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文摘gydF4y2Ba
背景和目的:gydF4y2Ba虽然胃饥饿素,小说生长激素释放肽本地化主要在胃底部,据报道不仅加速食品通道和胃肠蠕动也影响食欲和体重控制,调节胃生长素分泌胃的条件下gydF4y2Ba幽门螺杆菌gydF4y2Ba感染是未知的。本研究旨在调查血浆和胃胃促生长素水平在蒙古沙鼠gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba胃粘膜的殖民化。gydF4y2Ba
方法:gydF4y2Ba沙鼠口服接种gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba在接种后检查。检查preproghrelin mRNA表达在胃粘膜,互补脱氧核糖核酸编码的沙鼠preproghrelin和glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶同系物分离和定量逆转录-聚合酶链反应系统。gydF4y2Ba
结果:gydF4y2Ba在沙鼠显示gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba殖民统治(gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba集团)、preproghrelin mRNA的表达和总胃促生长素水平显著降低17日和23周后(p < 0.01)。虽然胃饥饿素免疫反应性的细胞的数量减少胃的体重增加,胃内容物的总量和活跃的饥饿激素这组在控制水平是一样的。胃髓过氧物酶活性表现出与血浆胃促生长素水平正相关。另一方面,在17周,血浆胃促生长素水平显著提高gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba组(p < 0.05),表明肽的分泌增加补偿在这个时间点。gydF4y2Ba
结论:gydF4y2Ba目前的实验研究表明,胃和血浆胃促生长素动力学改变回应gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba感染。gydF4y2Ba
- 胃生长素gydF4y2Ba
- 血浆胃促生长素gydF4y2Ba
- preproghrelingydF4y2Ba
- 髓过氧物酶gydF4y2Ba
- GAPDH, glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶gydF4y2Ba
- rt - pcr、逆转录-聚合酶链反应gydF4y2Ba
- RIA,未及gydF4y2Ba
- 轻拍3 3′-diaminobenzidine tetrahydrochloridegydF4y2Ba
- MPO、髓过氧物酶gydF4y2Ba
来自Altmetric.com的统计gydF4y2Ba
- GAPDH, glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶gydF4y2Ba
- rt - pcr、逆转录-聚合酶链反应gydF4y2Ba
- RIA,未及gydF4y2Ba
- 轻拍3 3′-diaminobenzidine tetrahydrochloridegydF4y2Ba
- MPO、髓过氧物酶gydF4y2Ba
最近,一种新的生长激素释放肽,饥饿激素,被证明是本地化主要在胃底部的类似细胞。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba2gydF4y2Ba河鼠胃饥饿素序列被发现对应一个28 117残留preproghrelin内残留信号序列,以前也曾阐明在人类和老鼠。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba3 -gydF4y2Ba5gydF4y2Ba胃饥饿素被发现是非常重要的在食欲和体重控制的规定,以及胃肠功能,如酸分泌和胃肠蠕动。gydF4y2Ba6gydF4y2Ba7gydF4y2Ba
幽门螺杆菌gydF4y2Ba(gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba)感染是致病的主要因素发展的胃炎、消化性溃疡疾病,胃恶性病变。gydF4y2Ba8gydF4y2Ba9gydF4y2Ba最近,Nwokolo和他的同事们gydF4y2Ba10gydF4y2Ba报告说,增加后的血浆胃促生长素水平gydF4y2BaH幽门gydF4y2Baeradicaton,暗示可能的联系gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba感染和饥饿激素的分泌。相比之下,在另一项研究中,在报道血浆胃促生长素水平无显著差异gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba积极的和消极的女性相似的年龄和身体质量指数。