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摘要
背景:肝硬化可能导致肝细胞癌(HCC)，无论其原因如何。遗传和/或环境因素可能调节HCC的风险。HFE基因的突变是遗传性血色素沉着症的原因，这种疾病已知与肝硬化、HCC或两者有关。最近有研究表明，C282Y HFE基因突变可能在非肝硬化肝癌患者中比在普通人群中更常见。HFE基因突变是否与肝硬化患者HCC风险增加有关尚不清楚。
目的:评估HFE基因突变在肝硬化和非HCC患者中的患病率。
患者及方法:共对133例连续肝硬化HCC患者进行了前瞻性研究，以确定是否存在C282Y和H63D突变。对照组为100例无HCC的肝硬化患者。我们用限制性内切酶酶切聚合酶链反应扩增基因组DNA测定HFE基因型。对89例肝癌患者和73例非肝癌患者的非肿瘤肝活检样本进行了铁负荷评估。
结果:HCC患者和非HCC患者中C282Y杂合子的患病率相似(5%)v分别为4%;P =0.65)，与一般人群的预期没有差异。所有HCC患者均未发现C282Y或H63D纯合子，也未发现复合杂合子。H63D杂合子在HCC患者和非HCC患者中的患病率相似(31%)v分别为38%;p = 0.25)。在有或没有HCC的患者中，HFE基因型与肝铁负荷之间没有发现相关性。
结论:C282Y和H63D突变似乎与肝硬化患者HCC风险增加无关。
- 肝细胞癌
- 肝硬化
- haemochromatosis
- HFE基因型
- C282Y突变
- H63D突变
- GH，遗传性血色素沉着症
- 肝细胞癌
- PCR，聚合酶链式反应
数据来自Altmetric.com
肝硬化是肝细胞癌(HCC)发生的主要原因之一。肝硬化患者HCC的年发病率为3-5%。1 -3.然而，并非所有肝硬化患者都会发展为HCC。因此，HCC高危患者的识别对于通过强化筛查计划提高早期检出率以及随后尝试改善根治性治疗对生存的影响是非常重要的。在西方肝硬化患者中已经发现了几个发生HCC的危险因素，包括男性、年龄在50岁以上、血清α胎蛋白水平持续升高、肝硬化严重程度(食管静脉曲张大和凝血酶原时间异常)以及抗丙型肝炎抗体。1
遗传性血色素沉着症(GH)患者发生HCC的风险也很高，即使没有肝硬化或尽管组织铁完全耗尽。4 -7HFE基因的两个错义突变与60% - 90%的生长激素病例有关。882 - 100%的GH患者的第一个主要突变C282Y为纯合子，4%的GH患者的C282Y突变和第二个次要突变H63D为复合杂合子。8
最近有报道称，HFE C282Y突变在轻度铁过载的非肝硬化肝癌患者中发病率增加。9 -11这表明在肝癌发生过程中C282Y突变可能与杂合状态有关。H63D的这种假定作用仍然难以捉摸11因为到目前为止，这种缺乏C282Y的突变尚未与显著的铁过载或HCC相关。12这促使我们前瞻性地评估伴有或不伴有HCC的肝硬化患者中C282Y和H63D突变的患病率。
患者与方法
病人
1997年5月至1999年11月，在获得知情同意后，对133名连续患有肝硬化和HCC的患者进行了HFE基因突变的前瞻性筛查。在同一时期，还收集了对照组100例无HCC肝硬化患者的血液样本。根据通常标准(一级亲属有肝病史或铁超载史，GH的典型表现如关节痛、皮肤色素沉着和明显的糖尿病)怀疑GH的患者13被排除在外。HCC的诊断是基于细针引导活检后的组织学，或超声或计算机断层扫描时存在局灶性肝损害，血清α胎蛋白水平高于250 UI/ml。根据我们之前的研究，选择250 UI/ml阈值作为诊断标准。14根据临床、生物学和形态学标准，经组织学证实或诊断为肝硬化。
方法
采用标准程序从外周血白细胞中提取基因组DNA。DNA片段通过聚合酶链式反应(PCR)扩增，所用引物和反应条件如前所述。8PCR产物用限制性内切酶RsaI和DpnII酶切，分别检测C282Y和H63D突变。
使用珀尔斯普鲁士蓝染色对162例可用的非肿瘤肝活检样本(89例有HCC, 73例无HCC)进行半定量评估，结果如下:0，无染色;1，微量至中度铁超载(<50%染色肝细胞);2，大量铁超载(>50%染色肝细胞)。
统计数据
对两组患者(有无HCC)的性别、肝硬化病因、肝铁负荷、HFE基因型分布进行χ比较2检验或费雪精确检验。使用方差分析对他们的年龄进行比较。随后将HFE基因突变与HCC的预测因素(年龄和性别)纳入logistic回归分析。p值<0.05被认为是显著的。
结果
表1给出了患者特征和HFE基因型分布，根据有无HCC。除年龄和性别外，两组具有可比性，尤其是肝硬化的病因。
HCC患者中有2.6%的染色体存在C282Y突变，而非HCC患者中有3.0%的染色体存在C282Y突变(p=0.44)。HCC患者和非HCC患者中C282Y杂合子的患病率相似(5%)v分别为4%;p=0.65)，与法国正常人群(3.6%)的预期没有差异。15
