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背景和目的:血清抗体碳酸酐酶(CA)二世在自身免疫性胰腺炎患者已报告(AIP)和干燥综合征(sj)。然而,它们的意义在这些疾病的发病机理是有争议的。本研究的目的是确定血清CA同功酶,抗体在胰腺导管细胞的表达。
方法:重组蛋白的人类CAs第四、第九和十二获得使用细菌表达系统,第四和五个CA与理论上高抗原性多肽合成。西方墨点法和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清CA同功酶抗体。
结果:第一个筛选免疫印迹分析显示血清抗体CA IV中三个CA特发性慢性胰腺炎患者的同功酶,包括AIP患者。ELISA的进一步分析显示血清抗体的患病率显著增加截断CA蛋白和CA IV合成肽(LGS图片PTC DEK VVW TVF代表我)明确AIP患者(分别为4/15和6/20;p < 0.01),可能AIP(6/14和3/14;p < 0.02), sj(9/20和8/40;p < 0.001),与正常对照组相比(0/26)。没有显著差异和正常对照组之间的抗体患病率酒精慢性胰腺炎患者(2/15)或胰腺癌(分别为2/14和1/14)。血清CA四肽抗体的存在显示出显著相关性与血清丙种球蛋白和免疫球蛋白水平AIP患者。
结论:这些发现表明,第四CA可能是目标抗原通常是表达在上皮细胞的特定组织参与AIP及其相关疾病。
- 航,自身免疫性胰腺炎
- 安娜,抗核抗体
- 钙、碳酸酐酶
- GPI、糖基磷脂酰肌醇
- 销售税,谷胱甘肽S-transferase
- ICP,特发性慢性胰腺炎
- PCR,逆转录-聚合酶链反应
- sj,干燥综合征
- ELISA,酶联免疫吸附测定
- 自身免疫性胰腺炎
- 自身免疫性epithelitis
- 碳酸酐酶IV
- 血清抗体
- 干燥综合征
来自Altmetric.com的统计
- 航,自身免疫性胰腺炎
- 安娜,抗核抗体
- 钙、碳酸酐酶
- GPI、糖基磷脂酰肌醇
- 销售税,谷胱甘肽S-transferase
- ICP,特发性慢性胰腺炎
- PCR,逆转录-聚合酶链反应
- sj,干燥综合征
- ELISA,酶联免疫吸附测定
自身免疫性胰腺炎(AIP)最近被提议作为一种新的疾病实体在慢性胰腺炎患者。1 -5能够很好的证明,AIP是偶尔观察到干燥综合征的并发症(sj)、原发性胆汁性肝硬化,和/或硬化性胆管炎。3 -6基于临床证据,“自身免疫性exocrinopathy”的概念,7“腺干燥综合症”,8和“自身免疫性epithelitis”9这种疾病已经提出描述复杂。有人提出,这些疾病可能是自体免疫反应的表现对一个共同的目标抗原表达的不同器官的上皮细胞。10然而,自体免疫机制在这种疾病的发病机制复杂,包括航,仍然知之甚少。
我们以前报道,特发性慢性胰腺炎患者(ICP)和sj显示细胞和体液免疫反应60 kDa蛋白质,从人类和猪胰腺提取分离。11 -13单克隆抗体SP3-1,反对60 kDa蛋白质,与导管细胞反应的外分泌器官,包括胰腺、唾腺、肝(胆管)和肾(远端肾小管)。14基于发现SP3-1还发现与人类反应碳酸酐酶(CA)二世,15我们成功地确定了ICP患者血清抗体CA II和sj。16随后,血清抗体CA二世在患者AIP已报告,17自身免疫性胆管炎,18岁21原发性胆汁性肝硬化,19 -22和sj。23日,24此外,我们发现sialoadenitis诱导小鼠2年代和2uMHC单由皮内注射免疫与人类CA II。15最近,据报道,胰腺炎和sialoadenitis诱导在裸体小鼠的脾细胞的过继转移新生地thymectomised和CA II接种小鼠。25这些发现表明,CA II可能是一个共同的目标在多个外分泌器官的上皮细胞抗原。