gydF4y2Ba11gydF4y2Ba两项临床研究的结果不一致,可能因为他们观察到胃饥饿素动态的不同方面gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba感染。澄清的影响gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba感染胃和血浆胃促生长素直接动力,它将需要使用建立实验动物模型进行研究gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba感染。蒙古沙鼠是一个合适的动物模型显示标志着对胃粘膜病变gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba感染;gydF4y2Ba12 -gydF4y2Ba16gydF4y2Ba相比之下,在其他实验动物,如鼠标或老鼠。然而,大多数的核苷酸或氨基酸序列没有被确认在沙鼠。因此我们preproghrelin和glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶(GAPDH)为特征的长爪沙鼠。gydF4y2Ba
,据报道,饥饿激素产生和分泌胃底gydF4y2Ba17gydF4y2Ba18gydF4y2Ba胃切除术后血浆胃促生长素水平下降明显,重要的是调查的动态胃粘膜胃促生长素在不同疾病的条件下。本研究旨在研究蒙古沙鼠的胃和血浆胃促生长素水平gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba胃粘膜的殖民化。gydF4y2Ba13gydF4y2Ba15gydF4y2Ba我们发现减少胃胃促生长素水平和增加补偿后血浆胃促生长素水平在沙鼠感染食物不足gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
方法gydF4y2Ba
沙鼠胃促生长素和GAPDH cDNA克隆gydF4y2Ba
从蒙古沙鼠获得总RNA (gydF4y2Ba梅里恩unguiculatusgydF4y2Ba)胃使用RNeasy Mini-kit(试剂盒、希尔登,德国)。为了克隆一个沙鼠胃促生长素同系物,退行性引物设计从人类和小鼠胃促生长素cDNA(正向引物M01: 5′-CCGGAATTCACTCAGCATGCTCTGGATGGACATGGCCATGGCAGG-3′和反向引物M02: 5′-CCGGAATTCTCAGCTGGCGCCTCTTTGACCTCTTCCCA-3′)。大约2μg总RNA被用作模板和逆转录-聚合酶链反应(rt - pcr),一步执行M01和M02引物(50°C 30分钟,95°C 15分钟,和35周期为30秒55°C,一分钟72°C,和94°C 20秒)。PCR产物的大小接近预期的大小(332个基点);该产品是subcloned pBluescript SKgydF4y2Ba+gydF4y2Ba向量(美国加州拉霍亚,Stratagene),和DNA序列测定使用310基因分析仪(PE应用生物系统公司,诺沃克,康涅狄格,美国)。gydF4y2Ba
获取生长素的全长cDNA,我们执行5′运动中和3′运动中通过基于设计的引物序列。5′运动中,两个特定的反义基因引物,M06 (5′-TCAGCTGGCGCCTCTTTGACCTCTT-3′)和M07 (5′-GCTCCTGACAGCTTGATGCCAACGT-3′),设计,5′运动中都使用了5′竞赛系统的迅速放大cDNA结束(英杰公司公司,卡尔斯巴德,加利福尼亚,美国)。基因3′运动中,特定的意义上底漆,M05 (5′-TGGCCATGTCAGGCTCCAGCTTCTT-3′),设计和3′运动中都使用了智能种族cDNA放大工具包(BD生物科学Clontech,帕洛阿尔托,加州,美国。每个放大片段直接使用310测序基因分析仪(PE应用生物系统公司)。gydF4y2Ba
克隆的沙鼠GAPDH同系物,上面描述的方法一样使用了生长素。总之,GAPDH生成一个片段,正向引物M08 (5′-CGGGGATCCGTATTGGGCGCCTGGTCACCAGGGC-3′)和反向引物M11公路(5′-CCGGAATTCACTCCTTGGAGGCCATGTGGGCCAT-3′)。PCR产品的大小接近预期的大小(990个基点)。基因5′运动中,特定的反义底漆,M17星云(5′-CCTCAGTGTAGCCCAGGATGCCCTT-3′),设计,和3′运动中,一个基因特定意义上底漆,M18 (5′-TCTTCACCACCATGGAGAAGGCCG-3′),是使用。每个放大片段直接使用310测序基因分析仪(PE应用生物系统公司)。gydF4y2Ba
定量rt - pcrgydF4y2Ba
总RNA提取的胃蒙古沙鼠使用RNeasy迷你包(试剂盒)。TaqMan定量实时rt - pcr检测执行preproghrelin mRNA和GAPDH mRNA ABI棱镜7700序列检测系统(PE应用生物系统公司)。gydF4y2Ba19gydF4y2Ba
