你在这里

  • 家
  • 存档
  • 64年卷5
  • 幽门螺杆菌目标癌症apical-junctional选民gastroids和胃上皮细胞

条文本

菜单条
幽门螺杆菌
原文
幽门螺杆菌癌症相关的目标apical-junctional选民gastroids和胃上皮细胞
免费的
  1. 丽迪雅E Wroblewski1,
  2. M布兰卡Piazuelo1,
  3. Rupesh查图尔维迪1,
  4. 迈克尔-舒马赫2,
  5. Eitaro Aihara2,
  6. 瑞丰2,
  7. 詹妮弗·米诺托1,
  8. 阿尔贝托·德尔珈朵1,
  9. 黎明一个以色列1,
  10. 雅娜Zavros2,
  11. 马歇尔H蒙特罗斯2,
  12. 诺亚Shroyer3,
  13. 皮雷约科雷亚1,
  14. 基思·T·威尔逊1,
  15. 理查德M偷看小1
  1. 1胃肠病学、医学部门和癌症生物学,范德比尔特大学医学院,田纳西州纳什维尔美国
  2. 2分子和细胞生理学,辛辛那提大学,俄亥俄州辛辛那提美国
  3. 3胃肠病学分工、肝脏病学和营养,辛辛那提儿童医院,俄亥俄州辛辛那提美国
  1. 对应到博士理查德M Peek小,胃肠病学,范德比尔特大学医学院的花环大街2215号,1030 c MRB IV,纳什维尔,TN 37232 - 2279,美国;richard.peek在}{vanderbilt.edu

文摘

客观的幽门螺杆菌菌株表达的癌蛋白CagA增加胃癌的风险。然而,通过它的精确机制cag+菌株增加癌症风险没有充分描述和模型系统,概括胃利基是了解发病机制的关键。Gastroids是三维organ-like结构为研究宿主——提供独一无二的机会幽门螺旋杆菌在临床前模型的交互。我们使用gastroids通知和直接通过体外研究定义机制幽门螺旋杆菌调节claudin-7癌症相关的紧密连接蛋白的表达。

设计Gastroids被感染的细胞腔的显微镜下注射,MKN28 cocultured与胃上皮细胞幽门螺旋杆菌野生型cag+菌株或同基因的突变体。β-catenin claudin-7和蜗牛本地化是由免疫细胞化学。扩散是评估使用5-ethynyl-2′脱氧尿苷,claudin-7和蜗牛免疫印迹和流式细胞仪测定。

结果Gastroids发展成为一个自组织分化轴幽门螺旋杆菌诱导mislocalisation claudin-7和增加CagA——β-catenin-dependent方式扩散。在MKN28细胞中,H幽门全身抑制claudin-7受β-catenin和蜗牛。同样,蜗牛表达式中增加和claudin-7水平降低幽门螺旋杆菌来华的个人。

结论幽门螺旋杆菌增加小说gastroid毒株特异性的方式扩散系统。幽门螺旋杆菌也改变表达和本地化的claudin-7 gastroids和人类上皮细胞,这是由β-catenin和蜗牛激活。这些数据提供新的见解分子之间发生的与致癌的潜在的相互作用幽门螺旋杆菌并在胃上皮细胞。

  • 幽门螺杆菌
  • 胃癌
  • 细胞增殖
  • 紧密连接
  • 胃发炎

http://dx.doi.org/10.1136/gutjnl - 2014 - 307650

来自Altmetric.com的统计

    请求的权限

    如果你想重用任何或所有本文的请使用下面的链接,这将带你到版权税计算中心的RightsLink服务。你将能够获得快速的价格和即时允许重用内容在许多不同的方式。

    本研究的意义

    已知在这个问题上是什么?

    • 幽门螺杆菌是最强的胃癌的危险因素,然而大多数感染者不开发这一恶性肿瘤。

    • 疾病风险取决于毒株特异性毒性因素,主机对这些成分和环境因素的反应。

    • 机械的研究幽门螺旋杆菌发病机理受限于当前microbial-epithelial系统。

    有什么新发现吗?

    • 小鼠gastroids自组织分化发育成轴,可以成功地感染致病幽门螺旋杆菌菌株。

    • 幽门螺旋杆菌增加gastroids扩散,这是依赖于细菌癌蛋白CagAβ-catenin信号。

    • 幽门螺旋杆菌诱导mislocalisation claudin-7紧密连接蛋白的抑制,这是由β-catenin和蜗牛。

    • 蜗牛表达式中增加和claudin-7水平降低幽门螺旋杆菌来华的个人。

    它会如何影响临床实践在可预见的未来吗?

    • 用与生物相关的模型系统,如gastroids可能描绘小说通路通过它幽门螺旋杆菌降低疾病的门槛,导致新的治疗靶点的识别抗菌疗法。

    • 幽门螺旋杆菌逆相关感染其他疾病,如食管腺癌和过敏性疾病;因此,调解因素的识别幽门螺旋杆菌全身的胃癌可能让医生更大幅检测和治疗”策略关注高危人群。

    • 定义机制,通过它幽门螺旋杆菌诱发胃癌可能提供重要的见解来自炎性病灶的其他恶性肿瘤。

    介绍

    幽门螺杆菌它生活的胃粘膜超过一半的世界人口和持续感染显著增加了开发的风险niche-specific疾病,如胃腺癌。1细菌毒性成分产生重要影响在确定感染的结果幽门螺旋杆菌压力,拥有一个功能cag致病性岛(PAI)导致更高的癌症风险cag−菌株。2的cagPAI由基因编码组件的IV型分泌系统,把细菌CagA等产品,进入宿主细胞后微生物接触。3 - 6细胞内CagA迅速磷酸化Src, Abl激酶和磷酸化CagA激活宿主磷酸酶(SHP-2)导致细胞活性和增殖的变化。4 - 7磷酸化CagA激活β-catenin和信息枢纽中断,导致上皮屏障功能丧失。8 - 10

    β-catenin是包裹在细胞膜adherens结和/或隔离在胞质内multiprotein抑制复杂含有腺瘤息肉病杆菌(APC),糖原合酶激酶(GSK) 3β,轴蛋白。11这个复杂的既定目标β-catenin通过GSK-3β-mediated磷酸化变幻虫的退化。幽门螺旋杆菌激活β-catenin GSK-3β失活,或通过一个CagA和膜相关β-catenin之间的互动,促进促有丝分裂的信号和扩散。9,12,13

    另一个可能影响的apical-junctional蛋白质幽门螺旋杆菌全身扩散结合β-catenin claudin-7。Claudin-7 24跨膜蛋白家族的一员,哪些是紧密连接的重要成分,哪些是主要的决定因素紧密连接的屏障功能。14紧密连接的破坏复合物与多种人类疾病有关,包括胃肠道癌。14幽门螺旋杆菌坚持在靠近胃上皮细胞紧密连接,可以改变组件的本地化的蛋白质构成这些复合物。15,16改变的表达claudin-7已经涉及到几种类型的人类癌症,14肠道claudin-7缺乏的小鼠模型,claudin-7损失导致增加扩散。17

    几个claudins蜗牛的上游中介,锌指转录因子家族的成员。蜗牛函数作为转录抑制因子,抑制钙粘蛋白可以通过绑定内E-boxes粘附促进剂;值得注意的是,增加了蜗牛表达也与恶性肿瘤有关。18蜗牛抑制claudins的表达19,特别是claudin-7负受蜗牛体外。18整合这些数据,幽门螺旋杆菌蜗牛可以上调,导致上皮:间充质转变。20.

