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目的和方法:在这项研究中,我们探索了反应不同的肿瘤实体(结直肠癌(CRC),肝细胞癌(HCC),刘易斯和小鼠肺癌(LLC)) angiostatic抗肿瘤治疗有两个编码angiostatin-like运载体重组分子(AdK1-3)和血管内皮抑制素(Adendo)。
结果:AdK1-3和Adendo施加在内皮细胞增殖,抑制生物功能迁移,管体外形成。AdK1-3显著抑制内皮细胞在血管内皮生长因子嵌入人工基底膜渗透插头在老鼠而Adendo显示只有轻微的影响。AdK1-3和Adendo诱导类似LLC肿瘤模型中的抗肿瘤效果免疫C57BL / 6小鼠主管但AdK1-3在无胸腺的老鼠更强的抑制作用。此外,AdK1-3抑制肿瘤生长在小鼠CRC和人类肝癌模型但在人类CRC模型是无效的。相比之下,Adendo不会降低肿瘤进展的这些肿瘤模型虽然AdK1-3和Adendo有效减少瘤内微血管密度LLC肿瘤。
结论:我们的数据表明,angiostatic基因疗法可能形成一个可行的策略,建立了肝细胞癌的治疗,体内抗肿瘤的功效angiostatic肿瘤特定的蛋白质。
- 癌症基因治疗
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- angiostatin
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- CRC,结直肠癌
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- LLC路易斯肺癌
- 血管内皮生长因子VEGF
- 鹰介质DMEM,杜尔贝科的修改
- 胎牛血清的边后卫
- HUVE、人类脐静脉内皮
- rt - pcr、逆转录-聚合酶链反应
- 厘米,培养基
- BrdU,溴脱氧尿苷
- pfu,空斑形成单位
- 莫伊,感染复数
来自Altmetric.com的统计
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血管生成在肿瘤疾病的发展的作用近年来已开始瓦解。1 -4底层有吸引力的理性angiostatic基因转移的策略是让身体本身产生的抗肿瘤药物。2虽然大多数传统的抗肿瘤策略攻击恶性肿瘤细胞,angiostatic治疗的主要目的是防止肿瘤进展通过抑制肿瘤血管生成高系统性水平的抗血管新生蛋白质。3,5,6运载体实现angiostatic基因治疗的基本要求通过确保高传导功效允许循环蛋白质含量高。重组腺病毒编码与血管内皮抑制素已被证明在一些研究中发挥抗肿瘤和antimetastatic影响而其他数据是没有前途的。7 -12最近的一份刊物郭等显示第一次比较研究设计不同的响应性肿瘤实体对不同angiostatic化合物。7这是一个惊人的观察任何反血管增生抗肿瘤治疗被认为攻击肿瘤内皮细胞通过基因稳定。因此,不同化合物的抗肿瘤反应可以将类似的测试在不同肿瘤实体。考虑到这个,进一步比较研究是必要的评估angiostatic蛋白质在不同的肿瘤模型的作用。
在我们的研究中,两个胃肠肿瘤实体,肝细胞癌(HCC)和结直肠癌(CRC),也包括在内。他们代表的逻辑目标angiostatic抗肿瘤方法,因为他们经常表现出强劲hypervascularisation。13 -15最近,体外血管生成抑制素基因转移,被证明是有效的在一个小鼠肝癌模型。16确定不同angiostatic化合物的抗肿瘤作用在不同实验肿瘤模型,我们研究了angiostatin-like分子和血管内皮抑制素对肿瘤生长的影响建立结肠癌、肝细胞和肺癌小鼠。
