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背景:人类抗肿瘤坏死因子(TNF)抗体英夫利昔单抗结合膜TNF,随后激活固有层的T淋巴细胞凋亡在克罗恩病的患者体外。
目的:测试是否有能力快速anti-TNF-induced肠道细胞凋亡预测anti-TNF治疗炎症性肠病的疗效。
方法:99米Technetium-annexin V单光子发射计算机断层扫描(SPECT)中执行2模型小鼠实验性结肠炎患者和14个活跃的克罗恩病由Crohńs评估疾病活动指数(CDAI)研究anti-TNF治疗对细胞凋亡的影响在小肠结肠炎活跃。英夫利昔单抗疾病活动评估2周后注入使用CDAI(定义反应:一滴> 100分)。
结果:结肠的吸收99米Tc-annexin V显著增加2 4 6-trinitrobenzene sulphonate-induced结肠炎以及转移结肠炎管理anti-TNF抗体与抗体所确定的控制专用动物针孔SPECT。此外,吸收99米Tc-annexin V显著增加患者的积极应对英夫利昔单抗治疗克罗恩病。结肠99米Tc-annexin V吸收比率(平均(SEM))增加0.24 ~ 0.41 (0.03)(0.07)(p < 0.01), 24小时后注入英夫利昔单抗(5毫克/公斤)。在结肠吸收平均增加了98.7%99米Tc-annexin V可以检测到10的14回应病人(CDAI > 100分在星期2)non-responding患者的比例为15.2% (p = 0.03)。粘膜活检标本的分析确定固有层T细胞作为靶细胞发生凋亡。
结论:这些体内观察支持结肠吸收的概念99米Tc-annexin V与临床相关的好处anti-TNF治疗和可能的治疗成功的预测。
- 7操弄,7-amino-actinomycin D
- 阿扎,咪唑硫嘌呤
- CDAI,克罗恩病活动指数
- CRP, C反应蛋白
- 坏蛋,结肠吸收比率
- cVAM,荒唐的老鼠anti-mouse控制抗体
- 流式细胞仪,fluorescence-activated细胞排序
- LPMNC,固有层单核细胞
- 马伯,单克隆抗体
- PBS,磷酸盐
- SCID,重度联合免疫缺陷症
- SPECT、单光子发射计算机断层扫描
- 99米Tc-HYNIC, technetium-hydrazinonicotinamide
- TNBS,三硝基苯磺酸
- 肿瘤坏死因子,肿瘤坏死因子
来自Altmetric.com的统计
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- TNBS,三硝基苯磺酸
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肿瘤坏死因子α(TNFα)是至关重要的启蒙和放大克罗恩氏病(由Papadakis和主任1和van代芬特尔2)。TNFα首先合成为26 kDa跨膜形成胞内的尾巴,这是裂解17 kDa分泌可溶性形式的金属蛋白酶TNFα-converting酶。3,4结果17 kDa的TNFα然后聚集形成三分子复合物(三)绑定并激活其同源受体,受体过去或我受体。1可溶性TNFα主要是合成,激活淋巴细胞和巨噬细胞。5板的数量propria-soluble TNFα-producing患者T细胞增加克罗恩氏病,和高浓度的可溶性TNFα可以在患者的粪便中发现活跃的免疫反应。6,7
Anti-TNF中和策略用于炎症性疾病包括服用依那西普(TNFα受体2 IgG1不变的尾巴融合蛋白)和英夫利昔单抗(空想的IgG1 Anti-TNF抗体)。道是无效的治疗活性克罗恩氏病,8虽然有利于各种自身免疫性疾病,包括类风湿性关节炎。9然而,英夫利昔单抗类风湿性关节炎有效10日,11和克罗恩病。12日,13英夫利昔单抗,但不是道,使单核细胞的凋亡14并通过绑定的膜结合肿瘤坏死因子激活淋巴细胞15和随后的反向信号。16克罗恩病的特点是粘膜超过T细胞凋亡的T细胞增殖,17和英夫利昔单抗可以恢复这个不恰当的T细胞积累通过诱导细胞凋亡。18这意味着它不是TNF中和本身,而是一种替代机制,协调英夫利昔单抗在炎症性肠病的影响。
