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摘要
背景:牛磺胆酸诱导的胆汁淤积是一种很好的药物诱导的胆汁淤积模型，具有潜在的临床意义。这种化合物破坏胆盐分泌的机制尚不清楚。
目的:为了评估牛石胆酸损伤肝细胞胆盐转运的哪个步骤/秒，重点关注作为潜在病理机制的管状胆盐转运体(Bsep)的定位变化。
方法:在大鼠体内进行胆盐肝运输步骤的药代动力学分析14C牛磺胆酸血浆消失。Bsep转运活性通过评估分泌14C牛磺胆酸和胆酰-裂解基荧光素分别在体内和分离的大鼠肝细胞对联(IRHC)中。通过特异性荧光染色在体内和IRHC中评估Bsep和F-actin的定位。
结果:体内药代动力学研究显示，牛磺胆酸(3 μmol/100 g体重)减少了58%的小管排泄，增加了96%的血浆回流14C牛磺胆酸盐。共聚焦图像分析显示，牛磺酸石胆酸诱导Bsep内化到胞质泡腔内，而不影响f -肌动蛋白的细胞骨架组织。这些效应在暴露于2.5 μM牛磺酸石胆酸的IRHC中重现。预给药二丁基- camp可以抵消牛磺酸石胆酸在IRHC中引起的胆盐分泌功能损伤，恢复了该模型中Bsep的定位。此外，在体内预给药时，二丁基- camp加速胆汁流量和胆汁盐输出的恢复，并使累积输出提高106%14C牛磺胆酸盐。
结论:牛磺胆酸在小管水平损害胆盐分泌。Bsep内化可能是一个因果因素，而二丁基- camp可以预防。
- 胆汁淤积
- taurolithocholate
- Bsep
- 肌动蛋白细胞骨架
- dibutyryl-cAMP
- 薄层色谱,taurolithocholate
- 废话,胆汁盐
- 男朋友,胆汁流
- 厘米,微管的膜
- Bsep，胆汁盐出口泵
- ABC, ATP结合盒
- IRHC，分离的大鼠肝细胞对联
- DB-cAMP dibutyryl——阵营
- TC,牛磺胆酸盐
- CLF, cholyl-lysylfluorescein
- PBS，磷酸盐缓冲盐水
- cVA，管状空泡堆积
来自Altmetric.com的统计
- 薄层色谱,taurolithocholate
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- cVA，管状空泡堆积
牛磺酸石胆酸(TLC)和其他单羟基胆盐(BS)被认为在原发性胆汁性肝硬化的肝功能障碍中起作用，1Byler的疾病,2全肠外营养引起的胆汁淤积，3.和新生儿胆汁淤积。4薄层色谱引起的胆汁淤积也是一种有用的药物性胆汁淤积的实验模型。5 -8
TLC诱导大鼠急性可逆胆汁淤积，5TLC给药15-20分钟胆汁流量(BF)最低点。之后，BF恢复缓慢，在24-30小时达到控制值。5TLC降低了BS独立BF和BS依赖BF。前者的减少被认为是由于管状膜(CM)的透水性降低，9和抑制钠+/ K+- atp酶泵是BS独立高炉的关键动力。10谷胱甘肽胆道排泄障碍，11可能与Mrp2的活性和/或定位下降有关，Mrp2是一种推定的谷胱甘肽转运蛋白，12也被假设过。13
相比之下，TLC损害BS排泄的机制仍有待阐明。牛磺酸或甘氨酸结合的BS主要由Na被肝细胞吸收+依赖机制，由钠介导+牛磺胆酸盐协同转运多肽。14它们的小管分泌是其从血液到胆汁的整体运输的速率限制步骤，主要由ATP依赖转运体“胆盐输出泵”(Bsep)介导，Bsep是属于ATP结合盒(ABC)转运体超家族的MDR p -糖蛋白的同源物。15
对经薄层色谱改变的BS运输中阶/s的表征仍有待确定，这是我们研究的目标之一。此外，最近的证据表明，在不同的实验性胆汁淤积模型中，包括雌二醇-17β-，另一种管状ABC转运蛋白Mrp2也发生内化d葡糖苷酸16和TLC本身,13促使我们通过评估Bsep是否发生类似的重定位，来检查这种病理机制在TLC诱导的BS分泌失败中的作用。最后，为了帮助建立由TLC引起的Bsep定位改变和BS分泌功能障碍之间的因果关系，我们还分析了cAMP防止由阻胆剂引起的这两个参数同时发生变化的能力;cAMP被证明能刺激向CM的转运蛋白靶向17 -19并在离体大鼠肝细胞对联(IRHC)模型中拮抗TLC诱导的BS分泌功能损伤。20.