方法
动物和细胞系
C57BL / 6, Balb / c, ror无胸腺的老鼠,5 - 8周大,购买的哈伦(西班牙巴塞罗那)。在实验期间,老鼠被安置在无菌条件下。根据批准的协议和所有动物程序进行按照建议适当的护理和使用实验动物。
人类和小鼠肺癌细胞株A549和路易斯肺癌(LLC)细胞,人类HT-29 CRC细胞和293个细胞(胚胎E1改变肾细胞系)获得美国类型文化集合(美国马里兰州罗克维尔市,写明ATCC)。杜尔贝科修改鹰的培养基培养细胞(DMEM)补充10%热灭活胎牛血清的边后卫。人类脐静脉内皮细胞(HUVE)得到的级联生物制剂(波特兰,俄勒冈州,美国),培养根据供应商的指令。人类肝癌细胞株Huh7和小鼠结肠癌细胞在DMEM培养补充10%的边后卫。
构建重组腺病毒编码angiostatin-like分子和血管内皮抑制素
小鼠血管内皮抑制素是由一个逆转录-聚合酶链反应(rt - pcr)技术,使用鼠标肝RNA模板。引物用于信号肽血管内皮抑制素的5′-GGATCCACCTCCAGGACCACAGGA-3′, 5′-GATATCATTCCCATCAGCGCTGGCAG-3′。引物5′-用于血管内皮抑制素GATATCCATACTCATCAGGACTTTCA-3′, 5′-GGATCCAGAGGCCTATTTGGAGAAT-3′(强调序列表明限制性内切酶的网站EcoRI和HamHI)。PCR片段为血管内皮抑制素和血管内皮抑制素信号肽被克隆到克隆载体pCR2.1-TOPO(美国加州表达载体,卡尔斯巴德)生成pCR2.1 / S和pCR2.1 / E。他们证实了DNA测序。血管内皮抑制素信号肽被释放EcoRI / EcoRV从pCR2.1 / S和关闭EcoRI / EcoRV网站生成pCR2.1 / endo pCR2.1 / E。血管内皮抑制素融合序列被释放BamHI从pCR2.1 / endo和结扎了BamHI网站pSQ1导致pSQ1 / endo。Angiostatin-like分子K1-3生成如前所述。29日简而言之,人类的纤溶酶原的互补物质粒作为模板和K1-3序列克隆到克隆载体pCR2.1-TOPO pCR2.1 / K1-3(表达载体)形式。K1-3片段公布了BamHI / XhoI从pCR2.1 / K1-3和钝端结扎了BamHIpSQ1网站,导致pSQ1 / K1-3,巨细胞病毒即早期启动子的控制下。重组腺病毒生成如前所述。17简而言之,pSQ1 / K1-3和pSQ1 / endo,分别与pJM17 cotransfected磷酸钙沉淀的293个细胞。重组腺病毒从一个孤立的斑块,扩大,并由超速离心法纯化。纯化病毒分离与10毫米三MgCl / 1毫米2并存储在整除−80°C。病毒浓度决定通过测量293年病毒颗粒和细胞毒性空斑实验细胞。
免疫印迹
条件培养基(厘米10μl)的A549细胞感染AdK1-3或控制向量AdlacZ 70小时用于电泳10%钠十二烷基sulphate-polyacrylamide凝胶电泳。膜杂交与多克隆抗体与纤溶酶原(生物起源、池、英国)和物二次抗体兔免疫球蛋白(σ,圣路易斯,密苏里州,美国)和开发协议(ECL-Plus;Amersham法玛西亚生物技术,小都,英国)。
ELISA
从矢量量化小鼠血管内皮抑制素的上层清液感染细胞和小鼠血清在收到向量进行了使用Accucyte按照制造商的指示酶联免疫试剂盒(美国马里兰州Cytoimmune大学帕克)。
溴脱氧尿苷扩散分析
HUVE细胞(5000)在40μl resuspended厘米和分发96培养板和preincubatedμl 60厘米。经过一段时间的30分钟的预孵化,100μl HUVE细胞厘米含增长补充说。细胞培养是持续了42小时,然后用溴脱氧尿苷细胞被标记(BrdU)进一步的六个小时。执行BrdU试验根据制造商的协议(BrdU扩散试验;罗氏诊断,德国曼海姆)。
