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客观的突出贡献的肠道微生物群宿主代谢的调制饮食inulin-type果聚糖(ITF益生元)肥胖的女性。
方法双盲,安慰剂对照,干预研究进行30肥胖女性对待ITF益生元(菊粉/ oligofructose 50/50混合;n = 15)或安慰剂(麦芽糊精;n = 15) 3个月(16 g /天)。血液、粪便和尿液采样、口服葡萄糖耐量试验,进行了稳态模型评估和impedancemetry之前和之后的治疗。肠道微生物组成的粪便被系统发育分析微阵列和16 s rDNA qPCR分析。血浆和尿液代谢进行了分析1核磁共振光谱。
结果治疗ITF益生元,但不是安慰剂,导致增加双歧杆菌属和Faecalibacterium prausnitzii;细菌与血清脂多糖水平负相关。ITF益生元也减少了拟杆菌intestinalis,拟杆菌vulgatus和丙酸菌属,影响轻微下降,脂肪量和血浆乳酸和磷脂酰胆碱的水平。没有明确的集群可以检测到治疗肠道微生物分析或血浆和尿液代谢组学概要分析。然而,ITF益生元导致肠道微生物群微妙的变化,重要的是对几个关键代谢物的影响与肥胖和/或糖尿病。
结论ITF益生元有选择地改变肠道微生物群组成在肥胖妇女,导致适度调整主机新陈代谢,相关性所显示一些细菌和代谢endotoxaemia或代谢组学特征。
- 肥胖
- 生命起源以前的
- 营养
- 肠道细菌
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本研究的意义
已知在这个问题上是什么?
失调与肥胖和代谢紊乱有关。
饮食inulin-type果聚糖(ITF)有选择地改变肠道微生物群组成和改善肥胖的啮齿动物的宿主生理功能。
ITF的有益作用(非肥胖的人类生命起源以前的效果)经常与促进双歧杆菌在结肠。
有什么新发现吗?
ITF益生元诱导一个巨大bifidogenic效应也修改在肥胖女性的许多其他细菌。
ITF益生元引起的肠道微生物群的变化与bacterial-related代谢物(磷脂酰胆碱、乳酸、hippurate)和血清脂多糖水平,尽管缺乏显著影响体重。
作为推断从人类肠道芯片(HITChip)分析(系统发育微阵列基于16 s rRNA基因序列研究人类肠道微生物群)和代谢组学特征,生命起源以前的方法有选择地改变microbiota-related主机功能。
它会如何影响临床实践在可预见的未来吗?
ITF益生元可以用来支持控制肥胖的饮食建议和相关代谢紊乱包括糖尿病、心血管和肝脏疾病。我们的研究结果表明细菌类型或函数,可以成为新药在这个重大公共卫生问题。
介绍
肥胖是一个主要公共卫生问题,因为它会导致代谢紊乱参与2型糖尿病的发展,脂肪肝疾病或心血管疾病。1肠道微生物群现在被认为是一个关键的“内生”器官造成宿主生理的调制和构成合理的目标的控制肥胖和代谢紊乱有关。2,3事实上,一些研究在啮齿动物(即无菌vs传统老鼠)表明,肠道微生物群促进储能通过改变宿主基因表达。4 - 6此外,我们提出了,代谢endotoxaemia(即增加了血液中脂多糖(LPS)水平)触发慢性炎症发生过食,肥胖和糖尿病,7因此导致这些代谢紊乱。8 - 11在人类中,肥胖的特点是生态失调。初步研究表明,比例的变化和/或水平的主要细菌类群(减少拟杆菌门和/或增加壁厚菌门)可能逆转发生在肥胖个体和节食和减肥,4,12 - 14但是这些改变仍然是一个有争议的问题。15,16具体的变化也发生在属水平,如降低肥胖和苗条的双歧杆菌和糖尿病与非糖尿病人。15,17
