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背景:幽门螺杆菌感染会增加胃癌的风险但负责的分子机制并不清楚。长期暴露于胃细胞H幽门体外细胞凋亡抗性p27水平较低有关,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂和哈普罗不足在胃癌肿瘤抑制基因表达下调。
目的:确定p27蛋白的低水平负责抗胃癌细胞的凋亡。
方法:p27蛋白的表达增加的影响进行瞬变和稳定使转染质粒编码完整p27信使rna在细胞凋亡较低的抗胃癌细胞株p27表达源自AGS胃癌细胞的慢性H幽门coculture dilutional克隆紧随其后。
结果:低p27表达在细胞凋亡抗性细胞系导数与p27 mRNA的近似减少30%和80%下降p27蛋白并不是由于增加p27蛋白的依赖蛋白酶体降解。瞬态或与p27构造部分恢复稳定转染细胞凋亡的敏感性耐药细胞的5 -氟尿嘧啶和H幽门诱导细胞凋亡在不改变自发凋亡细胞死亡。
结论:这些结果说明p27积极调节,至少在某种程度上,胃上皮细胞的凋亡反应H幽门。低胃p27可以促进胃相关的致癌作用H幽门感染通过抑制凋亡通路。
- 幽门螺杆菌
- 胃癌
- 细胞周期
- 细胞凋亡
- 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂
- GFP,绿色荧光蛋白
- 研究者用,5 -氟尿嘧啶
- PBS,磷酸缓冲盐
来自Altmetric.com的统计
p27kip1细胞周期蛋白依赖激酶的主要目标是cyclinE / CDK2复杂,控制细胞周期G1年代过渡阶段。1除了它的功能在细胞周期控制,p27也涉及细胞凋亡的规定,分化,耐药性,细胞迁移,对炎症刺激反应,1,2可能是转录监管机构。3老鼠缺乏一个或两个功能的副本p27是倾向于外源性致癌物引起的肿瘤4和p27的表达是人类恶性肿瘤减少许多。5此外,低水平的p27蛋白与不良预后相关的几种类型的癌症,包括胃癌。6 -8
Downregulation p27的癌症可能是由于增加的蛋白酶体降解p27泛素化后,9这是通常的主要途径调节p27蛋白的丰度在生理细胞周期进程。1然而,p27蛋白的水平也可能依赖于其他机制,包括转录调控和启动子甲基化,信使rna降解,p27蛋白的胞质封存,由non-proteasomal蛋白质水解(由Philip-Staheli和坎普1)。
大多数情况下,患者的胃癌发展殖民的革兰氏阴性细菌幽门螺杆菌。10感染H幽门与一个2-5-fold相关联的风险增加发展中四月四胃癌吗11 -13和消灭H幽门可以预防胃癌高危人群的慢性胃炎。14直接的证据表明H幽门胃癌来自示范的胃癌易感啮齿动物模型实验感染H幽门,没有额外的cocarcinogen曝光。15 -17某些H幽门决定因素和主机易感性因素引起H幽门近年来有关胃癌已确定,包括基因中cag致病性岛H幽门18日,19和宿主细胞因子和细胞因子受体的单核苷酸多态性20 -22但负责胃致癌作用的细胞和分子机制H幽门感染仍知之甚少。
证实慢性H幽门胃粘膜上皮细胞感染增加营业额;增殖和凋亡细胞数量降低到正常水平以下根除H幽门。23慢性H幽门感染也能减少胃上皮细胞p27的表达在慢性胃炎和胃肠上皮化生。24日,25此外,在动物26和细胞培养24慢性的模型H幽门胃上皮细胞感染,长期接触H幽门导致上皮细胞的出现相对抗细胞凋亡。减毒凋亡反应cag积极的H幽门菌株也报告了一些27日,28但并不是所有29日的研究H幽门感染人类,可能通过激活凋亡介导的转录因子核κB因素。30.之前我们有建议24p27表达的减少H幽门可能是负责诱导细胞凋亡状态阻力在胃上皮细胞,从而促进胃肿瘤发生。31日然而,这个假设是依赖证明p27在胃细胞促进细胞凋亡。