进一步阐明肠道细胞凋亡是否构成anti-TNF治疗克罗恩病的临床受益体内,我们进行实时成像的体内细胞凋亡99米Tc-annexin V单光子发射计算机断层扫描(SPECT)。这种技术已经显示出想象的可行性和量化细胞死亡在再灌注后心肌梗塞,19日,20.和凋亡指数高的肿瘤化疗所致的癌症细胞死亡。21我们使用这种技术来描述anti-TNF策略的影响,无论是在小鼠实验性结肠炎模型以及在克罗恩病的患者,和关联效应与最终英夫利昔单抗治疗的临床疗效。
方法
动物模型
动物实验伦理委员会大学的阿姆斯特丹,阿姆斯特丹,荷兰,批准所有的实验。BALB / c小鼠(哈伦的雄性sd,中霍斯特,荷兰)和CB17严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠(查尔斯河,Someren、荷兰)。BALB / c小鼠被安置在标准条件下,而SCID小鼠被安置在filter-top笼子在特定的无菌条件下在动物保健设施。实验在8 - 10周大女BALB / c小鼠和7-10-week-old女性CB17 SCID小鼠。
2、4、6-Trinitrobenzene磺酸盐结肠炎
急性结肠炎引起的如前所述。22两个剂量的1毫克的2 4 6-trinitrobenzene磺酸(TNBS;σ化学,圣路易斯,密苏里州,美国)溶解在40%乙醇(默克公司,达姆施塔特,德国)直肠给药管理(相隔7天的间隔,也就是0到7天)使用一个塑料导管从肛门位置3厘米。在滴注法,小鼠所使用异氟烷(1-chloro-2、2、2、-trifluoroethyl-isoflurane-difluoromethyl-ether;雅培,Queenborough,英国肯特郡)。他们是60年代的滴剂后保持垂直。总共30老鼠使用,它被分成三组。
转移结肠炎
慢性CD45RB高转移结肠炎引起的如前所述。23BALB / c脾细胞第一次浓缩红细胞CD4细胞的裂解和消极的选择通过使用下面的老鼠anti-mouse单克隆抗体(mab): B220(克隆RA3-6B2) Mac-1(克隆M1/70)和CD8α(克隆53 - 6.7)(sccp蒙特R博士的礼物,医疗中心,阿姆斯特丹,荷兰)。mAb-stained细胞被磁场通过使用羊anti-rat IgG-coated磁珠(Dynal,汉堡,德国)。由此产生的CD4细胞被沾cytochrome-conjugated CD4和荧光素isothiocyanate-conjugated CD45RB (BD Biosciences-Pharmingen,圣地亚哥,加利福尼亚州,美国)马伯。亚种群的CD4细胞生成的双色排序在流式细胞仪上优势(BD生物科学)。人口是> 95%的纯再分析。诱导结肠炎,只有CD45RB高CD4细胞(1 - 4×105)被转移到两组CB17 SCID小鼠。总之,13个老鼠使用,分为2组。动物被注射一个荒唐的鼠/鼠单克隆抗体anti-TNF-α(克隆cV1q,礼物从D谢伊,年会,校规,宾夕法尼亚州,美国)为一个单一的腹腔内注射(1毫克/鼠标),或荒唐的鼠/鼠单克隆cVaM负控制抗体,或车辆,转让后64天或1天第二次TNBS管理模型。注射和闪烁扫描法,小鼠镇静由一个腹腔内管理0.5 ml / 10 g FFD混合,组成的芬太尼0.1毫升/ fluanisone (Hypnorm;Vetapharma、利兹、英国),0.1毫升dormicum(5毫克/毫升,罗氏荷兰BV, Woerden,荷兰)和1.5毫升0.9%氯化钠(费森尤斯公司Kabi荷兰BV, Hertogenbosch,荷兰)。24小时的治疗后,小鼠静脉注射50兆贝可99米Tc-hydrazinonicotinamide (99米Tc-HYNIC)膜联蛋白V(忒修斯提供的成像,剑桥,麻萨诸塞州,美国)1 h后,闪烁扫描法进行。
