条文本
PDF
文摘
背景和目的我们之前报道的影响幽门螺杆菌根除hyperammonaemia在肝硬化患者。然而,所扮演的角色H幽门作为一个事业hyperammonaemia是有争议的。我们开发了一个动物模型与肝硬化和调查的影响H幽门hyperammonaemia感染。
材料和方法五周大男性蒙古沙鼠接种口服肉汤培养的H幽门。四十八沙鼠被分成四组。沙鼠不接种H幽门喂养一个商业啮齿动物的饮食(a组)或胆碱缺乏饮食(C组),沙鼠接种H幽门被喂以商业啮齿动物的饮食(B组)或胆碱缺乏饮食(D组)。股静脉和门静脉的血氨水平测定30周后。
结果所有沙鼠喂胆碱缺乏饮食发展肝硬化与高脂肪的蜕变。D组的生存率明显低于其他群体。系统性和门户在D组血氨水平显著高于其他组。
结论H幽门在沙鼠感染诱发hyperammonaemia肝硬化。
- 幽门螺杆菌
- hyperammonaemia
- 肝硬化
- 长爪沙鼠
- 肝性脑病
- 胆碱缺乏饮食
来自Altmetric.com的统计
Hyperammonaemia肝硬化患者必须被迅速,因为它是致命的肝衰竭的并发症之一。它被认为是由大肠中的细菌尿素酶引起的。1自隔离幽门螺杆菌从人类的胃,2它通常成为承认H幽门感染与胃十二指肠疾病的发病机理。3,4H幽门也产生大量的氨气,是因为其强大的脲酶的活动,这是许多倍的脲酶阳性肠道菌。5 - 7以前,我们报告的影响H幽门根除在两个hyperammonaemia肝硬化患者。8随后,我们发现根除H幽门hyperammonaemia患者系统性氨水平降低与分散H幽门感染的腹部。9一些调查人员也报告说H幽门感染可能与hyperammonaemia与肝硬化。10,11然而,其他人员质疑与否的影响H幽门根除治疗hyperammonaemia将根除H幽门或非特异性抗生素疗法对氨生产肠道菌群的影响。12,13的作用H幽门是hyperammonaemia在肝硬化患者的一个原因是有争议的。没有报告的长期的影响H幽门感染动物和肝硬化。
最近,Hirayama等接种的技术报告H幽门蒙古沙鼠的胃。14,15在沙鼠模型中,H幽门可以在胃里形成长期稳定的殖民地,模仿人类的情况的疾病,如慢性活动性胃炎、肠上皮化生,胃溃疡和胃癌。14 - 16因此,使用这个模型,我们通过喂养诱导肝硬化饮食胆碱缺乏沙鼠和长期的影响调查H幽门感染hyperammonaemia与肝硬化有关。
方法
四十八特定病原体免费,5周大男性蒙古沙鼠(毫克/海;Seac Yoshitomi、日本福冈)被安置在一个空调房间生物危害的目的H幽门感染,12小时光/ 12小时黑暗周期。动物喂养商业啮齿动物的饮食(CE-2;克丽日本,日本东京)或胆碱缺乏饮食(CA-6;克丽日本),允许自由进入水。
H幽门(ATCC43504;美式文化集合)是生长在布鲁氏菌汤含有10% v / v马血清48小时37°C microaerobic条件下(15%股份有限公司2)和高湿度摇(120 rpm)。肉汤(500μl)的文化H幽门(4×108CFU /毫升)接种口服,使用针,沙鼠已经禁食后24小时。
四十八沙鼠被分成四组每组(12)。沙鼠不接种H幽门喂养一个商业啮齿动物的饮食(a组)或胆碱缺乏饮食(C组),沙鼠接种H幽门被喂以商业啮齿动物的饮食(B组)或胆碱缺乏饮食(D组)。沙鼠都是观察30周调查生存。之后,六沙鼠每组A, B, C和D组的五个幸存的沙鼠麻醉下牺牲了pentobarbiturate氨水平的考试。
