydF4y2Ba0.3 (0.3) ng/ml;p < 0.05)。活动性UC患者的CRP水平与非活动性UC患者相比无显著差异(1.1 (0.9)mg/dl)gydF4y2BavgydF4y2Ba0.4 (0.3) mg/dl)。活动性CD患者的ESR明显更高(22 (7)mm/h)gydF4y2BavgydF4y2Ba9 (4) mm/h;p < 0.01)。然而，UC患者组间ESR无显著差异(10 (5)mm/h)gydF4y2BavgydF4y2Ba12 (5) mm/h。我们可以进一步证明，血清中S100A12水平与CD和UC的临床疾病活动密切相关(表2)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba）.有趣的是，只有CD与CRP和ESR相关，而UC中没有发现这些标志物与疾病活动性相关。这些经典标记物在IBD中的准确性值得商榷，但与以前的报道一致。gydF4y2Ba28，gydF4y2Ba29gydF4y2Ba同时测定12例患者的内镜和组织学活性以及血清S100A12水平。虽然这个群体相对较小，但S100A12血清浓度与内镜下(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.72;P <0.01)和组织学(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.83;p < 0.001)的分数。严重细菌感染的患者有广泛的全身反应迹象，平均CRP为18.3 (7.0)mg/dl, WBC为16 350 (3560)/μl，外周中性粒细胞计数高(平均12 140 (3110)/μl)。IBD的平均中性粒细胞计数仅为7390(1180)个/μl (WBC为8300(810)个/μl)，与S100A12浓度无显著相关性(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.33;n = 27, p = 0.09)。与脓毒症患者相比，IBD患者血清中的S100A12可能来源于局部粘膜炎症部位的中性粒细胞。gydF4y2Ba

    查看该表:gydF4y2Ba
    表2gydF4y2Ba

    血清S100A12、C反应蛋白(CRP)和红细胞沉降率(ESR)与炎症性肠病疾病活动性的相关性gydF4y2Ba

    10例IBD患者的个体随访数据证实S100A12血清水平与疾病活动性有很强的相关性。在UC患者中，个体随访数据显示，S100A12水平与疾病活动度的相关性优于已建立的炎症标志物，如ESR(图3)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba）.英夫利昔单抗治疗后血清S100A12水平迅速下降(图4)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba）.gydF4y2Ba

    Individual follow up of S100A12 serum levels, erythrocyte sedimentation rate (ESR), and clinical disease activity. Individual courses of S100A12, ESR, and colitis activity index (CAI)/Crohn’s disease activity index (CDAI) in a patient with ulcerative colitis (UC) (A) and Crohn’s disease (CD) (B). Data are representative of 10 patients with inflammatory bowel disease.
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图3gydF4y2Ba
    图3gydF4y2Ba

    个体随访血清S100A12水平、红细胞沉降率(ESR)和临床疾病活动性。1例溃疡性结肠炎(UC) (a)和克罗恩病(CD) (B)患者的S100A12、ESR和结肠炎活动指数(CAI)/克罗恩病活动指数(CDAI)的个体疗程。数据代表了10例炎症性肠病患者。gydF4y2Ba

    Changes in S100A12 serum levels in Crohn’s disease (CD) patients after infliximab treatment. Individual courses of S100A12 and Crohn’s disease activity index (CDAI) in three patients before, two weeks, and four weeks after treatment with infliximab.
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图4gydF4y2Ba
    图4gydF4y2Ba

    英夫利昔单抗治疗后克罗恩病(CD)患者血清S100A12水平的变化3例患者在英夫利昔单抗治疗前、2周和4周的个体疗程S100A12和克罗恩病活动性指数(CDAI)。gydF4y2Ba

    S100A12由活化的中性粒细胞分泌gydF4y2Ba

    为了证明S100A12确实是由外周中性粒细胞积极分泌的，我们通过密度梯度离心分离多形核粒细胞，并用TNF-α刺激它们。在未受刺激的中性粒细胞中测定了S100A12的最低基础分泌。三个独立实验中，细胞上清液中S100A12的浓度为5 ~ 10 ng/ml。TNF-α刺激后S100A12分泌呈时间和剂量依赖性增加(图5)gydF4y2Ba⇓gydF4y2Ba）.通过LDH活性测试，我们的实验在细胞活力和细胞裂解方面没有差异(数据未显示)。gydF4y2Ba