评估炎症
小鼠慢性结肠炎(转移模型)是重每周两次和小鼠急性结肠炎(TNBS模型)每天都重。减肥(基线体重的百分比)的25%转移结肠炎被认为是足够的。杀死老鼠后,结肠体重作为疾病指数肠壁增厚。纵向划分冒号被卷起,缓冲福尔马林固定在4%。固定的组织是嵌入在石蜡,4 - 6μm部分沾)组织学分级。在转移模型中,炎症在0 - 4分,代表没有炎症严重的炎症。不同的评分系统用于TNBS结肠炎模型通过使用以下参数:(1)比例的结肠,(2)纤维化(3)水肿,(4)糜烂和溃疡,(5)地下室损失,(6)多形核细胞浸润的单核细胞或(7)。22总得分范围从0(正常结肠)最高20分(最严重的炎症)。组织病理学家盲目幻灯片进行分析的研究,并相应得分。
治疗干预措施和radiolabelling
注射和闪烁扫描法,小鼠镇静。一个荒唐的鼠/鼠标单克隆抗体anti-TNF-α(克隆cV1q;礼物从D谢伊,年会)为一个单一的腹腔内注射(1毫克/鼠标)。作为阴性对照组,与小鼠治疗与腹腔内注射1毫升生理盐水或无关紧要的IgG1同形像空想的抗体cVam(1毫克/鼠标;礼物从D谢伊,年会)。99米Tc-HYNIC膜联蛋白V装备配方制备根据制造商提供的指导方针(忒修斯成像)。24小时的治疗后,小鼠静脉注射50兆贝可放射性药物的化合物99米Tc-HYNIC膜联蛋白V(进一步称为99矿渣mtc膜联蛋白V)探讨1 h后紧随其后。99米Tc-HYNIC膜联蛋白V组件是肾与肝和肠间隙完全排出。
病人
门诊患者的临床部门和部门的胃肠病学和肝脏病学,阿姆斯特丹,荷兰阿姆斯特丹大学。疾病活动决心使用克罗恩病活动指数(CDAI)。患者需要服用稳定药物:没有启动或改变剂量在8周内被允许thiopurine或甲氨蝶呤治疗,糖皮质激素在2周内。在8周内患者接受英夫利昔单抗在起始日期被排除在外。获得了书面知情同意后,病人接受了基线结肠镜检查和闪烁扫描法。内窥镜检查包括评估疾病活动和活检标本的集合。内窥镜的严重性疾病分类根据简单的内窥镜检查评分。24粘膜标本被放置在福尔马林和准备)染色现场确认的炎症疾病活动。结论内镜和scintigraphic程序后,英夫利昔单抗的患者接受2 h静脉输液(Remicade 5毫克/公斤体重)在日托中心。重复内镜和闪烁扫描法进行24 h后,英夫利昔单抗加药。英夫利昔单抗反应定义为一滴> 100分CDAI英夫利昔单抗治疗后2周。本研究通过当地的医学伦理审查委员会的学术医疗中心,阿姆斯特丹,荷兰。
粘膜淋巴细胞分离和分析
从三个患者在内镜粘膜活检标本收集并立即放置在冰冷的磷酸盐(PBS)。隔离固有层单核细胞(LPMNCs)活检标本被机械地摧毁使用自动化机械tissue-disaggregation装置(Medimachine系统,Dako、斯特鲁普、丹麦)。获得细胞悬浮液在PBS洗两次。为了防止研究表面标记的变化,没有隔离期间使用胶原酶一步。细胞悬浊液离心有聚蔗糖(法玛西亚,乌普萨拉,瑞典)和单核细胞随后通过一个40μM过滤槽过滤器(Becton / Dickinson实验室的器具,富兰克林湖,新泽西,美国)。细胞用流式细胞仪缓冲区(PBS,包含0.5%的牛血清白蛋白,0.3更易与叠氮化钠/ l EDTA和0.01%),并保存在冰的过程。洗后,LPMNCs被安置在流式细胞仪的缓冲和沾CD4 PE抗体对冰30分钟。随后,LPMNCs洗两次与PBS和放置在annexin-binding缓冲区和孵化15分钟与膜联蛋白V-fluorescein异硫氰酸酯,然后与7-amino-actinomycin(7操弄,Via-Probe BD生物科学)5分钟,在黑暗中在冰上,流式细胞术分析(流式细胞仪石中剑)。7法被用来排除坏死细胞。LPMNC人口是封闭的根据本地化向前/散射,并进一步分析CD4凋亡细胞的比例进行的7 aad-negative subpopulation-that,坏死细胞。 Data shown are representative for three patients.