生命起源以前的的概念是基于积极调节肠道微生物群组成的可能性保持和/或促进健康,使用non-digestible等营养物质,可发酵的碳水化合物。18,19其中,inulin-type果聚糖(ITF)已经被提议作为调节器的微生物生态学和宿主动物和人类的生理机能。3,20.在啮齿动物食源性肥胖或遗传模型,ITF被证明减少身体体重和脂肪量积累,改善葡萄糖耐量和胰岛素抵抗,降低炎症,改善肠道屏障功能。9,研讨会此外,在这些动物模型,ITF调节肠道微生物群组成主要领导bifidogenic效果。23,24最近,一个广泛的分析肠道微生物群组成喂养后肥胖老鼠短链ITF透露,生命起源以前的治疗降低壁厚菌门和拟杆菌增加,和改变了超过100的细菌类群。这是与有益影响宿主代谢有关,如葡萄糖和脂类代谢的改善和减少血浆LPS。25
这些影响也被观察到人类。我们和其他人已经证明,健康人类,短链ITF提升饱腹感,26,27增加breath-hydrogen排泄(肠道微生物群的一个标志发酵)和调制肠肽调节食物摄入量。27,28在超重和肥胖的成年人,短链ITF补充促进减肥,改善葡萄糖调节和调节肽的生产涉及能量摄入。29日我们的探索性研究的目的是评估ITF益生元对肠道微生物生态系统的影响在肥胖女性突出的贡献肠道微生物的变化调制宿主代谢营养干预。在尿液和血浆代谢组学分析也是并行执行评估的潜在利益microbial-related代谢物作为新型生物标志物的生命起源以前的干预。
方法
主题
44肥胖女性(身体质量指数(BMI) > 30公斤/米2)年龄在18到65年自愿招募了倩碧大学医疗圣卢克,布鲁塞尔,比利时在2008年3月和2011年5月之间。八个病人未能完成这项研究有以下原因:怀孕(一位病人),失去随访期间电话联系(一位病人),gastro-oesophageal回流(2例),个人原因(2例),没有减肥(2例)。的36名患者完成了研究,每组三个患者被排除在分析抗生素治疗,因为在研究和粪便取样不足或失踪。最后,每组包含在分析15例(图1)。受试者被分配到ITF或安慰剂组后系统的分配方法。排除标准:存在胃肠道功能紊乱或慢性身体/精神疾病的历史,使用抗糖尿病的药物或减肥治疗,近期消费(< 6周)的抗生素或治疗影响肠道微生物群组成,长期食用抗酸药或抗炎药物,怀孕,不寻常的饮食(素食者、素食者、高消耗的膳食补充剂),食用前/益生菌或纤维补充剂,过度饮酒(> 30杯酒精饮料/周),强化体育锻炼,减肥手术的历史,和gastro-oesophageal回流接受高剂量的质子泵抑制剂。从大学委员会d 'Ethique进行Hospitalo-facultaire catholique de鲁汶(比利时布鲁塞尔)提供伦理批准这项研究和从每个参与者获得的书面知情同意。这次审判是在clinicaltrials.gov注册NCT00616057。
饮食干预
受试者分配接收每天补充16 g (ITF的8 g一天两次)(协同1,即菊粉/ oligofructose混合50/50)或安慰剂(麦芽糊精)3个月(Oreye Orafti所提供的产品都是和善的,比利时)。麦芽糊精的味道和外观类似于协同1,用作ITF安慰剂在先前的研究。每股26到29病人被要求采取半剂量治疗的第一个星期期间促进适应纤维,减少胃肠道症状。安慰剂和ITF都提供相同的不透明的包(命名为A或B和分布式如下:1 /病人,病人2 / B,病人3 /病人4 / B,…)。粉添加在温暖的饮料如咖啡、茶或热巧克力或奶制品。研究对象和研究人员盲目治疗。
试验协议
验证后病人满足入选标准并获得同意,患者提交一个记忆和收到减肥的饮食建议。初(T0)和治疗结束(T3月)、血液、粪便和尿液样本。血液收集EDTA管和部分被直接发送给医院实验室测量以下经典生物参数:glycaemia, insulinaemia,糖化血红蛋白,天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、c反应蛋白(CRP)、总胆固醇、高密度和低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯(高密度脂蛋白和低密度脂蛋白,分别)。