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背景溃疡性结肠炎组织学评价活动需要可再生的,但很少被测试。这可能是有用的临床和临床试验。
目的开发可再生的标准是有效的评估急性炎症(活动)和长期性,并评估这些特性在一个interobserver变异性研究。
方法六年级分类系统的炎症是在每个年级也可以微调。成绩是:0,结构变化;1、慢性炎症;2、固有层中性粒细胞;3,中性粒细胞在上皮细胞;4、地下室破坏;5,糜烂或溃疡。九十九haematoxylin-eosin部分使用内窥镜发炎和non-inflamed粘膜从远端溃疡性结肠炎患者评估两个单独的数据由三个独立病理学家和没有知识的临床状态。使用kappa统计Interobserver协议是两两相比。
结果最初,kappa观察者之间的值分别为0.20,0.42,和0.26,过低的价值。后每个标准的半定量的图像尺度的发展,kappa值提高到0.62,0.70和0.59。活动由上皮细胞之间的中性粒细胞,kappa值分别为0.903,1.000和0.907。完全达成了协议使用内窥镜正常样本的64%,在66%的内窥镜发炎组织。中性粒细胞在上皮与地下室的存在破坏和溃疡。
结论溃疡性结肠炎的组织学活动系统,显示良好的再现性和温和的协议与内镜分级系统,因为它与反数据库互为补集。它有潜在价值的临床和临床试验。
- 溃疡性结肠炎
- 活组织检查
- 炎症
- 评分系统
略语
- 炎症性肠病
- 炎症性肠病
- 加州大学
- 溃疡性结肠炎
来自Altmetric.com的统计
特发性炎症性肠病(IBD)的诊断通常是基于临床、放射学、内窥镜、显微镜标准。微观的再现性标准,用于诊断溃疡性结肠炎(UC),在几项研究已经检查了。1 - 4总的来说,最重要的功能区分正常组织和炎症性肠病,和加州大学和克罗恩病是体系结构异常和炎症变化。5 - 8地下室建筑的结构变化和基底浆细胞增多有良好的预测为炎症性肠病的诊断价值和non-IBD。8 - 10溃疡性结肠炎是一种慢性的复发情况。因此,它不仅是重要的达成正确的诊断还评估疾病活动。这样做是借助临床参数,有时组合成临床指标,并通过使用内窥镜检查,通常辅以活检。它已经表明,治疗可以改变微观诊断功能和活动的迹象。11 - 14号虽然组织学活动可能不是重要的日常管理病人,通常取决于一般的福祉,它可能是重要的在选择药物治疗和监测药物治疗,这可能是特别重要的在设计和评估的研究旨在显示治疗中获益。残留微小的急性炎症患者更有可能复发。15,16
不同的组织学评分系统设计在加州大学的评估疾病活动。14,17日至19日通常他们合并慢性和急性变化,以及上皮炎症特征。20.微观活动是基于存在中性粒细胞或定义为明确损伤的表面,一般隐窝上皮细胞与中性粒细胞。21使用中性粒细胞作为疾病活动的指标的支持研究白细胞扫描。22,23组织学检查中性粒细胞出现的效应细胞上皮损伤。24组织学评分系统用于许多临床药物试验,但数据的再现性分数和可能之间的关系的发生糜烂和溃疡和上皮内中性粒细胞的存在是有限的。16,17因此我们的研究的目的是评估微观评分系统为加州大学基于不同等级的设计活动和评估其重现性。评分系统旨在帮助评估治疗UC的有效性。
材料和方法
不同特性的文献检索后用于诊断和评估活动在加州大学和不同的计分系统,一个新的分类和分级评估体系进步的炎症和活动构思(表1)。潜在的假设是不同的主要成绩和地基进步和与疾病严重程度或活动增加。
此外,中性粒细胞在上皮细胞之间的位置是在三年级分别得分。确定了七个可能的组合(无花果1)。这是检查的目的之间的关系位置的中性粒细胞和发生糜烂或溃疡和地下室的破坏。如果这种关系存在,中性粒细胞的位置将是重要的医疗评估。此外,部分的技术质量和方向的样品和他们的影响准确的微观分析进行评估。
中性粒细胞在上皮细胞内的位置的不同组合。七个可能的组合。
不同的主要成绩和地基的明确定义:年级0.0显示无异常;年级0.1表示一个孤独的建筑肯定异常如地下室异常或不适当的间距;0.3级严重病变时使用和扩散;与品位0.2是一个之间的任何异常病变和弥漫性病变。增加慢性炎症在固有层渗透表示一个1级的分数。路基1.1表示一个温和但明确的增加和路基1.3,显著提高慢性炎症。粒细胞的存在在固有层或上皮细胞之间得分高2年级。路基2 b。1was scored when one or more neutrophils were present in the lamina propria. For the assessment of subgrades, the worst area of the biopsy, and not the average aspect, was used. A series of photographs was constructed to define the upper and lower limits of each subgrade (fig2)。