闪烁法
动物显像进行了使用专用动物针孔γ-camera SPECT如前所述。253毫米孔径的钨针孔插入使用。所有研究都获得了15%在140 keV能量窗口99米Tc图峰值。一个操作工作站(爱马仕,核诊断,斯德哥尔摩,瑞典)是用来控制相机和步进电机。SPECT收购了50兆贝可静脉注射后1 h99米Tc-annexin。,50的预测30年代在64×64矩阵在360°的轨道。SPECT重建进行了使用一个应用程序(爱马仕、核诊断)适应针孔SPECT,使用过滤后的投影。巴特沃斯后重建滤波器(订单,5;0.8周期/厘米)应用。
图像是由一位经验丰富的核医学医师解释和得分,失明的细胞学资料。一个冒号吸收比(坏蛋)决心像之前描述的那样由感兴趣的半定量的分析。26连续5横片最高的结肠选择吸收和补充道。数量在每个地区获得结肠,脊髓骨髓和腹部(小肠)地区作为背景。计算出的坏蛋是减去腹部的背景从结肠活动活动,随后更正结肠吸收除以骨髓吸收(计数结肠−计数背景)/(计数骨髓−背景)。后立即闪烁摄影,老鼠被颈椎脱位并通过中线切口冒号被移除。
显像的病人进行了大视场SPECT-CT相机(GE Infinia通用电气(GE)医疗、窝博世,荷兰)配备低能高分辨准直仪。患者仰卧的定位与腹部影像表领域的观点。20分钟SPECT扫描(128年60视图、35 s /视图矩阵)进行静脉注射后60分钟450兆贝可99米低剂量CT Tc-annexin诉后立即闪烁扫描法,衰减校正和解剖映射进行相同的龙门不动病人。类似于动物研究,连续5横片被添加。根据这些图像,结肠分为段提升,横向,降结肠和rectosigmoid。内镜引导下,background-corrected结肠吸收决心在一段活动性疾病基于吸收层次supervisor-guided协议。坏蛋被表示为一个background-corrected比骨髓(坏蛋)。预处理和post-therapeutic扫描评估在同一段结肠或回肠。
统计分析
结果表示为(范围)或中位数是指在适当的地方(SEM)。所有统计测试是使用SPSS 2.01 v执行窗口。0.05⩽的p值被认为代表一个显著差异。小鼠结肠直肠的差异99年Tc吸收之间的各种治疗组(氯化钠、控制抗血清和mαTNF)异方差的单侧t检验进行了分析。治疗组之间的差异在时间为重复测量方差分析测试。CDAI和CRP变化之间的相关性进行了分析使用斯皮尔曼相关系数(r)。
结果
实验性结肠炎
TNBS结肠炎实验,共有30个老鼠4中使用单独的实验。结肠炎、CD45RB转移高CD4细胞(1 - 4×105)被转移到两组CB17 SCID小鼠。在这个实验中,共有13个老鼠,在两个独立的实验。两者都是有效的诱导结肠炎:转移模型中观察减肥3周后转移,而在TNBS模型,结肠炎与老鼠明显展示腹泻和直肠失血。BALB /老鼠基线组织病理学评分为0.3(0.5),与正常SCID小鼠得分为0.2 (0.2)。在TNBS-induced结肠炎,组织病理学评分增加到10.6(2.8),而在转移结肠炎组织病理学评分增加到1 (0.6)。因此,所有小鼠结肠炎时收集的冒号,这证实了曲线和减少体重增加结肠权重(数据没有显示)。在老鼠身上转移或TNBS结肠炎治疗生理盐水,99米Tc-annexin V几乎是冒号(无花果1中检测到⇓2 a, B⇓)。平均结直肠99米Tc吸收是0.53(0.27)和0.31(0.23),分别。管理负控制空想的抗体cVaM,平均结直肠99米Tc吸收是0.44(0.19)和0.32(0.32)转移和TNBS模型,分别。因此,荒唐的抗体并不proapoptotic。注射引起的空想的小鼠/鼠单克隆cV1q平均结直肠99米Tc吸收1.11传输模型(0.48)和1.04 (0.63)TNBS模型(图1和图2⇓⇓,B)。平均结直肠99米Tc吸收比率显著不同氯化钠和anti-murine肿瘤坏死因子抗体之间的转移和TNBS结肠炎模型,分别p = 0.016, p = 0.01。同样,平均结直肠99米Tc吸收比率显著不同控制空想的抗体和anti-murine肿瘤坏死因子抗体之间的转移和TNBS结肠炎模型,分别p = 0.04, p = 0.02。健康的啮齿动物显示小膜联蛋白V绑定在肠粘膜(未显示),证明如此高的膜联蛋白V绑定不是uninflamed粘膜的特征。膜联蛋白吸收比率的基础上在实验性结肠炎,我们得出的结论是,anti-TNF抗体导致小鼠结肠癌细胞凋亡的快速增长。
