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摘要
背景:在腹腔疾病(CD)黏膜，组织学损害与T辅助细胞1型(Th1)细胞的明显浸润有关。然而，调控CD黏膜Th1细胞分化的分子机制尚不清楚。
目的:目的分析乳糜泻中控制Th1细胞承诺的转录因子的表达。
病人:从未经治疗的乳糜泻患者和正常对照组中提取十二指肠粘膜样本。
方法:采用逆转录聚合酶链反应定量检测T固有层淋巴细胞中干扰素γ (IFN-γ)和白细胞介素-4 RNA的表达。两种Th1促进转录因子T-bet和STAT-4，以及控制T辅助细胞2型(Th2)细胞极化的转录因子STAT-6和GATA-3，在十二指肠活检中通过western blotting检测。从正常和治疗过的乳糜泻患者的活体组织中检测了麦胶蛋白和IFN-γ对T-bet表达的影响。
结果:与预期的一样，与对照组相比，乳糜泻患者的黏膜中IFN-γ而不是IL-4 RNA转录物增加。乳糜泻粘膜样本的T-bet水平始终高于对照组。然而，在乳糜泻患者和对照组之间没有看到活跃的STAT-4表达的差异，这表明Th1极化不是由局部IL-12诱导的。GATA-3和STAT-6在CD和对照组黏膜中均较低。在正常十二指肠活检中，IFN-γ通过STAT-1依赖机制刺激T-bet。用麦胶蛋白增强的T-bet挑战治疗过的乳糜泻，而不是对照活检，这种效果也被STAT-1抑制所抑制。
结论:本研究表明IFN-γ激活STAT-1促进CD黏膜T-bet。
- CD,腹腔疾病
- Th1, T辅助细胞类型1
- Th2, T辅助细胞2型
- 干扰素,干扰素
- ,白介素
- T- lpl，固有层T淋巴细胞
- 教育津贴,antiendomysial抗体
- DMSO(二甲亚砜
- 麦胶蛋白的消化性胰蛋白酶消化
- 固有层单个核细胞
- 腹腔疾病
- T-bet
- STAT-1
来自Altmetric.com的统计
- CD,腹腔疾病
- Th1, T辅助细胞类型1
- Th2, T辅助细胞2型
- 干扰素,干扰素
- ,白介素
- T- lpl，固有层T淋巴细胞
- 教育津贴,antiendomysial抗体
- DMSO(二甲亚砜
- 麦胶蛋白的消化性胰蛋白酶消化
- 固有层单个核细胞
毫无疑问，在腹腔疾病(CD)中，组织学损伤与主要的T辅助细胞1型(Th1)细胞反应有关。从活跃乳糜泻患者的肠道中分离出的固有层T淋巴细胞(T- lpl)在谷蛋白刺激下释放干扰素(IFN)-γ，内源性IFN-γ的中和阻止了麦胶蛋白介导的乳糜泻活组织标本体外培养的形态变化。1 -5此外，我们之前已经证明，胎儿肠道外植体中的Th1细胞反应会导致绒毛萎缩和隐窝细胞增生，6，7从而支持局部Th1细胞炎症在促进乳糜泻相关组织损伤中的作用。然而，关于乳糜泻中诱导和维持Th1细胞极化的因素仍有许多重要的问题。尽管乳糜泻患者的肠粘膜中含有大量的Th1相关细胞因子，如IFN-α、白介素(IL)-18和IL-15，但这些细胞因子在持续的Th1反应中的作用仍有待确定。8 -10同样，乳糜泻中独特的th1型细胞因子组合的转录机制仍然未知。
一些研究已经明确表明，不同的细胞因子激活信号和转录因子调节naïve T细胞沿Th1或T辅助细胞2型(Th2)表型的承担，以及极化表型的维持。11，12转录因子如STAT-1和STAT-4与IFN-γ的产生相关，并在Th1特异性细胞因子的产生中发挥重要作用。12在极化后，Th1的承诺似乎是稳定的，染色质重构的变化使极化的Th1细胞维持其细胞因子谱有很大的兴趣。通过对极化淋巴细胞中表达的转录因子的分子分析，最近发现了T-bet, T-box转录因子家族中的一种新成员。T-bet驱动IFN-γ位点染色质重塑，是Th1细胞发育和调节的主开关。