迁移分析
插入(8μm毛孔;配角,马德里,西班牙)24文化板块被涂上一层100μg /毫升的鼠尾胶原蛋白I型(Becton Dickinson,贝德福德,马萨诸塞州,美国)。HUVE细胞通道数量的4 - 6(25 000细胞/ 50μl)被播种到参议院。众议院200年充满了介质含有1%的牛血清白蛋白。HUVE细胞与CM preincubated 37°C 30分钟前增加血管内皮生长因子(VEGF)在最后5 ng / ml的浓度越低。这些房间是孵化了六个小时,允许细胞在胶原膜涂层孔隙迁移。Non-migrated细胞彻底刮掉用棉签上表面膜。膜是沾Diff-Quick(戴德Behring、Dudingen、瑞士)。5到8个领域代表在每个数在100×放大来确定迁移细胞的数量。迁移被表示为百分数最大迁移(定义为迁移与VEGF刺激没有添加厘米)。
管形成分析
24好板涂上320μl基底膜基质。HUVE细胞(25 000细胞/ 75μl)分发到每个和孵化75厘米的μl 30分钟。后增加150μl中等200包含10%低血清增长补充(级联生物制剂,波特兰,俄勒冈州,美国),细胞被孵化了六个小时。管的形成是量化通过计算完整的管在整个显微镜40×放大。
体内测试抗血管新生的影响(人工基底膜血管生成试验)
基底膜基质试验进行的修改,如前所述。25Adendo无胸腺的老鼠接受静脉注射,AdK1-3或AdlacZ 1010空斑形成单位(pfu)动物。6小时后,150μl VEGF嵌入人工基底膜皮下注射到老鼠的左和右midabdominal地区。后14天小鼠牺牲和基底膜基质插头被移除和染色(haematoxylin-eosin)。定量分析是通过计算的总数endothelial-like细胞基底膜基质塞格(ProSciTech,昆士兰,澳大利亚;在显微镜下表面行话21毫米)。结果表示为每平方规模意味着(SEM)手机号(毫米2)。
体内测试antitumoral效果
为建立C57BL / 6和无胸腺的老鼠,LLC 106LLC细胞皮下注入小鼠的右翼。当肿瘤达到50 mm3,动物治疗系统性注入AdK1-3, Adendo或控制向量AdlacZ 1010空斑形成单位/动物。在人类肝细胞癌(Huh7)和CRC (HT29), 2×106和107分别细胞皮下注入无胸腺的老鼠。10天后,HCC轴承的老鼠被系统性注入AdK1-3 Adendo,或控制向量AdlacZ剂量为1010空斑形成单位/动物。植入小鼠建立了CRC的5×105CT-26细胞成正确的Balb / c小鼠后。当小鼠(CT-26)或人(HT-29) CRC肿瘤达到大约50毫米3体积、肿瘤轴承AdK1-3小鼠瘤内注射治疗,Adendo,或者控制向量AdlacZ剂量的5×109或1010分别每动物微升。肿瘤生长被卡尺测量监控。肿瘤的体积计算公式:V =长×宽2×0.52。
评估微脉管密度
石蜡的部分肿瘤接受治疗与运载体与兔免疫染色anti-von血友病因子(因素VIII-related抗原;Dako Glostrun、丹麦),紧随其后的是顺序的孵化与LSAB2系统部分(Dako)。酶活性被开发使用轻拍(Dako)显色底物,其次是与梅耶尔苏木精复染色。
统计分析
肿瘤数据给出的意思(SEM)肿瘤体积。肿瘤体积之间的差异在不同实验小组分析了非参数统计学意义的正反测验未配对样本(Mann-Whitney测试);在组织学部分,团体之间的差异被学生的计算t测试未配对样本。p值< 0.05被认为是显著的。
结果