99米Technetium-annexin V单光子发射计算机断层扫描(SPECT)的小鼠结肠炎。小鼠三硝基苯sulphonate-induced结肠炎治疗生理盐水,chimaerical rat-anti-mouse肿瘤坏死因子(TNF)抗体(cV1q)或空想的rat-anti-mouse控制抗体(cVaM)。细胞凋亡是使用膜联蛋白V SPECTγ-camera形象化。结果显示肠膜联蛋白V吸收相对较低的生理盐水和控制抗体(Ab)对待动物,和高吸收水平指示增加水平的细胞凋亡在小肠TNF-neutralising抗体治疗。代表日冕,横向和矢状部分所示。箭已经电子补充道,结肠癌和本地化的指示99米Tc膜联蛋白V增加的信号。
量化的膜联蛋白V单光子发射计算机断层扫描(SPECT)在实验性结肠炎。转移结肠炎(A)和三硝基苯sulphonate-induced结肠炎(B)是诱导的方法部分中所描述的和动物治疗与空想的rat-anti-tumour坏死因子(TNF)抗体(cV1q)或空想的rat-anti-mouse控制抗体(cVaM)。肠细胞凋亡是量化使用膜联蛋白V SPECT,γ-camera和量化软件。结直肠吸收比率(坏蛋):99米technetium-annexin V SPECT结肠吸收表示为一个background-corrected比骨髓。结果显示肠膜联蛋白V吸收相对较低的生理盐水和控制抗体(Ab)治疗的动物,但显然高水平的细胞凋亡在小肠TNF-neutralising抗体治疗观察。* * * p < 0.05和p < 0.01作为检验异方差的单侧t测试学生的。
节段性回肠炎患者
14活动节段性回肠炎患者同意参与这项研究。表1⇓总结了病人的特点。平均CDAI 381(范围229 - 587)点,平均CRP (3 - 154) 55.9 mg / l,和所有除了一个病人疾病活跃的远端可及内镜。一个病人有严重的回肠炎,没有进行内窥镜检查。所有患者接受皮质类固醇和/或免疫调制剂在基线(表1⇓)。前3名患者接受了情景英夫利昔单抗注入包容。这些病人显示他们最后灌注的临床反应。英夫利昔单抗治疗不会引起任何严重不良事件。所有患者接受简单的双重SPECT扫描(在基线和英夫利昔单抗治疗后24小时内)。
英夫利昔单抗临床反应
图3 a, D显示14包括患者的临床反应。所有病人意味着CDAI基线是381点(范围220 - 587),在第2周减少到198 (36 - 394,p < 0.01)。在星期2,CDAI > 100点下降10位病人(平均减少226点,范围113 - 359),展示一个预定义的临床反应。4名患者未能显示出对英夫利昔单抗,均值变化CDAI 12分。此外,反应经c反应蛋白的变化。c反应蛋白水平显著降低英夫利昔单抗治疗与基线相比。平均水平减少从50.4升到7.5 mg / l(图3 b⇓,p = 0.04)。之间没有显著相关性观察CDAI变化和CRP的变化(r =−0.19, p = 0.517;−0.097%,p = 0.0742)。
量化的膜联蛋白V单光子发射计算机断层扫描(SPECT)之前和之后英夫利昔单抗治疗克罗恩病的患者。(一)临床反应英夫利昔单抗的克罗恩病活动指数(CDAI)。(B)血浆C反应蛋白(CRP)水平在基线和英夫利昔单抗治疗后。(C)细胞凋亡的膜联蛋白V SPECT前(基线)和英夫利昔单抗灌注后24小时,表示为结肠吸收比率(坏蛋;看到方法部分)。(D)反应英夫利昔单抗有更高的坏蛋99米Technetium-annexin V(98.6%)高于无(15.2%,p = 0.03)。结果显示大量的细胞凋亡的发生之间的相关性在小肠24 h后注入英夫利昔单抗英夫利昔单抗和临床反应,英夫利昔单抗治疗2周后决定。(E) co-medication对infliximab-induced CUR反应。硫唑嘌呤(AZA)没有影响的99米Tc-annexin V在肠道粘膜在克罗恩病的患者接受维持治疗。NS,不重要。