以下引物被用来放大preproghrelin mRNA: ghrelin-F (5′gga ATC CAA棉酚GCC ACC AGC-3′), ghrelin-R (5′gct有条件现金援助总署AGC TTG ATG CCA-3′),和ghrelin-Taq (5′-FAM-AAC TGC AGC CAC GAG CTC TGG亚美大陆煤层气有限公司GC-TAMRA-3′);放大GAPDH mRNA为内部控制,以下引物被使用:GAPDH-F (5′TTC AAC GGC ACA GTC亚美大陆煤层气有限公司GC-3′), GAPDH-R (5′gcc TTC太极拳ATG GTG GTG AAG-3′),和GAPDH-Taq (5′-FAM-CCC ATC ACC ATC TTC CAG GAG CGA GA-TAMRA-3′)。gydF4y2Ba
长爪沙鼠的PCR碎片preproghrelin GAPDH和放大和subcloned pDrive克隆载体(试剂盒),分别作为标准。Preproghrelin mRNA表达水平正常化使用GAPDH mRNA表达水平。gydF4y2Ba
胃饥饿素放射免疫检定法(RIA)gydF4y2Ba
胃、十二指肠或空肠抽样gydF4y2Ba
新鲜整个腺胃前壁标本,十二指肠幽门环)(5 - 15毫米,或空肠从幽门环(120 - 130毫米)被冻结后立即收集和储存在−80°C。每个样本中煮五分钟灭活内在蛋白酶10倍量的水。解决办法是调整为1 M醋酸后冷却,且组织是单一化样品溶液酸化以来阻止开采损失的复苏。上层清液是lyophilised然后接受胃促生长素RIA。组织胃饥饿素的提取效率超过95%。gydF4y2Ba
等离子体取样gydF4y2Ba
全血样品(1毫升)从右心室在管包含EDTA-2Na(1毫克/毫升)和抑肽酶(500桥/毫升)。每个等离子体样本(500µl)是治疗C18 Sep-Pak墨盒(水,米尔福德,马萨诸塞州,美国)肽提取。墨盒是清洗和筛选了;洗出液(50µl相当于等离子体)lyophilised和遭受饥饿激素RIA。血浆胃促生长素的萃取效率大约是90%。gydF4y2Ba
RIA的饥饿激素gydF4y2Ba
两个RIA技术被用于测量胃饥饿素,如前所述。gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba短暂,胃促生长素水平测量使用两个兔多克隆抗体反对N终端(1 - 11)(Gly1-Lys11)或C终端(13-28)(Gln13-Arg28)大鼠胃促生长素的片段。两个示踪剂配体合成(Tyr29):大鼠胃促生长素antirat胃促生长素(1 - 11)抗血清和[Tyr12]鼠胃促生长素(13-28)antirat胃促生长素(13-28)抗血清。RIA孵化混合物,包含100µl标准激素或未知样品与200年µl RIA的抗血清稀释缓冲含有0.5%正常兔血清,最初培养12小时。然后,100µlgydF4y2Ba125年gydF4y2Ba我添加了标记示踪(15 000 cpm)和混合孵化了36个小时。Antirabbit山羊血清免疫球蛋白(100µl)之前添加了一个额外的24小时的潜伏期。自由和约束路径被离心分离的3000 rpm 30分钟。上层清液的愿望后,放射性颗粒是量化使用γ计数器(arc - 600;Aloka,日本东京)。所有分析都在4°C。antirat胃促生长素(1 - 11)抗血清明确地认识到gydF4y2BangydF4y2Ba-octanoylated形式的鼠胃饥饿素但不是des-acyl形式。antirat胃促生长素(13-28)抗血清认可acylated和des-acyl鼠胃饥饿素同样的形式。抗血清都同样可以交叉反应性与人类和沙鼠胃促生长素和不承认其他肠肽。各自的内部和interassay系数变化的N末端RIA分别为3%和6%,C末端RIA, 6%和9%。gydF4y2Ba
长爪沙鼠模型gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba感染gydF4y2Ba
所有实验和程序进行批准的动物是庆应义塾大学动物研究委员会(023009)。30一个特定病原体自由男性蒙古沙鼠(毫克/海,五周大;日本福冈Seac Yoshitomi)管理gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba悬浮液(ATCC43504: 10gydF4y2Ba8gydF4y2Ba集落形成单位(CFU) /毫升,15毫升/公斤),而27以后单独控制沙鼠管理缓冲溶液隔夜剥夺他们的食物。所有的动物都被允许免费使用水和标准颗粒饮食(CE-2;克丽日本,日本东京)。4、17、23周接种后,乙醚麻醉下的沙鼠检查食物不足16个小时后,和牺牲了过量的醚。gydF4y2Ba
H幽门gydF4y2Ba感染了每个时间点确定microaerobic细菌菌落的数量的文化。短暂,匀浆稀释胃被镀到布鲁氏菌的琼脂板含有10%马血,两性霉素B 2.5µg /毫升、万古霉素9µg /毫升、多粘菌素B 0.32µg /毫升、甲氧苄氨嘧啶5µg /毫升、50µg /毫升2,3,5-triphenyl-tetrazolium氯。盘子被孵化在37°C七天在microaerobic的气氛中。殖民地的数量统计,可行的gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba被表示为CFU / g的组织的数量。gydF4y2Ba21gydF4y2Ba