构建腺病毒包含angiostatin-like分子和血管内皮抑制素(AdK1-3和Adendo)
重组运载体编码angiostatin-like分子和血管内皮抑制素。互补脱氧核糖核酸序列测序证实了,转基因表达所示A549细胞感染不同的感染(月)AdK1-3多样性和Adendo rt - pcr。预测的PCR检测到了产品AdK1-3和Adendo团体而没有带放大AdlacZ细胞感染控制向量。β-actin,管家基因的表达是相似的在所有样本(结果未显示)。为了证明转基因产品是否能被分泌到上层的A549细胞感染AdK1-3 Adendo,上层清液从感染的细胞收集检测angiostatin-like分子免疫印迹,ELISA检测血管内皮抑制素。血管生成抑制素图1显示检测到的分子量38 kDa只在上层清液从AdK1-3感染细胞,而不是浮在表面的控制向量AdlacZ感染细胞。我们还发现分泌血管内皮抑制素的细胞上清液Adendo A549细胞感染剂量依赖,最高水平的大约900 ng / ml的莫伊500(图1 b)。这些数据表明,感染AdK1-3 Adendo诱发相应的蛋白表达和分泌感染肿瘤细胞。
血管生成抑制素免疫印迹分析(A)和ELISA对血管内皮抑制素(B)。培养基(CM)感染和向量感染细胞受到免疫印迹和ELISA方法部分中描述。巷1、标记;从细胞感染AdK1-3巷2厘米;巷3,重组纤溶酶原。物Angiostatin碎片被发现在38厘米从AdK1-3 kDa。血管内皮抑制素水平提出了感染后A549细胞在不同的感染的多样性。(B)体内体外数据和(C)的数据显示,七天后系统性Adendo管理局(1010空斑形成单位/鼠标;混合血清的两个Balb / c小鼠)。
说明体内血管内皮抑制素的生产运载体,Balb / c小鼠接受Adendo或控制向量AdlacZ剂量为1010每动物或生理盐水静脉注射微升牺牲七天后和血液样本收集血管内皮抑制素的测量。图1 c显示高水平的血管内皮抑制素在动物被发现已经收到Adendo而不是那些AdlacZ或盐水应用程序。
angiostatin-like分子的生物活性和血管内皮抑制素由AdK1-3 Adendo体外
Angiostatic蛋白质可以被抑制为特征的影响不同的内皮细胞功能:增殖、迁移和管形成。评估CM A549细胞的抗增殖效果感染AdK1-3, Adendo,或控制向量AdlacZ, HUVE细胞preincubated CM的最终浓度为30%。我们发现预孵化HUVE细胞从AdK1-3厘米和Adendo感染细胞导致增殖抑制了39%和38%,分别与AdlacZ相比(图2)。两个蛋白也显示类似的抑制影响管HUVE细胞的形成。管的形成降低了约43%和39%,分别比AdlacZ控制(图2 b)。而增加CM AdlacZ感染A549细胞并不影响HUVE细胞迁移的能力通过一个多孔膜,含有K1-3厘米和血管内皮抑制素抑制细胞迁移了64%和86%,分别为(图1 c)。
抑制人脐静脉内皮细胞增殖(A) (HUVE),迁移(B)和(C)管形成angiostatin-like分子和血管内皮抑制素表达的运载体。数据给出的意思(SEM) 4 - 8独立的实验。* p < 0.05 (AdK1-3和Adendo)与控制(控制和Adluc)。(B)所表达的抑制血管生成抑制素HUVE细胞管形成的运载体。HUVE细胞和培养基preincubated 30分钟在人工基底膜涂布文化井与生长因子和生长在培养基补充额外的6个小时。在这个时间点,HUVE细胞开始形成capillary-like结构。完整的管道在整个量化在显微镜下。数据给出的意思(SEM)两个独立的实验与控制向量AdlacZ。
血管生成抑制体内AdK1-3和Adendo