目前,有分歧p27在调节细胞凋亡的作用。大多数报告支持p27在促进细胞凋亡的作用。例如,胃癌症p27表达较低(如由免疫组织化学)低水平的细胞凋亡,与一个相对贫穷的预后与肿瘤p27表达更高。7p27的过度增加细胞凋亡在几个人类non-gastric癌症细胞系32位34在人类和鼠成纤维细胞线。35此外,抑制p27的表达skp2的过度表达,泛素连接酶盒p27底物识别单元,导致抗放线菌素D诱导胃癌细胞凋亡。36
然而,过度的p27已经证明抑制凋亡对缺氧的反应和血清剥夺小细胞肺癌细胞37和抑制细胞毒性药物诱导白血病细胞凋亡,可能通过激活还代p27解理与凋亡功能的产品。38岁的39此外,p27零后成纤维细胞和间质细胞进行细胞凋亡过度生长因子不足。40因此可以想见,p27通常在某些情况下起到抗凋亡作用。
因为先前的研究显示冲突的结果,因为潜在的p27的发病机理的重要性H幽门胃癌相关,我们检查了p27在调节细胞凋亡的作用在胃癌细胞利用胃细胞系p27表达较低,抗细胞凋亡。我们在这里展示,p27 proapoptotic在胃癌细胞的影响H幽门在减少p27胃上皮细胞抗凋亡。
方法
细胞培养和建立H幽门抗胃上皮细胞系
AGS人类胃上皮细胞(crl - 1739;美式文化收藏,马纳萨斯,弗吉尼亚州,美国)保持在5%公司的氛围2在37°C,火腿的F12培养基补充10%胎牛血清(美国加州英杰公司公司,卡尔斯巴德)没有抗生素,在75厘米2组织培养瓶(BD生物科学,圣何塞,加利福尼亚,美国)。H幽门耐AGS细胞衍生品被coculture选定的浓度逐渐增加H幽门菌株60190(写明ATCC 49503)的初始菌上皮细胞比20:1 10 000:1超过三个月的时间。24从这些衍生品,两个单细胞克隆指定HS3C和HS3L选择通过限制稀释化验和扩展进行进一步分析。
H幽门菌株和文化条件
H幽门60190年菌株,cagA积极和vacA积极应变与消化不良患者保持在trypticase大豆含有5%绵羊血液琼脂(BD生物科学)37°C 8%孵化有限公司2,至少两个,最多四个段落从冻结的股票。接种物coculture被稀释的悬浮液,准备从48小时亚文化,相比之下麦克法兰的吸光度标准调整。H幽门细菌被添加到胃上皮细胞的比率200:1在所有实验。
5 -氟尿嘧啶(研究者用)治疗
细胞治疗10毫米研究者用24小时,如前所述。24
蛋白质提取和免疫印迹
蛋白质的提取和西方墨点法进行如前所述41使用30μg蛋白质样品和p27鼠单克隆抗体kip1(克隆57;BD生物科学)和Skp2(下岗通知skp2克隆SKP2-2B12;酶实验室有限公司南旧金山,加利福尼亚,美国)。
测量细胞凋亡
细胞凋亡被caspase-3乳沟免疫印迹和定性评估量化通过计算改变原子核的百分比在33342年赫斯特染色(σ,圣路易斯,密苏里州,美国)。核染色,细胞自发地脱离了菜和附加细胞trypsinisation发布的收集,用磷酸缓冲盐(PBS)和集中。收集细胞被固定为2%多聚甲醛10分钟37°C,沾染了赫斯特33342年,荧光显微镜下检查励磁过滤器350 nm和460 nm的排放过滤器。细胞凋亡被定义为核凝结或碎片的存在。样本准备一式四份,至少200个细胞每张幻灯片都检查了没有知识的实验操作。数据表示为细胞的平均百分比显示核分裂的迹象。在一些实验中,细胞凋亡也量化了细胞的百分比sub-diploid通过流式细胞术DNA内容,如前所述。42
集落形成实验
AGS、HS3C HS3L细胞悬浮在0.3%琼脂完全培养基(火腿的F12补充10%胎牛血清),镀的密度5×104细胞60毫米盘被涂以0.5%琼脂,并保持在37°C。在实验期间,0.5毫升新鲜的完全培养基添加每五天。21天,殖民地的数量大于0.2毫米直径被记录在每道菜四分。
p27的免疫细胞化学