免疫组织化学gydF4y2Ba
胃癌组织标本的沙鼠在中和10%福尔马林固定石蜡和嵌入。石蜡切片是放置在幻灯片用0.01%的水溶液poly-L-lysine预处理。Deparaffinisation和水化。然后,抗原被加热15分钟检索在121°C柠檬酸缓冲(10毫米,pH值6.0)。冷却后,内源性过氧化物酶就熄了0.3%过氧化氢。洗涤后,非特异性结合被阻塞试剂(BlockAce;日本制药、日本大阪)。一夜之间,所有部分被孵化在4°C antighrelin(13-28)抗血清(1:10 000)。gydF4y2Ba17gydF4y2Ba与TBS-T洗涤后,幻灯片是孵化与过氧化物酶标记右旋糖酐聚合物共轭山羊antimouse免疫球蛋白在Tris-HCl(设想/合;Dako日本,京都,日本)30分钟后在室温和呈现出来的颜色开发使用3、3′-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB)解决方案三分钟。用苏木精复染色了。gydF4y2Ba
光显微镜下观察染色部分配有3 ccd数码相机(C7780;滨松光子学、日本滨松)gydF4y2Ba19gydF4y2Ba和每个图像存储为一个PSD文件(Adobe Photoshop 7.0)。苏木精染色细胞核和/或轻拍数使用粒子分析程序(Ultimage 2.6.4 Pro。;联盟愿景、法国)。胃饥饿素免疫反应细胞的密度(D:饥饿激素)是计算使用以下方程:gydF4y2Ba
Ng和Nt代表胃饥饿素免疫反应性的细胞的数量和总细胞数,分别在该地区的利益。gydF4y2Ba
调查colocalisation壁细胞与胃饥饿素免疫反应性的细胞,一些标本也染色HgydF4y2Ba+gydF4y2Ba- - - - - - KgydF4y2Ba+gydF4y2Ba腺苷三磷酸酶。与民建联胃促生长素免疫染色后,标本与鼠标anti-H孵化gydF4y2Ba+gydF4y2Ba- - - - - - KgydF4y2Ba+gydF4y2Baatp酶α亚基单克隆抗体(RDI,弗兰德斯,新泽西,美国;施用)一夜之间在4°C。幻灯片被孵化与山羊antimouse免疫球蛋白共轭,碱性磷酸酶标记右旋糖酐聚合物在Tris-HCl缓冲区(设想/美联社)在室温下30分钟。部分接触后被呈现出来Dako洋红衬底色原系统7分钟。gydF4y2Ba
MPO活性gydF4y2Ba
胃粘膜的组织样本收集管含有磷酸缓冲盐的蛋白酶抑制剂(100μM phenylmethylsulphonyl氟化物,10μg /毫升抑肽酶)和用冰连续30 0.5秒脉冲的功率设定每隔0.5秒150 W (VCX 750;超音速和材料,Inc .,牛顿,康涅狄格,美国)。总蛋白的匀浆测定使用修改后的洛瑞方法,gydF4y2Ba22gydF4y2Ba像史密斯和他的同事所描述的那样。gydF4y2Ba23gydF4y2Ba
髓过氧化酶(MPO)活动,索引多形核细胞的积累,确定使用先前描述的方法,做了一些调整。gydF4y2Ba24gydF4y2Ba粘膜匀浆样品在8000离心机gydF4y2BaggydF4y2Ba15分钟在4°C颗粒不溶性细胞碎片。同等体积的颗粒被rehomogenised 0.05磷酸钾缓冲(pH值5.4)含0.5% hexadecyltrimethylammonium溴离子。样本离心机,享年8000岁gydF4y2BaggydF4y2Ba15分钟在4°C和上层的得救了。MPO活性评估通过测量HgydF4y2Ba2gydF4y2BaOgydF4y2Ba2gydF4y2Ba依赖氧化3、3′,5、5′-tetramethylbenzidine。一个单位的酶活性被定义为MPO的数量,导致吸光度的变化为1.0 /分钟在655 nm 25°C。gydF4y2Ba
统计分析gydF4y2Ba
所有数据都表示为意味着(SEM);p < 0.05被认为是表示统计学意义。用单向方差分析对数据进行分析之后,菸害的多重比较检验。gydF4y2Ba
结果gydF4y2Ba
互补脱氧核糖核酸和蛋白质序列的长爪沙鼠preproghrelin和肽的描述gydF4y2Ba
孤立的完整长度长爪沙鼠preproghrelin cDNA长460个基点,由17个bp的5′非翻译区,354个基点的编码区,89个基点的3′未翻译。预测的起始蛋氨酸是位于核苷酸位置18 - 20。一个AATAAA聚腺苷酸化信号被确认在3′非编码区域位置(452 - 457)(图1)(铃木gydF4y2Ba等gydF4y2BaEMBL /基因库:AF442491)。推导的氨基酸序列的编码区表示,沙鼠preproghrelin由117个氨基酸残基,相同长度的老鼠,老鼠,和人类preproghrelins(图1 b) (AF442491)。在核苷酸水平,沙鼠preproghrelin序列表现出与人类同源性评分平均为85% (AJ252278), 90%用鼠标(AJ243503),和92%的老鼠(AB029433) preproghrelins(图1 b)。的沙鼠preproghrelin是高度保守的,蛋白质与人类相对应的共享83%(97/117)的身份,89%(104/117)的身份与老鼠,和88%(103/117)身份的老鼠。身份不明的第三残渣纯化肽的决心是丝氨酸,一样的其他哺乳动物激素。随着沙鼠胃促生长素决心完全同源鼠胃饥饿素除了一个氨基酸(刺gydF4y2Ba12gydF4y2Ba),两个鼠胃饥饿素多克隆抗体被用来测量沙鼠胃促生长素在目前的研究。gydF4y2Ba