血液(50μl)是经右股静脉和门静脉,和血氨水平量化使用Amicheckmeter (aa - 4120;京都议定书第一核电站Kagaku,京都,日本),只需要20μl的血液。血氨水平表达μmol / l。如果有必要,血样与生理盐水稀释,如前所述。17,18此外,血从劣质caval获得静脉血液化学、血清被离心分离和衡量一个自动化化学分析器(au - 5200;奥林巴斯日本,日本东京)。一半的胃和肝沙鼠的磷酸盐缓冲福尔马林固定在10%,嵌入在石蜡,并分为4μm样本。胃与haematoxylin-eosin染色和染色,肝脏组织病理学检查haematoxylin-eosin和祈祷的召唤。剩下的一半的胃是单一化与10毫升的磷酸缓冲盐。一个整除(100μl)稀释培养在TSA-II琼脂板(日本东京日本,正欲)四天在37°C microaerobic条件下(O25%,有限公司215%,N280%)。
费雪的保护有意义的区别是用来测试的意义中氨含量不同的群体之间的差异。日志等级测试是用来比较不同组的生存率。学生的t测试是用来比较的结果血液化学和体重。一个p值< 0.05被认为是显著的。
结果
所有蒙古沙鼠喂胆碱缺乏饮食(C和D组)与脂肪蜕变发达肝硬化(无花果1),而所有沙鼠美联储商业啮齿动物的饮食(组A和B)有一个正常的肝脏(图1B)。所有的沙鼠组C和D轻微腹水和肝实质是细分成小pseudolobules。肝细胞中含有大量的脂肪和明显肿胀。正弦腔明显压缩。肝脏的组织学发现被认为是希望在所有阶段沙鼠在C和D组,根据Hoffbauer的报告。19没有明显差异的肝脏的组织学检查发现C和d组没有例肝细胞癌或其他癌症在任何组。
组织学结果显示肝硬化与蒙古沙鼠脂肪蜕变美联储胆碱缺乏饮食(祈祷的召唤污点,×100),与正常肝沙鼠美联储商业啮齿动物的饮食(祈祷的召唤污点,×100)。
沙鼠在组A和C没有胃溃疡和胃炎。在所有沙鼠组B和D,被接种H幽门生成,粘膜的水肿的增厚腔和相邻语料库的一部分,和窦显示胃炎的固有层和表面侵蚀大量单核细胞和中性粒细胞浸润。此外,两个动物组B和D胃溃疡。H幽门是可以通过文化或组织学发现胃粘膜的沙鼠组B和D;然而,它没有发现在沙鼠组A和c的数量H幽门殖民地在每个受感染的沙鼠是大约6.0日志CFU /胃。
所有蒙古沙鼠组A、B和C存活30周。然而,在D组,只有12五沙鼠存活30周。D组的生存率是41.7%(无花果2),显著低于其他组(p < 0.01)。
每个群蒙古沙鼠的存活率。D组的生存率显著低于其他组(* * p < 0.01)。
血氨水平从右侧股静脉组A, B, C和D 105(29), 128(17), 136(16)和180(30)μmol / l(无花果3)。右股静脉的血氨水平D组明显高于其他组(p < 0.01)。在C组血氨水平显著高于A组(p < 0.05)。门静脉的血氨水平组A, B, C和D 966(199), 1240(62), 1659(780)和5936年(2570年)μmol / l,分别(无花果4)。门静脉的血氨水平D组明显高于其他组(p < 0.01)。
系统中氨含量组蒙古沙鼠。股静脉的血氨水平D组显著高于其他组(* * p < 0.01)。在C组血氨水平显著高于A组(†p < 0.05)。
门户中的氨含量组蒙古沙鼠。门静脉的血氨水平D组显著高于其他组(* * p < 0.01)
血清丙氨酸转氨酶、白蛋白、总胆红素和胆碱酯酶被检查在沙鼠组C和D,美联储胆碱缺乏饮食。在C和D组,血清丙氨酸转氨酶是80(54)和119 (23)IU / l,血清白蛋白是3.2(0.2)和3.1 (0.5)g / dl,血清总胆红素是0.1和0.1 mg / dl,和平均血清胆碱酯酶是5077(896)和5413 (483)IU / l,分别。平均体重为53.9 g和53.2 (5.0)(2.7)g组C和D,分别。C和D组之间没有显著差异的血液化学或体重。
讨论