剩余的血液在4200 g离心10分钟在4°C和等离子体被冻结在−80°C。Adiponectinaemia决心使用RayBio酶联免疫试剂盒(正在RayBiotech,乔治亚州,美国)。粪便和尿液样本被冻结在−20°C。病人也提交给口服葡萄糖耐量试验(OGTT)(75克葡萄糖在喝酒解决方案和测量glycaemia insulinaemia 2 h后摄入)和内稳态模型评估(HOMA)测试。HOMA胰岛素敏感性估计的空腹血糖和胰岛素浓度。30.最后,体重和身体成分测定impedancemetry (Tanita bc - 418 ma Tanita英国、西德雷顿的英国)。计算体重指数和腰部和臀部周长测量。三次电话随访研究(后2周、1个月和2个月的治疗)来验证兼容性和询问可能的副作用。
本研究的主要终点是评估ITF的生命起源以前的效果在肥胖女性肠道微生物群组成。我们专注于bifidogenic效应因为一些研究ITF在人类健康突出显著增加双歧杆菌在生命起源以前的治疗。24,31日病人招生主要终点时停止,即显著增加粪便双歧杆菌qPCR量化的ITF集团,是有效的(即15例/组)。ITF对临床结果的影响和代谢分析当时评估作为一个次要目标。
肠道微生物群分析
粪便样本收集和储存在−20°C,直到进一步的处理。DNA是孤立的如前所述,32使用重复珠殴打过程与修改协议QiAamp粪便DNA迷你包(试剂盒、希尔登,德国)。粪便微生物群组成评估使用qPCR在线补充(见方法)和人类肠道芯片(HITChip),系统芯片。33HITChip包含超过4800个探针基于16 s rRNA超过1100肠道细菌phylotypes和识别的基因序列变异和相对数量的人类肠道的社区。34杂交与样品标签进行复制和Cy3 Cy5染料。幻灯片使用安捷伦数据从微阵列图像中提取特征提取软件,V.10.7.3.1 (http://www.agilent.com)。如前所述,执行数组正常化34,35与一组R-based脚本(http://r-project.org)结合设计关系数据库运行MySQL数据库管理系统(下http://www.mysql.com)。这个过程是应用于染料为每个样本,和重复的皮尔森相关超过0.98被认为是进行进一步分析。沃德的最小方差法用于分层集群的建设总微生物群的调查资料,在样本之间的距离矩阵是根据皮尔逊相关性。
代谢分析的1H核磁共振光谱学
400µl混合着尿液样本的200μl磷酸盐缓冲剂(0.2米,pH值7.4)在D2O含氘3 - 0.01% (trimethysilyl) 1-propanesulfonic叠氮化钠酸和3毫米。200年µl血浆样品的混合400μl D2在4°C o .样本离心10分钟(8000克)和转移到5毫米管核磁共振(NMR)分析。
所有1H NMR光谱上获得力量皇冠700 MHz光谱仪(力量Analytische, Rheinstetten,德国)在700.19 MHz,配有5毫米冷冻器来自同一制造商。有关详细信息,请参阅在线补充方法。
测量血清有限合伙人
LPS浓度测定采用Endosafe-MCS(查尔斯河实验室,里昂,法国)基于鲎变形细胞溶解产物动力学显色方法,如前所述。36从1/30到1/100稀释样品。
统计分析
原始数据表示为平均数±标准差。治疗效果评估是基于微分值减去价值T0从价值的T3个月为每一个病人。差值表示为±95%可信区间。因为大多数参数的异常分布(评估使用Shapiro-Wilk测试),Mann-Whitney测试是用来比较差值或在T0两组。相关性分析采用斯皮尔曼相关的GraphPad棱镜(V.5.00对于Windows, GraphPad软件,圣地亚哥,加利福尼亚州,美国)。水平的意义p < 0.05。