13克罗恩病是另一种与Th1相关的胃肠道慢性炎症性疾病，据报道，克罗恩病患者中T-bet增加。此外，我们之前已经证明，T-bet RNA转录本在CD黏膜中上调，因此提示该转录因子在促进该病中Th1细胞极化中发挥作用。9日,14，15相反，GATA-3和STAT-6等转录因子对Th2分化有重要影响，是IL-4/IL-13细胞因子表达所必需的。11，16日,17因此，STAT-4/T-bet和STAT-6/GATA-3之间的平衡似乎决定了免疫反应中T细胞极化的命运。
在本研究中，我们分析了CD中T-bet和活性STAT-4、GATA-3和活性STAT-6的表达。
方法
病人和控制
18例未经治疗的乳糜泻患者(年龄20-47岁)在上消化道内窥镜下获得十二指肠远端活检标本。组织病理学诊断以典型的粘膜病变为基础，包括隐窝细胞增生、绒毛萎缩和上皮内淋巴细胞增多。所有未经治疗的乳糜泻患者在诊断时抗肌内膜抗体(EMA)和抗谷氨酰胺转胺酶抗体均呈阳性。没有难治性乳糜泻患者纳入研究。在诊断时收集所有18例患者的十二指肠活检:这18例患者中每例进行常规组织学检查。在18名患者中，有11名患者收集了另外两个活检组织，并立即在液氮中冷冻并保存，直到检测蛋白表达。进行了四次十二指肠活检并用于固有层CD3+从其余7例患者中分离T-LPL。8例接受治疗的乳糜泻患者(年龄19-30岁)的活检均为临床和组织学缓解，EMA和抗谷氨酰胺转胺酶抗体阴性。无麸质难治性疾病。从这些患者中，收集了五份或更多的活检:一份用于组织学检查，其余用于器官培养。在连续入选的8例接受治疗的乳糜泻患者中，有3例取了额外的活检标本用于蛋白质提取。正常对照(n = 27)进行胃肠症状检查，组织学正常，炎症细胞无增加，EMA和抗谷氨酰胺转胺酶抗体阴性。该研究获得了当地委员会的伦理批准。
器官培养
为了检查IFN-γ对T-bet诱导的调节作用，将正常十二指肠活检组织在含有RPMI 1640 (Sigma-Aldrich Srl, Milan, Italy)的培养基中培养24小时，其中添加HL-1 (Biowhittaker, Walkersville, USA)，添加或不添加人重组IFN-γ (50 ng/ml) (Prepotech, Inc, London, UK)。正如我们之前所展示的，用IFN-γ挑战正常的十二指肠活检结果是STAT-1激活，18正常十二指肠活检组织也用IFN-γ培养，存在或不存在Tyrphostin B42 (AG490;Calbiochem, San Diego, California, USA)， JAK2/STAT-1抑制剂(TB42，终浓度100 μM)，或载体(二甲亚砜(DMSO))作用24小时，然后评估T-bet表达。在加入IFN-γ前，将TB42和DMSO预培养1小时，以验证TB42特异性抑制STAT-1激活，将THP1细胞系在RPMI 1640中培养，初始添加或不添加分级剂量的TB42(最终浓度为50 ~ 200 μM)，培养45分钟，然后用IFN-γ (100 ng/ml)刺激30分钟。最后，制备了核蛋白和胞质蛋白提取物，并用于分析核STAT-1易位，如前所述。18我们还研究了麦胶蛋白刺激对治疗过的乳糜糜活组织切片中T-bet表达的影响。为此，我们将5名治疗过的乳糜糜糜患者和5名正常对照的十二指肠活组织切片在含有RPMI 1640 (Sigma-Aldrich)的培养基中培养24小时，该培养基中添加了HL-1，同时添加或不添加1 mg/ml的麦胶蛋白消化性胰蛋白酶消化液(PT)。18为了研究麦胶蛋白对T-bet相关蛋白的调节活性是否依赖于JAK/STAT信号，我们将三名接受治疗的CD患者的十二指肠活检组织与PT一起培养，在TB42(终浓度为100 μM)或DMSO存在或不存在的情况下培养24小时。