然而,一些证据导致了问题可能CA二世在自身免疫性epithelitis的发病机制中的作用。首先,CA II广泛表达于多种细胞类型在几乎所有的组织。26其次,血清抗体CA II是系统性红斑狼疮患者中发现,23日,24日,27系统性硬化症,24日,27皮肌炎,24多肌炎,27子宫内膜异位,28日,29日自身免疫性肝炎、30.和病毒性肝炎。30.第三,化验外周血单核细胞的增殖并没有说明一个重要的细胞免疫反应对人类CA II ICP患者和sj。31日血清抗体CA ICP患者中我也发现了,sj和原发性胆汁性肝硬化。16CA我主要是血红细胞中表达,但不是外分泌腺导管细胞的。26有趣的是,血清抗体ca I和II中发现ICP患者和sj不是相互交叉反应性,证明了一个相互抑制试验。16这些发现让我们考虑一个假说,血清抗体ca I和II可能发现在sj和ICP患者由于抗体的交叉反应性与另一个模仿ca I和II的抗原。10基于这个假设,我们研究了血清抗体CAs IV,第九,十二,在胰腺导管细胞表达。10
材料和方法
主题
95例慢性胰腺炎患者的血清进行了研究。被诊断为慢性胰腺炎胰腺日本社会的标准。32ICP患者没有识别引起的胰腺炎如酗酒或胆结石,除了自身免疫。酒精慢性胰腺炎(n = 15)在病例被确诊患上了每日饮酒(> 81克/天一段超过10年)。ICP患者15完成制定的诊断标准为AIP日本胰腺的社会33岁的34并被指定为“定AIP”。总之,AIP被诊断出在那些ICP患者表现出特征的发现胰腺成像研究,也有血清学或组织学结果,或两者兼而有之。积极的成像研究表明扩散主胰管狭窄与不规则墙(也就是说,超过三分之一的整个胰腺)的长度和胰腺肿大。积极的血清学调查结果包括抗核抗体(ANA)的存在和/或水平升高血清丙种球蛋白(> 2 g / l)和/或免疫球蛋白(> 1800 mg / dl)。积极组织学结果显示纤维变化与淋巴细胞和浆细胞浸润。此外,14名患者完成了AIP标准上面所描述的那样,但是在他们缩小主胰管的长度小于整个胰腺的长度的三分之一,被指定为“可能AIP”。从患者血清sj (n = 20)诊断根据之前定义的标准,35胰腺导管细胞癌患者(n = 14),和健康者(正常对照组;n = 30)也进行了研究。
重组蛋白的人类CAs第四、第九和第十二
互补编码人类CA的开放阅读框架四世(312氨基酸残基;加入NM_000717)和人类CA十二(354残留物;AF051882), CA域的人类第九CA(137 - 390号氨基酸;NM_001216)通过逆转录-聚合酶链反应(PCR)。Poly (A) RNA从人类肾脏被用作来源cDNA克隆CA IV和聚(A) RNA用于克隆人类胰腺的CAs IX和十二(Clontech,帕洛阿尔托,加州,美国)。Poly (A) RNA(0.1μg)与随机反向转录五个一使用商业套装(豆类,京都,日本)。结果cDNA放大通过使用采用PCR引物,包括Bam你好,萨尔我识别序列。PCR反应是热开始孵化两分钟在94°C,由35周期94°C的30秒30秒58°C的CA第九,CA十二或56°C, 1.5分钟在72°C。CA IX和十二cdna克隆inframe进Bam你好/萨尔我网站pGEX-4T-2向量产生的融合蛋白与谷胱甘肽S-transferase CA同功酶(GST)(美国新泽西州Amersham,皮斯卡塔韦)。