互补脱氧核糖核酸和蛋白质序列preproghrelin及其与其他物种的同源性。(A)核苷酸和氨基酸屈指可数的左和右,分别。氨基酸残基的信号肽序列在斜体印刷。成熟激素肽的氨基酸残基构成印刷以粗体显示。加入EMBL /基因库这个序列是AF442491数量。(B)对齐的人类,老鼠,老鼠,和蒙古沙鼠preproghrelin蛋白质序列。匹配的残留物以同源(*)表示。氨基酸饥饿激素肽对应的阴影区域所示。gydF4y2Ba
互补脱氧核糖核酸和蛋白质序列的长爪沙鼠GAPDH和描述的肽gydF4y2Ba
孤立的完整长度长爪沙鼠GAPDH cDNA长1265个基点,由71个基点的5′非翻译区,编码地区1002个基点和192个基点的3′未翻译区(铃木gydF4y2Ba等gydF4y2BaEMBL /基因库:AY066007)。预测的起始蛋氨酸是位于72 - 74核苷酸位置。推导的氨基酸序列的编码区表示,沙鼠GAPDH可能是由333个氨基酸残基,相同长度的鼠标或老鼠GAPDH和两个氨基酸比人类GAPDH短。推导的氨基酸序列的沙鼠GAPDH是97.6%(325/333)与它的鼠标,97.3%(324/333)与老鼠的对应和95.2%(319/335)与人类相对应的相同。gydF4y2Ba
Preproghrelin mRNA表达和胃饥饿素内容在胃里gydF4y2Ba
preproghrelin mRNA水平的比率GAPDH mRNA水平(preproghrelin / GAPDH mRNA)gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba组显著下降而控制,17岁和23周后gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba接种(图2)。gydF4y2Ba
Preproghrelin mRNA表达水平正常化glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶(GAPDH) mRNA表达水平在胃里的蒙古沙鼠。* * p < 0.01相比,控制在17周;†††与控制在23周相比p < 0.001。gydF4y2Ba
虽然没有明显差异在总胃和活跃的胃促生长素水平控制和之间的(fmol /毫克)gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba组在接种后4周,这些水平明显下降gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba组与对照组相比在17和接种后23周(图3 a, B)。gydF4y2Ba
长爪沙鼠胃饥饿激素的水平。(一)总胃促生长素水平蒙古沙鼠有或没有的胃gydF4y2Ba幽门螺杆菌gydF4y2Ba细菌接种后殖民17岁和23周。* * p < 0.01相比,在每个时间点的控制。(B)活性的胃胃促生长素水平蒙古沙鼠有或没有gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba细菌接种后殖民17岁和23周。* p < 0.05相比,控制在17周;组合与控制在23周相比p < 0.01。gydF4y2Ba
胃饥饿素免疫反应性的细胞gydF4y2Ba
如图4所示,胃饥饿素免疫反应性的细胞位于胃粘膜腺体颈部的语料库,尤其是附近的HgydF4y2Ba+gydF4y2Ba- - - - - - KgydF4y2Ba+gydF4y2Ba腺苷三磷酸酶阳性壁细胞,在非gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba沙鼠感染。更高的放大倍数下,胃饥饿素免疫反应性的细胞被发现与壁细胞在相同的腺体(图4 b, C)的胃粘膜语料库gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba殖民沙鼠,虽然H的密度gydF4y2Ba+gydF4y2Ba- - - - - - KgydF4y2Ba+gydF4y2Ba腺苷三磷酸酶阳性细胞在与炎症细胞的积累减少,胃饥饿素免疫反应性的细胞仍发现局部与这些HgydF4y2Ba+gydF4y2Ba- - - - - - KgydF4y2Ba+gydF4y2Ba腺苷三磷酸酶阳性细胞(图4 d)。另一方面,gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba殖民语料库粘膜显示严重萎缩,大量消失的HgydF4y2Ba+gydF4y2Ba- - - - - - KgydF4y2Ba+gydF4y2Ba腺苷三磷酸酶阳性细胞是指出,胃饥饿素免疫反应性的细胞的数量也减少(图4 e)。gydF4y2Ba