活组织切片被放置在器官培养皿中央井的铁栅上，培养皿被放置在95%O的密闭容器中2/ 5%股份有限公司237°C, 1巴。在培养结束时，活组织切片迅速冷冻并在−80°C保存直到使用。
LPL分离、RNA提取和定量聚合酶链式反应(PCR)
固有层单个核细胞(LPMC)通过二硫苏糖醇- edta -胶原酶程序从7名活动性乳糜糜患者和7名正常对照的十二指肠活检中分离出来(所有试剂来自Sigma-Aldrich)。随后，如前所述，用LPMC通过磁珠分离纯化T-LPL。19然后用T-LPL提取总RNA，使用1ml苯酚、异硫氰酸胍和氯仿的单相溶液，然后用异丙醇沉淀(Sigma-Aldrich)。RNA的完整性通过电泳在1.5%琼脂糖凝胶上进行检查。如前所述进行定量PCR。6
蛋白提取和蛋白印迹分析
快速冷冻活检组织在液氮中机械均质，总提取物收集在含有10mm Hepes (pH 7.9)， 10mm KCl, 0.4 M NaCl, 1mm EDTA, 1mm EGTA, 10%甘油，1mm二硫苏糖醇，10 μg/ml抑肽酶，10 μg/ml白细胞素和1mm苯甲烷磺酰氟(所有试剂来自Sigma-Aldrich)的缓冲液中。T-bet检测采用10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离总蛋白(200 μg/样品)。使用一种市出售的小鼠单克隆T-bet抗体(Santa Cruz Biotechnology, Inc, Santa Cruz, California, USA)(最终稀释1:50 00)，然后使用辣根过氧化物酶偶联山羊抗鼠IgG抗体(Dako SpA, Milan, Italy)(最终稀释1:10 000)，并用Super Signal West DURA化学发光试剂盒(Pierce Biotechnology, Rockford, USA)检测反应。使用小鼠GATA-3单克隆抗体(Santa Cruz Biotechnology, Inc)(最终稀释1:50 00)检测GATA-3，然后用辣根过氧化物酶结合山羊抗兔IgG抗体(Dako)(最终稀释1:10 000)检测GATA-3。检测T-bet和GATA-3后，将印迹剥离并与小鼠抗人β-actin抗体(Sigma;最终稀释1:5000)，然后是与辣根过氧化物酶偶联的山羊抗鼠抗体(最终稀释1:20 000)。使用兔单克隆抗体检测p-Tyr-STAT-4和p-Tyr-STAT-6，该抗体专门识别酪氨酸残基上的STAT-4或STAT-6磷酸化(Santa Cruz Biotechnology, Inc)(最终稀释1:500)。用辣根过氧化物酶结合山羊抗兔IgG抗体(Dako)孵育(最终稀释1:10 000)后，用Super Signal West DURA化学发光试剂盒(Pierce)检测反应。在检测到磷酸化的STAT-4和STAT-6后，将印迹物剥离并与兔抗人总STAT-4或兔抗人STAT-6抗体(Santa Cruz Biotechnology, Inc)(最终稀释1:50 00)孵育，然后与与辣根过氧化物酶偶联的山羊抗兔抗体(Dako)(最终稀释1:10 000)孵育。
如前所述，在从THP1细胞制备的核蛋白中分析STAT-1。18分析完STAT-1后，将印迹剥离并与兔单克隆抗人OCT-1抗体(Santa Cruz Biotechnology, Inc，最终稀释1:50 00)孵育，然后与山羊抗兔抗体偶联辣根过氧化物酶(Dako)(最终稀释1:10 000)孵育。此外，从THP-1细胞中制备的细胞质蛋白进行了磷酸化和ERK-1总含量的分析，使用单克隆小鼠抗人抗体(Santa Cruz Biotechnology, Inc，最终稀释1:60)，然后使用山羊抗鼠抗体偶联辣根过氧化物酶(Dako)(最终稀释1:10 000)。