第四cDNA克隆人类CA的过程有点复杂。作为初步研究到目前为止未能放大一个完整的cDNA片段的CA IV,大概是因为附近的衔接着重复序列PCR错误3′末端,一个两步PCR法。PCR的第一步涉及放大的大约一半的CA IV编码序列使用以下引物:5′ATG CGG ATG CTG CTG GCG CT-3′, 5′gtc CTG GGC CTC TTC ACA条t - 3′(预计将PCR产物,从一开始就1 - 474密码子)和5′GAG AAA GAG亚美大陆煤层气有限公司GGG ACA TC-3′, 5′GAG CCA柠檬酸TCG CAG GAG GC-3′(430 - 945元)。第二个PCR一步联系cDNA产品从第一个没有使用PCR引物,导致一个完整的cDNA片段编码CA IV。PCR条件都是相同的,除了上述的退火温度是60°C。起初,我们试图获得一个CA IV重组蛋白使用pQE-30向量(美国加州试剂盒,就是查)大肠杆菌(应变M13);然而,我们未能获得产品,原因未知。因此,CA IV cDNA pQE-30向量recloned成Bam你好/萨尔我网站pGEX-4T-2向量与克莱诺的额外使用酶inframe调整。
正确的cDNA序列的CA IV,第九,十二插入包含在PGEX-4T-2向量被DNA测序确认好。细菌(主管大肠杆菌JM109)转染PGEX-4T-2向量包含没有插入(控制)和cDNA插入第四的CA,第九,第十二,分别。在LB培养基培养细胞在37°C。后诱导蛋白表达增加1毫米isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside三小时37°C,细胞收获声波降解法和细胞溶解的磷酸缓冲盐。细胞中提取的蛋白质浓度调整到10 mg / dl和样本存储在−30°C到以后使用。
免疫印迹分析
重组融合蛋白的CA第四、第九和十二销售税和人类CA二世在钠十二烷基硫酸10.0%聚丙烯酰胺凝胶电泳,electrophoretically转移到PVDF膜。人类CA II(从红细胞electrophoretically纯化)购买的σ(圣路易斯,密苏里州,美国)。膜与5%的脱脂牛奶preincubated磷酸缓冲盐在4°C过夜,然后被孵化与血清样本稀释1:200。五洗后磷酸缓冲盐,包括二层20 0.05%,膜在室温下了三个小时孵化了过氧化物酶共轭山羊反人类的免疫球蛋白抗体(接头,西切斯特,宾夕法尼亚州,美国)。五洗后磷酸缓冲盐,反应物在膜是3毫米4-chloro-1-naphthol(σ)methanol-phosphate缓冲盐水。
重组蛋白的截断CA IV
如图1所示,互补编码三种类型的截断CA IV蛋白质,缺乏N终端信号序列(N−ca第四;19号氨基酸- 312),C末端糖基磷脂酰肌醇(GPI)固定序列(C−ca第四;1 - 284),或两个终端序列(N−/ C−ca第四;19 - 284),通过PCR扩增使用CA IV cDNA插入PGEX-4T-2向量和采用者引物包含濒死经历我和Bam嗨识别序列。结果cdna克隆到濒死经历我/Bam嗨的pET21a向量(Novagen,达姆施塔特,德国)。细菌(主管大肠杆菌JM109)与subcloned向量转换,然后在LB培养基培养。经过诱导的重组蛋白表达了三个小时在37°C通过增加1毫米isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,声波降解法细胞细胞溶解的20毫米Tri-HCl (pH值8.0)。包含一小部分提取包涵体的细胞溶解产物使用商业套装(BugBuster;Novagen)。的重组蛋白包涵体变性了Tris-SO 8 M尿素(10毫米4pH值10),然后逐步稀释复合的尿素浓度(∼0.5)。之后添加氧化谷胱甘肽(GSSG;σ)在5毫米,样本离开安静的五天在4°C,然后在10毫米Tris-SO渗出4包含0.1毫米ZnSO (pH值9.0)4。复合N−/ C−第四ca蛋白进一步纯化的使用N-hydroxysuccinimide激活亲和柱(Amersham)。复合蛋白是在10 - 20%钠十二烷基硫酸盐聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染色。CA的活动获得的蛋白质测定根据先前所描述的方法36的存在与否10μM乙酰唑胺(σ)。
