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增殖和癌症
胆管癌的遗传改变与生长模式:第5q染色体杂合性缺失与息肉样生长密切相关
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  1. E Hidaka一个，c，
  2. 一个平贺柳泽一个，
  3. 米塞其b，
  4. T Setoguchic，
  5. Y加藤一个
  1. 一个日本东京癌症研究所病理科b日本东京肿瘤研究所医院外科c宫崎医学院外科，宫崎，日本
  1. A Yanagisawa博士，癌症研究所病理科，1-37-1神池袋，Toshima-ku, Tokyo 170-8455，日本a-yanagi在{}ims.u-tokyo.ac.jp

摘要

胆管癌(BDCs)相对罕见，其诱导的致癌机制尚不清楚。有两种生长模式，即息肉样和非息肉样浸润型，但关于生长模式与遗传改变之间的关系的信息很少。因此，我们进行了一项比较研究，以澄清遗传变化的差异，包括5q、9p、17p和18q的杂合度损失(LOH)和K-拉息肉样浸润型与非息肉样浸润型间存在突变。LOH分析采用微卫星标记和K-进行拉用斑点杂交法分析点突变。息肉样和非息肉样浸润型变化的发生率分别为:5q为73%和26%，9p为63%和59%，17p为55%和50%，18q为20%和18%，K-为25%和27%拉突变。最重要的是，我们发现5qLOH在息肉样生长时的频率明显高于非息肉样浸润型(p<0.05)，尤其是在肝外导管癌中(p<0.05)。其他基因改变的发生率(LOH在9p, 17p，和18q，和K-拉突变)显示两种肿瘤类型的发病率相似。目前的数据表明，5qLOH可能与bdc中息肉样的生长密切相关。

  • 胆管癌
  • 杂合度丧失
  • K -拉
  • 5号染色体问
  • 增长模式

  • 本文中使用的缩写

    下死点
    胆管癌
    LOH
    杂合度丧失
    聚合酶链反应
    聚合酶链反应
    GBC
    胆囊癌
    国际刑事法庭
    肝内胆管癌

    • http://dx.doi.org/10.1136/gut.48.5.656

    数据来自Altmetric.com

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      胆管癌(BDC)是一种相对罕见的疾病，但日本的发病率高于其他国家。1尽管进行了各种临床试验，但其预后仍然很差，需要了解其致癌机制。

      许多先前的报告已经表明，肿瘤的发生是肿瘤相关基因的改变积累的结果，如p53，p16，APC,DPC4肿瘤抑制基因和K-拉癌基因已被证明在人类恶性肿瘤的发生中起重要作用。2 - 7日关于BDC的分子致癌机制，特别是肝外管癌的生长方面的报道甚少。8 - 10有两种类型的BDC，息肉样和非息肉样浸润，这些可能有不同的遗传改变。

      因此，在本研究中，我们关注基因变化和BDC生长模式;我们筛选杂合度(LOH)的损失p53，p16，APC,DPC4位点，和K-拉密码子12点突变在34例BDC中与生长类型相关。

      方法

      样品收集

      福尔马林固定石蜡包埋的肿瘤组织样本诊断为bdc，从日本东京癌症研究所的手术病理档案中获得。将34个bdc按生长模式分为两类:(1)息肉样型(n=12)，乳头状和息肉样生长于导管内间隙;(2)非息肉样浸润型(n=22)浸润导管壁，无息肉样形成。两种生长模式如图所示1．记录每个病例的临床病理资料，并根据世界卫生组织的标准进行分期。11，12

      Examples of the two growth patterns. (A) Polypoid growth type (haematoxylin-eosin, ×12.5). (B) Invasive portion (haematoxylin-eosin, ×100) with cholangiography of the same case (C). (D) Non-polypoid infiltrative type (haematoxylin-eosin, ×12.5). (E) Invasive portion (haematoxylin-eosin, ×100) with cholangiography of the same case (F).
      " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图1
      图1

      两种增长模式的例子。(A)息肉样生长型(苏木精-伊红，×12.5)。(B)侵袭部分(苏木精-伊红，×100)，同例胆管造影(C)。(D)非息肉样浸润型(苏木精-伊红，×12.5)。(E)侵入部分(苏木精-伊红，×100)同例胆管造影(F)。

      DNA提取

      癌组织和正常组织分别用20 μm福尔马林固定石蜡包埋切片显微解剖，如前所述。13息肉样和非息肉样生长病例的癌组织均取自浸润部分。所有微解剖组织用二甲苯脱亲缘3次，用乙醇清除2次，完全干燥，用蛋白酶k消化。由此产生的裂解物直接用于聚合酶链反应(PCR)。由于明确定义的癌组织样本有限，提取的DNA数量较少。因此，只能分析如下所述的有限的基因改变。

      Loh研究和k -拉突变分析

      采用荧光标记引物对5q (D5S346、D5S433)、9p (D9S157、D9S162、D9S165)、17p (D17S570、D17S786、D17S1176)和18q (D18S474)进行PCR扩增。这些基因座与APC，p16，p53,DPC4,分别。所用引物序列见表1．这些数据来自国家生物技术信息中心的基因组数据库。在18q染色体中，由于使用D18S474以外的少数微卫星标记PCR扩增DNA比较困难，且这些PCR产物的数据不可靠，因此只能使用一个微卫星标记(D18S474)检测18qLOH。PCR产物在变性的6%聚丙烯酰胺凝胶中电泳，并用ALFred自动测序仪(Pharmacia Biotech, Tokyo, Japan)分析LOH。LOH定义为与正常组织信号相比等位基因信号减少90%以上(图2)．LOH分析程序至少重复三次以确认结果。在本研究中，我们评估了单染色体LOH作为至少一个微卫星位点LOH的检测器。例如，当检测到D5S346位点上的LOH，而D5S433位点上的LOH信息不充分时，我们将此结果评估为5qLOH。