HCC患者中H63D突变的频率为15.4%，而非HCC患者中H63D突变的频率为20.5% (p=0.12)。H63D杂合子在HCC患者和非HCC患者中的患病率相似(31%)v分别为38%;p=0.25)，略高于法国正常人群预期的23.7%。15HCC患者均未发现C282Y纯合子、H63D纯合子或复合杂合子。
总体而言，两组之间C282Y和H63D突变的患病率没有显著差异，即使在年龄和性别调整后也是如此。当根据肝硬化病因对患者进行研究时，两组患者中C282Y和H63D突变的发生率无明显差异(表2)。同样，当同时考虑HCC患者和非HCC患者时，HFE基因型的分布也没有因肝硬化病因而不同。
在大多数特征(年龄、性别、肝硬化病因、HFE基因型)方面，拥有非肿瘤肝组织样本的患者与没有肿瘤肝组织样本的患者没有差异。肝铁负荷在HCC患者和非HCC患者之间没有差异(p=0.8)。最后，HFE基因型与肝铁负荷在有无HCC患者中均无显著相关性(表3)。
讨论
这项大型前瞻性多中心研究的主要结果是C282Y和H63D HFE基因突变的患病率在肝硬化患者和非HCC患者之间没有差异。
先前的一些研究表明，HCC肝硬化患者中HFE基因突变的患病率高于非HCC患者。16 -19威利斯和同事16据报道，HCC患者中C282Y纯合突变的患病率为7%，显著高于正常人群中0.7%的预期患病率。然而，必须强调的是，这项研究是通过从存档的组织样本中提取DNA，对有限数量的患者(n=28)进行回顾性研究。在181名酒精性肝硬化患者中，Lauret和他的同事17发现43例HCC患者中C282Y杂合突变的患病率明显高于136例非HCC患者(分别为20.9%和4.4%;p = 0.002)。在另一组98例病毒性肝硬化患者中，34例发生HCC，未观察到这一结果。在本研究中，HCC患者中C282Y杂合突变的患病率较低(5%)，在酒精性肝硬化和病毒性肝硬化患者中无差异(分别为6.6%和2.6%)。Aldersley和他的同事18在32例HCC患者中，C282Y纯合突变的患病率为6.3%，而在82例慢性胆汁滞留性肝病对照组中，这一比例为0%;在HCC患者中，C282Y杂合突变的患病率为25%，对照组为5%。然而，这些结果很难解释，因为HCC组的潜在肝脏疾病没有明确。在一项包括65例酒精性或病毒性肝硬化和HCC患者的研究中，Cauza和他的同事19C282Y杂合子的患病率为10.8%。这一患病率被认为高于正常人群的预期患病率。20.
总的来说，在这四项研究中，HCC患者中HFE基因突变的发生率很高16 -19应谨慎解释，因为其方法上的缺陷，包括回顾性性质，缺乏肝硬化对照组，研究的患者数量有限。在本研究中，HFE基因突变在一个大队列的肝硬化患者中进行了前瞻性评估。虽然我们没有在健康对照组中筛查HFE基因型，但在我们的肝硬化患者中观察到的C282Y突变杂合子的流行率(分别为5%和4%)与法国正常人群中预期的(3.6%)相似。15此外，在我们的肝硬化患者中观察到H63D突变杂合子的流行率(分别为31%和38%)与Lauret及其同事的报道一致17酒精性或病毒性肝硬化患者和健康对照组(分别为31.3%、29.6%和37.7%)。
虽然我们没有测量肝脏铁浓度，但我们能够使用珀尔斯普鲁士蓝染色对162例可用的非肿瘤肝活检样本(89例有HCC, 73例无HCC)进行半定量评估。我们没有发现肝脏铁含量与HFE基因型之间有任何相关性。C282Y和H63D杂合度对铁过载的影响仍存在争议。在大量法国人群中HFE突变表型表达的测定表明，非C282Y纯合子患者的肝脏铁负荷为轻度至中度，明显低于C282Y纯合子患者。21同样，HFE基因突变似乎在与肝脏疾病相关的肝脏铁过载中起不了主要作用。事实上，HFE基因突变的杂合性似乎有助于慢性丙型肝炎患者的肝脏铁积累，但不能完全解释。20.22日,23此外，它似乎不会影响酒精患者的肝脏铁含量或纤维化。24相反，我们不能排除这样一个事实，即肝脏铁负荷与HFE基因型之间缺乏相关性可能是由于肝硬化患者肝脏铁含量测定缺乏可靠性。事实上，据报道，肝内铁浓度有相当大的变异性，GH和终末期肝硬化之间的这些值经常重叠。25，26
在大多数非肝硬化肝癌患者的非肿瘤肝中，肝脏铁超载已被报道，这表明它可能是一种共同致癌物。11日,27然而，在本研究中，肝脏铁含量在伴有和未伴有HCC的肝硬化患者之间没有差异，这一发现与我们之前的工作一致，我们没有发现酒精性或丙型肝炎病毒相关肝硬化患者肝脏铁含量与HCC发生之间的显著关系。28因此，在没有GH的肝硬化患者中，肝铁超载在HCC发展中的作用仍有待阐明。
总之，C282Y和H63D突变在肝硬化患者中相似的患病率提示HFE基因突变与肝硬化患者的HCC之间缺乏关联。在没有铁超载的肝硬化患者中，这些突变似乎与HCC风险增加无关。