    S100A12 in the supernatant of neutrophils after stimulation with tumour necrosis factor α (TNF-α). S100A12 was determined in supernatants of cells left untreated (w/o) or stimulated with TNF-α 2 or 5 ng/ml for 15 (15′) and 30 (30′) minutes, respectively. There was a time and dose dependent increase in S100A12 levels after treatment with TNF-α (**p<0.01; n=3).
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图5gydF4y2Ba
    图5gydF4y2Ba

    肿瘤坏死因子α (TNF-α)刺激后嗜中性粒细胞上清中的S100A12。S100A12分别在未处理(w/o)或TNF-α 2或5 ng/ml刺激15(15’)和30(30’)分钟的细胞上清液中测定。TNF-α治疗后血清S100A12水平呈时间和剂量依赖性升高(**p<0.01;n = 3)。gydF4y2Ba

    讨论gydF4y2Ba

    我们的研究表明，S100A12不仅在小鼠结肠炎模型中促进炎症，而且在人类慢性IBD中也起主导作用。我们发现S100A12在IBD炎症肠组织浸润的中性粒细胞中强烈表达。此外，在CD患者和UC患者的血清中发现了高循环量的S100A12。有证据表明，S100A12是由活化的中性粒细胞分泌的，中性粒细胞是IBD炎症病变中最丰富的细胞类型。IBD浸润细胞的最终组成取决于趋化细胞因子的谱和不同细胞类型上特异性受体的表达。gydF4y2Ba11gydF4y2Ba由于S100A12对其他吞噬细胞具有强烈的趋化作用，因此S100A12阳性多形核细胞的浸润可能是侵袭其他白细胞的早期步骤。S100A12是一种刺激细胞表面表达RAGE的促进因子。尽管S100A12的作用尚未完全确定，但有证据表明它在炎症条件下起着关键作用。S100A12连接RAGE激活NFκBgydF4y2Ba18gydF4y2Ba并且有许多关于NFκB活性在肠道炎症，特别是IBD中的关键作用的报道。gydF4y2Ba15，gydF4y2Ba30 -gydF4y2Ba，gydF4y2Ba32gydF4y2Ba类固醇的部分抗炎作用可能是由于抑制NFκB驱动的细胞因子表达，这一事实也强调了NFκB在IBD中的作用。gydF4y2Ba32gydF4y2BaIBD患者的粘膜糖皮质激素受体水平似乎降低，与治疗无关，这可能导致IBD患者肠黏膜对NFκB作用的保护作用降低。gydF4y2Ba33gydF4y2Banf - κ b也被TNF-α上调，TNF-α在IBD患者的炎症组织中含量很高。gydF4y2Ba9，gydF4y2Ba13gydF4y2Ba与S100A12相比，TNF-α仅在IBD患者的血清中检测到非常低的水平。gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba34，gydF4y2Ba35gydF4y2Ba然而，用抗tnf -α嵌合抗体英夫利昔单抗治疗可有效减少CD的炎症。gydF4y2Ba36 -gydF4y2Ba，gydF4y2Ba38gydF4y2Ba英夫利昔单抗治疗CD的主要作用机制之一是诱导活化单核细胞凋亡。gydF4y2Ba39gydF4y2Ba有趣的是，英夫利昔单抗治疗可迅速降低患者的S100A12水平。因此，可以推测中性粒细胞的凋亡可能是抗tnf -α治疗的另一种作用。也可以想象，在分泌TNF-α和S100A12的细胞之间存在强烈的串扰，从而导致不受控制和持续的炎症，这对这些促炎蛋白中的任何一种的阻断都有反应。阻断S100A12/RAGE相互作用对小鼠慢性结肠炎症的抑制伴随着血清中TNF-α的降低。gydF4y2Ba18gydF4y2Ba为了进一步证明TNF-α与中性粒细胞衍生的S100A12之间的关系，我们在本研究中证实了TNF-α刺激外周中性粒细胞分泌S100A12。由于血清中几乎检测不到TNF-α，而S100A12即使在室温下或经过多次解冻和冷冻循环后也是一种非常稳定的蛋白质，因此血清S100A12的分析可能为评估抗TNF-α治疗的反应提供一个很好的标志物。gydF4y2Ba