示意图表示的截断碳酸酐酶(CA) IV和合成肽的蛋白质。(一)前体CA IV长312个氨基酸。N−ca IV缺乏N终端信号序列(18个氨基酸残基),C−ca IV缺乏C末端糖基磷脂酰肌醇(GPI)固定序列(28残留),和N−/ C−ca IV缺乏终端序列。(B)理论抗原性人类第四CA的氨基酸序列进行了分析使用电脑。选择五个序列代表高抗原性与数字1 - 5(酒吧),这些序列的多肽合成。
合成肽的CA IV
人类第四CA的氨基酸序列进行了分析使用计算机软件Genetyx-Mac 7.3(软件开发、东京、日本),和以下五个序列理论上高抗原性选择(图1 b):氨基-PVK WGG NCQ KDR QSP INI -羧基(CA四肽1;号氨基酸39-56);氨基ffs GYD KKQ TWT VQN已-羧基(肽2;71 - 88年);氨基-GGL PAP YQA KQL通过WSD LPY公斤啊-羧基(肽3;103 - 128年);氨基lgs图片PTC DEK VVW TVF代表我-羧基(肽4;221 - 242年);和氨基-KDN VRP LQQ LGQ GRP L - RTV IKS次方差距羧基(肽5;267 - 291)。与上述序列肽合成的采购订单(免疫纯洁,没有接合)σGenosys(石狩湾、日本)。
酶联免疫吸附测定(ELISA)
血清抗体的N次方−/ C−CA蛋白和CA IV肽(1 - 5)量化据此前报道的方法。16短暂,井microtitre板涂有50μl 10μg /毫升N−/ C−CA蛋白或3μM CA IV肽在一夜之间在4°C。五个用磷酸盐缓冲盐水洗,井被涂上一层200μl 2%牛血清白蛋白在磷酸缓冲盐含有0.05%渐变20一夜之间在4°C;井被孵化与50μl稀释病人血清(1:200)一夜之间在4°C。与磷酸盐缓冲saline-Tween 20五洗后,井是孵化200μl 2%牛血清白蛋白在磷酸缓冲saline-Tween 20。与磷酸缓冲saline-Tween 20五洗后,井与50μl孵化过氧化物酶共轭山羊反人类的免疫球蛋白抗体(σ)在室温下了两个小时。绑定与磷酸盐缓冲saline-Tween五洗后20日反应物由孵化50μl 2.2′-azino-bis (3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic酸)液体衬底(σ)。吸光度是决定在405海里。第四控制井没有涂以CA蛋白/肽也用于ELISA在每个血清样本。所有化验进行了一式三份和血清抗体的特定绑定的N次方−/ C−CA蛋白和CA IV肽(1 - 5)计算如下:控制井的平均吸光度是减去从抗原涂井的平均吸光度。在目前的研究中,阳性结果任意定义为吸光度值高于均值(2 SD)的正常控制。
临床表现和血清抗体CA IV AIP患者
血清抗体的存在CA四肽4与明确的和可能的AIP患者的临床表现。因素评价包括发病年龄、性别、外周血细胞计数,生化筛查检测,血清丙种球蛋白和免疫球蛋白水平子类,安娜,类风湿因子、扩散和焦胰腺肿大了腹部计算机断层扫描和/或超声波回声图、扩散和节段性狭窄内镜逆行经由主胰管的证明了。
统计分析
的χ2测试是用于抗体患病率差异的统计分析患者和正常对照组和患病率的差异抗体阳性和阴性AIP患者之间的临床因素。第四anti-CA抗体滴定度之间的相关性和血清免疫球蛋白水平被计算皮尔逊相关系数的确定。统计学意义是定义为p < 0.05。所有数据都意味着(SD)。
结果
对血清CA同功酶抗体筛选分析
从ICP患者血清(包括航;n = 80)和正常对照组(n = 30)为第一抗体筛查分析四CA同功酶(CAs II,第四、第九和十二)表示在胰腺导管上皮细胞。10因为重组融合蛋白中科院第四、第九和十二销售税是不溶于水,免疫印迹分析被用于这一轮的分析。每个血清样本检测的重要反应,一双CA isozyme-GST融合蛋白和销售税蛋白质仅被用于微分显示在免疫印迹分析。积极的结果被认为当一个明显的信号分子大小对应的CA isozyme-GST融合蛋白(54 kDa)观察,此外,当没有消费税的探测信号蛋白单独观察(kDa 26日)污点。避免获得伪阳性结果在这一轮的分析中,微弱信号的污点(略微积极成果)丢弃。
