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数据来自Altmetric.com
我对朗兰兹的论文很感兴趣等其中，“益生元”碳水化合物改变了粘膜菌群，但显然对细胞增殖没有影响(肠道2004;53: 1610 - 16)．这个问题很重要，因为体内发酵的产物(短链脂肪酸)可能会增加上皮细胞的增殖，导致这种补充剂实际上可能会增加结直肠癌的风险。1，2
作者指出，(肠道菌群研究的)方法学一直是一个重要的问题，我认为这也适用于细胞增殖研究，因为目前工作的结果可能在两个方面具有误导性。首先，我绝不建议使用增殖细胞核抗原作为细胞增殖的标记，因为:(1)方法难以标准化;(2)抗原半衰期长;(3)在非循环肿瘤附近和施用生长因子后均有异常表达。3.对于切片，Ki67要好得多，但即使使用这种抗体，目前的研究结果也不太可能是结定论，因为只能对2-4个隐窝进行评分;对于大多数研究，我建议记录30个半隐窝。
第二点是依赖标记指标可能会产生误导，因为缺乏差异并不一定意味着没有增殖变化，因为比率的两边(标记细胞除以细胞数量)都可能发生变化。这在我们对经肠外喂养大鼠表皮生长因子的研究中得到了证实，尽管组织重量和隐窝细胞产量减半，但经口喂养和经肠外喂养大鼠的标记指数没有差异。当数据被重新表达为每个隐窝的标签时，处理的效果变得明显4；在米索前列醇治疗后，胃也有类似的效果。5，6
然而，对于人体组织的研究，有一种简单得多且经过充分验证的方法。这就是所谓的显微解剖技术，将染色的小块材料分离，并对有丝分裂的图形进行标记。7这实际上允许一个人得分超过100个隐窝(如果愿意的话)，当结果以每个隐窝表示时，分母变化的影响会自动被考虑在内。
参考文献
作者的回复
我们感谢Goodlad对我们的文章感兴趣。在我们的研究中(肠道2004;53: 1610 - 16)，我们评估了组织切片中最常用于指示细胞周期进入的三种标记物的表达。重要的是，这三者所获得的数据并无差异。我们同意，由于Goodlad提到的原因，增殖细胞核抗原的价值有限，而且该蛋白在DNA修复中有作用，这降低了其作为细胞周期标记物的特异性。同样，Ki67并非在所有周期细胞中都有表达，可能由于营养剥夺而下调，也可能参与非细胞周期相关的过程，如核糖体生物合成。1
我们认为，循环细胞最有用的标记是小染色体维持(MCM)蛋白，它在细胞周期的所有阶段都丰富，并在进入静止、分化或衰老后下调。1，2因此，MCMs提供了细胞周期进入的敏感和特异性指示。在我们看来，这些标记物更适合于计数有丝分裂数字，这是一种主观且容易出错的操作，根据定义，它在组织学切片上提供了细胞周期状态的有限阶段特异性指示。
我们同意增殖指数可能具有误导性，在评估大肠隐窝时，确定每个隐窝的标记细胞数量是很重要的。3.如前所述，我们确认本研究中所有受试者的黏膜在显微镜下和宏观上都是正常的。特别是，两组间隐窝长度和每个隐窝的细胞数量没有差异。因此，所确定的标记指数是所调查样品中细胞周期进入的有效指标。
我们研究中使用的益生元碳水化合物在大肠中完全发酵，没有一种会随粪便排出体外。这种发酵的主要产物是短链脂肪酸(SCFA)。虽然在一些动物模型中，SCFA与细胞增殖增加有关，但很难相信所有哺乳动物物种的结肠中主要的阴离子会增加癌症的风险，特别是因为其中一种脂肪酸丁酸被认为是一种分化剂。在观察性研究中，发酵碳水化合物，如膳食纤维，在饮食中适当测量时，似乎可以预防结直肠癌。4在我们的研究中，观察到缺乏生物元碳水化合物对结肠菌增殖的影响，这表明，在一些动物模型中，由这些益生元提供的可发酵碳水化合物摄入量的大幅增加并不能促进增殖，因此可能被视为增加了可发酵非淀粉多糖(纤维)的保护作用。
作者的回复
根据Cummings和Coleman对我上述信件的回复，我想对小染色体维持(MCM)蛋白作为增殖标记的主张提出质疑，因为MCM阳性细胞的数量可以大大超过其他标记，并且它们广泛分布在未复制的染色质上。1它们似乎更像是复制潜力的指标，因此，很可能是发育不良的有用标记。2此外，对免疫组织化学标记的细胞进行评分与对有丝分裂图(在“挤压”制备中评分比在切片中评分容易得多)评分一样，甚至更“主观和容易出错”。我的主要担忧仍然存在，因为对人类活组织切片进行评分，与南瓜制剂不同，导致对隐窝的取样数量非常有限(本研究为2-4个)，从而阻止了“观察到的生物起源前碳水化合物缺乏效果”的可信度。
最后，我认为可发酵的非淀粉多糖(纤维)的“保护作用”仍然没有定论，而EPIC研究显示了本质上高纤维饮食的戏剧性效果，3.许多其他的研究显示了无效效果，其中一些，尤其是干预性研究，显示了不良效果。例如，补充麦麸会增加女性息肉的复发4而板栗对息肉有更普遍的不良影响。5
作者的回复
我们试图在细胞周期的任何一点上识别细胞，而不考虑周期的速率或特定细胞周期阶段的持续时间。因此，我们选择不通过免疫染色或计数有丝分裂数字来评估样本中的单个细胞周期阶段。
虽然已经提出了小染色体维持(MCM)蛋白的其他作用，但有强有力的证据表明它们是重要的复制因子。1MCMs在DNA复制后从染色质中被取代，但在整个细胞周期中仍丰富地存在于细胞核中。2重要的是，几个研究小组已经表明，MCMs在细胞周期退出(分化、静止或衰老)后丢失。3 -5因此，MCMs是细胞周期状态的有用免疫组织化学标记物。MCMs比Ki67和增殖细胞核抗原(PCNA)更丰富，这并不奇怪，因为后者在所有循环细胞中都无法检测到。
免疫组化染色解释的客观性和再现性是所使用标记物的功能。一些标记物，如PCNA，在染色强度上产生很大的变化，导致幻灯片解释困难。然而，我们的MCM抗体并没有给我们带来这样的困难，导致迄今为止在许多研究中观察者间的差异很低。2
近年来，对纤维的观察性和干预性研究的解释已经占据了许多期刊页面。在当前讨论的背景下，存在许多问题，主要与人们将所有纤维来源视为平等有关，认为纤维补充剂与饮食中天然食物中的纤维具有相同的效果，并认为纤维的数量具有保护作用。关于Alberts和他同事的研究，6这种纤维是作为一种补充而提供的，而且只是由麦麸制成的。正如Goodlad和Alferez所正确指出的那样，EPIC研究表明，当纤维本质上是饮食的一部分时，并且来自混合来源时，对纤维有保护作用。换句话说，高纤维饮食可以保护。Bonithon-Kopp研究7使用世界上大多数饮食中没有的纤维补充剂，并且剂量非常小，每天仅约3克。
脚注
利益冲突:没有声明。
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利益冲突:没有声明。
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利益冲突:没有声明。