Colocalisation激素免疫反应性的胃胃底粘膜细胞与壁细胞的蒙古沙鼠。棕色色细胞代表胃饥饿素免疫反应性的细胞和粉色彩色细胞代表HgydF4y2Ba+gydF4y2BaKgydF4y2Ba+gydF4y2Ba腺苷三磷酸酶阳性壁细胞。(一)控制胃底粘膜;放大20×。(B)控制胃底粘膜;放大100×,纵向视图。(C)控制胃底粘膜;放大100×,横截面视图。(D)gydF4y2Ba幽门螺杆菌gydF4y2Ba殖民胃底粘膜显示炎性细胞浸润;放大20×。(E)gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba殖民胃底粘膜显示严重胃粘膜萎缩;放大20×。gydF4y2Ba
代表显微照片语料库的胃饥饿素免疫组织化学显示减少的棕色彩色胃饥饿素免疫反应性的细胞数量gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba殖民粘膜(图5 b, D)。gydF4y2Ba
代表胃饥饿素免疫反应细胞的显微照片的胃胃底粘膜蒙古沙鼠。棕色的颜色细胞代表胃饥饿素免疫反应性的细胞。(一)控制在17周后胃底粘膜gydF4y2Ba幽门螺杆菌gydF4y2Ba接种。(B)gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba在17周后殖民胃底粘膜gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba接种。(C)控制在23周后胃底粘膜gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba接种。(D)gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba在23周后殖民胃底粘膜gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba接种;放大40×。gydF4y2Ba
Morphometeric分析还显示,胃饥饿素免疫反应性的细胞的数量/毫米gydF4y2Ba2gydF4y2Ba明显减少了gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba殖民的胃粘膜语料库,17岁和23周后gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba接种(表1)。相比之下,高总细胞数被发现gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba殖民粘膜(表1),可能是由于炎症细胞浸润。考虑到这些参数,发现胃饥饿素免疫反应细胞(%)的密度降低gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba感染胃粘膜语料库(表1),表明可能增加炎症细胞的数量之间的关系和数量的减少胃饥饿素免疫反应性的细胞。gydF4y2Ba
胃底粘膜胃饥饿素免疫反应性的细胞的蒙古沙鼠gydF4y2Ba
胃粘膜炎症gydF4y2Ba
在观察期间,持久的gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba殖民被确认gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba接种沙鼠。无显著差异在体重控制和之间的观察gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba组(表2),这表明尽管gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba改变了胃促生长素动力学,它可能不影响动物的饮食行为或身体质量在如此短的时间内感染的发生。在这种情况下,一些代偿机制可能诱发调节生长素独立生长激素分泌和体重。相比之下,胃湿重明显增加gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba组(表2),这可能反映了宏观发现严重的增厚和水肿的变化与严重的炎症中观察到gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba殖民胃粘膜。符合胃的增加体重,胃粘膜MPO活性,这反映了多形核的渗透,在控制17相比显著增加,23周后gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba接种(表2)。在接种后4周,尽管胃的湿重显著增加gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba组(表2),没有观察到显著增加MPO活性,仅仅反映了胃粘膜水肿的变化在感染的急性期。gydF4y2Ba
体重、胃重量,和胃髓过氧化物酶(MPO)活性蒙古沙鼠gydF4y2Ba