方法
材料
TLC(钠盐)、3α-羟基类固醇脱氢酶、Leibovitz-15培养基、Phalloidin-FITC、DMSO和二丁基- camp (DB-cAMP)来自Sigma Chemical Co. (St Louis, Missouri, USA)。14C牛磺胆酸盐(14C-TC)来自新英格兰核能公司(波士顿，马萨诸塞州，美国)。Cholyl-lysylfluorescein (CLF)由Charles O Mills博士(Birmingham, UK)提供。A型胶原酶histolyticum梭状芽胞杆菌来自Gibco(英国佩斯利)。所有其他试剂都是可用的最高等级试剂。
动物
成年雄性Wistar大鼠，体重300 ~ 350 g。动物被维持在标准的饮食和自由饮水，在恒定的12小时光照/12小时黑暗循环下。根据1986年的《动物科学程序法》批准了议定书。
“体内”的研究
外科手术
动物用戊巴比妥钠(50mg /kg腹腔注射)麻醉，全程保持麻醉。颈动脉和股静脉插管用PC-50聚乙烯管，胆总管插管用PE-10聚乙烯导管(Intramedic, Clay Adams, Parsippany, New Jersey, USA)。体温保持在37.5-38.0°C，使用加热灯。
实验程序
在胆汁分泌研究中，对照组在基础胆汁收集30分钟后静脉注射TLC (3 μmol/100 g体重)或对照物(10%牛血清白蛋白盐水)。然后每隔20分钟收集胆汁，持续100分钟。接下来，动物被放血杀死，肝脏被取出并称重。在评价cAMP预防胆汁淤积的实验中，在TLC给药前5分钟给药DB-cAMP (10 mg/kg体重静脉注射)，一种完全的cAMP类似物。
在14C-TC胆道排泄研究，TLC脉冲后20分钟或100分钟静脉注射放射性同位素(0.25 μCi/100 g体重)。药代动力学的分析14C-TC等离子体衰变时间为100分钟;到那时，达到正常的BS排泄，并且14C-TC动力学更好地反映了缺陷的输运能力，而不是与最初保留的BS竞争。每0.5-3分钟采集一次血样，持续20分钟;每2分钟采集一次胆汁，持续20分钟。
分析方法
BF采用重量法测量，假设胆汁密度为1.0 g/ml。用3α-羟基甾体脱氢酶法测定总BS。21
分数14通过血浆消失动力学分析评估C-TC转移率。等离子体14C-TC浓度随时间变化的数据拟合为双指数方程;根据赤池的标准，初步的三指数拟合未能显示出任何改善。22因此，正如Richards和他的同事所描述的，带有开放式胆道流出的双室室模型，23在生理学上被认为是现实的，并被用于计算肝摄取的分数转移率(r12)，正弦射流(r21)及小管排泄(r3.)．
14用液体闪烁计数器(RackBeta, Pharmacia Wallac Oy，芬兰)测量血浆和胆汁中的C-TC。14在主叶离心后的匀浆上清液(10% w/v在盐水中)中测定C-TC肝脏含量。
共聚焦显微镜和图像分析
肝脏样品冷冻在液氮预冷的异戊烷中，保存在−80°C。用蔡司Microm HM5000低温切片机制备肝脏切片(5 μm)，风干后用3%多聚甲醛磷酸盐缓冲盐水(PBS)固定。为了进行Bsep标记，组织切片与兔抗鼠Bsep(1:100)抗体孵育过夜(美国华盛顿州西雅图Kamiya)，并进一步与Cy2结合驴抗兔IgG孵育(美国宾夕法尼亚州西格罗夫Jackson免疫研究所)(1:100,1小时)。切片用Vectashield安装介质(Vector, Burlingame, California, USA)安装，用共聚焦显微镜(True confocal Scanner Leica TCS SP II)分析。肌动蛋白标记时，固定组织切片用phalloidin-FITC (10 μg/ml in PBS, 20分钟)培养，安装，并用共聚焦显微镜分析，如Bsep所述。对于双标记，组织切片在进行Bsep染色后暴露于phalloidin-FITC，如上所述。