    调查识别机制幽门螺旋杆菌引发异常胃上皮反应已经主要由体外癌细胞模型,短期体外原代细胞模型或体内感染的啮齿动物模型。然而,之间的相互作用的详细研究幽门螺旋杆菌和完整的胃上皮细胞受到体内可访问性问题或去分化细胞培养。21,22因此,本研究的目的是使用一个小说补充能量来自体内的行李袋三维(3 d)系统来识别成分,调节主机-幽门螺旋杆菌互动与致癌潜力,随后通知体外机械的研究,可能最终被扩展到人类胃上皮细胞。我们的数据表明,幽门螺旋杆菌gastroids诱导扩散,这是依赖于幽门螺旋杆菌毒力因子CagAβ-catenin。此外,幽门螺旋杆菌改变的表达claudin-7在人体胃组织和胃上皮细胞通过信号通路包括β-catenin和蜗牛。

    材料和方法

    细节细胞培养、免疫印迹分析、转染和荧光素酶化验,瞬时转染核和免疫荧光中包含在线补充数据。

    动物和gastroid文化

    所有程序都是通过范德比尔特大学的动物保健委员会制度。C57BL / 6小鼠安乐死在8 - 12周的年龄。小鼠胃结扎oesophago-gastric和gastric-duodenal连接,快速删除,在磷酸缓冲盐(PBS)洗。大约一半的前胃切除。幽门括约肌就直接通过新创建的基底的开放,和胃倒密封的结扎前胃。倒胃洗在冰冷的杜尔贝科PBS (DPBS),由注射DPBS和孵化在4°C EDTA(5毫米)为2.5 h。EDTA然后换成5毫升的渗透抖动缓冲区山梨糖醇(54.9毫米和43.5毫米蔗糖)和胃都摇动了去除腺体。发布的腺体在250 g离心10分钟和腺体镀在基底膜基质(BD生物科学)(1μM)包含防治胃泌激素(10海里),表皮生长因子10 (50 ng / mL), R-spondin 1 (500 ng / mL),‘诺金’(100 ng / mL),纤维母细胞生长因子10 (100 ng / mL), rWnt3A (100 ng / mL)和Y27632(10μM),基于最近出版协议为gastroid开发文化。21先进的杜尔贝科的修改鹰的介质与B27 DMEM / F12培养基补充,N2,青霉素、链霉素、N-2-hydroxyethylpiperazine-N-2-ethane磺酸(10毫米)和Glutamax(2毫米)在人工基底膜覆盖。对于coculture实验幽门螺旋杆菌、先进的DMEM / F12培养基没有使用青霉素和链霉素。

    幽门螺旋杆菌菌株和文化条件

    的幽门螺杆菌cag菌株7.13或60190人生长在布鲁氏菌肉汤10%胎牛血清16 h,收获的离心和cocultured MKN28细胞或microinjected进入胃腔的感染复数gastroids 100:1。8,23一个同基因的cagA零突变体构造应变7.13中被选中与卡那霉素(25μg /毫升)如前所述。8

    流式细胞术

    胃上皮细胞从冷冻分离人类胃活检使用离解和分散技术,如前所述。24,25胃活检获得幽门螺旋杆菌来华的或未受感染的病人住在哥伦比亚,26这是经伦理委员会批准的医院和大学del Valle参与卡利,哥伦比亚和范德比尔特大学的机构审查委员会。胃组织处理10µM二硫苏糖醇在室温下为30分钟30分钟和1.0毫米EDTA在4°C。分散细胞70µm过滤器过滤(BD猎鹰)分离单个细胞。细胞被固定和permeabilised 0.1%多聚甲醛和冰冷的甲醇。细胞培养与小鼠单克隆抗体结合anti-pan-cytokeratin allophycocyanin (1:10 0, BD生物科学)和兔多克隆抗体anti-claudin-7(1:10 0,生活技术)在室温下了20分钟。细胞被洗了,沾着仓鼠anti-rabbit二级抗体共轭与异硫氰酸荧光素(1:400 BD生物科学)。细胞获得使用光敏电阻二流式细胞分析仪(BD生物科学)和pan-cytokeratin-positive细胞分析claudin-7表达式使用FlowJo恒星(树)。

    分析细胞增殖

    细胞增殖是96 h后决定幽门螺旋杆菌显微镜下注射使用5-ethynyl-2′脱氧尿苷(EdU)化验和分析点击它EdU成像设备(分子探针)根据制造商的指示。EdU加入瀑样后显微镜下注射幽门螺旋杆菌。

    对人类的胃粘膜免疫组织化学

    免疫组织化学(包含IHC)进行石蜡包埋切片样本病人有或没有幽门螺旋杆菌感染。组织样本多克隆抗体anti-snail deparaffinised和染色。一个病理学家(MBP)得分细胞质和核蜗牛包含IHC染色通过评估蜗牛的百分比+上皮细胞半定量的,如前所述。25

    统计分析

    结果表示为±SEM手段。比较了使用Mann-Whitney学生t测试或方差分析,p≤0.05和被认为是重要的。

    结果

    幽门螺旋杆菌改变β-catenin gastroids增强扩散

    幽门螺旋杆菌激活β-catenin信号在胃上皮细胞转化8 - 10;然而,特定感受器和细胞表型受β-catenin导致致癌作用尚未完全定义。Gastroids 3 d模型系统更紧密地概括事件发生在胃上皮细胞比传统的克隆细胞培养系统,27从而提供新机遇的分子解剖上皮对微生物病原体的反应。作为一个定义路径被致癌的前奏幽门螺旋杆菌菌株体外,我们从老鼠和检查生成gastroids血统分配。这些结果表明gastroids self-organise成一个球体中央腔和周围的细胞分化成粘液细胞、壁细胞,G-cells, enterochromaffin-like (ECL)细胞(图1g)和d(没有显示)。我们随后确定gastroids可以成功地感染幽门螺旋杆菌通过显微镜下注射到瀑样腔,与细菌生存能力持续7天(图1H)。以确定gastroids准确反映体内反应幽门螺旋杆菌我们检查了occludin本地化。由免疫荧光,幽门螺旋杆菌感染gastroids导致中断occludin的本地化;重要的是,这些发现我们以前体内发现发表在复制幽门螺旋杆菌来华insulin-gastrin (INS-GAS)小鼠,导致mislocalisation occludin的紧密连接。16

    Gastroids differentiate and can be successfully infected with Helicobacter pylori. (A) Bright field image of a single gastroid. (B) Cross-sectional image of a single gastroid stained for F-actin (red); nuclei are labelled with Hoechst (blue). (C) Three dimensional reconstruction of a single gastroid stained for F-actin (red) and nuclei (blue). (D-G) Representative staining of gastroids for (D) gastric mucin (red), labelling mucus cells; (E) H+K+ATPase (red), labelling parietal cells; (F) gastrin (green), labelling G-cells and (G) chromogranin (red), labelling enterochromaffin-like cells. (D–G), nuclei are labelled with Hoechst (blue). (H) Uninfected (left panel) and infected (right panel) gastroids stained for occludin (red) and H. pylori (arrows, green). (I) Gastroids were uninfected, treated with LiCl or infected with H. pylori strain 7.13 (green) and stained for β-catenin (red).
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图1
    图1