用计算机辅助扫描密度法分析免疫反应带的强度。
统计分析
数据比较采用曼-惠特尼法U测试。
结果
未处理乳糜泻十二指肠黏膜中IFN-γ和IL-4 RNA转录物
为了证实乳糜泻病变与显著的th1型免疫应答相关，我们使用从7名未治疗乳糜泻患者和7名对照组的T-LPL中提取的RNA，通过定量PCR分析IFN-γ和IL-4的RNA转录本。如图1A所示，CD中IFN-γ转录本的数量(中位数10229转录本/μg总RNA(范围8915-14126)显著高于对照T-LPL样本(中位数3900转录本/μg总RNA(范围500-5142))(p<0.001, Mann WhitneyU测试)。相比之下，在CD和对照T-LPL中IL-4转录本的数量是相同的(中位数2650转录本/μg总RNA(范围500-5980))(中位数1239转录本/μg总RNA(范围500-2120))(图1B)。总的来说，在乳糜泻T-LPL样本中，IFN-γ转录本的数量大约是IL-4的4倍，从而证实了未治疗乳糜泻患者十二指肠黏膜中Th1淋巴细胞的优势。
在未经治疗的腹腔疾病(CD)患者的固有T层淋巴细胞(T- lpl)中，干扰素γ (IFN-γ)而非白细胞介素(IL-4)转录物增加。T-LPL中IFN-γ (A)和IL-4 (B) RNA转录本分离自7例未治疗乳糜泻患者和7例正常对照者的十二指肠。每个点代表单个受试者T-LPL中IFN-γ或IL-4的值(转录物数/μg总RNA)。横条表示中值。
T-bet在CD粘膜中过表达
由于Th1细胞的极化依赖于STAT-4和/或T-bet表达的激活，我们随后在11名未经治疗的CD患者、3名接受治疗的CD患者和10名对照组的十二指肠活检中观察了这两种转录因子。无论从乳糜泻还是正常十二指肠中提取的蛋白，T-bet在所有样本中均能检测到。重要的是，与治疗过的乳糜泻患者和对照组相比，T-bet在活动性乳糜泻的十二指肠样本中的免疫反应性更明显(图2A)。条带强度分析显示，T-bet表达在未经处理的CD样本中显著高于对照组(中位数0.55(范围0.06-2.48))(中位数0.17(范围0.003-0.24)(图2B) (p<0.001, Mann Whitney)U测试)。相比之下，在接受治疗的乳糜泻患者和正常对照组之间，在T-bet方面没有发现差异(图2)。
T-bet但不活跃的STAT-4在未治疗的腹腔疾病中占主导地位。(A)从三个未治疗的乳糜泻(CD)患者、三个治疗的乳糜泻患者和三个对照组的十二指肠活检中提取的蛋白中显示T-bet的代表性印迹。(B)定量分析11例乳糜泻未治疗组、3例乳糜泻治疗组和11例正常对照组的粘膜样品中T-bet蛋白的含量，通过western blots的密度扫描测定。值用任意单位(au)表示。每个点代表取自单一受试者的粘膜样本中的T-bet/β-actin比率。横条表示中值。(C)从三名未治疗乳糜泻患者、三名治疗乳糜泻患者和三名对照组的十二指肠活检标本中提取的蛋白中，有代表性的印迹显示酪氨酸基团上的STAT-4磷酸化(p-Tyr-STAT-4)(顶部印迹)和总STAT-4(底部印迹)。(D)定量分析11例乳糜泻未治疗组、3例乳糜泻治疗组和11例正常对照组粘膜样品中p-Tyr-STAT-4/总STAT-4比值，通过western blots密度扫描测定。值用任意单位(au)表示。每个点代表单一受试者粘膜样本中p-Tyr-STAT-4/总STAT-4比值。 Horizontal bars indicate median values.