在PBS细胞trypsinised,水洗,与2%多聚甲醛固定PBS在室温下五分钟。固定后,细胞颗粒在70%冷乙醇permeabilised然后储存在20°C到分析。细胞被洗在PBS 0.2%渐变和孵化一小时100μl p27稀释1:50的单克隆抗体PBA (PBS渐变20 0.2%和1%牛血清白蛋白)。细胞被洗两次PBA和孵化一小时100μl藻红蛋白共轭antimouse免疫球蛋白(1:50;BD生物科学)。消极的控制,一些细胞只有二次孵化藻红蛋白结合抗体。二次抗体孵育后,细胞被洗两次PBA和荧光显微镜下检查励磁过滤器的488 nm和575 nm的发射滤波器。
使用实时逆转录PCR mRNA量化
指数增长的总RNA AGS或HS3C细胞使用试剂盒提取试剂(英杰公司)根据制造商的指示,和核糖核酸酶处理自由DNase我(罗氏诊断公司,印第安纳波利斯,印第安纳州,美国)去除污染基因组DNA。反转录的RNA进行最后一卷包含4μl 5×20μl逆转录缓冲区(250毫米三羟甲基氨基甲烷盐酸,液MgCl 40毫米2二硫苏糖醇,150毫米氯化钾,5毫米,pH值8.5),250μM deoxynucleotide三磷酸,40单位的核糖核酸酶抑制剂,3.2μg随机五个一,20单位的禽成髓细胞瘤病毒逆转录酶从罗氏(所有),和250 ng / 10μl的总RNA。样本在25°C的环境和42°C一小时10分钟,然后逆转录酶的灭活在99°C通过加热五分钟,直到使用保存在冰。
实时定量聚合酶链反应(PCR)进行使用iCycler智商多彩漆实时PCR检测系统(Bio-Rad,赫拉克勒斯,加州,美国)包含5μl 25μl反应混合稀释逆转录酶样品(0.25 ng的等效总RNA)和pcDNA3-p27质粒cDNA序列稀释,4312.5μl SYBR绿色PCR反应混合液(应用生物系统公司,培育城市,加利福尼亚,美国),6.5μl deionised蒸馏水,和0.5μl 10μM每个p27底漆(向前,5′-AGGACACGCATTTGGTGGA-3′;相反,5′-TAGAAGAATCGTCGGTTGCAGGT-3′)。热循环进行了45周期,与变性为15秒95°C,退火和延伸在68°C,持续30秒。从pcDNA3-p27质粒标准稀释准备cDNA如下:3.1×106,3.1×105,3.1×104,3.1×103,3.1×102和3.1×101复制数据,用于关联阈值循环日志输入模板。所有样品都是一式三份。p27的相对数量记录采用标准曲线法测定,并正常18 srrna(正向引物5′-GGACCAGAGCGAAAGCATTTGCC−3′;反向引物5′-TCAATCTCGGGTGGCTGAACGC-3′)。
p27的瞬时和稳定转染
瞬时转染p27的表达载体进行使用阳离子脂质体试剂,TransIT-LT1 (Mirus Corp .,麦迪逊,威斯康辛州,美国),根据制造商的协议。简单地说,3×105HS3C或HS3L细胞被播种在六孔板和cotransfected 3μg人类p27的全长cDNA插入pcDNA3质粒43或空向量,连同1μg互补脱氧核糖核酸的绿色荧光蛋白(GFP)插入pcDNA3作为一名记者的检测转染细胞。37孵化24小时后,H幽门或研究者用了和细胞培养24小时。细胞被收获,沾染了赫斯特33342年,至少有200 GFP阳性细胞是由荧光显微镜检查核分裂一式四份。为了获得细胞稳定表达p27,人类p27的全长cDNA插入pcDNA3质粒或空向量pcDNA3转染成HS3C或HS3L细胞使用LipofectAMINE 2000(表达载体)。转染细胞被选在900μg /毫升G418 21天。G418抗性殖民地被集中,扩大,并通过免疫印迹分析p27表达。池显示显著增加p27表达被用于后续的研究。
p27降解试验
评估p27的营业额、AGS HS3C,和HS3L细胞培养的100μM放线菌酮(σ)抑制蛋白质的从头合成,从而使翻译后的评价等事件恶化在调节蛋白水平。44细胞收获0,1,2,3小时后环己酰亚胺,和30μg整个细胞溶解产物被加载在钠十二烷基sulphate-polyacrylamide p27免疫印迹凝胶。
统计数据