HITChip分析,Wilcoxon符号秩检验修正错误发现率,37用于评估个人的显著差异genus-level组3个月后两组的微生物群。多元统计分析、综合Canoco软件使用了Windows 4.5。38冗余分析用于评估微生物组之间的相关性HITChip分析检测到的样本特征的功能。这种冗余分析是一种多元分析表明样品在一个三维空间的分布基于物种变量和环境变量。日志转换的杂交信号131 genus-level系统组织的目标HITChip变量被用作物种。作为环境变量,我们包括年龄、BMI、性别、抗生素使用、样品收集时间和样本来源(安慰剂或生命起源以前的组在T0和T3个月)。蒙特卡洛置换过程中实现Canoco软件包被用来评估统计学意义差异的大型数据集。
统计分析描述代谢分析的在线补充方法。
结果
在方法部分,所述每组包含在分析15例(除了HITChip分析,我们排除了一个离群值治疗组的样本)。轻微副作用报道的治疗:六名病人在安慰剂组和14个病人在治疗组有轻微肿胀,肠胃气胀和/或腹痛。这些症状消失几天之内在大多数病人。
报告的患者的基线特征表1。两组之间没有差异的研究。
分析肠道微生物群组成
HITChip分析揭示了一个重要的调节患者的肠道微生物群组成ITF益生元3个月。这些变化发生在门级(在类和细分为厚壁菌门梭状芽胞杆菌集群)和genus-like分类水平与phylotypes > 90% 16 s rRNA基因序列相似(见在线表S1)。ITF益生元诱导显著增加壁厚菌门和放线菌和拟杆菌减少(图2A)。壁厚菌门的变化是由于显著增加三组属于这门,即细菌梭状芽胞杆菌集群IV和十六(细菌组属于在线表S2)中描述了这三个类。在genus-like分类级别(图2B)增加双歧杆菌属和Faecalibacterium prausnitzii在减少拟杆菌intestinalis和B vulgatusITF生命起源以前的治疗后发生但不是安慰剂治疗后。双歧杆菌的重要增加生命起源以前的治疗后证实了qPCR (图3A)。HITChip分析也揭示了一个重要的变化加氏乳杆菌(34.4倍的变化),主要发生在三个病人属于生命起源以前的组。乳酸杆菌qPCR强调了一个重要的分析属生命起源以前的治疗效果乳酸菌种虫害与生命起源以前的组和安慰剂组没有变化(图3B)。
HITChip的层次聚类之间的数据并未透露任何集群每个组的病人,但证实了重要inter-individual变化与集群之间观察到的样本来自同一个病人网上(见图S1)。
评估的不同微生物群组成两组在T0和T3月,使用多元统计方法。冗余分析显示,尽管不同的学习小组中没有明显变化成分,属于生命起源以前的样品组3个月与放线菌(包括呈正相关双歧杆菌属集团)和负相关拟杆菌和变形菌门(见网络图S2)。
人体测量参数和血液
3个月的治疗后,ITF益生元没有显著影响体重指数和腰围/臀围,但倾向于减少脂肪量即使差值两组之间没有显著差异(图4一个)。
生命起源以前的治疗没有明显修改糖化血红蛋白、空腹glycaemia insulinaemia, post-OGTT insulinaemia, HOMA索引或adiponectinaemia。然而,我们观察到的一个显著差异post-OGTT glycaemia,增加发生在安慰剂组和轻微减少观察治疗组。生命起源以前的治疗没有显著影响胆固醇(高密度脂蛋白和低密度脂蛋白,)和甘油三酯(见在线表S3)。
最后,对血浆c反应蛋白治疗效果并不显著。代谢endotoxaemia两组降低,但在更高的程度上在生命起源以前的集团,即使治疗效果没有达到意义(图4B)。
肠道细菌和生物参数之间的相关性
斯皮尔曼相关分析来评估潜在的重大变化之间的联系在益生元引起的肠道微生物群组成和主机的新陈代谢(图5)。有限合伙人变化显著负相关,与几个类群和物种的细菌增加益生元,即厚壁菌门(杆菌出现负责这种相关性),放线菌,双歧杆菌属和Faecalibacterium prausnitzii。的变化梭状芽胞杆菌集群第四组(这也增加了ITF)负相关与人体测量参数和禁食glycaemia, insulinaemia和HOMA索引。相比之下,在变化丙酸菌属,拟杆菌intestinalis和拟杆菌vulgatus,所有三个显著减少了生命起源以前的治疗,积极与身体成分和葡萄糖体内平衡的变化。