显微照片说明了不同等级的上下边界。0.3 (A)等级:优质的部分是,架构是严重和广泛地改变但固有层细胞渗透不增加强度。3.3 (B)级:中性粒细胞浸润的隐窝上皮细胞> 50%的隐窝(箭头表示中性粒细胞在地下室的腔)。(C)年级5.1:表面覆盖着减毒细胞,上皮细胞复苏的特征。除了有严重的相邻的炎症。(D)年级5.3:明确的侵蚀,因为表面上皮细胞的损失,相邻上皮细胞恢复,严重的炎症(haematoxylin-eosin)。
结果在三个不同的方面进行分析。在第一个分析活动是根据六种不同的评估主要成绩。第二分析成绩0和1是一组和第二组的其他人。第三分析主要成绩0,1,2,和2 b结合在一组和成绩3,4,5在第二组。两组之间的隔绝是中性粒细胞在固有层的存在在第二第三分析分析或上皮细胞之间。不同分析的目的是检查可能的区别一个简单和更复杂的评分系统。
99 haematoxylin-eosin活检获得的彩色部分建立远端UC患者检查。所有患者选择控制的临床试验。在内窥镜活检获得(n = 68)和non-inflamed粘膜发炎(n = 31)。在同一地区66例多个样本。两个单独的数据进行。在第一次阅读三种不同semiserial部分(5μm)的每个活检评估三个病理学家(公斤,RR, AO)。在第二个会话相同的部分由三个病理学家检查造成任何影响降到最低之间的差异部分。两项数据均独立执行,没有知识的内窥镜的地位。第一个阅读之后,双方存在分歧的领域相关的解剖和分析semiserial部分的使用。可能的误差来源和产生分歧的领域被确定和澄清在多头显微镜幻灯片的复审。 The grading scale was adapted and refined. In particular the boundaries within each grade between different degrees of severity and the features allowing identification of a precise lesion such as crypt destruction and erosion were discussed and defined more precisely.
第二阅读之后,数据的统计分析和复审的幻灯片识别来源的分歧。使用kappa统计总体interobserver协议是两两相比。kappa值⩽0.5被认为是“穷人”,0.51 - -0.6“温和”,0.61 - -0.8“好”,> 0.8“优秀”。此外,显微镜和内窥镜发现之间的关系进行了研究,和p值计算不同位置的中性粒细胞在上皮。
结果
最初的阅读
第一次阅读的结果列于表2。分析interobserver差异可以区分四个不同的类别:(a)观察者的错误是,当一个或多个观察者错过了一个特性;(b)错误由于使用三种不同的semiserial部分;(c)差异由于部分的质量;和(d)分歧造成的差异解释。
讨论后,评分量表改编和地基梁之间的边界被定义更清楚。这是决定只使用一个串行部分在第二阅读读的所有三个病理学家独立排除差异所导致的不同部分的使用。为评估不同地基梁的严重性决定建造一系列的照片显示给定特性的上限和下限,而不是使用一个典型的例子一定程度的严重性,这是一个许多不同的原因的解释。最后,它也是决定评估样品的质量是否对分析技术质量有重要影响。
二读
二读的结果也列于表2。协议是优秀的主要成绩0和5。完成协议的最后得分(主要成绩和地基梁)达到65%的样品质量好了所有三个观察员(n = 86)。在内窥镜活检获得正常组织完全达成了协议的最后得分64%的样本和使用内窥镜活检获得的发炎组织完成达成了协议在66%的情况下(n = 58)(无花果3,4)。一个观察者之间的差异的一个主要成绩,两人在18例(21%)和两个年级差异在9例。很大差异被发现在两种情况下,评分为5的两三个观察者在一个案例中,5和3,由两个观察员在第二种情况下。