细胞凋亡和细胞类型之间的集落形成能力的差异是由Mann-Whitney紫外线测试,与p < 0.05用于统计显著性水平。
结果
建立和描述H幽门耐药细胞株
两个H幽门耐药细胞克隆(HS3C和HS3L)选择从HS3衍生品,建立了AGS胃上皮细胞反复接触H幽门。24然后我们确认克隆抗细胞凋亡。如图1 a和1 b所示,克隆较小比例的细胞表现出自发性细胞凋亡或凋亡反应H幽门或研究者用与父母相比AGS细胞。coculture后与H幽门或之后的研究者用,激活caspase-3检测凋亡细胞的外表caspase-3乳沟产品在AGS细胞在时间依赖方式,但没有发现在HS3C或HS3L克隆(图1 c)。HS3C HS3L细胞也表现出较低的凋亡细胞百分比在指数增长(自发凋亡)和针对研究者用(图1 b)。如此低的百分比HS3C和HS3L细胞凋亡是一个稳定的特征观察到即使10周的连续通道(数据没有显示)。确定抗凋亡HS3C和HS3L细胞与更恶性行为,安克雷奇独立HS3C和HS3L细胞增长评估在半固体琼脂培养基。如图1所示,HS3C HS3L细胞形成大约6倍殖民地比AGS细胞在软琼脂,尽管每个菌落较小的抗凋亡HS3线与殖民地由AGS细胞。确认我们的数据的异构HS3衍生的细胞,24p27 mRNA的表达(图2)和p27蛋白(图2 b)比在低HS3C AGS细胞。p27 mRNA拷贝数来衡量定量实时PCR一式三份细胞培养样本和正常18 s rRNA HS3C细胞系表达降低了26%。p27蛋白的数量取决于微p27免疫印迹(β-actin nomalisation后)在HS3C下降了85%,和80%相比,HS3L父母AGS细胞(图2 b)。p27蛋白的量H幽门耐药细胞保持在一个较低水平,即使在10周的连续体外通道(数据没有显示)。
幽门螺杆菌耐药细胞自发性凋亡较低,也对5 -氟尿嘧啶(研究者用)诱导细胞凋亡。(一)AGS亲代细胞H幽门耐药克隆HS3C和HS3L单独培养,在的存在H幽门,或者在10毫米研究者用24小时的存在。细胞被收获和凋亡细胞被赫斯特染色数。代表核形态指数增长的细胞。黄色箭头显示凋亡细胞。(B)汇总数据证明平均每分钱(SD)凋亡细胞的反应H幽门或研究者用。* p < 0.05, AGS相比HS3C或HS3L细胞。(C)细胞coculturedH幽门表示时间,收获了免疫印迹蛋白质完整和caspase-3分开。研究者用AGS细胞治疗作为一个积极的控制(去年车道)。等量的蛋白质加载被β-actin验证。(D) HS3C HS3L显示增加锚固在软琼脂独立增长。*与HS3C或HS3L细胞相比p < 0.05。细胞(5×104)被播种,21天培养,菌落数的数量。执行的实验数据是代表三次,显示为意味着(SD)。代表每一个细胞类型的形态上面板所示。
p27 mRNA和蛋白表达在父母和抗细胞凋亡细胞。从指数增长的细胞RNA和蛋白质提取。(一)实时定量聚合酶链反应分析p27/18S拷贝数(平均(SD)的样品一式三份)。* p < 0.02。(B)免疫印迹:等量的蛋白质加载被β-actin验证。(C)的光密度值的比值p27 /β-actin。
瞬时转染的p27恢复对凋亡刺激的敏感性
为了调查是否p27的表达下降H幽门抗胃细胞负责其抗凋亡刺激,抗细胞凋亡HS3C和HS3L细胞瞬变cotransfected p27表达载体和质粒编码绿色荧光蛋白标记来识别转染子(图3)。转染与p27没有改变的百分比在HS3C或HS3L细胞自发性凋亡(图3 b,列在每个图1和2)而是一个更高比例的转染细胞进行细胞凋亡在回应H幽门或研究者用(图3 b)。