尽管上述数据胃重、总和活跃在每个全胃标本测定胃促生长素水平控制和是相同的gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba组(表3)。gydF4y2Ba
胃促生长素含量(nmol)每一个蒙古沙鼠胃gydF4y2Ba
血浆胃促生长素水平gydF4y2Ba
虽然空腹血浆总胃促生长素水平显著提高gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba组比对照组在17周后gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba接种,并没有显著的差异在4 - 23周(图6)。相比之下,积极空腹血浆胃促生长素水平都显著增加gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba集团在17日和23周后gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba接种与那些在每一个对照组相比,尽管没有显著增加等离子体活性胃促生长素水平在4周(图6 b)。gydF4y2Ba
蒙古沙鼠血浆胃促生长素水平。(一)总血浆胃促生长素水平在蒙古沙鼠有或没有gydF4y2Ba幽门螺杆菌gydF4y2Ba后殖民17岁和23周gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba接种。* p < 0.05相比,控制在17周。(B)等离子体活性胃促生长素水平蒙古沙鼠有或没有gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba后殖民17岁和23周gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba接种。* p < 0.05相比,控制时间点表示。gydF4y2Ba
胃粘膜MPO活性与等离子体的总水平和积极胃促生长素(图7)。gydF4y2Ba
关系胃髓过氧化酶(MPO)活性和血浆胃促生长素水平。(一)胃粘膜MPO活性与总血浆胃促生长素水平相关。(B)胃粘膜MPO活性很好与血浆胃促生长素水平的活跃。gydF4y2Ba
胃促生长素水平在十二指肠和空肠gydF4y2Ba
图8演示了总饥饿激素的水平在胃里,在控制和十二指肠和空肠gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba组在4周后gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba接种。虽然在胃促生长素的含量无显著差异的任何部分肠控制和之间的观察gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba组在这个时间点,水平显著降低到0.55%和0.16%在十二指肠和空肠,分别与胃的水平相比,表明主要本地化的沙鼠胃促生长素在胃里。gydF4y2Ba
胃促生长素含量的腺胃、十二指肠和空肠,4周后gydF4y2Ba幽门螺杆菌gydF4y2Ba接种(fmol /毫克)。gydF4y2Ba
讨论gydF4y2Ba
修改后的胃饥饿素动态gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba感染了在目前的研究中使用的实验动物模型,以及减少preproghrelin mRNA表达和胃促生长素水平显然是沙鼠的胃所示gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba殖民,与显著增加炎症细胞浸润。gydF4y2Ba
相对应的氨基酸序列的饥饿激素肽沙鼠与人类93%和96%相同的鼠标或鼠对应(图1 b),表明功能同质性的肽在不同的动物。四个物种之间的氨基酸序列的差异研究发现只有在位置34或35(图1 b),一个非常小的分子,可能微不足道的生物功能。gydF4y2Ba3gydF4y2Ba事实上,肽的构效关系的研究表明,Ser辛酰小组gydF4y2Ba3gydF4y2Ba是生物活性肽的重要一部分,gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,N末端片段显示前五个氨基酸守恒表现出完整的机能活动。gydF4y2Ba25gydF4y2Ba
使用相同的实验动物,我们之前报道的一个显著增加炎症细胞浸润和氧化应激的程度gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba殖民胃粘膜,gydF4y2Ba15gydF4y2Ba该研究验证了该模型的有效性gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba胃炎有关。本研究还显示胃炎症诱导后gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba接种(表2),这是反映在胃的体重增加(表2)。gydF4y2Ba