Interobserver变异性不同等级的评分系统。平均分数的三个观察员(A、B和C)所示二读。仅包含了从使用内窥镜活检涉及领域。观察者协议高成绩3、4和5。
Interobserver变异性不同等级的评分系统在使用内窥镜活检获得健康的组织。平均分数的三个观察员(A、B和C)所示二读。协议是成绩优秀的3和4。
30一个样品被发现是高质量的所有三个考官而36的质量不达标,22日质量差(13这些没有检查这三个观察者因为质量差)。整体分数,kappa值分别为0.489,0.434,和0.670为穷人标本和0.666,0.706和0.510的样品好。
团体有和没有的区别粒细胞是优秀,kappa值为0.815,0.945和0.869。协议的诊断活动,定义明确的存在损坏的表面或隐窝上皮细胞与中性粒细胞(主要成绩3、4、5),也是优秀的,kappa值为0.903,1.000和0.907。
的样品质量好使用内窥镜uninflamed组织(n = 28),为病理学家之间的协议和内镜kappa值,分别为0.613,0.545,和0.386,表明适度的协议。病理学家对这些样本的平均等级得分低于2(存在固有层中的粒细胞)或更多。平均值分别为1.07,1.13和1.07。
获得高质量的标本使用内窥镜组织发炎,kappa值协议病理学和内镜是0.648,0.808,和0.570,分别表示中度至良好的协议。平均分数为组织发炎,由每一个病理学家,分别为3.25,2.75和3.00。发炎组织相关的内窥镜检查评分等级5和成绩3和2 b所有评估者(p < 0.02)。2级,固有层内嗜酸性粒细胞,也与内镜得分为每个观察员(p < 0.11)。然而,这并不意味着有内镜分数和组织学之间的完整协议。内窥镜发炎组织正常的所有三个观察员出现在3例(4%),而在使用内窥镜uninflamed组织微观活动炎症仍存在于13/28(46%)例根据这三个观察员。没有异常出现在样品11/28 (39%)。其余结构变化或强度的增加至少一个观察单核细胞的三个观察员。
Kappa值不同的主要成绩(0,1,2 a、2 b、3、4和5)无花果所示5。值超过0.4,通常超过0.5为等级1,3,4。intragrade差异的分析结果和可变性的地基梁(例如,1.1v1.2v1.3)主要成绩0到4表所示3。主要成绩4和5,在66%的情况下达成协议的存在,缺乏,或类型的隐窝破坏和44%的存在,缺乏或类型的侵蚀或溃疡。在17%的情况下一个等级的区别是闻名地穴破坏但是只有14%的病变被认为是缺席。在22%的情况下呈现侵蚀,病变不认可的观察家之一。
Interobserver可变性在溃疡性结肠炎的评估活动直肠活检二读。Kappa值不同等级评分系统显示的三对观察者(B, A: C, B: C)。协议是可怜的评估结构变化不相关的炎性改变(即静止结肠炎)观察员的两双。
分歧是由于观察者错误,解释错误,或两者的结合。观察者错误的总数4.67%的观测时中性粒细胞的位置是不包括3.06%的观察在这个项目包括在内。观察者的错误被发现在所有主要成绩:10% 0级;1级为2%;8%为2级;6% 2 b级;1%的三年级;3%,成绩4和5。
中性粒细胞的位置之间的相关性隐窝上皮和发生的破坏,侵蚀和溃疡
相关的中性粒细胞的位置上皮(主要等级3)主要成绩4(地穴破坏)和5(侵蚀)显示,隐窝破坏和侵蚀中性粒细胞在场时更常见上皮。主要4级指示地穴破坏,p值之间存在的隐窝上皮细胞的损伤和中性粒细胞(位置2 + 3 + 6 + 7v1 + 4 + 5)分别为0.18,0.026,和0.062,分别对三种不同的观察者。4级,地穴破坏和隐窝脓肿(位置4 + 5 + 6 + 7v1 + 2 + 3),p值分别为0.0002,0.015和0.0001。这表明,隐窝脓肿的存在意味着地穴的破坏。五年级(侵蚀或溃疡),相关的中性粒细胞表面上皮(位置1 + 3 + 5 + 7v2 + 4 + 6),p值分别为0.0045,0.16和0.0057。这意味着,中性粒细胞在上皮细胞的存在意味着一个侵蚀或溃疡(表的可能性4)。
讨论
总的来说,完成协议达成的最后得分是所有三个观察员56/86(65%)的样品好或可接受的质量。28个样本获得的平均成绩使用内窥镜正常组织(1.07、1.13和1.07)和58样本获得的内窥镜发炎组织(3.25,2.75,和3.00)具有可比性。Kappa值分别为0.62、0.70和0.59,表明中度至良好的协议。观察者的错误被发现在3.5%的情况下。改善后,二读显示精确定义的重要性。