共焦图像的密度分析如前所述24使用软件Scion Image β4.02 for Windows(美国Scion公司)。荧光强度在垂直于小管的一条线上测量(长度8 μm)。对于每个切片，从15个不同的小管收集数据并用于统计比较。数据来自三种独立的肝脏制剂。每个测量值都归一化为各自测量值的所有强度之和。用曼-惠特尼检验比较不同条件下的差异。
研究IRHC
对联隔离、充实、培养
IRHC是根据Wilton和同事描述的两步胶原酶灌注程序从大鼠肝脏中获得的，25改编自高塔姆和他的同事，26通过离心洗脱进一步富集。27最后的制剂，含有73(5)%的IRHC，通过台盼蓝排除试验，存活率为>95%，被镀在含有青霉素/链霉素的L-15培养基中，以密度为0.5×10的35毫米塑料培养皿(2 ml/皿)上5单位/ml, 37°C孵育4.5-5小时。
IRHC BS分泌功能的评估
通过CLF试验的小管液泡积累(cVA)评估BS分泌功能，评估在其小管液泡中显示CLF的对联百分比(每实验>50)。25，28对联暴露于TLC (2.5 μM / 2 μl DMSO)中20分钟;在这个浓度下，TLC和它的载体DMSO对细胞膜的完整性或活力都没有任何影响，分别通过乳酸脱氢酶释放和台泮蓝排除试验进行评估(数据未显示)。然后用L-15洗涤2次去除TLC，将细胞暴露于CLF (2 μM)中15分钟。接下来，切除CLF，并使用倒置荧光显微镜(Olympus IMT2-RFL;Olympus光学有限公司，伦敦，英国)。另一组用DB-cAMP (10 μM, 30 min)预处理后，再进行TLC暴露。
在一些实验中，细胞内CLF荧光定量。来自随机选择视野的显微照片被数字化，细胞体中的CLF荧光通过密度法定量，使用图像分析程序(Openlab;英国考文垂Improvision)。细胞内荧光强度的测定方法是:从单独的管状液泡中获得的值除以液泡面积，减去对联中的总荧光(~ 30)，除以对联总面积。
评估Bsep和F-actin的定位
对于Bsep免疫荧光染色，细胞在PBS中用4%多聚甲醛固定，并与抗Bsep兔多克隆抗体孵育(1:250,2小时)，然后与FITC标记的山羊抗兔Ig G孵育(1:100,40分钟)(Zymed, San Francisco, USA)。然后将细胞安装并使用荧光显微镜(蔡司Axiovert 350TV，配备新荧光透镜)检查。
Phalloidin-FITC标签被用于可视化f -肌动蛋白，使用的方法是对knuton和同事描述的方法的修改，29正如威尔顿和他的同事所描述的那样。28然后，按照Bsep的描述，将细胞安装在荧光显微镜下进行检查。
单色图像(每组20-30张)的拍摄步骤为1 μm，用CCD摄像机(Hamamatsu photontonic Sys.)拍摄。日本滨松市株式会社)。使用反卷积程序(Micro-Tome Mac;Vaytek，费尔菲尔德，伊利诺伊州，美国)。荧光定量使用Openlab软件(即兴)。