在目前的研究中,系统在C组血氨水平显著高于A组和系统在D组血氨水平显著高于其他组。门户在D组氨水平明显高于其他组。所有蒙古沙鼠喂胆碱缺乏饮食(C和D组)开发的肝硬化和C和D组之间没有明显差异在肝功能或病理结果。这些发现表明,H幽门感染产生大量的氨的胃,引起明显的海拔门户氨水平与肝硬化沙鼠。此外,H幽门影响系统氨水平与肝硬化沙鼠。
胆碱缺乏饮食诱导肝硬化小鼠脂肪蜕变之前的研究。19日至22日Hartroft最初报道,老鼠发达病理如果美联储胆碱缺乏饮食脂肪性肝硬化。20.,21Hoffbauer报道,胆碱缺乏饮食开始后,脂肪肝肝硬化肝脏的进化可能是公认的大鼠肝脏。19和田等报道,门静脉高压的机制在这个模型是类似于四氯化碳诱导的大鼠肝硬化和门脉高压。22这是证实胆碱缺乏饮食也可能诱发肝硬化在沙鼠在目前的研究中。
D组的预后明显低于c组在这项研究中,7 D组12沙鼠的死亡。在肝脏组织学的研究,可以确定在这些沙鼠显示相似或早期发现,相比之下,沙鼠,活了下来。此外,垂死的沙鼠的系统性氨水平非常高,在我们先前的研究显示大部分超过500μmol / l轨道窦血在死之前。同时,之间没有明显差异H幽门感染和未感染的沙鼠肝硬化的肝组织学结果和16岁或24周的血液化学的研究。因此,我们推测,这两组氨含量的差异变得更加标记为接受胆碱缺乏饮食的时间变得更长,肝损伤更严重。沙鼠,死在D组被认为已经开发出与hyperammonaemia肝性脑病。肝性脑病导致意识的干扰和偶尔肝昏迷。此外,它可能会导致死于小动物因为它们不是治疗与传统治疗用于人类。H幽门感染也可能影响预后与肝硬化沙鼠。
肝性脑病是由化合物沉淀,如尿素可导致氨水平升高经常出现在有症状的患者。23血氨水平和症状增加肝脏功能下降。24大多数氨从静脉的肠道中氨的水平大大超过系统的水平。25萨默斯基尔和沃伯特显示胃粘膜脲酶活性远高于结肠粘膜脲酶的活动,和大多数肠道中氨是由腔的生成或粪便脲酶,1尽管氨的量,从胃结肠并没有考虑在他们的研究。导演奖和Kern显示肝硬化患者的胃粘膜脲酶活性显著高于正常的科目。26此外,增加胃氨据报道是一个系统性的氨的重要来源。27
先前的研究的影响H幽门患者hyperammonaemia显示这样一个角色8 - 11而其他研究显示没有这样的作用。12,13在人类中,大多数病人已经治疗与传统治疗不同程度的例子,低蛋白饮食,抗生素、乳果糖,支链氨基酸丰富的解决方案。这些传统疗法可以预防作用的说明H幽门hyperammonaemia感染,尽管这类患者需要充分的治疗。因此,动物模型研究的效果可能会更好H幽门感染hyperammonaemia动物没有治疗。
以前,我们检查了盒子的效果H幽门胃在系统性氨水平与四氯化碳引起的肝硬化大鼠。17这项研究表明,在门户和静脉血氨水平10滴剂后显著增加7在肝硬化大鼠的胃细菌菌落,建议产生的氨H幽门诱导hyperammonaemia当此生物分布广泛,存在于大量的胃,尤其是肝硬化的存在。这项研究描述了短期效应的滴注法H幽门大鼠胃因为H幽门不能形成殖民地在胃里。28在目前的研究中,长期的影响H幽门感染动物模型hyperammonaemia演示。
Kusuhara等报道了根除治疗H幽门沙鼠感染29日我们也尝试根除治疗,包括奥美拉唑、阿莫西林,克拉霉素,在另一组H幽门沙鼠感染肝硬化。然而,大多数这些沙鼠的剂量,因为不久死于肝功能衰竭由于药物引起的肝损伤,尽管剂量小于之前报道。这些药物的建立一个适当的剂量是困难的对于肝硬化的沙鼠,虽然各种剂量进行的试验。因此,我们不可能调查的影响H幽门根除感染沙鼠肝硬化。然而,目前的研究清楚地表明,脲酶H幽门以及肠道细菌尿素酶引起的系统性和门户氨水平与肝硬化沙鼠。我们得出这样的结论:H幽门在沙鼠感染诱发hyperammonaemia肝硬化。