作为以前的报告中观察到,16血清抗体CA二世被发现在30%的ICP患者和正常对照组的10% (p < 0.05,表1)目前的研究。有趣的是,血清抗体CA IV与ICP中观察到5%的患者和3%的正常对照组(不重要)。没有病例显示在测试血清抗体阳性结果CAs IX和十二世。
图2显示了免疫印迹概要代表患者的血清抗体CA IV AIP和ICP。蛋白质染色的左边的墨迹显示面板。例1(一种AIP患者)和案例2 (ICP患者)显示血清CA IV-GST抗体融合蛋白的重要信号(箭头),但没有探测信号观察血清抗体单独销售税(箭头)。在案例1中,几个乐队则同时出现在这些墨迹CA IV-GST和销售税,可能由于特定反应细菌内生蛋白质在这个病人。
西方墨点法代表血清抗体碳酸酐酶(CA)患者静脉AIP(案例1)和ICP(例2)。蛋白质染色的左边的墨迹显示面板。两个病人显示重要的信号血清抗体CA IV-glutathione S-transferase(销售税)融合蛋白(箭头),但没有探测信号观察血清抗体单独销售税(箭头)。在例1中,几个乐队则同时出现在这些墨迹CA IV-GST和销售税,对细菌的反应可能是派生的内源性蛋白质在这个病人。
第四制备可溶性钙的蛋白质
虽然第一次筛选免疫印迹分析显示血清抗体的存在第四CA患者AIP,不幸的是,第四前体CA蛋白不溶于水,即使变性和重折叠。量化血清抗体CA四世在大型面板的病人,ELISA更方便;因此第四可溶性钙蛋白是必需的。为此,我们利用细菌生产第四截断CA蛋白表达系统。图3显示了一个银染色钠十二烷基sulphate-polyacrylamide凝胶电泳与三种类型的配置文件截断CA IV变性和重折叠之后。随着一些微弱的乐队,强烈表达蛋白被认为在每一个车道,相应的N−/ C−ca IV (30.3 kDa;巷1),N−ca IV (33.2 kDa;巷2),和C−ca IV (32.2 kDa;巷3)。图3 b显示了银染色钠十二烷基sulphate-polyacrylamide凝胶电泳与N概要文件−/ C−第四ca蛋白与的使用进一步纯化N亲和柱-hydroxysuccinimide激活。一个乐队是观察和被视为抗原ELISA。的注意的是,在这三种类型的截断CA蛋白,只有N−/ C−第四CA蛋白显示CA活动,甚至在与亲和柱纯化后(t t的82%0/ T;达到平衡的时间有限2水化反应没有CA (T0)和一个示例(T))的存在(图3 c)及其活动是完全被乙酰唑胺,如前所报道。37这些发现表明,一些重组N−/ C−第四CA蛋白表现出所需的三级结构的生物活性。
分子性质的三个截断碳酸酐酶(CA) IV蛋白质。(A)一个银染色钠十二烷基sulphate-polyacrylamide凝胶电泳与三种类型的配置文件截断CA IV变性和重折叠之后。随着一些微弱的乐队,强烈表达蛋白被认为在每一个车道,相应的N−/ C−ca IV (30.3 kDa;巷1),N−ca IV (33.2 kDa;巷2),和C−ca IV (32.2 kDa;巷3)。(B)银染色钠十二烷基sulphate-polyacrylamide凝胶电泳与N概要文件−/ C−第四ca蛋白,进一步纯化的使用N亲和柱-hydroxysuccinimide激活。一个乐队是观察和被视为抗原ELISA。(C)催化活性三截断CA蛋白:t t0/ T,达到平衡的时间有限2水化反应没有CA (T0)和一个示例(T)的存在。只有N−/ C−第四CA蛋白显示CA活动(t t的82%0/ T)。CA活动完全抑制了乙酰唑胺(AZ)。
血清抗体CA IV