      查看该表:
      表1

      所用引物的序列

      Illustration of examples of loss of heterozygosity (LOH). Polymerase chain reaction products for normal tissue (N) and tumour (T) DNA are shown. Microsatellite alleles are represented by two signals in the case of heterozygosity. LOH at one allele corresponds to almost complete loss of one of two signals (arrowheads).
      " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图2
      图2

      杂合度丧失(LOH)的例子说明。显示正常组织(N)和肿瘤(T) DNA的聚合酶链反应产物。在杂合度的情况下，微卫星等位基因由两个信号表示。一个等位基因的失合相当于两个信号中的一个几乎完全丧失(箭头)。

      K-密码子12的点突变拉如前所述，采用斑点杂交法进行分析。13

      统计分析

      分类变量采用Fisher精确概率检验进行分析;P <0.05被认为是显著的。

      结果

      表中比较了息肉样和非息肉样浸润性病变的临床病理参数2．亚组间在年龄、性别、部位、大小、组织学分级或分期等任何变量上均无显著差异。

      查看该表:
      表2

      两组的临床病理特点

      5q、9p、17p、18q位点LOH频率及K-突变拉总体和在子组中如表所示3.．每个位点的信息性病例数在5q时为30例，在9p和17p时为25例，在18q时为16例。息肉样浸润型和非息肉样浸润型发生率分别为:5q LOH率分别为73%(8/11)和26% (5/19);9p, 63%(5/8)和59% (10/17);17p, 55%(6/11)和50% (7/14);和18q, 20%(1/5)和18% (2/11);K-的点突变拉、25%(3/12)及27%(6/22)。K-的数据拉突变来自我们之前的报告。14有趣的是，在73%的息肉样生长癌中检测到5qLOH，而在非息肉样生长癌中仅检测到26% (p<0.05)(表)3.)．这在肝外管癌中尤其值得注意(p<0.05)4)．至于其他染色体位点的LOH和K-突变拉，两组之间没有发现频率差异。

      查看该表:
      表3

      胆管癌的遗传改变

      查看该表:
      表4

      位置与5qLOH的关系

      讨论

      我们目前的调查显示，5q LOH在息肉样型bdc中普遍存在，尤其是在肝外导管癌中。由此可见，5qLOH可能与息肉样体的生长密切相关。

      关于各种肿瘤中LOH与生长模式之间的关系已有许多报道，但迄今为止尚未报道bdc的数据。5q染色体LOH在结直肠癌、食管癌、胃癌、壶腹癌和十二指肠癌中常见。15至21在具有息肉样和乳头状生长的结直肠和壶腹腺瘤中，5qLOH相对常见，这与我们在bdc中的发现一致。15，16因此，由于肿瘤抑制基因的存在，5qLOH可能是决定息肉样生长的重要遗传变化。例如，APC位于第5q染色体上的基因与-连环蛋白有关，与细胞粘附有关。22 - 24今后，分析两者之间的关系APC基因和息肉样生长模式是合理的。然而，对于具有5qLOH的非息肉样浸润型肿瘤与不具有5qLOH的非息肉样浸润型肿瘤的特征，本研究在临床病理或遗传学方面没有明显的区别特征，需要在这方面进行进一步的遗传学研究。

      在LOH的总发生率方面，与5q、9p和17p相比，BDC中18q时LOH的发生率较低。如果我们将我们目前的数据与之前使用相同引物和方法的结果以及Wistuba对胆囊癌(GBC)的发现进行比较，9p和17pLOH在两种肿瘤类型中的频率是相似的。25日- 27日与GBC相比，BDC中5qLOH更常见，BDC中18qLOH较少。然而，其他研究人员报道了GBC中5q、9p和17pLOH的频率较高，这与我们目前的BDC数据相似。27需要进一步的研究来阐明BDC和GBC在遗传改变决定因素方面的关系。

      近年来，为了探索染色体中缺失的区域，比较基因组杂交技术已被报道。28胆道癌的单份报告显示6q、18q、4q、5q和9p的拷贝数下降。5q和9p拷贝数下降的高频率与我们现有的数据相符。但病例数量较少，且未对这些遗传变化与形态模式之间的关系进行研究。在未来，通过这种技术的检查可能允许澄清哪些基因对BDC的发展最重要。

      关于K-拉，在导管周围延伸型肝内胆管癌(ICC)中，基因突变的发生频率高于肿块形成型。29，30.此外，在结直肠癌中，息肉样病变的发生率高于溃疡性病变。10但在本研究中，这与生长模式无关。根据我们的结果和以前的报道，K-拉BDC的点突变和生长模式可能与ICC和结直肠癌不同。

      综上所述，我们的数据表明5qLOH可能与bdc的息肉样生长密切相关。

      致谢

      作者非常感谢日本东京癌症研究所的Yuzo Sakai和Yurika Tada提供的技术援助。这项工作得到了日本教育、科学、体育和文化部、卫生和福利部以及赛车纪念基金会和吸烟研究基金会的资助。

      本文中使用的缩写

      下死点
      胆管癌
      LOH
      杂合度丧失
      聚合酶链反应
      聚合酶链反应
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