    Gastroids区分,可以成功地感染幽门螺杆菌。(一)单个gastroid亮视场的形象。(B)的横断面图像构成的单一gastroid彩色(红色);核与赫斯特标签(蓝色)。(C)三维重建一个gastroid彩色f -肌动蛋白(红色)和核心(蓝色)。(D)代表的gastroids染色(D)胃粘蛋白(红色),标签粘液细胞;(E) H+K+腺苷三磷酸酶(红色),标签壁细胞;(F)胃泌激素(绿色),标签G-cells和(G) chromogranin(红色),标签enterochromaffin-like细胞。(d),核与赫斯特标签(蓝色)。(H)感染(左面板)和感染(右面板)gastroids彩色occludin(红色)幽门螺旋杆菌(绿色箭头)。(我)Gastroids未感染,处理氯化锂或感染幽门螺旋杆菌7.13应变(绿色)和彩色β-catenin(红色)。

    建立了gastroids可以成功地感染和反映体内发现,我们下一个检查的能力幽门螺旋杆菌影响β-catenin,这个分子协调异常上皮反应与致癌潜力。由免疫荧光,大幅β-catenin局部细胞边缘的瀑样无毒性(图1我),氯化锂(氯化锂)激活β-catenin GSK-3β通过磷酸化作用和抑制,与氯化锂和治疗gastroidsβ-catenin显著增加细胞质池(图1我看到网上补充图S1A)。重要的是,感染幽门螺旋杆菌7.13应变同样β-catenin分布的改变,导致细胞溶质的积累(图1我),以确保这些发现不二次细胞凋亡,我们对待gastroids氯化锂或感染他们幽门螺旋杆菌7.13应变通过腔的显微镜下注射和量化利用抗体针对裂解细胞凋亡的半胱天冬酶3(参见图印地在线补充C)。只检测到凋亡细胞的腔gastroids,和细胞凋亡水平没有显著不同感染,LiCl-treated或幽门螺旋杆菌来华gastroids(参见图印地在线补充C)。

    幽门螺旋杆菌菌株表达和把CagA增加胃癌风险和CagA可以调节β-catenin8;因此,我们研究了在gastroids CagA-dependent表型可能与致癌作用。Gastroids感染了幽门螺旋杆菌同基因的菌株7.13或7.13cagA−零变异通过腔的显微镜下注射,扩散是量化使用EdU 96 h后幽门螺旋杆菌感染(图2A、B)。Gastroids感染野生型幽门螺旋杆菌扩散率显著高于未受感染的瀑样。相比之下,增殖率gastroids感染同基因的幽门螺杆菌cagA−突变体与gastroids无毒性(相比没有不同图2A、B)。

    Helicobacter pylori induces proliferation in gastroids via CagA and β-catenin. (A and B) Gastroids were infected with wild-type (WT) H. pylori strain 7.13 or an isogenic 7.13 cagA− null mutant (red) via luminal microinjection and proliferation was quantified using 5-ethynyl-2′-deoxyuridine (EdU) (green). (A) Representative staining in uninfected (left panel), WT H. pylori-infected (middle panel) or H. pylori cagA− mutant-infected (right panel) gastroids. (B) EdU quantification demonstrating increased proliferation in WT H. pylori infected gastroids. (C and D) Gastroids were pretreated with cardionogen 1, a β-catenin inhibitor (i), and then infected with H. pylori and proliferation was quantified by EdU. (C) Representative staining in uninfected or WT H. pylori-infected gastroids, with or without pretreatment with cardionogen 1. (D) EdU quantification demonstrating that increased proliferation in H. pylori WT-infected gastroids is abolished by pretreatment with cardionogen 1. Data are expressed as means±SEM, n=3 independent replicates.
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图2
    图2

    幽门螺杆菌诱导扩散通过CagA gastroidsβ-catenin。(A和B) Gastroids感染野生型(WT)幽门螺旋杆菌同基因的菌株7.13或7.13cagA−零变异(红色)通过腔的显微镜下注射和扩散是量化使用5-ethynyl-2′脱氧尿苷(EdU)(绿色)。(一)代表染色的(左面板),无毒性WT幽门螺旋杆菌(中间面板)或来华幽门螺杆菌cagA−mutant-infected gastroids(右面板)。(B) EdU量化显示增加了WT的扩散幽门螺旋杆菌gastroids感染。(C和D) Gastroids使用cardionogen 1,β-catenin抑制剂(我),然后感染幽门螺旋杆菌和扩散被EdU量化。染色在未感染或WT (C)代表幽门螺旋杆菌gastroids来华的,有或没有预处理cardionogen 1。(D) EdU量化证明增加扩散幽门螺旋杆菌WT-infected gastroids由预处理cardionogen 1废除。数据表示为±SEM, n = 3独立复制。

    直接确定增强扩散是依赖幽门螺旋杆菌全身β-catenin激活,gastroids使用cardionogen 1,β-catenin的抑制剂,然后感染幽门螺旋杆菌。正如所料,幽门螺旋杆菌在mock-treated与未感染的gastroids相比显著增加扩散;然而,预处理cardionogen 1显著(p < 0.0001)降低感染gastroids扩散,表明幽门螺旋杆菌全身扩散在这个模型系统是由CagA和β-catenin (图2C, D)。

    一个癌症相关的紧密连接蛋白是异常改变时幽门螺旋杆菌gastroids感染与胃上皮细胞

    增加扩散发展claudin-7-deficient小鼠肠上皮内,和claudin-7水平降低了几种类型的癌症14,17;因此,我们下一个检验幽门螺旋杆菌claudin-7改变。大幅的gastroids无毒性,claudin-7局部细胞利润(图3相比之下,A)。幽门螺旋杆菌感染诱导claudin-7的异常的再分配,与细胞溶质的积累部位(图3B)。这并不是由于细胞凋亡作为裂解半胱天冬酶3只出现在细胞水平挤压gastroid腔和裂解半胱天冬酶3 gastroids无毒性或之间没有显著差异幽门螺旋杆菌-感染gastroids(参见图印地在线补充C)。

    Helicobacter pylori alters the topography of claudin-7 in gastroids and MKN28 gastric epithelial cells. Immunocytochemical localisation of claudin-7 in uninfected (A) gastroids and (C) MKN28 cells and H. pylori-infected (B) gastroids and (D) MKN28 cells, demonstrating accumulation of claudin-7 in cytosolic vesicles and discontinuous claudin-7 staining at the cell membrane in infected samples. (E and F) MKN28 cells were cocultured for 48 h with H. pylori strain 60190 and claudin-7 levels were determined by western blotting. (E) Representative western blot for claudin-7 or actin in detergent-insoluble and detergent-soluble MKN28 fractions in the presence or absence of H. pylori. (F) Densitometric analysis demonstrating loss of claudin-7 from the insoluble fraction of H. pylori-infected cells. Data are expressed as means±SEM, n=3 independent replicates.
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图3
    图3

    幽门螺杆菌改变了地形claudin-7 gastroids和MKN28胃上皮细胞。gastroids采用本地化的claudin-7感染(A)和(C) MKN28细胞幽门螺旋杆菌(B)来华gastroids和(D) MKN28细胞,证明claudin-7积累在细胞胞质囊泡和不连续claudin-7染色膜感染样本。(E和F) MKN28细胞cocultured 48 h幽门螺旋杆菌菌株60190和claudin-7水平取决于西方墨点法。(E)代表的claudin-7或肌动蛋白免疫印迹detergent-insoluble和detergent-soluble MKN28分数的存在与否幽门螺旋杆菌。(F)光密度分析表明claudin-7损失的不溶性分数幽门螺旋杆菌来华的细胞。数据表示为±SEM, n = 3独立复制。

