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附言
附言
浸润结直肠癌的先天性淋巴样细胞亚群的特征
  1. 保罗Carrega1，2，
  2. Paola Orecchia3.，
  3. 琳达Quatrini4，
  4. 尼古拉Tumino4，
  5. 罗伯塔Vene5，
  6. 罗伯特·Benelli3.，
  7. 亚历山德罗Poggi5，
  8. 斯特凡诺Scabini6，
  9. 玛丽亚·克里斯蒂娜·明加里3.，7，
  10. 洛伦佐Moretta作品4，
  11. Paola Vacca4
  1. 1人体病理学系免疫学与生物治疗研究室，墨西拿大学，墨西拿，西西里岛、意大利
  2. 2电池生产中心，墨西拿大学，墨西拿，西西里岛、意大利
  3. 3.UOC免疫单元，IRCCS Ospedale Policlinico圣马蒂诺，热那亚，利古利亚、意大利
  4. 4免疫学领域，巴比诺·杰苏儿科医院，罗马，拉齐奥、意大利
  5. 5分子肿瘤学和血管生成单元，IRCCS Ospedale Policlinico圣马蒂诺，热那亚，利古利亚、意大利
  6. 6肿瘤手术，IRCCS Ospedale Policlinico圣马蒂诺，热那亚，利古利亚、意大利
  7. 7实验医学系和生物医学研究卓越中心(CEBR)，热那亚大学，热那亚，利古利亚、意大利
  1. 对应到洛伦佐·莫雷塔教授，意大利拉齐奥00165罗马儿童医院免疫科;lorenzo.moretta在}{opbg.net

http://dx.doi.org/10.1136/gutjnl-2020-320908

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    我们怀着极大的兴趣阅读了德弗里斯的论文等1该研究为结直肠癌(全球第三大常见癌症)的免疫环境提供了有趣且无偏见的特征。2通过巨细胞分析和单细胞RNA测序，作者发现了几个免疫细胞集群浸润CRC。结果显示，自然杀伤(NK)细胞(被鉴定为CD127−CD56+CD45RO+)是普遍存在的先天淋巴样细胞(ILC)群体。NK细胞是细胞毒性细胞，可与非细胞毒性CD127区分+“辅助性”ILC亚群(hILCs)，专门分泌不同组的细胞因子。3.因为CD127的数量少+hILC，作者没有进一步描述hILC的子集。然而，考虑到它们对环境信号和致病挑战的快速反应能力，hILCs是黏膜组织稳态的重要哨兵。4因此，它们在CRC发病机制和抗肿瘤反应中的可能作用尚未确定。CRC中ILC亚群组成的数据可以通过抑制或利用ILC功能来改善控制该肿瘤的治疗策略。

    在此背景下，我们分析了来自33例原发性结直肠癌(在线补充表1)与匹配的正常粘膜(来自同一患者)进行比较，采样距离肿瘤10厘米(见在线补充数据)．单细胞悬液用多参数流式细胞术(在线补充图1)．两组白细胞数量(CD45)无明显差异+细胞)渗入正常或肿瘤组织(图1一个)．在CD34, CD123, CD3, CD19, CD14阴性细胞中，我们对CD56进行了门控+CD127−细胞(NK细胞)和CD56细胞+和CD56-CD127+细胞(hILCs)。正常和肿瘤组织中NK细胞数量相近(图1 b)，检测到总固有淋巴细胞中hILCs的总数量和频率显著下降(图1中)．根据ILCs的常规分类，3.我们进一步门控hILCs进入CD117−CRTH2−(ILC1s), CD117双峰CRTH2+(ILC2s)和CD117+CRTH2−(ILC3s)。如图1 d-f， hILC亚群的组成在正常和肿瘤样本中有所不同。在正常结肠黏膜中，ilc3是最丰富的亚群，其次是ilc1和ilc2 (hILCs中最少的亚群)。在肿瘤样本中，hILCs总数显著减少，这主要反映了产生白介素(IL)-22的ilc3的丢失(图1 d-f)．肿瘤组织中ILC2的频率也较低，ILC1/ILC3的比例发生改变，反映了ILC3的减少和ILC1的增加(图1 d, E)．免疫组织化学分析上皮隐窝显示更多的浸润ilc3 (RORγt+CD3−)与肿瘤组织比较(图1 g)．ilc1的特征是分泌促炎细胞因子干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α，5而不同的研究表明ilc3对癌症有保护作用。6 7因此，它们的急剧减少，以及ilc1的增加(可能有利于慢性肠道炎症)，可能在恶性转化/肿瘤进展中发挥作用。值得注意的是，ILC1/ILC3平衡的改变可能至少部分依赖于CRC微环境驱动的ILC3的可塑性，在这种微环境中，IL-1β、IL-15和IL-12等细胞因子可以将ILC3转化为产生IFN-γ的ILC1样细胞。5 8此外，产生IFN-γ的ILC1 (NKp44+CD103+CD127−)，称为上皮内ILC1，之前在肠固有层中发现，9与正常组织相比，也在肿瘤中富集(图1 h,我)．