瞬时转染与p27恢复对凋亡刺激的敏感性。HS3C或暂时HS3L细胞转染与p27或模拟质粒与绿色荧光蛋白(GFP)质粒在3:1的比例。GFP转染细胞被绿色的荧光,通过免疫细胞化学p27的表达,细胞凋亡被赫斯特染色法测量。(A) HS3C细胞与p27和GFP转染质粒染色绿色(箭头),荧光显微镜,p27免疫细胞化学和红色。(B)二十四小时与p27或模拟质粒,转染后细胞仅仅是文化的存在幽门螺杆菌(惠普),或者在5 -氟尿嘧啶(研究者用)24小时。漂浮然后连接细胞收获和转染细胞的百分比(确认为GFP阳性),有凋亡形态学被赫斯特染色评估。数据表达与细胞凋亡在模拟转染细胞的意思(SD)。* p < 0.05模拟相比,转染细胞。(C)代表显微照片显示响应H幽门p27转染细胞凋亡(黄色箭头)而模拟转染细胞不(白色箭头)。
稳定转染p27也恢复对凋亡刺激的敏感性
为了进一步探讨p27在细胞凋亡中的作用,p27 cDNA表达的稳定H幽门耐药细胞及其对细胞凋亡的影响评估。稳定转染HS3C和HS3L p27蛋白的表达水平类似发现在AGS细胞(图4)。与瞬时转染实验一致,尽管稳定p27的表达HS3C和HS3L细胞并没有改变自发凋亡率(图4 b,左侧卧),它恢复敏感性H幽门诱导细胞凋亡,增加了对研究者用诱导细胞凋亡的敏感性(图4 b、4 c、4 d)。在这些实验中,无论是H幽门也不影响研究者用模拟的发展或p27转染HS3克隆,剩余的数量取决于细胞连接这些治疗后24小时。
稳定转染p27恢复凋亡刺激的敏感性。HS3C或HS3L细胞与p27或模拟质粒,转染选择G418 21天,幸存细胞收获对蛋白质提取和他们对细胞凋亡的敏感性由赫斯特染色和显微镜。(A)免疫印迹分析证实,HS3C或HS3L细胞稳定转染与p27表达p27蛋白水平与AGS细胞相似。等量的蛋白质加载被β-actin验证。(B) p27转染细胞(HS3C-p27 HS3L-p27)显示相似的自发凋亡率与模拟转染子(HS3C-mock HS3L-mock)。coculture后幽门螺杆菌(惠普)24小时,或暴露于10毫米后5 -氟尿嘧啶(研究者用)24小时,p27稳定转染子显示增加细胞凋亡与模拟转染子。* p < 0.05 p27转染细胞与模拟转染细胞。数据表示为代表(SD)相对于模拟转染HS3细胞凋亡。(C)代表形态抗凋亡细胞核(蓝色)的衍生品,p27转染衍生品和模拟转染衍生品H幽门感染。箭头显示凋亡细胞。(D) Subdiploid流式细胞术分析证实,稳定转染p27增加敏感性H幽门诱导细胞凋亡。* p < 0.05 p27转染HS3L细胞与模拟相比,转染细胞。
低p27表达H幽门抗胃上皮细胞并不是因为p27蛋白降解增加
是否减少p27蛋白HS3C和HS3L细胞中伴随着p27蛋白的蛋白酶体降解加速,父母AGS, HS3C, HS3L细胞培养的高度特定的蛋白酶体抑制剂bortezomib(千禧制药,波士顿,麻萨诸塞州,美国)。除了在血液病中的作用浓度,导致明显的积累AGS细胞中p27蛋白p27蛋白水平增加到一个较小的程度上在HS3C和HS3L细胞(图5),表明减少p27蛋白的表达HS3C HS3L细胞相比AGS细胞并没有由于依赖蛋白酶体降解的激活增加p27在这些细胞。此外,抑制蛋白质合成与环己酰亚胺表明退化p27是减少而不是增加HS3C HS3L而AGS细胞(图5 b)。之前的研究表明,p27的ubiquitin-proteasome依赖退化是监管主要由泛素连接酶的可用性skp2。然而,skp2蛋白水平在下降H幽门耐药HS3C和HS3L细胞相比,父母的AGS细胞(图5)。总的来说,这些结果表明,p27蛋白的水平较低H幽门耐HS3C HS3L细胞并不是由于加速p27蛋白的蛋白酶体降解这些细胞但更可能由于mRNA丰度较低。
p27蛋白的低表达幽门螺杆菌耐药细胞不是由于加速蛋白酶体降解的依赖。(一)AGS细胞或H幽门耐药克隆培养没有或导数存在1μM和5μM bortezomib为12小时。免疫印迹分析表明,蛋白酶体活性的抑制bortezomib没有恢复p27蛋白的高水平H幽门的衍生品。等量的蛋白质加载被β-actin验证。(B)脉冲追逐p27蛋白的分析。抑制了蛋白质合成增加100μM环己酰亚胺,蛋白质和细胞收获的时间(小时)表示p27蛋白表达评价免疫印迹。等量的蛋白质加载被β-actin验证。图表显示低光密度分析p27蛋白。(C) Skp2蛋白表达在指数增长的细胞被免疫印迹测量。等量的蛋白质加载被β-actin验证。