评估是否angiostatin-like分子和血管内皮抑制素由AdK1-3 Adendo体内抑制血管生成,动物皮下注射VEGF包含人工基底膜、系统性AdK1-3管理六个小时后,AdlacZ Adendo或控制向量。基底膜基质插头收集进一步的组织学检查两周后。如图3所示,强烈的入侵endothelium-like观察细胞基底膜基质插头从动物收到AdlacZ盐水和控制向量。相比之下,人工基底膜插头从老鼠收到AdK1-3显示更少endothelium-like细胞的渗透。管理Adendo诱导只有轻微的抑制效果与对照组相比接受生理盐水或AdlacZ。量化的endothelium-like细胞基底膜基质部分(图3)显示,AdK1-3和Adendo导致降低细胞渗透的48%和13%,分别与动物相比AdlacZ接受控制向量。
抑制血管内皮生长因子(VEGF)在体内诱导血管生成系统性Adendo AdK1-3总局。基底膜基质含有VEGF皮下注射到老鼠体内,收到通过静脉注射不同的腺病毒六个小时以前。14天后,基底膜基质插头被移除和haematoxylin-eosin染色。定量分析的血管生成是由计数endothelium-like细胞的数量在一个区域(毫米2)。数据表示为(SEM), n = 4。*与对照组相比p < 0.05 AdlacZ或生理盐水(未配对的学生的t测试)。
系统性AdK1-3 Adendo总局对建立C57BL / 6和LLC肿瘤无胸腺的老鼠
AdK1-3 antitumoral效应和Adendo首先评估在C57BL / 6小鼠皮下肿瘤LLC。当达到肿瘤大小大约50毫米3在体积,动物被静脉注射治疗AdK1-3管理局,Adendo或AdlacZ 1010空斑形成单位/动物。图4表明,治疗与AdK1-3或Adendo导致显著减少肿瘤进展54%和46%四天治疗后启动,分别与AdlacZ相比。类似的实验进行轴承有限责任公司建立在无胸腺的老鼠肿瘤。如图4所示b,治疗AdK1-3只有轻微的抑制肿瘤生长,诱导与Adendo和治疗是无效的。
抑制肿瘤生长在建立Lewis肺癌(LLC)在C57BL / 6和无胸腺的小鼠肿瘤AdK1-3或Adendo系统性管理。建立了LLC肿瘤大约50毫米3C57BL / 6小鼠(A)和(B)治疗无胸腺的老鼠的静脉注射重组腺病毒(1010空斑形成单位/鼠标)或控制向量AdlacZ或盐水。测量肿瘤大小和介绍(SEM), n = 7 - 13。* p < 0.05 AdK1-3和Adendo为AdK1-3 (A)和(B)与AdlacZ控制(第四天,Mann-Whitney)。
系统性AdK1-3 Adendo总局对建立在无胸腺的小鼠肝细胞癌肿瘤
肝细胞癌是一种理性的目标angiostatic antitumoral基因治疗,因为他们经常显示hypervascularisation。因此我们管理AdK1-3和Adendo无胸腺的老鼠皮下人类Huh7肝细胞癌肿瘤。十天后,动物被静脉注射治疗AdK1-3管理局,Adendo或AdlacZ 1×10的剂量10空斑形成单位/动物。如图5所示,肿瘤生长明显抑制AdK1-3的系统性管理。治疗Adendo导致只有轻微的抑制肿瘤生长。治疗后7天,AdK1-3或Adendo引起的抑制率达到87%和46%,分别与对照组相比。
抑制肿瘤生长在无胸腺的小鼠肝细胞癌肿瘤的系统性管理AdK1-3或Adendo。Huh7细胞植入后十天,小鼠静脉注射治疗的重组腺病毒(1010空斑形成单位/鼠标)或生理盐水作为控制。肿瘤的大小测量并显示在(SEM), n = 6 - 10。* p < 0.05 AdK1-3天为期3天13与对照组相比接受AdlacZ (Mann-Whitney)。