统计分析
结果用均值(SEM)表示。未配对的t薄层色谱组与对照组比较采用薄层色谱法。采用单因素方差分析，然后采用Newman-Keuls检验进行多次比较。p<0.05为差异有统计学意义。
结果
活体TLC对基底BF和BS分泌的影响
图1显示了TLC处理后BF和BS总输出的变化。BF值迅速下降，在20分钟时达到最低点。在此之后，BF恢复缓慢，在整个实验中显著低于对照组。相比之下，在TLC给药60分钟后，BS输出恢复正常，甚至从此时起超过了控制BS输出。
牛磺酸盐治疗大鼠胆流量(A)和胆盐产量(B)变化的时间过程(TLC;3 μmol/100 g体重静脉滴注)，同时或不预先给药二丁利- camp (DB-cAMP;静脉注射10 mg/kg体重)。对照组大鼠，只接受TLC灌胃，也显示。箭头表示TLC或车辆管理。对照组和TLC组6只动物，TLC+DB-cAMP组3只动物用均值(SEM)表示。*与对照组差异显著(p<0.05);†与TLC组比较差异显著(p<0.05)。
研究了DB-cAMP对薄层色谱诱导的胆汁淤积的防治作用。DB-cAMP可部分但显著地防止BF损伤;在初始下降之后，该参数的恢复速度明显加快，在100分钟时达到控制值。尽管DB-cAMP不能阻止BS输出的初始损伤，但该化合物诱导该参数的快速恢复，从TLC给药40分钟开始甚至达到了高于对照组的值。
胆道排泄及药代动力学分析14C-TC
14在TLC处理的20分钟和100分钟，C-TC胆道输出均显著受损(图2)，这反映在放射性化合物的胆道累积排泄减少(图2，插图)。同时，最后的肝脏14C- TC含量显著增加(对照2.1 (0.6);TLC 20分钟24.1 (5.3);TLC 100分钟27.9 (5.5)dpm/μg肝脏重量;与对照组比较，差异有统计学意义(p<0.01)。DB-cAMP预处理显著抵消了胆道排泄量的减少14C-TC, TLC后100分钟给药。因此，放射性化合物的胆道累积排泄增加了106%(图2，附图)。
胆汁排泄的14C牛磺胆酸盐(14C-TC;0.25 μCi/100 g体重)和牛磺胆酸(TLC;静注3 μmol/100 g)，分别于给药后20分钟或100分钟给药。胆汁排泄的14C- TC，在TLC注射后100分钟给经二丁丁利- camp (DB-cAMP;10 mg/kg体重静脉注射)也显示。在所有实验组中，14C-TC在规定的时间内作为单次静脉注射给药，而在对照组14给药后100分钟给予C-TC。插图显示累积胆道输出14上述实验组均于放射性化合物静脉脉冲后20分钟进行C-TC。每组四只动物的数值用均值(SEM)表示。*与对照组差异显著(p<0.05);†与TLC (100 min)组比较差异显著(p<0.05)。
药代动力学的分析14TLC给药后100分钟C-TC血浆消失如表1所示。而肝14C-TC吸收(r12)， TLC增加96%，其正弦射流(r21)和减少58%的小管排泄(r3.)．这个变更r3.，以及肝脏的增加14TLC处理大鼠的C-TC滞留，提示主要步骤受损的是小管运输而不是正弦摄取。
TLC对体内Bsep和F-actin定位的影响
在TLC给药20分钟和100分钟后，用激光扫描共聚焦显微镜原位分析Bsep定位和F-actin细胞骨架组织的变化。
F-actin分布的变化如图3 (A-C)所示。对照组大鼠F-肌动蛋白细胞骨架呈典型的规则多边形排列，代表皮层F-肌动蛋白网络。对照组(图3A)和TLC处理动物在TLC给药20分钟或100分钟后无明显差异(分别为图3B和C)。