讨论
我们的研究结果表明,实验操纵p27蛋白表达在胃癌细胞调节抗细胞凋亡,因此支持p27的一个关键的角色在胃上皮细胞的凋亡反应H幽门和其他潜在proapoptotic刺激。的发展阻力proapoptotic刺激可能是一个重要的机制H幽门促进胃粘膜生长和肿瘤特异表达。
虽然我们的研究结果清楚地表明一个重要的角色p27在胃癌细胞的凋亡敏感性,很可能减少p27不是唯一的机制导致的耐药表型细胞凋亡HS3C和HS3L胃细胞系。转染后,HS3C和HS3L细胞显示增加了反应的细胞凋亡H幽门和研究者用,但对细胞凋亡的敏感性的增加(增加30 - 100%,这取决于类型的转染细胞系,转染)没有回复完全在父母AGS细胞水平观察(有一个大约3-5-fold增加对细胞凋亡的敏感性较其HS3导数行)。此外,p27转染没有影响自发凋亡HS3细胞系中仍低于观察父母的AGS细胞。
差异表达的bcl - 2家族成员AGS细胞及其异构抗细胞凋亡之间HS3衍生品已经被我们先前报道。24我们正在进行互补脱氧核糖核酸微阵列分析以确定全球mRNA表达差异HS3C AGS细胞与期望这种策略会识别,从更广泛的角度来看,其他基因负责在胃癌细胞凋亡抵抗。这种方法可能会导致小说胃癌基因和肿瘤抑制基因的识别。
观察proapoptotic角色p27在胃细胞与大多数以前的研究结果是一致的,各种各样的non-gastric细胞使用。32位35岁,37 -40部分的解释明显凋亡作用归因于p27在一些研究中可能是p27在细胞凋亡的影响可能取决于转染细胞功能磷酸化Rb蛋白。在这方面,p27过度凋亡反应已经指出只有在磷酸化Rb癌细胞表达。45岁的46因为AGS细胞及其细胞抗凋亡导数HS3功能磷酸化Rb,24日,42我们的研究结果是符合这一假说。
proapoptotic角色p27在胃上皮细胞也符合p27的胃表型缺陷小鼠的胃增生更为夸张的实验H幽门感染。47缺乏细胞凋亡的程度或增加扩散导致这些动物的增生性表型是在我们实验室目前正在接受调查。
p27的出现低水平的细胞和细胞凋亡抗性表型观察顺向的选择压力H幽门作为一个长期的细胞凋亡诱导刺激24在其他情况下也可能发生。例如,低p27表达与抗雷帕霉素诱导细胞死亡有关的雷帕霉素耐药RR-3细胞系来源于BC3H1小鼠肌肉肿瘤细胞。48
机制负责减少p27表达在慢性的表情H幽门感染仍不清楚。在急性(短期)暴露模型中,H幽门p27蛋白的降解增加了一个独立泛素蛋白酶体通路的依赖。41然而,减少HS3细胞中p27蛋白的表达及其衍生物(80%)也伴随着减少p27 mRNA的丰度,约30 - 40%,根据我们当前和先前的研究。24与此形成鲜明对比的是急性H幽门曝光,长期暴露在HS3衍生品H幽门,我们没有发现证据表明加速p27蛋白的蛋白酶体降解。因此,它是可能的转录和翻译后机制有助于减少p27蛋白在胃癌相关H幽门感染。研究p27蛋白的表达和p27 mRNA在胃上皮细胞从正常胃上皮肿瘤出现前的阶段进展胃癌可能有助于确定H幽门减少p27表达非转换胃上皮细胞和说明何时、在何种水平H幽门影响p27表达过程中胃致癌作用。相似的动物模型的方法H幽门有关胃癌也可能是有用的在这方面。这种分析也可以解决体内是否有关联的观察从短期coculture物质分泌H幽门同时也可以增加p27蛋白表达水平。49
总之,我们的研究支持了proapoptotic角色p27在胃癌细胞可能解释,至少在某种程度上,低水平的协会p27与这种疾病预后不良。
确认
我们感谢苏珊Delamonte博士审查的手稿。支持由R罗伯特和莎莉D Funderburg美国胃肠病学协会的研究学者奖基金会对消化系统的健康和营养和来自美国国立卫生研究院(图项目资助,1 p20rr17695-01)。