    我们试图确认和扩展的结果gastroids成一个系统,可以很容易地操纵,MKN28人类胃上皮细胞。MKN28细胞和幽门螺杆菌cag菌株60190被用于这些因为我们以前研究表明MKN28细胞功能apical-junctional复合物上皮细胞的特征和形式,菌株60190也许紧密连接在这个模型。16MKN28细胞cocultured幽门螺旋杆菌48 h和claudin-7被免疫荧光检查。类似于gastroids发现,claudin-7是局部的细胞膜的细胞无毒性(图3C)。claudin-7的地形,然而,中断了幽门螺旋杆菌(图3D),发现在gastroids反映我们的结果。来证实这些结果,使用未感染和西方进行免疫印迹幽门螺旋杆菌MKN28来华的亚细胞分数。免疫印迹claudin-7使用可溶性(胞质)和不可溶性(膜相关)上皮细胞分数确认再分配claudin-7,显著减少(p < 0.05)的claudin-7在感染细胞的不溶性分数(图3E、F)。

    幽门螺旋杆菌介导的抑制claudin-7取决于β-catenin

    建立的影响幽门螺旋杆菌β-catenin和claudin-7,我们下决定是否直接联系这些主机内感受器之间是存在的幽门螺旋杆菌来华的细胞。MKN28细胞转染β-catenin记者包含三个串联淋巴增强因子/ t细胞因子(LEF / TCF)结合主题上游的荧光素酶基因(Topflash)或控制构建含突变LEF / TCF网站(Fopflash),然后处理氯化锂。正如所料,转染细胞的治疗与氯化锂提高荧光素酶活性(图4),反映β-catenin激活。我们下一个决定是否β-catenin激活claudin-7的规范表达。MKN28细胞孵化与氯化锂24 h,导致显著降低claudin-7表达水平(图4B, C),来确定幽门螺旋杆菌激活β-catenin-reduced claudin-7, siRNA针对β-catenin使用。减少表达claudin-7感染幽门螺旋杆菌被废除的感染MKN28细胞处理β-catenin-specific核(图4D, E)。这些结果表明β-catenin claudin-7抑制的关键中介的上下文中幽门螺旋杆菌感染。

    Helicobacter pylori-mediated suppression of claudin-7 is dependent on β-catenin. (A) MKN28 cells were transfected with a β-catenin reporter containing three tandem lymphoid enhancer factor/T-cell factor (LEF/TCF)-binding motifs upstream of the luciferase gene (Topflash) or a control construct containing mutant LEF/TCF sites (Fopflash), and then treated with 10 mM LiCl. Luciferase activity, reflecting β–catenin activation, was quantified. (B and C) MKN28 cells were incubated with LiCl for 24 h, and expression levels of claudin-7 or glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) were quantified by western blotting. (B) Representative western blot for claudin-7 and GAPDH in MKN28 cells in the presence or absence of LiCl. (C) Densitometric analysis demonstrating decreased expression of claudin-7 in LiCl-treated cells. (D and E) MKN28 cells were transfected with control or β-catenin-specific siRNA and levels of claudin-7 or GAPDH were quantified by western blotting. (D) Representative western blot for claudin-7 and GAPDH in MKN28 cells in the presence of non-targeting (NT) or β-catenin-specific siRNA, with or without H. pylori strain 60910. (E) Densitometric analysis demonstrating that decreased expression of claudin-7 in H. pylori-infected cells is abolished in the presence of β-catenin-specific siRNA. Data are expressed as means±SEM, n=3 independent replicates.
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图4
    图4

    幽门螺杆菌介导的抑制claudin-7取决于β-catenin。(A) MKN28细胞转染β-catenin记者包含三个串联淋巴增强因子/ t细胞因子(LEF / TCF)结合主题上游的荧光素酶基因(Topflash)或控制构建含突变LEF / TCF网站(Fopflash),然后接受10毫米氯化锂。荧光素酶活性,反映β-catenin激活,是量化。(B和C) MKN28细胞与氯化锂孵化24 h,和表达水平claudin-7或3 -磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)被西方墨点法量化。(B)代表免疫印迹claudin-7和GAPDH MKN28细胞氯化锂的存在与否。(C)光密度分析表明claudin-7 LiCl-treated细胞的表达下降。(D和E) MKN28细胞转染和控制或β-catenin-specific siRNA claudin-7水平或GAPDH被西方墨点法量化。(D)代表免疫印迹claudin-7和GAPDH MKN28细胞的存在新(NT)或β-catenin-specific核,有或没有幽门螺旋杆菌60910菌株。(E)光密度分析表明claudin-7表达降低幽门螺旋杆菌来华的细胞是存在β-catenin-specific siRNA废除。数据表示为±SEM, n = 3独立复制。

    幽门螺旋杆菌全身抑制claudin-7是由蜗牛

    蜗牛是一种转录因子,负调节claudin-7表达在人类癌症18;因此,我们下一个决定幽门螺旋杆菌的差别全身对这些claudin-7在胃上皮细胞由蜗牛。在MKN28细胞cocultured幽门螺旋杆菌,蜗牛mRNA表达显著增加与细胞无毒性(图5),它是伴随着全细胞溶解产物(蛋白质含量增加图5B、C)。这些结果被证实使用免疫荧光,这证明了蜗牛的原子核的积累幽门螺旋杆菌来华的细胞(图5D),明确联系幽门螺旋杆菌全身的激活claudin-7蜗牛和减少表达式,使用了核。减少表达claudin-7感染幽门螺旋杆菌废除了蜗牛击倒,这表明激活的蜗牛吗幽门螺旋杆菌减少claudin-7表达式(图5E、F)。

    Helicobacter pylori-induced suppression of claudin-7 is mediated by snail. MKN28 cells were cocultured with H. pylori strain 60 190 and levels of snail mRNA (A), and snail total protein (B and C) were quantified. (A) Real-time RT-PCR was performed on isolated RNA and quantified. (B) Representative western blot for snail and glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) in MKN28 cells in the presence or absence of H. pylori. (C) Densitometric analysis demonstrating increased expression of snail in H. pylori-infected cells. (D) Immunofluorescence for snail (green) in uninfected MKN28 cells or MKN28 cells infected with H. pylori strain 7.13. Nuclei are labelled with Hoechst (blue). (E and F) Control non-targeting (NT) siRNA or siRNA targeting snail was transfected in MKN28 cells followed by infection with or without H. pylori. Levels of claudin-7 expression were then determined by western blotting. (E) Representative western blot for claudin-7 and GAPDH in MKN28 cells in the presence or absence of non-targeting or snail-specific siRNA. (F) Densitometric analysis demonstrating that decreased expression of claudin-7 in H. pylori-infected cells is abolished in the presence of snail-specific siRNA, n=3 independent replicates.
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图5
    图5