代谢分析的1H核磁共振光谱学
总的来说,尿液和血浆的多元统计分析核磁共振光谱不允许分离代谢在安慰剂治疗组在时间点(数据没有显示)。然而,在等离子体中,我们观察到一个重要的、积极的偏最小二乘(PLS)之间的相关性分数的核磁共振光谱和丙酸菌属和拟杆菌vulgatus(图6),判别代谢物解释这种关联是乳酸和磷脂酰胆碱(PC),这意味着这两个代谢物在病人增加丙酸菌属和拟杆菌vulgatus更丰富的(图6B显示了请加载情节丙酸菌属)。
尿核磁共振光谱的请得分显著相关的腰围/臀围和post-OGTT胰岛素(请参见图S3)在线。这两个模型表明,肌酐的请载荷和hippurate post-OGTT胰岛素呈负相关,而肌酐独自与腰围/臀围。最后,水平的变化Collinsella,细菌属显著增加了生命起源以前的治疗,请得分显著相关的尿代谢(图6C)。Hippurate与这些变化相关联Collinsella请描述的载荷。请参数列出的模型给出了在网上补充方法。
讨论
在过去的几年中,利息增长的潜在作用肠道微生物群在肥胖和相关疾病的发生。营养的方法被认为是潜在的工具来调节肠道微生物群与伴随的对健康的影响。2,3我们显示,第一次,3个月治疗ITF益生元导致选择性调制肥胖女性的肠道微生物群组成。在门级,ITF治疗增加壁厚菌门和放线菌和减少拟杆菌门。这个结果是有趣的,因为其他研究发现增加壁厚菌门和/或减少拟杆菌计数在肥胖和苗条的人。这些变化可能是倒在食源性减肥及division-wide没有特定的子群被优先减少或增加。4,13,39在我们的研究中,水平的提高壁厚菌门后生命起源以前的治疗是由于细菌的增加,和梭状芽胞杆菌集群IV和十六。有趣的是,细菌的变化在有限合伙人负相关的变化,而变化梭状芽胞杆菌集群IV负相关与脂肪量和空腹血糖稳态的变化。益生元的观测表明积极的影响在这些特定的厚壁菌门。与此一致的是,Schwiertz等最近显示更高水平的leptum梭状芽胞杆菌组,Faecalibacterium prausnitzii这个群体的主要细菌,在精益患者相比,肥胖者。15
此外,其他研究显示类似水平的拟杆菌门在精益和肥胖的个体,16甚至增加的比例这门在超重和肥胖的患者中,15因此显示的潜在变化拟杆菌门在肥胖是有争议的。此外,吴等最近研究饮食对肠道微生物的影响使用饮食库存和16 s rDNA测序来描述粪便样本98人。40他们观察到细菌类群与饮食有关,拟杆菌是积极与脂肪和消极与纤维,和壁厚菌门显示相反的关联。有趣的是,这些协会符合ITF益生元的结果,可发酵的膳食纤维。
在prebiotic-induced genus-like分类级别的具体变化,显著增加双歧杆菌属和Faecalibacterium prausnitzii特别感兴趣的。双歧杆菌已被证明减少肥胖和糖尿病,7,15,17,41和增加生命起源以前的治疗,导致宿主代谢改善啮齿动物和人类健康。23,24,31日,42,43F prausnitzii耗尽在炎症性肠病(IBD)和克罗恩病病人和展览体外抗炎作用(细胞模型)和体内(TNBS-induced结肠炎小鼠)。44-46它也减少肥胖糖尿病患者比非糖尿病人(精益和肥胖)和减肥手术后往往会增加。此外,它是负相关,肥胖患者的炎性标志物前后减肥手术。47在健康人类,ITF益生元显著增加的水平F prausnitzii。31日在我们的研究中,prebiotic-induced变化双歧杆菌属和F prausnitzii有限合伙人的变化呈负相关,促炎症组件。这个结果是特别感兴趣的代谢endotoxaemia所扮演的重要角色的过程中,慢性炎症在肥胖。7,8,23
初的治疗,无统计差异在人体测量和血液参数两组患者之间。尽管ITF益生元展示出了有前景的结果在肥胖女性肠道微生物群组成,他们没有显著影响体重指数、脂质或葡萄糖稳态但他们倾向于减少脂肪量。我们不能排除倾向观察的临床参数可能已经成为重要的更高的患者数量。