(A-C)显示牛磺酸石胆酸在体内作用的共聚焦图像(TLC;3 μmol/100 g静脉滴注)对f -肌动蛋白骨架组织的影响。在溶剂处理的对照组大鼠(A)中，f -肌动蛋白的细胞骨架显示出主要的室周定位。在TLC处理大鼠(分别为B和C)给药20分钟或100分钟后，均未观察到该正态分布的变化。(D-F)活体TLC对胆汁盐出口泵(Bsep)免疫荧光定位的影响(红色)。F-actin染色(绿色)用于划分胆管，黄色染色表示Bsep和F-actin共存。在溶剂处理的对照组大鼠(D)中，Bsep主要局限于小管。在TLC给药20分钟后(E)，阻胆剂破坏了Bsep的正常管状定位，可见在小管界限外(箭头)和细胞内囊泡样结构(箭头)的红色染色增加。在TLC给药100分钟后观察到同样的现象(F)，但明显增加的Bsep含有泡状结构，在肝细胞内部更深。图片是每组至少三个独立实验的代表性图片。
图3还描述了TLC处理(D-F)后Bsep定位的变化(红色)。图中还可见f -肌动蛋白(绿色)，它划分了小管间隙(黄色染色表示共定位)。在对照制剂中，Bsep主要局限于小管间隙(图3D)。TLC给药20分钟后，阻胆剂改变了Bsep的定位(图3E)，可见于小管界限外的红色染色增加(图3E，箭头)，以及在根尖下区域包含囊泡样结构的Bsep数量增加(图3E，箭头)。在TLC给药后100分钟，Bsep定位的改变似乎更加严重，因为在肝细胞深处发现了越来越多的包含泡状结构的Bsep(图3F，箭头)。
Bsep荧光谱的密度分析(图4A)显示，仅在TLC给药100分钟时，管状Bsep峰出现显著增宽，尽管在TLC给药20分钟后，Bsep内化趋势也很明显。相比之下，类似的f -肌动蛋白分布分析显示没有变化(图4B)。
胆汁盐输出泵(Bsep) (A)和f -肌动蛋白(B)荧光谱的密度分析。在对照条件下，在牛石胆酸(TLC)给药20分钟或100分钟后，沿着垂直于小管的一条线(从- 4到+4 μm)记录荧光分布。图3显示了每种条件下的三个单独实验中每一个15个测量值的平均值(SEM)。Bsep (A)荧光图谱的统计分析显示，TLC 100分钟组与对照组和TLC 20分钟组差异有统计学意义(p<0.05，见统计学分析方法)。两组间f -肌动蛋白分布(B)无差异。
TLC对IRHC中Bsep定位和功能的影响
图5显示了IRHC在管状空泡中积累CLF的典型荧光图像(A)、CLF值的cVA (B)和TLC处理IRHC(经DB-cAMP预处理或未预处理)细胞内CLF含量(C)。
(A)具有代表性的显微照片显示，在对照肝细胞对联和牛油石胆酸中，荧光胆盐类似物胆酰化荧光素(CLF)的积累(TLC;2.5 μM, 20分钟)处理的对联，分别用二丁基- camp (DB-cAMP;10 μM, 30分钟)。(B)在小管液泡中显示可见CLF荧光的总对联(>50)百分比的量化。(C)量化30个肝细胞对联细胞体中CLF荧光的总像素强度，作为细胞内CLF含量的测量。数值用四种独立细胞制剂的平均值(SEM)表示。*与对照组差异显著(p <0.05);†与TLC组比较差异显著(p<0.05)。
在对照条件下，71.8(2.4)%的对联表现为CLF的cVA。TLC使该值降低了63%，而DB-cAMP预处理实际上使该参数归一化，这与我们小组之前的报告一致。20.TLC诱导CLF的cVA下降，同时细胞内CLF含量增加67%，进一步提示BS小管转移是BS整体转运的主要步骤，受TLC影响;DB- cAMP也抵消了这种变化。