所有乳糜泻和正常对照均检测到激活的STAT-4，无显著差异(乳糜泻中位数为0.28(范围0.01-0.75)v对照组为0.21 (0.11-0.52);NS)(图2C, D)。Western blotting不是一种定量技术，任意单位可能不能直接反映十二指肠黏膜内蛋白质的生物数量。然而，与对照组相比，大多数乳糜泻样本中T-bet带的强度增加，这一事实表明，在乳糜泻中，炎症反应与T-bet的主要诱导有关，而与STAT-4无关。
GATA-3和STAT-6在腹腔疾病黏膜中无诱导作用
Th2细胞的发育依赖于STAT-6和GATA-3的激活。因此，我们接下来检测了这些转录因子在从用于T-bet和STAT-4分析的十二指肠样本中提取的蛋白中的表达。GATA-3在CD和对照组中表达水平相同(CD中值0.12密度任意单位(0.03-0.49)，对照组中值0.06(0.02-0.30))(图3A, B) (NS)。同样，在CD患者(中位数0.4密度任意单位(0.02-0.74))和对照组(0.25(0.06-0.56)之间，STAT-6的激活没有显著差异(图3C, D)。
(A)从三个未治疗的腹腔疾病(CD)患者和三个对照组的十二指肠活组织切片中提取的蛋白中有GATA-3的代表性印迹。(B)定量分析11例未治疗乳糜泻患者和11例正常对照者的粘膜样品中GATA-3蛋白，通过western blots密度扫描测定。值用任意单位(au)表示。每一个点代表来自单一受试者的粘膜样本中GATA-3/β-肌动蛋白的比例。横条表示中值。(C)从三名乳糜泻患者和三名对照组的十二指肠活检标本中提取的蛋白中，有代表性的印迹显示酪氨酸组上的STAT-6磷酸化(p-Tyr-STAT-6)(上印迹)和总STAT-6(下印迹)。(D)定量分析11例活动性乳糜泻患者和11例正常对照者的黏膜样本中p-Tyr-STAT-6/总STAT-6比值，通过western blots密度扫描测定。值用任意单位(au)表示。每个点代表单一受试者粘膜样本中p-Tyr-STAT-6/总STAT-6比值。横条表示中值。
在正常十二指肠活检中，IFN-γ/STAT-1信号通路增强T-bet表达
事实上，IFN-γ在乳糜泻中增强，加上最近的研究表明IFN-γ增强了细胞系中的T-bet，20.促使我们探索IFN-γ调节人十二指肠T-bet表达的可能性。正常十二指肠活检组织加入IFN-γ或不加入IFN-γ培养，western blotting检测T-bet。如图4所示，IFN-γ诱导T-bet。当IFN-γ信号通过STAT-1通路时，21我们之前已经证明，用IFN-γ刺激正常的十二指肠活检会导致STAT-1激活，18然后我们检测了JAK2/STAT-1抑制对IFN-γ介导的T-bet诱导的影响。图4B中显示的数据清楚地表明阻断STAT-1激活会显著抑制IFN-γ诱导的T-bet。
(A)干扰素γ (IFN-γ)增强正常对照十二指肠活检中T-bet蛋白的表达。典型印迹显示正常十二指肠活检组织用培养基(M)或IFN-γ 50 ng/ml培养24小时，T-bet和β-actin。两个有代表性的实验之一分析了来自四个正常对照的活检。在每种情况下都得到了类似的结果。(B)用TB42 (JAK2/STAT-1抑制剂)治疗正常十二指肠活检可阻止IFN-γ介导的T-bet诱导。M，仅用培养液培养的活组织切片。以二甲亚砜(DMSO)为载体。展示了四个代表性的实验之一。