    乳糜泻和UC有许多共同的免疫学特征，但也有重要的区别。虽然CD患者血清中S100A12水平高于UC患者，但CD患者血清中S100A12水平与疾病活动指数的相关性低于UC患者。即使在非活动性乳糜泻患者中，我们也发现与对照组相比血清S100A12水平显著升高。事实上，只有4/40的乳糜泻患者的水平与30名健康对照者相当。这一观察结果可能是由于与UC相比，CD中免疫紊乱的全身性更强。即使在非活动性疾病中，仍有少量中性粒细胞留在肠组织中，这可能是这些患者血清水平升高的原因。因此，S100A12可能是残留疾病活动性的一个非常敏感的参数。由于中性粒细胞内流在IBD炎症过程中是一个非常早期的事件，因此S100A12也可能是判断IBD复发的有用标志物。然而，在这种情况下，S100A12是否优于其他血清学标志物还需要进一步的研究来确定。同样可以想象的是，CDAI评分可能在我们的患者中被错误地低估，这些患者因此被认为处于缓解期，尽管有残留的疾病活动。 Brignola等gydF4y2Ba根据CDAI评分，55%的非活动性疾病患者的实验室参数发生改变。gydF4y2Ba40gydF4y2Ba常规活度指标的敏感性很可能低于S100A12水平。在我们的UC研究人群中，S100A12是比CRP或ESR更好的疾病活动性标志物。gydF4y2Ba

    中性粒细胞衍生蛋白S100A12的高度显著升高也强调了中性粒细胞在肠道炎症中的重要作用。中性粒细胞属于非常早期的效应细胞群，在IBD期间浸润粘膜和肠上皮细胞，从而改变肠屏障功能。在活化的中性粒细胞分泌的蛋白质中，有许多储存在颗粒中的物质，只有少量的细胞质蛋白，如calgranulins，包括S100A12。gydF4y2Ba22gydF4y2Ba人类嗜中性脂钙素(HNL/NGAL)存在于特定的中性粒细胞颗粒中，也可能由结肠上皮细胞表达，由于其在炎症肠组织中过度表达，因此是UC的有用粪便标志物。gydF4y2Ba41岁的gydF4y2Ba42gydF4y2Ba然而，脂钙素的血清浓度与疾病活动无关。gydF4y2Ba43gydF4y2Ba我们不知道粪便中S100A12的浓度，但粪便中S100A8和S100A9是肠道炎症的有意义的标志物。gydF4y2Ba44gydF4y2BaS100A12而非HNL/NGAL血清浓度与局部炎症活动密切相关，可能是由于中性粒细胞粘附内皮时S100A12较早释放gydF4y2Ba18gydF4y2Ba而特定颗粒的内容更有可能在细胞通过组织迁移后分泌出来。gydF4y2Ba45gydF4y2Ba此外，血清S100A12循环水平升高提供了证据，证明中性粒细胞不仅在局部粘膜免疫系统中发挥作用，而且在IBD的全身免疫反应中也很重要。在这种情况下，值得注意的是，大量IBD患者显示的S100A12血清浓度与败血症期间检测到的浓度相当。与IBD相反，在存在严重细菌感染的情况下，全身性炎症参数显着升高。S100A12与循环中性粒细胞相关性较弱，但与IBD的内镜和组织学表现相关性强，这表明慢性活动性IBD期间局部中性粒细胞驱动的炎症足以产生全身性影响。gydF4y2Ba

    综上所述，我们的数据表明S100A12是一种促炎蛋白，在IBD的肠道炎症中起主要作用。它在活动性CD和UC患者的炎症组织中强烈表达，循环水平的S100A12似乎是监测疾病活动性的可靠炎症标志物。此外，阻断剂在小鼠结肠炎模型中的有益作用使S100A12成为IBD患者新治疗方法的一个有吸引力的靶点。gydF4y2Ba

    致谢gydF4y2Ba

    我们感谢Karin Fischer和Eva Nattkemper出色的技术援助。这项研究得到了德国梅恩斯特大学“跨学科临床研究中心”(IZKF)的资助。gydF4y2Ba

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