IRHC中Bsep免疫荧光染色如图6所示。在对照条件下，Bsep主要局限于CM。TLC诱导明显的Bsep重定位到位于胞周区域的囊泡中，更稀疏地在剩余的细胞体上。因此，CM中荧光强度的比例降低了42% (p<0.005)。DB-cAMP预处理实际上正常化了Bsep的定位。相反，在TLC处理的对联中，f -肌动蛋白的正常胞周定位或IRHC的形貌(通过相位对比显微镜观察)没有发现变化(图7)。
(A)具有代表性的荧光显微照片显示对照肝细胞对联和牛油石胆酸中胆汁盐输出泵(Bsep)的定位(TLC;2.5 μM, 20分钟)处理的对联，分别用二丁基- camp (DB-cAMP;10 μM, 30分钟)。小管区Bsep荧光强度的量化，表示为总(小管膜+细胞体)荧光强度的百分比(B)。*与对照组有显著差异(p<0.05)。†与TLC组比较差异显著(p<0.05)。
(A)具有代表性的荧光显微照片显示phalloidin-FITC标记的f -肌动蛋白定位和对照肝细胞对联和牛油石胆酸中的相位对比图像(TLC;2.5 μM, 20分钟)处理的对联，分别用二丁基- camp (DB-cAMP;10 μM, 30分钟)。f -肌动蛋白在胞周区域的荧光强度的量化，表示为总(胞周面积加细胞体)荧光强度的百分比(B)。
讨论
本研究的目的是对TLC诱导的BS分泌衰竭的相关机制进行深入研究。
TLC在体内诱导BS总输出急性短暂下降，在60分钟达到控制值(见图1)。然而，这种恢复可能不一定反映完整的肝处理BS的正常化;也有可能是在胆汁淤积高峰期间被保留在肝脏中的BS产生了补偿性浓度梯度，高到足以抵消BS运输系统的部分长期损伤。我们的数据支持最后一种可能性。药代动力学研究14在胆道BS输出时进行C-TC肝处理完全恢复的分数常数表示14C-TC微管的转移,r3.，降低了56%(见表1)14C-TC吸收,r12， TLC不影响。这与我们的发现是一致的14在活体肝脏组织中，经TLC处理的大鼠的C-TC滞留显著升高，而在经TLC处理的IRHC中，BS荧光类似物CLF在细胞内的滞留水平较高(见图5)14注射TLC 100分钟后观察到C-TC排泄，尽管此时BS排泄总量已恢复正常，表明与20分钟时相比，BS运输系统持续受损(见图2)。
我们的结果表明，Bsep从CM内化到细胞内泡状结构(见图3和图6)可能是BS分泌功能障碍的一个促成因素。这一观点得到了一些研究的进一步支持，这些研究分析了DB-cAMP对Bsep定位的恢复及其使Bsep功能正常化(TLC损害)的能力之间的关联。我们在IRHC中的数据显示，DB-cAMP在恢复Bsep定位和功能方面具有重要作用，CLF的cVA评估结果明确支持Bsep移位在TLC诱导的BS分泌损伤中发挥关键作用。在体内的研究证实了DB- cAMP对Bsep功能的类似有益作用，表明这种第二信使显著加速TLC诱导的总胆盐产量下降后的恢复(见图1)，并提高肝脏清除胆汁的能力，示踪剂量为14C-TC。
据Beuers及其同事报道，TLC诱导的膜转运蛋白重分布可能不仅限于Bsep，还可能涉及其他载体，如多特异性有机阴离子载体Mrp213；该研究表明Mrp2的重新定位与Mrp2底物二硝基苯-分泌功能受损之间存在功能关联年代——谷胱甘肽。此外，超微结构研究显示，TLC可以诱导培养的肝细胞中CM结合蛋白的重新分布。30.