在乳糜泻中，麦胶蛋白诱导的STAT-1信号传导导致T-bet的诱导
为了独立验证STAT信号在乳糜泻中T-bet调节中的作用，我们刺激了5名接受治疗的乳糜泻患者和5名有麦胶蛋白PT消化的对照组的活检。在处理过的CD活检组织的外植体中，而不是对照组，PT刺激增强了T-bet蛋白表达(图5)。我们之前已经证明，用PT刺激处理过的CD活检组织会导致STAT-1激活。18因此，我们探索了STAT-1活性可能在调节PT介导的T-bet诱导中发挥重要作用的可能性。为此目的，在存在或不存在TB42或DMSO的情况下，用PT刺激处理过的CD活检组织。如图6A所示，TB42消除了PT诱导的T-bet表达。重要的是，TB42剂量依赖性地抑制了THP1细胞中IFN-γ刺激的STAT-1核易位，但不影响ERK-1的磷酸化，从而证实了TB42对STAT-1激活作用的特异性(图6B, C)。
(A)用麦胶蛋白消化酶消化(PT)治疗的腹腔疾病(CD)活检的挑战导致T-bet表达增强。从2例CD患者的十二指肠活检组织中提取总蛋白，用培养基(M)或PT培养24小时，代表性印迹T-bet(上)和β-actin(下)。展示了四个代表性实验中的两个。(B)用麦胶蛋白刺激正常十二指肠活检不会改变T-bet的表达。从两个正常对照的十二指肠活组织切片中提取总蛋白，用培养基(M)或PT培养24小时，代表性印迹T-bet(上)和β-actin(下)。展示了四个代表性实验中的两个。
(A)用TB42 (JAK2/STAT-1抑制剂)预处理腹腔疾病(CD)患者的十二指肠活检，可阻止麦胶蛋白介导的T-bet诱导。从治疗过的乳糜泻患者的十二指肠活组织切片中提取的总蛋白中T-bet(上图)和β-肌动蛋白(下图)的代表性印迹，用培养基(M)或麦胶蛋白消化性胰蛋白酶消化液(PT)培养24小时。四个代表性的实验之一分析了来自四个病人的全部活检显示。在每种情况下都得到了类似的结果。(B, C) TB42剂量依赖性抑制干扰素γ (IFN-γ)在THP1细胞中诱导的STAT-1核易位，但不影响ERK-1磷酸化。(B)从未处理(UNST)的THP-1细胞中提取的核蛋白中STAT-1(顶部印迹)和OCT-1(底部印迹)的代表性western blot，或用中(M)或分级剂量的TB42或二甲基亚砜(DMSO，载具)预孵育45分钟，然后用IFN-γ刺激30分钟。(C)从未处理(UNST)或用中(M)或分级剂量TB42或DMSO(载体)预孵育45分钟的THP-1细胞中提取的胞质蛋白中磷酸化(顶部印迹)和ERK-1总含量(底部印迹)，然后用IFN-γ刺激30分钟。
讨论
本研究旨在分析CD黏膜中调节和/或稳定沿Th1或Th2表型T细胞极化的转录因子。我们发现，与对照组相比，未经治疗的乳糜泻患者的十二指肠样本显示出高水平的T-bet蛋白。密度分析显示，CD样本中T-bet的中位水平约为对照组的3倍。相比之下，T-bet在治疗的乳糜泻患者和正常对照组中表达水平相同，明确表明T-bet在乳糜泻中的上调依赖于活动性炎症。这些数据证实并扩展了我们之前的观察，即T-bet RNA转录本在未经治疗的乳糜泻患者的活检中增强。9虽然这项研究仍在进行中，但它表明T-bet的上调也发生在克罗恩病患者的粘膜中，14从而证实了该转录因子在Th1驱动的肠道炎症中的选择性表达。