99米Tc膜联蛋白V吸收
基线SPECT扫描显示有限99米Tc-annexin V积累在结肠,坏蛋是0.24 (0.03)。坏蛋的增加到0.41(0.07)观察(p < 0.01) 24小时收到5毫克/公斤英夫利昔单抗(图3 c⇑;表2⇓)。图5⇓显示代表SPECT-CT乙状结肠英夫利昔单抗注入前后的图像。随后,我们调查是否的积累99米Tc-annexin V是不同的病人表现出有利的反应从那些没有显示英夫利昔单抗客观反应。坏蛋增加反应者和无,但有趣的是坏蛋的增加显著更高的反应(图3 d⇑)。坏蛋在10回应病人,平均增加了98.6%,相比之下,15.2% 4 non-responding患者(p = 0.03;图3 d⇑)。内窥镜调查的病人,在实验之前,表明疾病出现在大肠和小肠结肠或两者。scintigraphic信号获得与这些病变区域,至少在这个宏观水平(表2⇓),尤其是在结肠。相关疾病本地化和增加膜联蛋白V吸收是惊人的,适用于13 14个病人(1不接受内镜)。这些数据表明,高水平的细胞凋亡与对英夫利昔单抗临床反应。99米Tc-annexin V吸收分析英夫利昔单抗治疗前后七组的患者使用硫唑嘌呤(AZA;凋亡诱导代理人27在基线。Co-treatment与英夫利昔单抗并没有导致更高的在这群坏蛋收到阿扎(图3 e⇑)。重要的是,志愿者不显示结肠炎被充满99米Tc-annexin V,分析显示小膜联蛋白V绑定在小肠(未显示),证明高膜联蛋白V绑定不是uninflamed粘膜的特征,但显然是一个活跃的代表临床愈合过程。
英夫利昔单抗政府增加CD4固有层单核细胞凋亡(LPMNCs)从新鲜的活检标本分离获得前或后24 h英夫利昔单抗治疗克罗恩病的患者。图中显示的相对比例的CD4细胞凋亡细胞数量在基线和英夫利昔单抗治疗后。新孤立LPMNCs是沾膜联蛋白V, CD4和7-amino-actinomyocin (7 aad)。LPMC人口是根据本地化向前/一侧封闭的分散和CD4凋亡细胞的比例的进一步分析中执行7 aad-negative族群。(数据显示代表三个病人分析。)FITC,异硫氰酸荧光素;PE、藻红蛋白。
的例子99米Technetium-annexin V单光子发射计算机断层扫描(SPECT)人类的克罗恩病。细胞凋亡在小肠克罗恩病的患者呈现前(基线)和英夫利昔单抗治疗后24小时。这张照片显示了一个代表pseudocolours SPECT图像和CT图像的叠加SPECT图像。scintigraphic信号获取与结肠病变区域,表明相关性疾病本地化和增加99米Tc-annexin V吸收。
粘膜T细胞分析
测试是否固有层T细胞确实是靶细胞的膜联蛋白V绑定,LPMNCs新鲜活检标本中分离的CD4阳性凋亡细胞的比例分析了分组人口三个病人。7 aad-negative细胞的分析显示细胞凋亡显著增加,英夫利昔单抗CD4细胞24小时后管理(图4所示⇑)。这表明,固有层T细胞导致的细胞凋亡增加肠细胞凋亡水平。
讨论
英夫利昔单抗已成为支柱steroid-refractory克罗恩病的治疗;然而,背后的分子机制其有利影响尚不清楚,很难预测个体患者的临床成功这昂贵的治疗。最近,结果表明:体外英夫利昔单抗可以绑定到膜结合肿瘤坏死因子,导致激活T细胞凋亡15可能通过反向信号,16但体内这些发现的临床意义尚不清楚。在这项研究中,我们显示体内肠细胞凋亡的诱导在空想的anti-TNF治疗实验性结肠炎和人类的克罗恩病。