然而,尿液的代谢分析和等离子体显示有趣的代谢物之间的相关性与肥胖和肠道细菌。水平的丙酸菌属和拟杆菌vulgatus,既减少了生命起源以前的治疗,与血浆PC和乳酸水平呈正相关。丙酸菌属与益生菌是一种细菌属属性,主要是远离乳制品。48一只老鼠肠道芯片分析揭示了这个属的显著增加db / db老鼠相比,瘦老鼠(Cani PD、个人通信)。拟杆菌vulgatus被发现在健康人体内构成核心肠道微生物群的一部分,通常被认为是有益的。49-51然而,它也被关联到一个更高的腹腔疾病遗传风险和一些特定的菌株B vulgatus能够促进结肠炎,52,53因此建议有争议的对健康的影响。小仲马等已经证明,发展中胰岛素抵抗和非酒精脂肪肝小鼠低水平的电脑,导致损伤非常低密度脂蛋白的分泌,因此,肝甘油三酯积累。54然而,其他研究已经表明,电脑水平高在肥胖和降低食源性减肥或者减肥手术。55,56此外,传统的PC分子增加了(CONV-R)动物与无菌鼠相比,具有较低的肥胖和肝甘油三酯比CONV-R同行。57干扰在全身乳酸营业额出现胰岛素抵抗的发展作出贡献。血浆乳酸水平升高已报告在肥胖和2型糖尿病。58-60
因此,低水平的血浆PC和乳酸,低水平的患者中观察到丙酸菌属和拟杆菌vulgatus在生命起源以前的集团似乎降低肥胖。此外,这些细菌的变化与脂肪和葡萄糖稳态的变化呈正相关。这符合更高水平的相关性丙酸菌属在糖尿病db / db老鼠,从而确认其潜在负面作用宿主代谢,至少在病理情况下与葡萄糖稳态扰动(Cani PD、个人通信)。
最后,水平的提高Collinsella,属于放线菌属和益生元显著增强,与尿hippurate水平更高。Collinsella aerofaciens已经与结肠癌的风险很低,61年和IBD患者肠道水平较低的属比个人的控制。62年Hippurate是gut-derived代谢物通常与一个有关健康的表型。这是减少糖尿病和肥胖和减肥手术后增加。此外,它是一个主要的判别代谢物解释的差异之间的尿液代谢精益和肥胖或糖尿病人。63 - 65因此,水平的提高Collinsella和泌尿hippurate可以被认为是一个有益的影响与ITF发酵。
总之,生命起源以前的干预并不足以诱导显著集群整体代谢组学或肠道微生物群的两组患者之间的配置文件。然而,我们发现的细微变化的肠道微生物群与脂肪量的变化,血清LPS水平和代谢(hippurate、乳酸和PC)。因此,通过造型共生生物系统(如肠道microbiota-host交互)与益生元在肥胖妇女,我们确定了潜在的超系统交互与肥胖和相关疾病的发生有关。因此,我们的研究可能被认为是一个先决条件更好地定义目标人群和患者特征进一步更大的干预研究。
确认
我们要感谢病人和调查人员参与了这项研究。PDC是一个研究助理,激光弯曲的研究员FRS-FNRS(喜欢de la任职),比利时。
引用
补充材料
脚注
PDC和SPC同样起到了推波助澜的作用
贡献者EMD:协议和试验设计,病人的选择,随机分配序列,处方研究过程、性能的实验,数据分析和解释,手稿写作。PDC:协议和试验设计、病人选择、性能的实验,数据分析和解释。程控、科幻、PGBP,飞行员和激光弯曲:性能的实验,数据分析和解释。WMdV GRG:数据分析和解释。JPT:负责临床试验和病人护理,协议和试验设计,病人的选择。NMD:首席研究员、协议和试验设计,病人的选择,随机分配序列,数据分析和解释,手稿写作。所有的作者都有读取、修改和批准最终的手稿。
资金这个项目是由FNRS格兰特(不支持。1.5.095.09F)。
相互竞争的利益一个也没有。
病人的同意获得的。
伦理批准大学委员会d 'Ethique进行Hospitalo-facultaire, catholique de鲁汶。
出处和同行评议不是委托;外部同行评议。