AdK1-3效果和Adendo建立皮下结直肠癌,CT-26和HT-29 Balb / c和无胸腺的老鼠
评估antitumoral AdK1-3和Adendo CRC的影响,小鼠CT-26和人类HT-29 CRC细胞皮下接种Balb / c或无胸腺的小鼠,分别。当达到CT-26肿瘤大小约为50毫米3肿瘤治疗是由相应的向量的瘤内注射的浓度5×109空斑形成单位/鼠标。再次AdK1-3诱导显著减少41%的肿瘤生长与生理盐水相比8天控制而Adendo没有抑制作用(图6)。皮下HT-29肿瘤治疗静脉每组(n = 5)或瘤内每组(n = 9)注入AdK1-3, Adendo,或AdlacZ,分别在10的浓度10分别pfu /鼠标。意味着肿瘤数量达到189毫米3和291毫米3分别与183毫米3AdlacZ组瘤内八天后矢量管理(数据未显示)。无论是Adendo还是AdK1-3抑制肿瘤生长在这个模型相比,AdlacZ控制。
抑制肿瘤生长在结直肠癌(CRC)建立肿瘤AdK1-3或Adendo系统性管理。瘤内向量管理局(5×109空斑形成单位/鼠标)启动时肿瘤达到平均直径约5毫米。数据提出了意味着(SEM), n = 7 - 11。* p < 0.05 AdK1-3天为期4天12相比AdlacZ控制(Mann-Whitney)。
抑制肿瘤血管生成的系统性管理AdK1-3和Adendo皮下LLC模型
底层antitumoral机制可以认为,至少在某种程度上,angiostatic angiostatin-like分子和血管内皮抑制素瘤内血管密度的影响在两个治疗组显著降低而AdlacZ控制。为此,瘤内微血管与血管性血友病因子在免疫染色LLC肿瘤。LLC肿瘤被删除7天治疗后启动。AdlacZ和氯化钠,显示,控制动物的肿瘤强化对血管性血友病因子染色,显示广泛的这些肿瘤血管生成。相比之下,Adendo或AdK1-3治疗动物的肿瘤样本显示的微脉管密度显著降低大约60%。(图7)
抑制肿瘤血管生成的治疗AdK1-3或Adendo。建立了路易斯肺癌肿瘤大约50毫米3在无胸腺的老鼠被静脉注射重组腺病毒(1010空斑形成单位/鼠标)或生理盐水作为控制。动物被牺牲在7天治疗后,肿瘤组织移除。微脉管密度是由anti-von血友病因子染色。定量分析的微脉管密度是由高功率的10个领域里的积极染色细胞计数(高通滤波器,400×放大)。数据给出的意思(EM)手机号/高通滤波器,n = 3。* p < 0.05 Adendo相比AdlacZ(学生的t测试)。
讨论
在这项研究中,我们表明,代angiostatin-like分子(代表前三个kringles (K1-3)的纤溶酶原)物和血管内皮抑制素adenoviral介导基因转移引起的肿瘤和蛋白质特定antitumoral效果在三个不同的小鼠肿瘤实体:结肠癌、肝细胞,Lewis肺癌。肿瘤和蛋白质特异性angiostatic肿瘤治疗是肿瘤血管生成是一个引人注目的方面被认为是一个共同的病理过程独立于肿瘤的类型。我们的研究结果表明,不同肿瘤实体必须专门为对不同的抗肿瘤反应评估angiostatic蛋白质。
最近,抗血管新生肿瘤治疗引起了广泛的关注,和实验数据显示有前景的结果在某些情况下完全消灭肿瘤。18日,19底层概念似乎令人信服:切断肿瘤的血液供应,因此饿死肿瘤。20.这两个生理蛋白质,它与血管内皮抑制素,在几项研究显示antitumoral影响。7,8日,10日,18岁25然而,相应的重组蛋白的生产是复杂的。2,4,26日—28它最近已被证明,血管生成抑制素的体外基因转移(代表前四kringles纤溶酶原)物有效地降低肝癌细胞的致瘤性。16然而,体内肿瘤的治疗仍然是一种挑战。Adenoviral介导基因转移的互补编码angiostatic蛋白质是一种很有前途的方法使身体产生自身抗肿瘤药物。事实上,一些实验研究,包括我们自己的,证明了重组腺病毒是一个适当的血管生成抑制素的基因转移的工具(例如分子)和血管内皮抑制素。8日,10 -12日,29日索特等发现强antimetastatic影响血管内皮抑制素的基因转移但只有轻微影响主要的肿瘤生长。10在比较抗肿瘤的研究中,它与血管内皮抑制素效果也比不上VEGF受体拮抗剂在测试T241纤维肉瘤。7