胃促生长素水平在整个胃标本gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba感染是在同一范围的控制,即使在肽的释放到血液中,以应对粮食不足(表3),很难提出,在沙鼠血浆胃促生长素水平的增加gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba胃粘膜感染(图6)可能是胃生长素总产量增加的结果。增加血浆胃促生长素水平,特别是活性胃饥饿素,可能是由于增强胃促生长素的脱粒生产类似细胞炎症刺激引起的,如细胞因子gydF4y2Ba26gydF4y2Ba或自由基。gydF4y2Ba15gydF4y2Ba有报道称血浆胃促生长素海拔为发生在与肿瘤坏死因子α的增加,gydF4y2Ba27gydF4y2Ba的增加gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba肿瘤坏死因子α生产有关gydF4y2Ba28gydF4y2Ba可能发挥作用在增强胃促生长素释放后指出粮食不足。支持这些论点之间的显著相关性胃MPO活性(表1)和血浆胃促生长素水平(图7)。尽管底层机制仍需详细阐明,可能会有补偿后的血浆胃促生长素水平增加粮食不足gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba殖民沙鼠,与胃生长素密度下降。这样的海拔血浆胃促生长素水平可能减弱食欲和体重减少gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba沙鼠感染直到23周(表2)。长期gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba比人群感染(72周)检查在当前研究中(23周)据报道在沙鼠诱发显著的减肥,gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba进一步延长胃炎症和萎缩可能取消补偿增加血浆胃促生长素水平的影响和减少导致的食欲和体重。gydF4y2Ba
肠道湿重的平均在4周后未感染的沙鼠接种1540毫克,小肠是计算总胃促生长素含量小于0.029 nmol(图8)。相比之下,胃的平均湿重的沙鼠无毒性在四个星期632.1毫克(表2),平均胃总胃促生长素含量计算是2.168 nmol。胃总胃促生长素含量估计至少74倍比小肠。因此,很难考虑一个extragastric源激素增加血浆胃促生长素的起源gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba殖民沙鼠。gydF4y2Ba
目前的数据在沙鼠与最近的两项临床研究的结果不一致,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba11gydF4y2Ba的结果也有差异的。这些差异可能是由于不同的方法测量激素肽或病人选择,或在extragastric胃促生长素分布的种间差异。gydF4y2Ba
在目前的研究中,血浆胃促生长素水平没有显著增加gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba殖民军团在23周后gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba接种(图6)中gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba殖民军团在23周,四11沙鼠显示血浆胃促生长素水平低于平均总额中观察到控制在相应的时间点。在这四种沙鼠gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba感染,两个显示严重的胃萎缩,胃饥饿素免疫反应性的细胞的数量不到1.2%,也低于平均值为胃胃促生长素和preproghrelin mRNA。严重萎缩可能占没有统计上的显著差异的情况下感染和未感染的沙鼠在23周之间。这些结果表明,胃生长素含量减少的反应gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba胃萎缩的感染,进一步延伸,血浆胃促生长素水平也降低。虽然似乎有微分调节preproghrelin mRNA,粘膜胃饥饿素,甚至胃促生长素的分泌活跃,背后的分子生理饥饿激素动态管辖范围之外的是当前的研究。进一步研究基于长期的激素动态gydF4y2BaH幽门gydF4y2Ba感染可能有助于澄清这些问题。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
本研究支持的科研补助金C(2)从日本促进社会科学(jsp) (15590686, HS),并从庆应义塾大学医学院资助。作者感谢久美子小姐Kurabayashi,综合医学研究中心庆应义塾大学医学院和Hisashi Hisatomi博士,分子生物学和细胞遗传学中心SRL公司,为他们的技术支持。gydF4y2Ba
引用gydF4y2Ba
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