    幽门螺杆菌全身抑制claudin-7是由蜗牛。MKN28细胞cocultured幽门螺旋杆菌应变60 190的水平蜗牛信使rna (A),蜗牛总蛋白(B和C)量化。(一)实时rt - pcr进行孤立的RNA和量化。(B)代表免疫印迹的蜗牛和3 -磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH) MKN28细胞的存在与否幽门螺旋杆菌。(C)光密度分析表明增加表达的蜗牛幽门螺旋杆菌来华的细胞。蜗牛(D)免疫荧光(绿色)的MKN28细胞无毒性或MKN28细胞感染幽门螺旋杆菌7.13应变。核与赫斯特标签(蓝色)。(E和F)控制的新(NT)核或阻止针对蜗牛在MKN28细胞转染感染或没有紧随其后幽门螺旋杆菌。claudin-7表达水平取决于西方墨点法。免疫印迹(E)代表claudin-7和GAPDH MKN28细胞的新或snail-specific siRNA的存在与否。(F)光密度分析表明claudin-7表达降低幽门螺旋杆菌来华的细胞存在snail-specific siRNA废除,n = 3独立复制。

    幽门螺旋杆菌感染导致claudin-7降低,增加蜗牛表达在人类胃上皮细胞体内gastroids

    扩展我们的结果的自然生态位幽门螺旋杆菌,我们检查claudin-7表达在人类胃活检标本通过流式细胞术(图6选择A, B)上皮细胞使用pan-cytokeratin富含抗体和claudin-7表达在上皮量化的人口。整合gastroid和细胞培养数据,表达claudin-7减少在胃上皮细胞收获从被感染的人,相比与未感染胃活组织检查(图6A、B)。表明幽门螺旋杆菌蜗牛蜗牛也会增加体外表达,我们量化表达在人类胃活检标本。类似于我们的体外结果,蜗牛表达增加胃上皮细胞从人感染幽门螺旋杆菌与未受感染的人相比图6C, D, E)。最后,我们回到我们的小说gastroid模型并分析了蜗牛在感染和表达式幽门螺旋杆菌来华gastroids (图6F)。整合与我们体内发现,蜗牛表达显著增加上皮细胞的细胞质中幽门螺旋杆菌相比之下,来华的gastroids无毒性(图6F)。这些结果表明,改变claudin-7和蜗牛可能导致的能力幽门螺旋杆菌诱导损伤在人类胃利基。

    Helicobacter pylori infection leads to decreased claudin-7 and increased snail expression in human gastric epithelial cells in vivo and in gastroids. (A and B) Claudin-7 expression in human gastric epithelial cells isolated from gastric biopsies from uninfected and H. pylori-infected subjects was assessed by flow cytometry analysis. (A) Representative histogram for claudin-7 in uninfected and H. pylori-infected cells. (B) Levels of claudin-7 protein expressed as MFU determined by flow cytometry, were compared between uninfected and H. pylori-infected samples. (C–E) Snail expression in human gastric tissue was assessed by immunostaining in uninfected (C), and H. pylori-infected subjects (D) at 200× magnification. (E) A single pathologist, blinded to treatment groups, assessed and scored snail immunostaining. Snail IHC score was determined by assessing the percentage of snail epithelial cells multiplied by the intensity of epithelial snail staining (1–3) in both the cytoplasm and nucleus of gastric epithelial cells. Data are expressed as means+SEM. (F) Representative staining for snail (green) in uninfected or H. pylori-infected gastroids; nuclei are labelled with Hoechst (blue). APC, adenomatous polyposis coli; MFU, mean fluorescence units; IF, immunofluorescence; IHC, immunohistochemistry.
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图6
    图6

    幽门螺杆菌感染导致claudin-7降低,增加蜗牛表达在人类胃上皮细胞体内gastroids。(A和B) Claudin-7表达在人类胃上皮细胞分离从胃活检未感染的关系,研究对象被流式细胞术分析评估。(一)直方图claudin-7感染和代表幽门螺旋杆菌来华的细胞。(B) claudin-7蛋白质水平表达为MFU由流式细胞术,感染和之间的比较幽门螺旋杆菌来华的样本。(汉英)蜗牛表达在人类胃组织进行免疫染色的(C)、无毒性和关系科目(D)为200×放大。(E)一个病理学家,盲法治疗组、评估,取得了蜗牛疣状。蜗牛包含IHC得分是由评估蜗牛上皮细胞的百分比乘以上皮蜗牛染色强度(1 - 3)在胃上皮细胞的细胞质和细胞核。数据表示为+ SEM手段。染色(F)代表在未感染或蜗牛(绿色)幽门螺旋杆菌gastroids来华的;核与赫斯特标签(蓝色)。APC,腺瘤息肉病杆菌;MFU,意味着荧光单位;如果,免疫荧光;包含IHC,免疫组织化学。

    讨论

    胃腺癌是癌症死亡的第三大主因,000年大约有660新发病例由于胃癌/年幽门螺旋杆菌,使这个病原体最常见的传染病与恶性肿瘤有关。28然而,只有一个百分比的殖民开发肿瘤,和增强的风险有关幽门螺旋杆菌应变的差异、主机响应由遗传多样性和/或特定的宿主之间的相互作用,微生物和环境因素。29日通用测试和治疗策略幽门螺旋杆菌不可行由于感染患病率较高以及费用和副作用的抗生素治疗。2,30.此外,证据表明,某些菌株是逆相关运输食管腺癌和过敏性疾病2,30.,31日;因此,调查针对的理解机制,调节恶性进展需要靶向治疗的研究所课程。

    β-catenin是广泛表达宿主细胞内蛋白质执行不同的角色。我们的实验室和其他团体曾证明CagA激活phosphoinositide-3 PI3激酶,12抑制GSK-3ß的激酶活性,13导致抑制β-catenin退化;细胞内CagA也扰乱了E-cadherin-β-catenin复合物。9这些事件导致β-catenin核积累,导致与致癌作用的基因的转录。增加β-catenin表达以及在APC突变出现在胃腺癌标本,32和核β-catenin积累是发育不良的增加胃内腺瘤和焦点,33-36表明异常激活β-catenin先于胃癌的发展。由于β-catenin是过表达幽门螺旋杆菌相关的癌变前的和恶性病变,和调节基因的转录与肿瘤起始,β-catenin很可能是一个核心组件上皮反应的调节幽门螺旋杆菌这可能直接促进tumourigenesis。

    中断apical-junctional复合物也与致癌作用和一组紧密连接成分claudins调解信息粘连。Claudins发挥关键作用在调节paracellular渗透率和维持细胞极性和异常的具体Claudins一直与癌症有关的函数。14Claudin-7是局部的顶端紧密连接和各种组织包括肠上皮的基底膜。14基因缺陷的小鼠claudin-7导致增加肠道细胞增殖和炎症,17和claudin-7损失是负的乳房癌和鳞状细胞癌的预后因素。14,37claudin-7表达式的规定,然而,不完全定义。一项研究表明,招聘claudin-7紧密连接在鼠标上皮细胞是由EpCAM监管,38而另一份报告显示,迫使表达式的蜗牛会导致减少claudin-7表达式。18我们目前发现扩展这些结果表明抑制claudin-7也受β-catenin,由CagA激活,这些结果反映在人体胃组织收获幽门螺旋杆菌来华的科目。