TLC诱导Bsep内化的机制不能从我们的结果中直接解决。有报道称存在一种微管依赖的囊泡通路，参与从根尖下腔室到膜域的CM转运蛋白靶向，它与聚合IgA受体共享跨细胞通路。31相反的现象——即CM蛋白组分的内吞作用——最近被证实，32这很可能解释了转运蛋白的内化。因此，可以想见，两者之间是有平衡的exocytic插入而且内吞作用的掩饰TLC可能会通过抑制插入或刺激内化，或两者兼而有之，破坏这种平衡。第一种可能是TLC损害了体内的跨细胞微管依赖的囊泡运输33IRHC。34然而，也应考虑其他可能性。TLC引起的胆固醇含量增加导致CM流动性下降，35用来测定膜的熔合性，36也可能影响CM运输蛋白的插入，包括Bsep。相比之下，肌动蛋白细胞骨架组织的破坏被证明改变了分选19和维护37这是不可能的，因为在体内或IRHC中TLC给药后没有观察到F-actin分布的变化。然而，这一发现并不排除肌动蛋白细胞骨架在功能或分子水平上发生更细微变化的可能性，或者两者都发生。无论发生Bsep内化的机制是什么，已知的刺激该转运蛋白插入其膜结构域的因素有望帮助恢复插入/内化平衡，从而防止其本地化的破坏;这是DB-cAMP的情况(见图6)。类似的现象可以解释对TLC诱导的胆汁淤积和非胆汁淤积BS样牛磺胆酸的BS分泌衰竭的保护作用。38tauroursodeoxycholate,20.38，39两者都能刺激泡状Bsep靶向。17日,40
除了Bsep定位受损外，TLC改变BS在肝小管水平正常转运和/或滞留的其他机制也应予以考虑，这些机制可能协同作用，即:(i) TLC诱导的CM流动性下降35；这可能会影响功能BS运输能力，已显示发生在其他地方14C-TC在CM囊泡中的转运41；(ii)由于与胞质蛋白的结合减少，细胞内BS滞留受损;BS与谷胱甘肽结合的可逆位移年代- TLC显示转移酶(配体素)发生，42这可能解释了肝脏与血浆正弦的内在常数的增加14C-TC流出(r21)(见表1);(iii) TLC对紧密连接完整性的破坏;这是在相似的条件下在体内描述的43在海地,44并可能导致BS通过渗漏的细胞间连接复合体扩散回血浆，从而导致其输出减少。
综上所述，TLC通过选择性地影响BS的管状运输而损害胆道BS的分泌，这种影响至少部分是由于Bsep重新定位到膜下腔室。在这里也观察到类似的现象13以及其他形式的胆汁淤积16日,37由于这些变化总是伴随着运输功能受损，我们的研究结果表明，内吞载体内化可能是胆汁淤积症的一个共同特征，这可能是在这种情况下嗜胆化合物运输受损的原因。显然，需要进一步的工作来证实这一假设。
致谢
这项工作得到了CONICET、皇家学会、Fundación Antorchas和Nación(给经理)、国立罗萨里奥大学(给FAC和ADM)、朱尔斯·索恩爵士慈善信托基金(给PM)和小服务局赠款GM55343(给MV)的支持。
参考文献
脚注
谨以此篇文章纪念罗杰·科尔曼教授(1938年8月13日至2003年1月14日)。
在2002年4月西班牙马德里举行的国际肝脏研究协会(IASL)双年会议上部分发表，并以摘要形式出版(
)．