细胞凋亡是一种不同的细胞死亡方式,代表了一个重要的监管机制来去除多余的细胞在很多生理活动。最近,药物引起的细胞凋亡的成像产生了巨大的兴趣在实验和临床研究。28膜联蛋白V已经验证了细胞凋亡在动物的体内scintigraphic成像20.29 -,32而在人类。33岁的34管理的恶性疾病,这已经证明了一个有价值的工具,用于准确监测肿瘤凋亡反应和化学敏感性,35 -,37以及化学抗性的早期预测,以应对各种pro-apoptotic干预措施。35作为进一步的证据表明,慢性炎症在克罗恩病主要是由于apoptotic-resistant细胞影响克罗恩氏粘膜,我们先前已经表明,英夫利昔单抗对pro-apoptotic影响固有层或外周T细胞活跃的克罗恩氏病,患者18由Di萨博迪诺随后显示等38是caspase-dependent现象。积累的增加放射性后注入英夫利昔单抗在克罗恩病的患者的结肠地区当然是同意这一假说,但这个解释我们的数据严重依赖于结肠scintigraphic假设信号获得来自膜联蛋白结合T细胞凋亡。为了证实这一点,T细胞活检标本中分离的三个研究的病人和与流式细胞仪研究膜联蛋白V和T细胞的细胞凋亡状态间通过co-staining CD3抗体和7法。7 aad只有进入membrane-compromised细胞和DNA结合。7 aad-negative舱时调查(因此坏死除外),增加膜联蛋白V-positive英夫利昔单抗灌注后观察细胞。因此,增加scintigraphic信号似乎包括T细胞凋亡的隔间和提供,在某种程度上,体内细胞凋亡的一个善意的表示。这个观察与研究相关scintigraphic成像用于检查体内细胞凋亡,提供证据表明,获得的信号是真正由膜联蛋白V绑定到凋亡细胞。20.30.39在多大程度上其他细胞(巨噬细胞和树突细胞)导致scintigraphic信号仍不确定。另外,高膜联蛋白V绑定到肠道粘膜可能是一个特征的uninflamed粘膜炎症。在这种情况下,观察到膜联蛋白V增加绑定及其与临床疗效的相关性将是一个偶发症状的治疗,而不是缓解过程本身的象征。健康的啮齿动物和一个健康的志愿者,但是,显示小膜联蛋白V绑定在小肠(RJB,数据未显示),表明如此高的膜联蛋白V绑定不是uninflamed粘膜的特征。因此,增加膜联蛋白V英夫利昔单抗治疗后绑定是一个缓解的具体表现的过程。一起观察膜联蛋白V吸收增加,这至少在一定程度上依赖于T细胞室(尽管巨噬细胞和单核细胞也可能导致这个信号40岁,41),膜联蛋白V吸收的相关性和英夫利昔单抗治疗的临床效益,我们的数据清楚地表明,膜联蛋白V是一个缓解感应的特征吸收,并在这方面,甚至可能诱发细胞凋亡。
绝对水平的观察细胞凋亡相关的临床反应的患者有重要意义。无似乎没有一种内在的缺陷在他们应对英夫利昔单抗凋亡能力;相反,在无细胞凋亡诱导的水平似乎是不够的。进一步支持这一观点,在救援人员以及无,c反应蛋白水平降低对英夫利昔单抗治疗因此,似乎infliximab-induced凋亡的大小是很重要的,无治疗的反应通过增加细胞凋亡在小肠不是足够大,允许临床康复。这个概念的一个合乎逻辑的后果是,当这些病人有随着英夫利昔单抗凋亡诱导药物,临床反应可能变得明显。我们最近注意到,甲氨蝶呤与英夫利昔单抗可能协同作用诱导凋亡反应激活T细胞(未发表的观察)。此外,阿扎诱导细胞凋亡被称为Rac1抑制的结果27因此一个有趣的候选人co-application英夫利昔单抗。有趣的是,没有显著增加患者在基线CUR阿扎co-medication相比AZA-negative组。观察一个可能的解释是,低水平的细胞凋亡可能不是可检测在维护设置。最后,在无观察到细胞凋亡水平低于反应需要验证在一个更大的患者群,但是,如果得到证实,将提供一个工具,可以预测响应英夫利昔单抗和提高成本效益。
总之,英夫利昔单抗快速凋亡小肠克罗恩病的患者。这可能是一个关键启动事件触发粘膜愈合的病人。进一步的研究是必要的学习差异调节细胞凋亡在克罗恩病的患者和个性化生物处理的可能性。
确认
我们感谢戴夫·谢伊空想的鼠抗体的供应,M Tanck,生物统计学,AMC,有用的讨论和Joost Daalhuisen专家技术援助。
引用
脚注
↵*这些作者同样导致了本文。
网上发布的第一个2006年11月2日
资金:MPP支持荷兰消化疾病的基础。DWH是荷兰的临床研究员组织健康研究和发展。
利益冲突:没有。