    当前工作的另一个独特的方面是,它作为模型,建立了3 d gastroids概括事件发生在更紧密地合作幽门螺旋杆菌来华的胃。27我们的研究结果表明,gastroids有能力扩展到单层上皮球体结构,由粘液细胞、壁细胞,G-cells,粘液颈细胞,产生ECL细胞。这种上皮球体结构(gastroid)围绕一个密封腔中部,凋亡细胞被挤压,概括事件发生在胃粘膜。因此,gastroids可以被描述为具有自组织分化发育成轴的能力。我们成功地感染gastroids幽门螺旋杆菌通过显微镜下注射,导致mislocalisation occludin的紧密连接,响应我们先前在相同幽门螺旋杆菌来华MKN28胃上皮细胞并感染胃上皮细胞体内。16我们也报告蜗牛表达增加幽门螺旋杆菌来华MKN28胃上皮细胞,从人体胃上皮,gastroids。蜗牛可以摆动细胞核和细胞质之间;然而,先前的报道表明,蜗牛主要是局部细胞质在人类胃腺癌标本。39在gastroids,类似于人类标本,我们已经表明幽门螺旋杆菌蜗牛的增加表达增加,这主要是局部的细胞质。此外,我们以前在沙鼠模型,以及感染人体,β-catenin反应转移到细胞核cag艾滋病患者幽门螺旋杆菌菌株;8,13这些发现符合我们当前的结果在gastroidsβ-catenin感染后转移到细胞核cag艾滋病患者幽门螺旋杆菌。总的来说,我们的研究结果表明幽门螺旋杆菌由gastroids有效地承认,这个系统可能是作为一个发现模型和验证结果在人类胃粘膜。

    Gastroids代表一个重要的和新颖的模型研究微生物引起的疾病。大多数关注的体外模型幽门螺旋杆菌发病机制使用多个通道细胞株,其中许多包含突变和来自癌症标本。体内模型幽门螺旋杆菌感染最常使用老鼠或沙鼠;然而,这些模型是昂贵的,可以耗费时间生成。孤立的胃腺是一个替代模型的研究幽门螺旋杆菌上皮细胞的相互作用22;然而,这个模型有局限性,包括寿命较短(约7天)与gastroids能存活长达9个月。27此外,幽门螺旋杆菌不诱导胃腺隔离模型中的扩散,这是不同于hyperproliferative反应中发展幽门螺旋杆菌来华的胃粘膜和gastroids。Gastroids还有效桥体外和体内模型通过提供一个文化系统,很容易产生非转换胃上皮和Gastroids包含的主要细胞类型中找到胃腺体。虽然我们用gastroids模型幽门螺旋杆菌与胃上皮细胞的相互作用,该系统可以轻易地适应研究其他host-microbial交互。此外,我们预计,这部小说感染模型将促进更深入的研究胃癌的分子介质所发起的幽门螺旋杆菌。

    使用这部小说系统,我们表明,野生型幽门螺旋杆菌,但不是一个同基因的cagA−变异显著增加扩散,这是依赖β-catenin信号,支持一个模型CagA-drivenβ-catenin激活导致增强细胞生产。这些发现符合我们之前的数据在两个MKN28胃上皮细胞和沙鼠模型证明幽门螺旋杆菌增加扩散的cag通过激活β-catenin端依赖的方式发生。13使用gastroids还透露新发现claudin-7表达减少感染瀑样,这引导机械的体外研究暗示β-catenin claudin-7中从没被监管机构。感兴趣的,一项研究使用不同的小鼠模型,hypergastrinaemic INS-GAS老鼠,表明慢性感染幽门螺杆菌物种,H猫属,导致增加胃上皮内6个月postchallenge claudin-7表达式。40然而,H猫属缺乏cag拜,41啮齿动物模型中强调需要进行长期研究的挑战幽门螺杆菌港口功能的菌株cag岛来解剖的集体效应幽门螺旋杆菌在体内claudin-7表达式。

    除了主机和细菌组成,环境条件也可以修改的风险幽门螺旋杆菌全身的致癌作用,例如,高盐饮食,已被临床流行病学与胃癌率增加,42加快发展幽门螺旋杆菌在啮齿动物全身的胃癌。43缺铁还与胃癌的风险增加有关。44,45幽门螺旋杆菌感染导致缺铁,46和铁损耗可以增强细菌病原体的潜在毒性。47-50我们已经表明,CagA,β-catenin所需的激活,8,9,13促进幽门螺旋杆菌通过从两极分化上皮细胞铁收购殖民51,铁损耗增加组装的cagIV型分泌系统和癌症。52Gastroids提供巨大的潜力作为一个创新的系统解剖这些复杂的关系,因为他们可以受到不同浓度的膳食盐或铁等元素,可以感染野生型或同基因的突变幽门螺旋杆菌从野生型菌株,可以生成或基因缺陷小鼠。

    在结论中,我们使用一种新颖的体外三维显示系统幽门螺旋杆菌诱导扩散,这是依赖于幽门螺旋杆菌毒力因子CagAβ-catenin。此外,幽门螺旋杆菌改变的表达claudin-7在人体胃组织和胃上皮细胞通过信号通路包括β-catenin和蜗牛。这样的调查不仅会提高我们的理解幽门螺旋杆菌全身的癌症,但还将提供机械的见解其他感染相关性恶性肿瘤的上下文中出现的炎症。