技术质量和方向改善微观评估和最终的评分。分歧的存在在一定程度上是由于多个样本和不连续的病变样本进行了比较。不连续的病变已经报道了加州大学和微观的准确评估疾病活动可能需要不止一个活检样品的分析。12,13只有最后一个评分相结合的主要成绩和路基,一些观察人士给出了平均分数当病变不连续而其他人得分最坏的打算。最终决定应该使用最糟糕的分数。
Kappa值改善和协议成为优秀的班级时崩溃。当疾病活动定义的存在明确的破坏上皮细胞与中性粒细胞,kappa值分别为0.903,1.000和0.907。这证实了先前的研究表明,中性粒细胞可以评估重复性良好,interobserver协议有利于组织学特性与中性粒细胞。1,14,17这样一个简单的评分系统的再现性高,如预期。然而,这项研究的目的是构建一个更精致的评分系统,使我们更精确地定义疾病活动,并最终指导长期治疗;我们的研究显示中度到优秀的协议对于这样一个复杂的系统。
在过去,几项研究已经发现变量结果当比较内镜在加州大学分数和组织学。20.,25在目前的研究中,内镜和组织学之间的关系总体上是有利于使用内窥镜粘膜发炎。使用内窥镜的相关性是uninflamed粘膜。这并不奇怪,内镜和组织学评估相同的特性。焦活跃炎症可能是错过了通过内窥镜检查和活检因此添加一个额外的维度对炎症的存在。因此,似乎适合使用内镜和组织学评估疾病活动程度。持续的微小病灶,在缺乏内窥镜病变,可能表明复发的可能性增加。15,16
分析领域的分歧在第一次阅读显示,只有几张幻灯片,中性粒细胞在固有层是唯一活动的迹象,而不是与中性粒细胞浸润面或隐窝上皮。变化导致失败的一个或多个病理检测中性粒细胞的内皮损伤或解释排列通道是正常或异常。观察者减弱但仍指出错误第二次阅读。这些大多是由于技术质量差但在五个质量好的标本活检的最终成绩受到观察者的错误。
观察者的数量错误侵蚀或溃疡是很小的。之间的分歧主要差异在解释有关真正的侵蚀和上皮的artifactual剥离。恢复上皮,定义为减毒(扁平或立方形的)表面上皮细胞,因此包含在评估形式来提高识别的侵蚀。相邻的存在严重的炎症是添加到排除尽可能表面损伤的其他潜在原因。我们还包括一个类别可能侵蚀和焦剥离。包含后者负责两个不同年级的最后分数5/12的情况下,这样的一个主要区别。因此它可能不合适,包括这个步骤5年级。
第一次阅读后解释一些问题没有解决。评估固有层单核渗透仍然是一个问题。这在其他研究中也发现了。26它已经表明,固有层多孔性炎症性肠病是一个重要的功能,但是正常的细胞固有层的边界渗透需要澄清和标准化。27,28固有层的识别嗜酸性粒细胞是分歧的另一个原因,8%的观察者的错误负责。然而,一些文献中的数据表明,嗜酸性粒细胞对CD和加州大学的发病机制很重要。28 - 30因此,我们建议包括嗜酸性粒细胞在IBD的组织学评分系统评估疾病活动。
0级,完成协议达成后只有22%的情况下二读。类似的分歧还指出在第一次阅读。分析后,建立了一系列摄影标准相比较而言,代表不平均的照片但不同类别之间的界限。二读的数据表明,分歧一方面是由于观察者错误和部分解释的差异。分歧的可用性结构变化主要是由于多个样本相同的病人和同一地区。部分的取向是分歧的另一个来源。裂成两半的地下室和地下基地之间的距离增加,粘膜肌层被用作主要的标准,但这些功能不能充分评估在横向部分或部分的横切面。可变性在隐窝直径和intercryptal距离显然更加困难参数使用。
一个好的位置之间的相关性被发现中性粒细胞和地下室发生破坏,侵蚀和溃疡。我们的数据证实,上皮细胞之间的中性粒细胞与上皮细胞损伤有关。中性粒细胞表面上皮与侵蚀的发生。隐窝脓肿意味着地穴的破坏。减少或消失,中性粒细胞在连续的上皮细胞活检因此最有可能减少疾病活动的迹象,可能意味着给定治疗的疗效。
总之,我们的评分系统是足够的,它可能是有价值的临床试验和临床的常规评估活动。技术质量,在质量上的部分和良好的定位,可以提高报告的质量,因此强烈建议。一些组织学特性,特别是结构异常,需要更精确的定义。嗜酸性粒细胞的存在必须包含在任何评分系统在加州大学评估活动。中性粒细胞在上皮细胞的存在与发展的相关病变如地下室破坏和侵蚀或溃疡。尽管内镜是一个非常重要的工具,疾病的诊断和评估活动,有良好的相关性内镜和组织学,内窥镜检查和活检的结合提供了一个更好的比内镜独自活动的迹象,特别是在使用内窥镜non-inflamed粘膜。
确认
这项研究是由Astra-Zeneca)的资助下,瑞典。的IOIBD病理学部分为预备讨论提供了机会。
略语
- 炎症性肠病
- 炎症性肠病
- 加州大学
- 溃疡性结肠炎