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病例报告
新型阳离子胰蛋白酶原(PRSS1) N29T和R122C突变导致常染色体显性遗传性胰腺炎
免费的
  1. R Pfutzer1，
  2. E迈尔斯2，
  3. 年代Applebaum-Shapiro1，
  4. R雀3.，
  5. 我埃利斯4，
  6. J Neoptolemos4，
  7. J A康德5，
  8. D·C·惠特科姆6
  1. 1美国宾夕法尼亚州匹兹堡市匹兹堡大学医学系
  2. 2美国宾夕法尼亚州匹兹堡大学基因组科学中心
  3. 3.美国匹兹堡大学人类遗传学系和基因组科学中心
  4. 4利物浦大学外科，英国利物浦
  5. 5美国宾夕法尼亚州匹兹堡市匹兹堡大学病理学系
  6. 6美国宾夕法尼亚州匹兹堡市匹兹堡大学医学系、人类遗传学系、细胞生物学和生理学系以及基因组科学中心，以及弗吉尼亚州匹兹堡医疗保健系统消化病学部
  1. 通信:
    D·C·惠特科姆博士，匹兹堡大学，571斯凯夫大厅，3550露台街，匹兹堡，PA 15101;
    惠特科姆在}{pitt.edu

摘要

遗传性胰腺炎(HP)通常由阳离子胰蛋白酶原(PRSS1)基因突变引起，尤其是R122H或N29I。我们对没有这些常见突变的先证者家族中的PRSS1基因进行了测序。新的R122C和N29T突变在常染色体显性分离的独立家族中被检测到。与R122H突变一样，R122C突变消除了精氨酸自溶位点。N29T突变也可能增强胰腺内胰蛋白酶活性，这已在体外实验中得到证实。这些新突变的鉴定需要特别注意，因为常用的检测方法可能会失败。

  • N29T突变
  • R122C突变
  • 胰腺炎
  • HP，遗传性胰腺炎
  • RFLP，限制片段长度多态性
  • PCR，聚合酶链式反应

http://dx.doi.org/10.1136/gut.50.2.271

数据来自Altmetric.com

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    遗传性胰腺炎(HP)是一种高外显率的常染色体显性疾病，以急性胰腺炎多发、慢性胰腺炎发展、胰腺癌高发为特征。1，2大约60%的病例是由PRSS1、R122H和N29I突变引起的。3.4其他PRSS1突变(A16V, D22G, K23R和−28delTCC)是罕见的。在此，我们报告了两种引起典型HP表型的PRSS1突变。

    材料与方法

    招募、同意、咨询、DNA提取和外显子特异性测序如前所述进行。3.5对每个HP亲系(n=209)先证者进行序列分析AflIII限制性内切酶酶切PRSS1外显子33.如果阴性，则外显子2测序，如果阴性，则外显子1、3、4和5的DNA测序。

    RFLP分析

    利用该方法进行了一种新的密码子29限制性片段长度多态性(RFLP)分析Bst4CI(SibEnzyme Ltd, novosibirsk - 117,630117，俄罗斯)。野生型聚合酶链反应(PCR)产物有三个识别位点Bst4CI4种消化产物分别为415、160、151和79 bp。131945位点的突变导致一个ACNGT识别位点的丢失，因此突变等位基因有三个消化产物，分别为415、230和151 bp。限制性内切酶切取5 μl PCR产物，3单位Bst4CI、0.2 μl牛血清白蛋白、2 μlBst4CI缓冲液在20 μl反应。在65°C下消化2小时。碎片在10%的聚丙烯酰胺凝胶上分离。

    结果

    1号血统

    25岁的指标患者5岁开始出现症状，18岁时被诊断为胰腺炎(图1A)。她的祖母(已故)在34岁时被诊断出患有慢性胰腺炎，她的两个女儿中的一个在5岁时患有胰腺炎。133282位C向T转变突变(Genbank编号U66061)导致R122C氨基酸取代。在父亲和有症状的女儿中检测到这种突变，但在58例PRSS1 R122H/N29I突变阴性的HP患者、66例家族性或特发性胰腺炎患者或130例健康对照组中未检测到这种突变。的AflIII消化未能检测到新的R122C突变。

    图1

    谱系显示胰腺炎的常染色体显性遗传模式。(A) R122C突变家系谱系。箭头指向下标情况。(B) N29T突变家族的谱系。箭头指向下标情况。

    2号血统

    23岁的先证者、他的父亲和祖父都有胰腺炎症状(图1B)。131945位点A到C的突变(Genbank编号U66061)导致N29T氨基酸取代。如上所述，这种突变在受影响的父亲中存在，而在其他组中不存在。Bst4CIdigest检测到N29T突变。

    讨论

    两个新的突变改变了“热点”密码子29和122，其中先前发现了与常染色体显性遗传模式相关的功能突变。Sahin-Toth最近在密码子29(即N29I和N29T)上表达了人类阳离子胰蛋白酶突变体，并完成了将其与野生型人类阳离子胰蛋白酶原进行比较的体外研究。6在体外实验中，N29T突变显著增强了自活化，同时也降低了自溶。6R122位点对于启动人体自溶至关重要，任何氨基酸替换(R122H或R122C)都会消除该位点。最后，RFLP分析和类似的突变特异性筛查策略可能会遗漏一些明显易使某些个体患胰腺炎的重要突变。

    致谢

    本研究得到以下资助:NIH DK54709 (DCW)、NIH AA10855 (DCW)、VA Merit Review (DCW)、匹兹堡大学基因组科学中心和海德堡大学(RHP)奖学金。EUROPAC由英国西北癌症研究基金资助。技术援助由Lara Chensny和Paul Wood提供。我们还要感谢MMPSG和EUROPAC的所有成员。

    本文发表于2001年5月21日美国亚特兰大的消化疾病周(胃肠病学2001;120: A33)。

    参考文献

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      惠特科姆直流， gregory MC, Preston RA，et al。遗传性胰腺炎是由阳离子胰蛋白酶原基因突变引起的。Nat麝猫1996；14：1415。
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      Applebaum SE，康德JA，惠特科姆DC，et al。基因检测:咨询、实验室和监管问题以及遗传胰腺疾病多中心研究伦理研究的EUROPAC协议。北美医学诊所2000；82：577-88年。
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      Sahin-Toth米．人阳离子胰蛋白酶原。Asn-21在酶原激活中的作用及其在遗传性胰腺炎中的意义。生物化学2000；275：227505。
      OpenUrl 摘要/免费的全文

    补充材料

    • 新型阳离子胰蛋白酶原(PRSS1) N29T和R122C突变导致常染色体显性遗传性胰腺炎
      R Pfützer, E Myers, S Applebaum-Shapiro, R Finch, I Ellis, J Neoptolemos, J A Kant和D C Whitcomb
      肠道2002;: 271 - 272。

      这篇文章最初发表在二月号的肠道浓缩的形式。

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