    引用

    1. ↵
      1. Wroblewski勒,
      2. 偷看RM小。,
      3. 威尔逊KT
      。幽门螺杆菌胃癌:调节疾病风险因素。中国Microbiol牧师2010年;23:713年- - - - - -39。
      OpenUrl 文摘/免费的全文
    2. ↵
      1. 波尔克DB,
      2. 偷看RM小。
      。幽门螺杆菌:胃癌和超越。Nat牧师癌症2010年;10:403年- - - - - -14。
      OpenUrl CrossRef PubMed 网络的科学
    3. ↵
      1. Censini年代,
      2. 兰格C,
      3. 香Z,
      4. 等
      。cag致病性岛幽门螺杆菌、编码类型I -特定的和疾病有关的毒性因素。《美国国家科学院刊1996年;93年:14648年- - - - - -53。
      OpenUrl 文摘/免费的全文
    4. ↵
      1. Selbach米,
      2. Moese年代,
      3. 豪克CR,
      4. 等
      。Src的激酶幽门螺杆菌CagA蛋白质在体外和在活的有机体内。J临床生物化学2002年;277年:6775年- - - - - -8。
      OpenUrl 文摘/免费的全文
    5. ↵
      1. Backert年代,
      2. Moese年代,
      3. Selbach米,
      4. 等
      。972的酪氨酸的磷酸化幽门螺杆菌CagA蛋白质对感应至关重要的散射在胃上皮细胞表型。摩尔Microbiol2001年;42:631年- - - - - -44。
      OpenUrl CrossRef PubMed 网络的科学
    6. ↵
      1. tam我,
      2. 布兰德年代,
      3. HartigR,
      4. 等
      。Abl的激活幽门螺杆菌:一个新的CagA激酶和宿主细胞散射的重要中介。胃肠病学2007年;132年:1309年- - - - - -19。
      OpenUrl CrossRef PubMed 网络的科学
    7. ↵
      1. 穆勒D,
      2. TegtmeyerN,
      3. 布兰德年代,
      4. 等
      。c - src和c-Abl激酶CagA效应的控制分级的磷酸化和功能蛋白质在西方和东亚幽门螺杆菌菌株。中国投资2012年;122年:1553年- - - - - -66年。
      OpenUrl CrossRef PubMed 网络的科学
    8. ↵
      1. 弗朗哥在,
      2. 以色列达,
      3. 华盛顿可,
      4. 等
      。激活b-catenin致癌幽门螺杆菌。《美国国家科学院刊2005年;102年:10646年- - - - - -51。
      OpenUrl 文摘/免费的全文
    9. ↵
      1. Murata-KamiyaN,
      2. KurashimaY,
      3. TeishikataY,
      4. 等
      。幽门螺杆菌CagA与钙粘蛋白和放松β-连环蛋白信号交互促进肠道在胃上皮细胞分化转移。致癌基因2007年;26:4617年- - - - - -26。
      OpenUrl CrossRef PubMed 网络的科学
    10. ↵
      1. Saadat我,
      2. 东H,
      3. ObuseC,
      4. 等
      。幽门螺杆菌CagA目标PAR1 /马克激酶破坏上皮细胞极性。自然2007年;447年:330年- - - - - -3。
      OpenUrl CrossRef PubMed 网络的科学
    11. ↵
      1. TolwinskiNS,
      2. WieschausE
      。反思WNT信号。趋势麝猫2004年;20.:177年- - - - - -81年。
      OpenUrl CrossRef PubMed 网络的科学
    12. ↵
      1. 伊助教,
      2. 弗雷先生,
      3. 杨ydF4y2BaF,
      4. 等
      。幽门螺杆菌调节细胞迁移和激活细胞凋亡的磷脂酰肌醇3-kinase信号。J感染说2009年;199年:641年- - - - - -51。
      OpenUrl 文摘/免费的全文
    13. ↵
      1. 伊助教,
      2. Wroblewski勒,
      3. 王D,
      4. 等
      。β-连环蛋白和p120调解PPARdelta-dependent扩散引起的幽门螺杆菌在人类和啮齿动物上皮细胞。胃肠病学2011年;141年:553年- - - - - -64年。
      OpenUrl CrossRef PubMed 网络的科学
    14. ↵
      1. 丁l,
      2. 陆Z,
      3. 陆问,
      4. 等
      。claudin家族的蛋白质在人类恶性肿瘤:临床的视角。癌症等物2013年;5:367年- - - - - -75年。
      OpenUrl PubMed
    15. ↵
      1. Amieva先生,
      2. VogelmannR,
      3. Covacci一个,
      4. 等
      。破坏上皮apical-junctional复杂幽门螺杆菌CagA。科学2003年;300年:1430年- - - - - -4。
      OpenUrl 文摘/免费的全文
    16. ↵
      1. Wroblewski勒,
      2. 沈l,
      3. 奥格登年代,
      4. 等
      。幽门螺杆菌胃上皮紧密连接的失调urease-mediated肌凝蛋白II激活。胃肠病学2009年;136年:236年- - - - - -46。
      OpenUrl CrossRef PubMed 网络的科学
    17. ↵
      1. 丁l,
      2. 陆Z,
      3. 工头O,
      4. 等
      。粘膜的炎症和破坏建筑claudin-7-deficient老鼠。胃肠病学2012年;142年:305年- - - - - -15。
      OpenUrl CrossRef PubMed 网络的科学
    18. ↵
      1. CarrozzinoF,
      2. SoulieP,
      3. 休伯D,
      4. 等
      。诱导表达的蜗牛有选择地增加paracellular离子渗透率和不同调节紧密连接蛋白。是杂志2005年;289年:C1002- - - - - -14。
      OpenUrl
    19. ↵
      1. IkenouchiJ,
      2. 松田米,
      3. Furuse米,
      4. 等
      。调节紧密连接在epithelium-mesenchyme转型:基因表达的直接压迫claudins / occludin的蜗牛。J细胞科学2003年;116年(Pt 10):1959年- - - - - -67年。
      OpenUrl 文摘/免费的全文
    20. ↵
      1. 阴Y,
      2. Grabowska我,
      3. 克拉克巴勒斯坦权力机构,
      4. 等
      。幽门螺杆菌强化上皮间充质转变胃癌:metalloproteinase-7可溶性HB-EGF链接、胃泌激素和矩阵。肠道2010年;59:1037年- - - - - -45。
      OpenUrl 文摘/免费的全文
    21. ↵
      血吸虫病、肝吸虫和幽门螺杆菌。IARC的评价工作组对人类致癌风险。里昂,1994年6月7 - 14。IARC Monogr Eval Carcinog风险的嗡嗡声1994年;61年:1- - - - - -241年。
      OpenUrl PubMed
    22. ↵
      1. Wroblewski勒,
      2. 高贵的PJ,
      3. Pagliocca一个,
      4. 等
      。刺激MMP-7 (matrilysin)幽门螺杆菌在人类胃上皮细胞:在上皮细胞迁移中的作用。J细胞科学2003年;116年(Pt 14):3017年- - - - - -26。
      OpenUrl 文摘/免费的全文
    23. ↵
      1. 偷看RM小。,
      2. 巴索乔丹,
      3. 梅斯DJ,
      4. 等
      。幽门螺杆菌毒株特异性基因型和胃上皮细胞周期的调制。癌症Res1999年;59:6124年- - - - - -31日。
      OpenUrl 文摘/免费的全文
    24. ↵
      1. 查图尔维迪R,
      2. Asim米,
      3. Romero-GalloJ,
      4. 等
      。精胺氧化酶介导胃癌风险幽门螺杆菌CagA。胃肠病学2011年;141年:1696年- - - - - -708年。e1-2。
      OpenUrl CrossRef PubMed 网络的科学
    25. ↵
      1. 能登JM,
      2. KhizanishviliT,
      3. 查图尔维迪R,
      4. 等
      。幽门螺杆菌促进Kruppel-like因子的表达,致癌作用的中介,在体外和在活的有机体内。《公共科学图书馆•综合》2013年;8:e54344。
      OpenUrl CrossRef PubMed
    26. ↵
      1. PiazueloMB,
      2. Haque年代,
      3. 戴尔嘎多一个,
      4. 等
      。表型差异食管和胃肠上皮化生。国防部分册2004年;17:62年- - - - - -74年。
      OpenUrl CrossRef PubMed
    27. ↵
      1. 巴克N,
      2. Huch米,
      3. KujalaP,
      4. 等