据我们所知,后者出版是第一个关注直接比较不同的angiostatic基因疗法。我们的研究主要集中在基因传递angiostatin-like分子和血管内皮抑制素,和在皮下LLC antitumoral报道影响确诊肿瘤在小鼠的免疫能力。另外,我们观察到,只有angiostatin-like分子保持重要antitumoral免疫缺陷小鼠的影响。此外,我们首次显示在一个直接的比较研究,管理AdK1-3导致显著antitumoral影响人类Huh7肝细胞和小鼠CT-26 CRC模型而未发现AdK1-3的影响在人类HT-29 CRC肿瘤模型。尽管类似的体外影响内皮细胞功能和体内在LLC肿瘤模型中,影响血管内皮抑制素在这些特定的肿瘤模型中没有影响。几种机制可能参与这些肿瘤特定抗肿瘤efficicacies:(1)蛋白表达和蛋白质含量可能是鼠标应变具体,从而影响抗肿瘤效果;(2)angiostatic抗肿瘤效应可能涉及一级或二级免疫反应依赖于应用蛋白质;(3)肿瘤血管生成是肿瘤具体过程。
温等显示大时间之间的差异和在不同品系小鼠血清的蛋白表达水平后血管内皮抑制素的基因传递。11虽然这可能导致我们的发现,它可能不是唯一的原因是我们记录antitumoral效果在短时间内只有两个星期。有趣的是,作者发现强烈antimetastatic影响血管内皮抑制素在129年一个EOAMA转移模型/ J小鼠黑色素瘤B16转椅的但没有效果转移C57BL6 / J小鼠模型。然而,在我们的研究中,治疗adenoviral LLC肿瘤的血管生成抑制素介导的基因转移和C57BL6 / J小鼠血管内皮抑制素是有效的压力。我们的研究结果很好地反映肿瘤的抗肿瘤和antimetastatic效果发现LLC所描述的索特和他的同事们。10因此可以得出结论,antitumoral血管内皮抑制素不依靠鼠标应变的影响但在肿瘤实体处理,表明肿瘤血管生成可能不得不重新考虑复杂的肿瘤的具体过程。
考虑LLC肿瘤免疫能力的不同抗肿瘤作用和免疫缺陷小鼠,二级或主要免疫反应本质上有助于antitumoral血管内皮抑制素的影响,但更重要的抗肿瘤疗效angiostatin-like分子。这是由我们的观察,减少微脉管密度LLC的肿瘤血管内皮抑制素相似,angiostatin-like分子。
考虑到郭和他的同事们的先前的研究7和温家宝和他的同事们,11我们的数据进一步加强vascularisation假设肿瘤是肿瘤的具体过程,因此需要使用不同的antitumoral angiostatic蛋白质。这方面是复杂angiostatic抗肿瘤治疗,进一步的研究聚焦于肿瘤血管生成的基本分子机制是必要的。然而,本研究也凸显了一个事实:angiostatin-like分子在人类肝细胞癌模型均具有明显的抗肿瘤作用,因此可能造成对另类疗法的策略这个肿瘤实体。
确认
这部分工作是支持由CICYT SAF 98 - 0146和J·维达尔,乔丹这个词,赛尔维拉博士M Losantos,为基因治疗和M门德斯赠款。VS德国支持的部分交换委员会VERUM基金会(德意志)和德国慕尼黑。我们感谢海伦娜维拉纽瓦和Ingeborg Hoschler专业协助。
引用
脚注
↵*目前地址:内科,德国波恩大学医院