血清抗体的N次方−/ C−第四ca蛋白被ELISA量化一组患者胰腺疾病,在那些sj和正常对照组(表2)。意味着在正常对照组(SD)的吸光度为0.0003 (0.004)。积极的结果没有一个正常对照组(n = 26),在4/15的AIP患者(26.7%;与正常对照组相比p < 0.01),在6/14可能AIP患者(42.9%;p < 0.001),在9/20 sj患者(45.0%;p < 0.001)。15的两个酒精慢性胰腺炎患者胰腺癌患者(13.3%)和2/14(14.3%)显示阳性结果抗体滴定度较低,但没有显著差异的抗体这些患者和正常对照组之间的患病率。
血清CA四肽抗体
血清抗体CA IV合成肽(1 - 5)的ELISA分析明确的和可能的AIP患者(n = 2,每个)和六个正常控制。0.088一个明确的AIP患者(吸光度)和一个可能的AIP(0.058)显示血清抗体阳性结果CA四肽4(意思是(SD)在正常控制,0.009 (0.007))。所有四个患者AIP其他四肽结果为阴性。没有一个正常对照组显示阳性结果的五肽。
随后,血清抗体CA四肽4被ELISA量化一组患者和正常对照组(表2,图4)。意味着在正常对照组(SD)的吸光度为0.018 (0.010)。积极的结果没有一个正常对照组(n = 26),在6/15的AIP患者(40.0%;与正常对照组相比p < 0.001),在3/14可能AIP患者(21.4%;p < 0.02),在8/20 sj患者(40.0%;p < 0.001)。15的两个酒精慢性胰腺炎患者胰腺癌患者(13.3%)和1/14(7.1%)表现出积极的结果抗体滴定度较低但没有显著差异的抗体这些患者和正常对照组之间的患病率。是值得注意的有显著相关性的血清抗体滴定度CA的四肽4和N−/ C−ca IV明确的和可能的AIP患者的蛋白质(r= 0.929)(图5)。
血清抗体碳酸酐酶(CA)四肽4通过ELISA明确自身免疫性胰腺炎患者(定航,n = 15),可能AIP (n = 14),酒精慢性胰腺炎(ACP, n = 15)胰腺癌(PC, n = 14),干燥综合征(sj, n = 20)和正常对照组(NC (n = 26)。虚线表示切断值定义的意思是在数控(2 SD)。
血清抗体滴定度之间的相关性碳酸酐酶(CA)四肽4和N−/ C−第四ca蛋白确定和可能的自身免疫性胰腺炎患者。
血清抗体CA IV和临床表现的相关性
临床表现相关的血清CA四肽抗体4明确的和可能的AIP患者进行评估(表3)。最显著的区别抗体阳性和阴性患者血清丙种球蛋白的水平(p < 0.001)。免疫球蛋白子类中,血清免疫球蛋白水平有显著差异(p < 0.001)和IgA (p < 0.05)。此外,血清免疫球蛋白水平显示公平与抗体滴定度相关性CA四肽4 (r= 0.80)和N−/ C−第四ca蛋白(r= 0.72)。另一个临床因素与血清抗体CA四肽4是贫血的存在。外围抗体阳性患者的红细胞计数(370(49)/μl)显著降低(p < 0.01)比抗体阴性患者(416(39)/μl)。没有明显差异中观察到的其他临床表现。值得注意,没有观察到显著差异抗体阳性和阴性AIP患者之间的安娜的患病率,分散或节段性胰腺增大,扩散或节段性狭窄的主胰管,已被视为每年的临床特征。33岁的34
讨论
在三个CA同功酶在胰腺导管上皮细胞表达,我们成功地确定患者的血清抗体CA IV AIP和sj。第四CA是一种细胞外同工酶,结合GPI在质膜38;也可能通过C末端固定在质膜疏水段。39连同其已知区域表达泡心细胞间,intralobular,胰腺和小叶间导管细胞,39免疫组织化学研究报道,CA IV的上皮细胞表达几个organs-namely,胆囊,40大的胆管,40提升肢体近端小管和厚厚的亨利的肾脏,41小肠和大肠,42和食管。43尽管CA的免疫组织化学本地化IV唾液腺尚未报道,我们之前报道发现重要的CA IV mRNA表达人类唾液腺。44