      。Lgr5就(+ ve)干细胞自我更新的胃,在体外建立长期胃单位。细胞干细胞2010年;6:25- - - - - -36。
      OpenUrl CrossRef PubMed 网络的科学
    28. ↵
      1. 德·马特尔C,
      2. FerlayJ,
      3. Franceschi年代,
      4. 等
      。2008年全球癌症负担归因于感染:回顾和综合分析。《柳叶刀》杂志2012年;13:607年- - - - - -15。
      OpenUrl CrossRef PubMed
    29. ↵
      1. 偷看RM小。,
      2. 菲斯克C,
      3. 威尔逊KT
      。先天免疫的作用幽门螺杆菌全身的胃恶性肿瘤。杂志牧师2010年;90年:831年- - - - - -58。
      OpenUrl 文摘/免费的全文
    30. ↵
      1. 偷看RM小。,
      2. 巴索乔丹
      。幽门螺杆菌和胃肠道腺癌。Nat牧师癌症2002年;2:28- - - - - -37。
      OpenUrl CrossRef PubMed 网络的科学
    31. ↵
      1. 程ydF4y2BaY,
      2. 巴索乔丹
      。逆协会幽门螺杆菌与哮喘和过敏。地中海拱形实习生2007年;167年:821年- - - - - -7。
      OpenUrl CrossRef PubMed 网络的科学
    32. ↵
      1. Tsukashita年代,
      2. KushimaR,
      3. Bamba米,
      4. 等
      。β-连环蛋白表达intramucosal胃肿瘤病变。比较分析腺瘤/发育不良、腺癌、印戒细胞癌。肿瘤学2003年;64年:251年- - - - - -8。
      OpenUrl CrossRef PubMed 网络的科学
    33. ↵
      1. 艾伯特国会议员,
      2. 范G,
      3. Kahmann年代,
      4. 等
      。增加β-连环蛋白mRNA水平和APC和β-连环蛋白基因的突变改变存在于肠胃型胃癌。致癌作用2002年;23:87年- - - - - -91年。
      OpenUrl 文摘/免费的全文
    34. ↵
      1. 克莱门茨WM,
      2. 王J,
      3. Sarnaik一个,
      4. 等
      。β-连环蛋白基因突变是一个频繁导致胃癌Wnt通路的激活。癌症Res2002年;62年:3503年- - - - - -6。
      OpenUrl 文摘/免费的全文
    35. ↵
      1. 金海关,
      2. 在香港埃克,
      3. 公园SY,
      4. 等
      。β-连环蛋白和钙粘蛋白的表达adenoma-carcinoma胃的序列。抗癌物2003年;23:2863年- - - - - -8。
      OpenUrl PubMed
    36. ↵
      1. 程XX,
      2. 太阳Y,
      3. 程ydF4y2BaXY,
      4. 等
      。频繁translocalizationβ-连环蛋白在胃癌症和肿瘤进展的相关性。肿瘤防治杂志代表2004年;11:1201年- - - - - -7。
      OpenUrl PubMed
    37. ↵
      1. 吉泽章K,
      2. Nozaki年代,
      3. 加藤一个,
      4. 等
      。claudin-7损失是负的预后因子在口腔鳞状细胞癌浸润和转移。肿瘤防治杂志代表2013年;29日:445年- - - - - -50。
      OpenUrl PubMed
    38. ↵
      1. LeiZ,
      2. MaedaT,
      3. (尽管)一个,
      4. 等
      。EpCAM有助于形成功能在肠上皮细胞紧密连接的招聘claudin蛋白质。开发生物2012年;371年:136年- - - - - -45。
      OpenUrl CrossRef PubMed
    39. ↵
      1. 他H,
      2. 程ydF4y2BaW,
      3. 王X,
      4. 等
      。蜗牛是一个独立的发展和患者生存预后预测胃癌。癌症科学2012年;103年:1296年- - - - - -303年。
      OpenUrl CrossRef PubMed
    40. ↵
      1. Takaishi年代,
      2. 王TC
      。基因表达分析的小鼠模型幽门螺杆菌,诱导胃癌。癌症科学2007年;98年:284年- - - - - -93年。
      OpenUrl CrossRef PubMed
    41. ↵
      1. 香Z,
      2. Censini年代,
      3. BayeliPF,
      4. 等
      。分析表达CagA和VacA 43株毒力因素幽门螺杆菌显示,临床分离株主要可分为两种类型,CagA不是必要的空泡细胞毒素的表达式。感染Immun1995年;63年:94年- - - - - -8。
      OpenUrl 文摘/免费的全文
    42. ↵
      1. 封面TL,
      2. 偷看RM小。
      。饮食,微生物毒性和幽门螺杆菌全身的胃癌。肠道微生物2013年;4:482年- - - - - -93年。
      OpenUrl CrossRef PubMed
    43. ↵
      1. 盖迪晶澳,
      2. 雷丁约,
      3. LohJT,
      4. 等
      。高盐饮食摄入加剧幽门螺杆菌pylori-induced胃致癌作用。感染Immun2013年;81年:2258年- - - - - -67年。
      OpenUrl 文摘/免费的全文
    44. ↵
      1. 野村证券一个,
      2. ChyouPH值,
      3. StemmermannGN
      。协会的血清铁蛋白水平与胃癌的风险。癌症增加生物标记:1992年;1:547年- - - - - -50。
      OpenUrl 文摘/免费的全文
    45. ↵
      1. 哈里森勒,
      2. 张ZF,
      3. Karpeh女士,
      4. 等
      。饮食因素的作用在肠道和扩散胃腺癌的组织学亚型:美国的病例对照研究。癌症1997年;80年:1021年- - - - - -8。
      OpenUrl CrossRef PubMed 网络的科学
    46. ↵
      1. 元W,
      2. 李Y,
      3. 杨K,
      4. 等
      。缺铁性贫血的幽门螺杆菌感染:随机对照试验的荟萃分析。Scand杂志2010年;45:665年- - - - - -76年。
      OpenUrl CrossRef PubMed
    47. ↵
      1. 范Heyningen我们,
      2. 格莱斯顿全科医生
      。的神经毒素志贺氏杆菌shigae。三世。铁的生产毒素的效果。Br中华病理学实验1953年;34:221年- - - - - -9。
      OpenUrl PubMed
    48. ↵
      1. Calderwood某人,
      2. MekalanosJJ
      。铁的监管类志贺毒素表达大肠杆菌是由毛皮轨迹。J Bacteriol1987年;169年:4759年- - - - - -64年。
      OpenUrl 文摘/免费的全文
    49. ↵
      1. 大SP,
      2. 约翰AE,
      3. NoothetiP,
      4. 等
      。协同调节铁的含铁细胞和白喉毒素的生产白喉杆菌。活细胞Pathog1990年;9:267年- - - - - -73年。
      OpenUrl CrossRef PubMed 网络的科学
    50. ↵
      1. 比约恩乔丹,
      2. Iglewski黑洞,
      3. 艾夫斯SK,
      4. 等
      。铁对收益率的影响文化的外毒素铜绿假单胞菌pa - 103。感染Immun1978年;19:785年- - - - - -91年。
      OpenUrl 文摘/免费的全文
    51. ↵
      1. 棕褐色年代,
      2. 能登JM,
      3. Romero-GalloJ,
      4. 等
      。幽门螺杆菌扰乱铁贩卖上皮生长在细胞表面。公共科学图书馆Pathog2011年;7:e1002050。
      OpenUrl CrossRef PubMed
    52. ↵
      1. 能登JM,
      2. 盖迪晶澳,
      3. 李司法院,
      4. 等
      。缺铁加速幽门螺杆菌全身的致癌作用在啮齿类动物和人类。中国投资2013年;123年:479年- - - - - -92年。
      OpenUrl CrossRef PubMed 网络的科学

    补充材料

    • 补充数据

      仅这个web文件已经由英国医学杂志出版集团从一个电子文件提供的作者(年代)和没有对内容进行编辑。

      在这个数据补充文件:

    脚注

    • 参与者:所有的作者包括在这个作者的手稿完成标准如下:卢:研究概念和设计,采集的数据,分析和解释数据,起草的手稿,统计分析。MBP、RC、广告,JMN:采集的数据。戴女士、EA、射频,YZ,嗯,NS, PC, KTW:物质的支持,以及重要的知识内容的修订手稿。RMP:研究概念和设计、分析和解释数据,起草的手稿,关键的重要知识内容的修订手稿,统计分析,获得资金,监督学习。

    • 资金支持部分由美国国立卫生研究院的资助CA 153539 (JMN), 007324 (RC), CA 028842 (KTW, PC), DK 053620 (KTW), 58587年DK, CA 77955 CA 116087和DK 058404 (RMP)。

    • 相互竞争的利益一个也没有。

    • 病人的同意获得的。

    • 伦理批准机构审查委员会。

    • 出处和同行评议不是委托;外部同行评议。