    hILCs infiltrate CRC. After Percoll, single cell suspensions of normal and tumour colon biopsies from patients with CRC were stained and analysed by flow cytometry. (A, B) Absolute number of CD45+ cells (n=10), NK cells and hILC (CD127+) (n=8) per gram. (C, D) Proportion of NK cells (purple) and hILC (black) among live CD45+ cells and proportion of ILC1 (blue), ILC2 (green) and ILC3 (red) among hILCs (n=13). (E) Frequency of ILC1, ILC2 and ILC3 among live/CD45+/lin− (CD3, CD19, CD14, CD34, CD123) CD127+ cells (n=13). (F) Absolute number of ILC1, ILC2 and ILC3 (n=7) per gram. (G) Immunohistochemical analysis of normal and tumorous specimens from a patient with CRC using RORγt (brown) and CD3 (red). The arrows indicate RORγt+CD3− ILC3. Scale bars: 50 mm. (H) Absolute number of ieILC1 per gram (n=5) and (I) representative dot plots showing ieILC1s gated as live/CD45+/lin− (CD3, CD19, CD14) NKp44+CD103+ cells. CRC, colorectal cancer; hILC, helper ILC; ieILC1, intraepithelial ILC1; ILC, innate lymphoid cell; NK, natural killer; RORγt, RAR-related orphan receptor gamma. * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001.
    " data-icon-position="" data-hide-link-title="0">图1
    图1

    hILCs浸润CRC。Percoll后，对CRC患者的正常和肿瘤结肠活检标本的单细胞悬液进行染色，并用流式细胞术进行分析。(A, B) CD45的绝对数目+细胞(n=10)、NK细胞和hILC细胞(CD127+(n=8)每克。(C, D) NK细胞(紫色)和hILC细胞(黑色)在活CD45中的比例+ILC1(蓝色)、ILC2(绿色)和ILC3(红色)在hILCs中的比例(n=13)。(E)活体/CD45中ILC1、ILC2和ILC3的频率+林/−(cd3, cd19, cd14, cd34, cd123) cd127+细胞(n = 13)。(F)每克ILC1、ILC2和ILC3的绝对数量(n=7)。(G)使用RORγt(棕色)和CD3(红色)对CRC患者的正常和肿瘤标本进行免疫组化分析。箭头表示RORγt+CD3−ILC3。比例尺:50mm。(H)每克ieILC1的绝对数量(n=5)和(I)显示ieILC1门控为活/CD45的代表性点图+林/−(CD3, CD19, CD14) NKp44+CD103+细胞。CRC，结直肠癌;hILC，辅助ILC;ieILC1，上皮内ILC1;ILC，先天淋巴样细胞;NK，自然杀手;rar相关孤儿受体γ。* p<0.05， ** p<0.01， *** p<0.001。

    总之，我们的数据补充了de Vries的研究等，1提供CRC组织中存在的hILC群体的信息。我们的数据可能为治疗策略提供线索，例如，利用ilc3和/或靶向ilc1。确定CRC样本中ILC1/ILC3比例改变是否具有预后价值也很重要。

    参考文献

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    补充材料

    脚注

    • LM和PV是联合资深作者。

    • 贡献者PC设计了研究，进行了实验，并修改了手稿。PO进行免疫组化实验。LQ和NT分析了数据并撰写了手稿。RV, RB和AP对样品进行了筛选和加工，并对稿件进行了修改。SS提供了患者的样本。MCM对手稿进行了严格的修改。LM撰写了手稿。PV构思并指导研究并撰写论文。

    • 资金这项工作得到了意大利sul ricerana协会(AIRC)-转移性疾病:肿瘤领域未满足的关键需求2018年Id 21147 (LM)和AIRC IG 2017年Id 19920 (LM)的赠款支持;和Ministero della Salute RF-2013, GR-2013-02356568 (PV)， RC-2020 OPBG (LM, PV)和RC 5x1000 (MCM)。LQ获得了来自AIRC和欧盟地平线2020研究和创新项目的资助，该项目根据玛丽·斯库多夫斯卡-居里资助协议(编号800924)。新新界大学获航空研究中心颁发奖学金。

    • 相互竞争的利益没有宣布。

    • 患者和公众的参与患者和/或公众未参与本研究的设计、实施、报告或传播计划。

    • 病人同意发表不是必需的。

    • 来源和同行评审不是委托;内部同行评审。