众所周知,例AIP往往与炎症病变胰腺以外的几个器官。提出了各种各样的临床表型不同的器官:sj唾液腺和肝外硬化性胆管炎(解释为一种变体的原发性硬化性胆管炎)choledochus。4溃疡性结肠炎,这可能被视为一种epithelitis结肠,偶尔看到AIP患者,4,6原发性硬化性胆管炎。45近端肾小管性酸中毒是众所周知的sj患者的并发症。46作为观察胰腺组织标本AIP患者,病理结果中看到这些疾病患者表示“epithelitis”。9基于这些发现,有人提出一个破坏性的自身免疫过程通常针对某一抗原(s)表达在上皮细胞自身免疫性epithelitis的发病机制中发挥重要作用。与CA二世的无处不在的表情相比,26CA IV的表达更受限制的组织和细胞类型的炎症病变已观察到患者AIP和相关疾病。虽然在目前的研究中获得的数据绝不消除可能的角色CA二世在这种疾病的发病机制复杂,考虑的微分分布CA二世和CA IV表明,后者更有可能函数作为目标抗原。
的注意,CA静脉腔内表面也表达了在毛细管内皮细胞在不同的组织,包括肺癌、37葡萄膜,47大脑,48骨骼肌,49心脏肌肉,50胆囊、40和胃肠道。42虽然第四CA表达式没有被报道在胰腺内皮细胞,这些研究表明,血清抗体的可能性CA IV绑定到毛细管表面体内。然而,半胱氨酸残基位于位置9 CA四肽免疫反应性的报道形成与N终端半胱氨酸残基二硫化物键(28日在序列中的位置的N−第四ca蛋白),51表明野生型CA IV的三级结构是不同于合成肽和重组蛋白。这一发现表明,血清CA四世被抗体ELISA不会与野生型CA IV体内反应。静脉炎偶尔被报道在胰腺组织标本AIP患者52但没有证据表明病变出现在胰腺毛细血管。免疫组织化学研究表明,大部分的淋巴细胞浸润的胰腺AIP患者CD8+和CD4+T细胞,淋巴细胞显示B细胞标记相对较少。4内皮细胞有能力表达MHC II级分子干扰素γ,因此他们可能会加速疾病过程由T细胞。一起的病原学的意义CA IV AIP患者血清抗体,CA静脉内皮细胞表达的作用仍有待阐明。
在目前的研究中,我们确定一个B细胞抗原表位对人类CA IV,由患者血清抗体AIP认可和sj。有趣的是,免疫反应性的肽序列(LGS LTTPTC DEK VVWTVF代表我)富含活性位点氨基酸残基序列(下划线),包括三个残基形成氢键网络(以粗体显示)。38的活性部位是至关重要的一种酶的功能,相当于CA家族中散播他们的序列是守恒的。事实上,13 22残留的免疫反应性的CA四肽序列,包括六个连环残留,在CA II守恒。26预计患者的血清抗体CA IV AIP是CA II交叉反应性。
关于临床的角度来看,AIP患者阳性血清抗体表明CA IV增加血清丙种球蛋白的水平,特别是免疫球蛋白和IgA,表明它们在超免疫状态。尽管目前尚不清楚为什么抗体阳性患者表现出贫血,一个可能的解释是,他们患有长期疾病活动。胰腺形态的变化,提出了每年的临床特征,并没有与血清抗体的存在有关CA IV。只有AIP患者显示,胰腺弥漫性或节段病变形态为在这项研究中,从而进一步的调查应该旨在评估例ICP与多种临床表型相关。
在目前的研究中,我们建议第四CA作为抗原自身免疫性epithelitis的发病机制中起着重要的作用,包括航和sj。目前,尚不确定是否血清抗体CA IV参与航和sj的免疫过程。血清抗体临床使用CA IV可以作为这些疾病的疾病标记抗体。研究第四CA患者的致病作用自身免疫性epithelitis,需要大量的研究,包括那些专注于特异性抗体的各种疾病,以及分析CA IV AIP患者的T细胞反应和sj。
确认
我们感谢Keiko Udaka博士(分子免疫学、高知县医学院)为她宝贵的建议。这部分工作是支持健康和劳动科学研究资助从日本外交部和棘手的胰腺疾病研究从日本风湿病基金会的资助。
引用
脚注
利益冲突:没有宣布。