在乳糜泻中诱导T-bet的因素尚待确定，但本研究中的一些观察结果强调了STAT-1信号通路的相关性。IFN-γ增强T-bet对正常十二指肠活检的挑战，这种影响依赖于STAT-1的激活。在接受治疗的乳糜泻患者的活组织检查中，麦胶蛋白诱导T-bet也可以通过抑制STAT-1来预防。总之，这些数据表明，在CD粘膜中，无论促进最初Th1细胞分化的主因子是什么，最佳的IFN-γ//STAT-1信号通路是通过增强T-bet的表达来扩大和稳定承诺的Th1细胞表型的必要条件。这与来自STAT-1缺陷小鼠的T细胞合成IFN-γ能力的缺陷是一致的，并且在SOCS-1(一种STAT-1信号的细胞内抑制剂)缺陷小鼠的血清中可以测量到高水平的IFN-γ。22，23
然而，我们想指出的是，STAT-1和T-bet都是在整个活检中检查的，而不是在纯化的细胞类型中。随着对其他系统的研究揭示了T-bet的细胞特异性调控，13日,20.我们认为，在单一粘膜细胞类型中检测STAT-1和T-bet，以确定STAT-1的激活是否直接导致T-bet的诱导，在生物学上是相关的。不幸的是，使用目前的技术无法从小的活组织组织中纯化足够的T、B和NK细胞来进行机制研究和提取蛋白质用于western blotting或DNA结合蛋白分析。
活跃的STAT-4是Th1 T细胞发育和调节的另一个关键转录因子，尽管在一些乳糜泻样本中发现了相对较高水平的活跃STAT-4，但在未治疗的乳糜泻患者和对照组之间，活性STAT-4的表达没有显著差异。这一观察结果并不完全令人惊讶，因为人类细胞中STAT-4的激活主要发生在对IL-12的反应中，IL-12是一种在乳糜泻中不产生的细胞因子。3.然而，值得注意的是，STAT-4也可以被IFN-α激活，IFN-α是活性乳糜泻中过量合成的一种分子。7，8日,24尽管有证据表明IFN-α介导的STAT-4的磷酸化和DNA结合与IL-12诱导的相比是非常短暂的事件，但这为什么没有导致STAT-4持续激活的原因仍不清楚。25
综上所述，这些结果提示CD黏膜中T-bet的上调可能不仅仅反映了淋巴样细胞的黏膜浸润增加。事实上，如果是这种情况，我们就会观察到活性STAT-4的平行增加，因为STAT-4和T-bet在淋巴细胞中有选择性地表达，而在其他类型的细胞(例如，肌成纤维细胞，上皮细胞和内皮细胞)中没有表达。13日,20.
T-bet和活性STAT-4在正常受试者的所有十二指肠粘膜样本中均有记录，与正常T- lpl中IFN-γ RNA转录本的优先表达一致，大量文献表明，来自正常肠固有层的T细胞产生的IFN-γ比其他细胞因子更多。26日,27这些结果提出了在正常十二指肠样本中是什么诱导STAT-4和T-bet的问题。T-LPL很可能来源于受到IL-12刺激的Peyer 's patch26但是在T细胞离开Peyer的贴片并迁移到固有层后，活性STAT-4不太可能保持在T细胞中，这个过程需要几天时间。需要进一步的研究来确定LPL在体外单独培养时是否可以继续表达活性的STAT-4，这将确定STAT-4在LPL中是由局部释放的因子激活的，还是确实是Peyer 's patches中IL-12刺激的残余。
致谢
这项工作得到了欧盟合同ERBFMRXCT980240的支持。
参考文献
脚注
↵＊I Monteleone和G Monteleone对这项研究贡献相同。